水母雪莲乙醇提取物对Lewis肺癌荷瘤小鼠抗肿瘤免疫的影响

目的：初步探讨藏药水母雪莲(SMM)的体内外抗肿瘤免疫功能。方法：C57BL/6野生小鼠接种3LL细胞建立Lewis肺癌荷瘤小鼠模型,随机分为生理盐水组、SMM1低剂量组、SMM2中剂量组、SMM3高剂量组和环磷酰胺(CTX)组,体内连续治疗21 d。检测Lewis肺癌荷瘤小鼠实体瘤体积、质量和体质量;计算胸腺、脾脏指数;流式细胞仪检测肿瘤浸润组织淋巴细胞(TIL)的CD4⁺T、CD8⁺T百分比和CD4⁺T/CD8⁺T比例。体内MTT法检测80、100μg/ml SMM乙醇提取物对Lewis肺癌荷瘤小鼠脾CTL杀伤活性的影响;El ISA法检测CTL分泌IFN-γ的水平。结果：与生理盐水组比较,SMM乙醇提取物可显著抑制肿瘤生长并维持荷瘤小鼠体质量增长;胸腺和脾脏指数均显著升高(P<0.05);TIL中CD4⁺T和CD4⁺T/CD8⁺T水平显著升高(P<0.05),SMM1和SMM3组CD8⁺T显著降...     

Apogossypol增强SGC7901胃癌荷瘤小鼠的免疫功能并抑制肿瘤生长

目的探讨新型棉酚衍生物apogossypol对胃癌SGC7901移植瘤抑制及免疫功能之间的关系。方法体外培养扩增SGC7901胃癌细胞,接种裸鼠,建立小鼠移植瘤模型。计算肿瘤的抑瘤率,测定自然杀伤(NK)细胞活性,腹腔巨噬细胞一氧化氮(NO)的产生量,NK细胞活性,T淋巴细胞增殖能力及白细胞介素-2(IL-2)的活性。结果 Apogossypol可明显提高荷瘤小鼠吞噬细胞的功能并抑制肿瘤的增殖,NO产生量增加并可显著促进IL-2分泌,进而影响淋巴细胞的活性,最终导致NK细胞功能增强。结论 Apogossypol可增强荷瘤小鼠的免疫功能,抑制肿瘤的生长。     

树突状细胞激活的肿瘤浸润淋巴细胞对荷瘤小鼠免疫功能影响的研究

目的:探讨H22细胞全细胞性抗原致敏的DC激活的TIL体外抗小鼠肝癌活性;并将H22细胞全细胞性抗原致敏的DC激活的TIL(H22-DC-TIL)过继免疫荷瘤小鼠,研究其对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法:从小鼠四肢长骨骨髓中获取DC,应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)和肿瘤全细胞性抗原致敏DC,然后用DC激活TIL,观察TIL在体外对H22细胞、Hepal-6细胞和B16细胞的杀伤活性;检测应用H22-DC-TIL后荷瘤小鼠的脾淋巴细胞的NK、LAK、CTL活性及血清TNF活性,并与对照组相比较。结果:(1)H22-DC-TIL具有很强的对H22细胞杀伤活性(杀伤率为71.31%±3.11%),明显高于其对Hepal-6和B16细胞的杀伤活性(杀伤率分别为50.11%±3.03%和30.31%±2.89%);也明显高于未经DC激活的TIL、H22-DC-小鼠脾淋巴细胞和未经DC激活的小鼠脾淋巴细胞对H22细胞杀伤活性(杀伤率分别为49.80%±3.21%、48.76%±3.60%和19.23%±2.71%)和对Hepal-6细胞杀伤活性(杀伤率分别为39.40%±3.21%、38.62%±2.87%和18.73%±2.40%)以及对B16细胞杀伤活性(杀伤率分别为26.38%±2.51%、25.82%±2.70%和18.34%±3.01%),同时B16-DC-TIL(TIL来源于H22瘤体)也可诱导相对较低的对B16细胞的特异性细胞杀伤活性。(2)H22-DC-TIL可明显诱导提高荷瘤小鼠脾淋巴细胞NK、LAK和CTL活性(活性分别为30.43%±1.35%、31.40%±1.80%和35.30%±1.20%),并可检测到血清TNF水平明显上升[血清TNF为(40.41±1.85)U/m l],它们均达正常对照组水平,与未经DC激活的TIL组、H22-DC-小鼠脾淋巴细胞组、未经DC激活的小鼠脾淋巴细胞组、生理盐水组分别对应比较,差异均有显著性(P<0.01)。结论:(1)H22-DC-TIL可产生很强的体外针对H22细胞的特异性杀伤活性。(2)H22-DC-TIL可明显诱导提高荷瘤小鼠特异性抗肿瘤免疫反应。     

人肿瘤浸润γδT细胞的抗肿瘤活性研究

目的 研究人直肠癌和结肠癌肿瘤浸润γδＴ淋巴细胞（γδＴＩＬＳ）体外抗肿瘤活性。方法 用固相抗体法体外扩增获得γδＴＩＬＳ，并用ＭＴＴ法和＾Ｈ－ＴｄＲ掺入实验体外观察γδＴＩＬＳ对同种异体和异种肿瘤细胞的细胞毒及增殖反应。结果 所获得γδＴＵＩＬＳ对所测定的肿瘤细胞显示出明显的细胞毒活性。该杀伤效应可为ＩＬ－２、ＩＬ－４，ＩＬ－１２，ＩＬ０１５，ＴＮＦ－γ所增强，而不受ＩＬ－１０，ＧＭ０－ＣＳＦ和     

肝再生增强因子通过增加调节T细胞数量保护小鼠急性肝损伤

目的研究肝再生增强因子(ALR)保护急性肝损伤的作用及机制。方法将30只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、急性肝损伤组和ALR干预组。急性肝损伤组小鼠按2 m L/kg体质量的剂量予以腹腔注射500 m L/L四氯化碳(CCl4)矿物油溶液1次。ALR干预组于CCl4注射前8 h尾静脉注射ALR质粒,正常对照组注射等量生理盐水注射液。收集小鼠肝组织和血液标本,HE染色观察肝组织病理形态学变化;生化法检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;流式细胞术检测肝组织中调节性T细胞(Treg)的数量,实时定量PCR(qRT-PCR)检测肝组织Foxp3、ALR、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA水平。结果 ALR干预组小鼠肝组织中ALR mRNA表达水平显著高于急性肝损伤组和正常对照组,急性肝损伤组与正常对照组相比无明显差异;流式细胞术检测结果显示ALR干预组小鼠肝组织中CD25+Foxp3+Treg/CD4+T细胞为(5.90±0.10)%,高于急性肝损伤组的(4.23±0.46)%和正常对照组的(2.93±0.74)%,急性肝损伤组显著高于正常对照组;ALR干预组小鼠肝组织中Foxp3 mRNA表达水平高于急性肝损伤组和正常对照组,急性肝损伤组高于正常对照组,但差异无统计学意义;ALR干预组与急性肝损伤组相比,IL-6 mRNA、TNF-αmRNA表达水平降低,而与正常对照组相比无明显变化,急性肝损伤组与正常对照组相比,IL-6 mRNA、TNF-αmRNA表达水平明显升高。结论 ALR通过上调Treg数量保护小鼠急性肝损伤,可能与Treg下调肝脏IL-6、TNF-α表达有关。     

藏药红景天甙诱导DC成熟并增强T细胞抑制肺癌的实验研究

观察红景天甙对Lewis肺癌移植瘤生长的作用,初步探讨其增强肿瘤免疫的机制。建立小鼠Lewis肺癌移植瘤模型,随机分为红景天甙(sachalin rhodiola rhizome,SRR)组,紫杉醇(taxelol,TAX)组和PBS组,计算抑瘤率并观察小鼠生存期;同时取SRR治疗荷瘤小鼠肿瘤引流DC,观察SRR体外处理后对DC表面分子、吞噬功能及T细胞杀伤功能的影响。在治疗第23天,SRR组肿瘤体积明显小于PBS组(P<0.05),与TAX组无显著性差异(P>0.05);SRR组小鼠生存期较PBS组显著延长(P<0.05),与TAX组无显著差异(P>0.05);SRR处理的树突细胞(dendritic cell,DC)表面分子MHCII、CD80表达显著上升,吞噬功能显著下降,由DC诱导的活化T细胞对肿瘤细胞的杀伤效应显著高于对照组(P<0.05)。SRR有效促进DC成熟、增强T细胞功能,同时可以抑制肿瘤生长。     

非小细胞肺癌患者的肿瘤转移与肿瘤浸润的CD8~+T细胞数量负相关

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者原位肿瘤中浸润T细胞数量与临床转移及患者临床预后的关系。方法选取肺癌组织共140例(其中发生转移的43例),采用免疫组织化学染色法检测肿瘤组织中CD4~+ T细胞和CD8~+ T细胞在肿瘤组织的浸润情况,对比未转移和转移患者肿瘤组织CD4~+T细胞和CD8~+ T细胞的浸润数量,采用生存分析对比不同CD4~+ T细胞和CD8~+ T细胞浸润数量对患者临床预后的影响。结果两组患者肿瘤组织CD4~+ T细胞比例差异不大,转移组患者肿瘤组织CD8~+ T细胞数量显著低于转移组,且未转移组CD8/CD4比例显著高于转移组, CD8~+ T细胞数量多和CD8/CD4比例高的患者总体生存率显著优于CD8~+ T细胞数量少和CD8/CD4比例低的患者。结论出现转移的NSCLC患者肿瘤组织CD8~+ T细胞浸润数量、 CD8/CD4比例均显著下降,与NSCLC转移患者预后差密切相关。     

痰热清注射液可增强Lewis肺癌化疗小鼠的免疫功能

目的研究痰热清注射液对Lewis肺癌化疗模型小鼠免疫功能的影响,探讨该药对肺癌小鼠的免疫调节作用。方法构建小鼠Lewis肺癌模型,分为模型对照组、单独痰热清治疗组、单独化疗组、联合痰热清化疗组,另设正常对照组。每组8只。取各组小鼠外周血后,引颈处死小鼠,取瘤组织、股骨、脾脏和胸腺用于后续实验。观察各组小鼠瘤组织质量、体积,流式细胞术检测各组瘤细胞凋亡水平及瘤组织CD3+T细胞、CD3-NK1.1+细胞浸润情况,HE染色观察胸腺组织结构,计算胸腺指数,并检测外周血淋巴细胞计数及股骨有核细胞总数、MTT法检测脾细胞毒性T细胞(CTL)杀伤活性。反转录PCR技术检测小鼠瘤组织表达γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA的水平。结果化疗后,联合痰热清化疗组小鼠胸腺指数、外周血淋巴细胞计数及股骨细胞总数均明显高于单独化疗组。化疗后,联合痰热清组小鼠瘤组织CD3+T细胞及CD3-NK1.1+细胞浸润程度均明显强于单独化疗组。化疗后,联合痰热清组小鼠瘤组织表达IFN-γ及TNF-αmRNA水平明显高于单独化疗组,脾CTL杀伤活性明显高于单独化疗组。结论痰热清注射液对肺癌化疗造成的机体的免疫功能损伤有明显保护作用,并对机体抗肿瘤免疫力有明显的促进作用。     

白及多糖通过调节免疫作用抑制结肠癌CT26荷瘤小鼠肿瘤生长

目的:研究白及多糖(BSP)对结肠癌CT26荷瘤小鼠的抗肿瘤及免疫调节作用.方法:从30只BALB/c小鼠中随机选取6只作为对照组(Control),剩余24只小鼠右前肢皮下接种CT26细胞构建CT26结肠癌小鼠模型,建模成功后将模型裸鼠分为荷瘤模型组(Model)、白及多糖低剂量组[BSP-L,100 mg/(kg·...     

Th22细胞对小鼠Lewis肺癌免疫逃逸的影响北大核心CSCD

目的探讨T辅助细胞22(Th22)在小鼠Lewis肺癌抗肿瘤免疫中的作用及其机制。方法通过皮下接种Lewis肺癌细胞悬液建立Lewis肺癌小鼠模型,IL-22中和抗体(IL-22 nAb)组小鼠在此基础上腹腔注射IL-22 nAb(50μg/kg)。14 d后处死小鼠,计算肿瘤质量和抑瘤率。流式细胞术检测小鼠Th22和调节性T细胞(Treg)的表达情况;RT-PCR法检测小鼠肿瘤组织TAP1和CTLA-4 mRNA表达;酶联免疫吸附法检测小鼠血清IL-4、IL-10、IL-22和TGF-β含量。结果与对照组比较,模型组小鼠Th22细胞数量和IL-22水平均明显升高(P<0.05);与模型组比较,IL-22 nAb组小鼠肺癌组织的质量和Treg细胞数量明显降低(P<0.05),肺癌组织TAP1和CTLA-4 mRNA表达显著降低(P<0.05),血清IL-4、IL-10和TGF-β表达明显降低(P<0.05)。结论IL-22通过调控Treg细胞功能,参与肺癌免疫逃逸过程。     

头颈肿瘤浸润γδT细胞的数量及表型与临床分期相关

目的研究头颈肿瘤中浸润的Foxp3+γδT细胞的数量与头颈肿瘤临床分期的关系。方法 用组织研磨法分离患者肿瘤浸润淋巴细胞(TILs),用密度梯度离心法分离患者外周血单个核细胞(PBMCs);用固相化anti-pan-TCRγδ单克隆抗体对TIL和PBMC进行2～4周的体外扩增,免疫荧光染色和流式细胞仪测定扩增前后的细胞;对头颈肿瘤组织芯片进行免疫组织化学染色。结果 15例头颈肿瘤组织标本TIL中γδT占CD3+T细胞的0.37%～12.35%,其中0.13%～34.38%为Foxp3+γδT。扩增后TIL中γδT占CD3+T细胞的20.38%～82.87%,且以Vδ1亚型为主。肿瘤组织芯片按照肿瘤TNM分期中的T分期分为4组,Foxp3+γδT细胞的比例随肿瘤分期的提高而增加。结论 现有证据证明了头颈肿瘤组织中存在Foxp3+γδT细胞的浸润,并提示肿瘤组织中调节表型T细胞的数量可能与头颈肿瘤的预后相关。     

乳香提取物对免疫低下实验小鼠T细胞功能的影响

研究乳香提取物提高小鼠免疫功能的机理与途径,探索乳香提取物对增强免疫功能的应用潜能。采用环磷酰胺制备免疫低下小鼠模型,以乳香提取物经灌胃给予免疫低下小鼠,连续10d。灌胃结束后取小鼠外周血采用荧光抗体染色并经流式细胞仪检测小鼠T细胞数量变化;取小鼠脾脏单个核细胞加抗CD3和CD28刺激并经3 H-TdR掺入试验,观察小鼠淋巴细胞增殖能力;取小鼠骨髓前体细胞与GM-CSF共培养,3 H-TdR掺入试验观察小鼠骨髓前体细胞增殖能力;ELISA方法检测小鼠血清中细胞因子。结果表明,给免疫低下模型小鼠口服乳香提取物后可有效增加小鼠总T细胞及CD4+T细胞数量:非服用组T细胞为12%±3%,服用组T细胞为28%±4%,两组相比具有显著差异(P<0.01);而CD4+T细胞从5%±2%(非服用组)增加至22%±3%(服用组),两组相比具有显著性统计学差异(P<0.01)。接受乳香提取物处理小鼠的T细胞对抗CD3和CD28刺激的增殖反应明显增高(P<0.05);IFN-γ、TNF-α、IL-12和IL-4水平上调;骨髓粒系细胞受GM-CSF刺激后增殖上调。因此,乳香提取物具有明显上调小鼠T细胞和Th1和Th2细胞数量和功能,其作用可能与刺激骨髓前体细胞增殖有关。     

香菇多糖联合顺铂对Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤S-100蛋白表达影响的研究

目的研究香菇多糖(lentinan,LNT)联合顺铂(DDP)对荷瘤小鼠实体瘤中S-100蛋白表达的影响。方法体外培养Lewis肺癌小鼠肿瘤细胞,接种健康BALB/c小鼠,荷瘤成功后予以治疗,实验分组为:荷瘤组,LNT组,DDP组以及LNT+DDP组。观察小鼠一般情况,并采用免疫组化法检测S-100蛋白表达,RTPCR检测S-100基因表达。结果肿瘤组织内S-100蛋白和m RNA表达水平LNT组、DDP组或LNT+DDP组比荷瘤组增多(0.05),LNT+DDP组比LNT组和DDP组增多(0.05)。结论 LNT同DDP联合使用上调S-100蛋白和基因的表达有协同作用。     

灭活自体T细胞增强小鼠免疫功能作用机制的研究

接种灭活自身反应性T细胞用于治疗自身免疫性疾病已获初步成效。本研究采用辐射方法灭活ConA活化自体T细胞,经皮下和腹腔免疫正常的C57BL/6J小鼠,结果发现,该免疫方案可明显上调T细胞功能,表现为:免疫小鼠体内活化T细胞增多且Th1型细胞因子分泌增加,淋巴细胞体外增殖能力增强且凋亡细胞明显减少。进一步研究结果提示,接种灭活自体T细胞可能通过上调Fas、GADD45β及下调FasL基因表达而促进T细胞的活化和存活,并增加其生物学功能。这些结果表明,自体T细胞免疫具有增强机体的细胞免疫功能,为其抗肿瘤免疫作用提供了一定的实验依据。     

表达CD40配体的溶瘤痘苗病毒(CD40L-VV)抑制结直肠癌细胞生长并增强荷瘤小鼠T细胞抗肿瘤活性

目的 探索表达CD40配体的溶瘤痘苗病毒(CD40L-VV)对结直肠癌的抗肿瘤活性.方法 通过将CD40L的基因序列整合至VV的DNA骨架中,获得CD40L-VV.通过体外感染肿瘤细胞,验证其溶瘤活性及检测CD40L的表达情况.利用CD40L-VV和单纯VV对结直肠癌移植瘤模型进行治疗后,监测肿瘤生长状况,并通过流式细...     

小鼠Lewis肺癌细胞Foxp3的表达对T淋巴细胞增殖的影响及机制

目的:检测小鼠Lewis肺癌(LLC)细胞中Foxp3基因的表达,研究小鼠LLC细胞中Foxp3过表达对T淋巴细胞的增殖和TGF-β1和IL-10表达的影响,探讨LLC细胞中Foxp3的表达在肿瘤免疫逃逸中的作用及可能机制。方法:分别采用RT-PCR和免疫组化染色法检测LLC细胞中Foxp3的mRNA和蛋白表达。构建pcDNA3.1-Foxp3重组质粒,采用FuGENEHD瞬时转染LLC细胞,实验分3组:LLC组,pcDNA3.1-LLC组及pcDNA3.1-Foxp3-LLC组。RT-PCR和免疫组化方法分别检测转染48小时后Foxp3基因的表达,通过淋巴细胞转化试验检测Foxp3过表达对T淋巴细胞增殖的影响,RT-PCR和ELISA方法分别检测Foxp3过表达对TGF-β1和IL-10的mRNA表达及蛋白分泌的影响。结果:在LLC细胞中检测到Foxp3mRNA及蛋白的表达;瞬时转染48小时后pcDNA3.1-Foxp3-LLC组LLC细胞中Foxp3表达增高,与LLC组和pcDNA3.1-LLC组相比差异显著(P0.01);pcDNA3.1-Foxp3-LLC组LLC细胞及培养上清对T淋巴细胞增殖的抑制率均明显高于LLC组和pcDNA3.1-LLC组(P0.05);pcDNA3.1-Foxp3-LLC组TGF-β1、IL-10mRNA和蛋白的表达水平明显高于LLC组和pcDNA3.1-LLC组(P0.05)。结论:LLC细胞表达Foxp3,Foxp3可能通过上调TGF-β1和IL-10的表达来抑制T淋巴细胞的增殖,进而参与肿瘤的免疫逃逸。     

Tregs调节小鼠肝癌局部引流淋巴结内免疫效应细胞的功能

目的:探讨肿瘤引流淋巴结(TDLNs)内调节性T细胞(Tregs)对局部免疫效应细胞的调节作用。方法:建立小鼠肝癌TDLNs模型,通过免疫组织化学染色和流式细胞仪检测TDLNs内Foxp3+Tregs和CD4+及CD8+T细胞的数量。实时定量PCR测定Foxp3mRNA表达水平。应用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测TDLNs内CD8+T细胞分泌IFN-γ的功能。结果:TDLNs内Tregs和效应性T细胞均明显扩增,Tregs弥散分布于CD8+T细胞聚居区。TDLNs内Foxp3mRNA表达水平显著高于同一接种肿瘤小鼠腹股沟淋巴结(P0.01)和脾脏(P0.01)。Tregs趋向于在TDLNs内聚集,而非其它外周淋巴结位点。荷瘤小鼠的脾脏Foxp3mRNA表达明显高于注射LPS小鼠脾脏。Tregs抑制TDLNs内已初始化的CD8+T细胞分泌IFN-γ的功能,经anti-CD3刺激激活后,CD8+T细胞分泌IFN-γ的功能可恢复。结论:TDLNs内Tregs通过调控CD8+T细胞功能而发挥重要作用,清除Tregs是发挥特异性肿瘤免疫治疗的关键。     

山仙颗粒对Lewis肺癌荷瘤小鼠抗肿瘤免疫力及外周血中IFN-γ、TNF-β、IL-10的影响

目的:观察山仙颗粒对Lewis肺癌细胞增殖的影响及对Lewis肺癌荷瘤小鼠抗肿瘤免疫力及免疫微环境的影响,以探究山仙颗粒抑瘤及提高机体抗肿瘤免疫力的分子机制,为其临床应用提供深层次的理论依据。方法:腋下皮肤移植Lewis肺癌细胞建立小鼠荷瘤模型,分为空白组、模型组、化疗组和山仙颗粒组;通过对Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤组织称重并计算抑瘤率,采用免疫组织化学法检测脾脏组织中淋巴细胞CD、CD8表达情况,采用CCK-8法检测淋巴细胞对Lewis肺癌细胞增殖的影响,采用ELISA法检测外周血中IFN-γ、TNF-β与IL-10的变化。结果:(1)山仙颗粒组对Lewis肺癌的抑瘤率为45.99%,显著高于化疗组(P0.05);(2)小鼠淋巴细胞可抑制Lewis肺癌细胞的增殖,并与淋巴细胞浓度和作用时间呈正相关;且脾脏组织中CD4~+T细胞、CD4~+/CD8~+比值及淋巴细胞对Lewis肺癌细胞的抑制率,模型组和化疗组显著低于空白组(P0.05),山仙颗粒组显著高于模型组和化疗组(P0.05),而山仙颗粒组与空白组比较无显著差异(P0.05);(3)模型组和化疗组小鼠外周血中的IFN-γ和TNF-β显著低于空白组(P0.05)、而IL-10显著高于空白组(P0.05),山仙颗粒组小鼠外周血中的IFN-γ、TNF-β显著高于模型组和化疗组(P0.05),而IL-10显著低于模型组与化疗组(P0.05);山仙颗粒组小鼠外周血中的IFN-γ、TNF-β、IL-10与空白组比较无明显差异(P0.05)。结论:山仙颗粒能明显抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤组织的生长,并具有提高小鼠脾脏指数、增强T淋巴细胞活性、使外周血中的IFN-γ、TNF-β上调而IL-10下调,提示山仙颗粒的抗肿瘤作用可能通过调节CD4~+T淋巴细胞含量、CD4~+/CD8~+、Th1/Th2比值,恢复肿瘤患者免疫功能稳态,提高机体免疫力、加强免疫监视功能有关。     

递送PD-1 siRNA的肿瘤细胞膜包裹的纳米颗粒增强小鼠口腔鳞状细胞癌的抗肿瘤免疫

目的确定携带程序性细胞死亡蛋白1小干扰RNA(PD-1 siRNA)的肿瘤细胞膜包裹的纳米颗粒(M-SNP)是否可以靶向肿瘤组织抑制口腔鳞状细胞癌的生长,以及它是否可以激活肿瘤部位的抗肿瘤免疫反应。方法采用复乳化溶剂挥发法及机械挤出法制备M-SNP,透射电镜观察颗粒形态,差示扫描量热法测定M-SNP的粒径;共聚焦显微镜观察淋巴细胞对M-SNP的摄取,实时定量PCR检测淋巴细胞摄取M-SNP后PD-1的表达情况;活体成像观测M-SNP的体内肿瘤靶向性,SCC7小鼠鳞状细胞癌细胞皮下移植瘤模型评估M-SNP的肿瘤抑制活性,流式细胞术检测肿瘤浸润T细胞的表型。结果透射电镜及差示扫描量热法表明M-SNP构建成功,共聚焦显微镜结果显示淋巴细胞可以成功摄取M-SNP,实时定量PCR结果表明淋巴细胞摄取包裹PD-1 siRNA的M-SNP后PD-1表达显著下调,活体成像结果表明M-SNP可以有效靶向肿瘤组织,SCC7细胞皮下移植瘤模型表明M-SNP可以显著抑制肿瘤生长,流式细胞术结果显示M-SNP治疗后肿瘤浸润T细胞中KI抗原67(ki67)及γ干扰素(IFN-γ)表达显著升高,而PD-1和T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(TIM-3)表达则显著降低。结论M-SNP可以介导PD-1 siRNA特异性靶向递送到同源肿瘤组织,激活抗肿瘤免疫反应,抑制肿瘤生长,为口腔鳞状细胞癌的潜在治疗策略。     

肿瘤抗原活化T细胞体外模型的建立及其免疫效应研究

目的建立体外肿瘤抗原活化T细胞模型，研究活化后T细胞的功能特点与分化方向。方法将肝癌BEL-7402细胞与健康人外周血单个核细胞（PBMC）和协同刺激分子抗CD3、CD28单抗共培养（初次刺激组），或与经肝癌细胞刺激的PBMC共培养（再次刺激组），共培养时间分别为24、48、72h。另设靶细胞对照组和PBMC对照组。各组实验均设6孔。以流式细胞仪分析PBMC经肝癌细胞刺激后CD45RO＋T细胞比例变化；MTT法检测活化T细胞对肝癌细胞的杀伤率；双抗体夹心ELISA法检测活化T细胞IFN-γ，和IL-4分泌水平；流式细胞仪分析T细胞表面Fas配体表达和T细胞受体（TCR）Vβ亚家族表达水平，并比较初次刺激组与再次刺激组T细胞免疫效应的差异。结果健康人PBMC在肿瘤抗原和协同刺激分子作用下，CD45RO＋T细胞比例逐渐上升，共培养72h时为（16．1±0．9）％，明显高于PBMC对照组[（2．4±0．3）％，P〈0．05]。活化T细胞对肝癌细胞的杀伤率随共培养时间的延长而增大[24h为（28．4±6．7）％、48h为（60．4±6．2）％、72h为（78．0±9．3）％]；IFN-γ，分泌水平升高，共培养48h时为（932±117）ng／L，明显高于PBMC对照组[（157±30）ng／L，P〈0．05]：T细胞表面FasL表达增加至（8．1±1．8）％，明显高于PBMC对照组[（0．5±0．2）％，P〈0．01]；肿瘤抗原刺激后，TCRVβ的表达水平与PBMC对照组相比有所增加。再次刺激组CD45RO＋T细胞比例、对肝癌细胞的杀伤率、IFN-γ分泌水平及FasL表达水平均明显高于初次刺激组。结论成功建立了体外肿瘤抗原活化T细胞模型。活化T细胞具有明显的免疫效应，并向Th1和Tc1方向分化；再次接触相同抗原时，其免疫效应更为迅速、强烈，表现出一定的记忆特性。