蓝氏贾第鞭毛虫基因分型—磷酸丙糖异构酶（tim）基因序列 …

蓝氏贾第鞭毛虫（简称贾第虫）细胞内的磷酸丙糖异构酶（ｔｉｍ）基因编码磷酸丙糖异构酶。对扩增后的ｔｉｍ基因做序列分析，可对来源于不同地理位置和／或不同宿主的贾第虫株进行基因分型，并以此确定它们之间的遗传学关系。为了确定中国虫株的基因型，我们对分离自北京（Ｃ１），四川（Ｃ２）和福建（Ｃ３）３株人源贾第虫ｔｉｍ基因序列进行了分析。结果表明，Ｃ１和Ｃ２具有相同的遗传学特性，可划归为目前公认的分型系统中的第     

通过基因扩增产物的限制性内切酶分析划分肠道蓝氏贾？…

人们已经使用聚合酶链反应来扩增编码不同的变异性表面蛋白的基因片断。９个瑞士蓝氏贾第虫无菌虫株被用于基因分析。根据产量、大小和限制性片断长度的多态性分析鉴定３个基因型。其中有５个蓝氏贾第虫株（０１，Ｂ１，Ｂ２，Ｂ３－１Ａ１和Ｃ１）被分类属于基因组Ⅰ。一个从人类获得的虫株（Ｈ２－１７Ａ）被分类属于基因组Ⅱ，它产生了一个特殊的ＶＳＰ１２６７的ＰＣＲ产物。这个虫株也产生了１．８ｋｇ ｔｓｐ１１和０．５２ｋ     

DIFFERENTIATION OF MAJOR GENOTYPES OF GIARDIA LAMBLIA(G.INTESTINALIS) BY RESTRICTION ANALYSIS OF GENE AMPLIFICATION PRODUCTS

人们已经使用聚合酶链反应来扩增编码不同变异性表面蛋白的基因片断。９个瑞士蓝氏贾第虫无菌虫株被用于基因分析。根据产量、大小和限制性片断长度的多态性分析鉴定３个基因型。其中有５个蓝氏贾第虫株（０１，Ｂ１，Ｂ２，Ｂ３－１Ａ１和Ｃ１）被分类属于基因组Ⅰ。一个从人类获得的虫株（Ｈ２－１７Ａ）被分类属于基因组Ⅱ，它产生了一个特殊的ＶＳＰ１２６７的ＰＣＲ产物。这个虫株也产生了１．８ｋｂｔｓｐ１１和０．５２ｋｂ类似ｔｓａ４１７／ｔｓｐ１１的ＰＣＲ产物，这个产物具有基因组Ⅱ型虫株的限制性片断长度的多态性。３个虫株（Ｏ２－４Ａ１，Ｏ３和Ｈ３－１５Ｋ２）代表了一个新的基因型，它和基因组Ⅰ和基因组Ⅱ密切相关。这３个虫株显示了在ｔｓｐ１１ＰＣＲ产物中完全相同的限制性片断长度的多态性，同时未能产生１个ＶＳＰ１２６７ＰＣＲ产物。这个结果表明能用这种方法划分肠道蓝氏贾第虫的不同基因型。     

中国广西狂犬病毒野毒株（CGX89－1株）糖蛋白基因核酸序列测定和分析

本文报告了中国广西狂犬病毒野毒株（ＣＧＸ８９－１株）糖蛋白基因ｃＤＮＡ的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列。ＣＧＸ８９－１株的糖蛋白基因从起始密码ＡＴＧ到终止密码ＴＡＡ共有１５７５个核苷酸残基，可编码形成５２４个氨基酸残基的多肽链，经修饰后形成具有５０５个氨基酸残基构成的狂犬病毒糖蛋白。ＣＧＸ８９－１株的糖蛋白基因和核苷酸组成分别为：Ａ占２７．１１％，Ｔ占２６．２９％，Ｃ占２１．９７％和Ｇ占２４．６３％。核苷酸序列和巴斯德株（ＰＶ株），国际标准攻击毒株（ＣＶＳ株），中国狂犬病毒疫苗株（３ａＧ株）相比，同源性分别为８４．１％，８３．１％和８４．５％。其推导的氨基酸序列和ＰＶ株、ＣＶＳ株和３ａＧ株相比其同源性分别为９２．４％，８９．７％和８９．５％。ＣＧＸ８９－１株也具有３个Ｎ－糖基化位点，分别位于第３７位、１５７位和３１９位的氨基酸残基上。糖蛋白的膜外区部分重要抗原位点和ＰＶ株、ＣＶＳ株及３ａＧ株具有较高的一致性。     

用PCR扩增tim基因检测蓝氏贾第鞭毛虫

采用聚合酶链反应 (PCR)对蓝氏贾第鞭毛虫 (Giardialamblia)的磷酸丙糖异构酶 (triosephosphateisomerase ,缩写为tim)基因进行特异性扩增 ,结果扩增出 1条 6 83bp的DNA片段。此方法的特异性可高达10 0 % ,而其它DNA样本 ,如日本血吸虫 (Schistosomajaponicum)、刚地弓形虫 (Toxoplasmagondii)、微小隐孢子虫 (Cryptosporidiumparvum)、溶组织内阿米巴 (Entamoebahistolytica)、旋毛虫 (Trichinellaspiralis)和阴道毛滴虫 (Trichomonasvaginalis) ,以及人体血细胞等均未出现扩增反应。本法的敏感性也很高 ,可检测到0 4pg贾第虫包囊的DNA。 13株来自不同地理位置和 或宿主的贾第虫DNA样本在PCR中均各产生 1条长为 6 83bp的目的片段。上述结果表明本实验建立的检测贾第虫的PCR方法有效     

中美四株蓝氏贾第虫可溶性蛋白和同工酶分析

对四株蓝氏贾第虫「三株分离自中国（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３）」,一株分离自美国（ＣＤＣ）的可溶性蛋白和同工酶分别用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＰＡＧＥ法进行分析,每一受试虫株在ＳＤＳ－＝ＰＡＧＥ中均显示出众多蛋白带,其主要数目分别为９、１３、１３、１。我数带的分子量介于１７．５ＫＤａ－９４ＫＤａ之间,同工酶分析结果表明,在酯酶ＥＳＴ）分析中,ＣＤＣ出现４条带,其中３条深染,Ｃ３呈现３条浅带,但Ｃ１和Ｃ２未邮条带出现     

用PCR扩增tim基因检测蓝氏贾第鞭毛虫

采用聚合酶链反应(PCR)对蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)的磷酸丙糖异构酶(triose phosphate isomerase,缩写为tim)基因进行特异性扩增,结果扩增出1条683bp的DNA片段.此方法的特异性可高达100%,而其它DNA样本,如日本血吸虫(Schistosoma japonicum)、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)、微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)、溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica)、旋毛虫(Trichinella spiralis)和阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis),以及人体血细胞等均未出现扩增反应.本法的敏感性也很高,可检测到0.4pg贾第虫包囊的DNA.13株来自不同地理位置和/或宿主的贾第虫DNA样本在PCR中均各产生1条长为683bp的目的片段.上述结果表明本实验建立的检测贾第虫的PCR方法有效.     

实验感染C57 BL/6N小鼠粪内蓝氏贾第鞭毛虫tim基因检测

建立蓝氏贾第鞭毛虫感染动物模型 ,用PCR技术对感染动物粪内该虫tim基因进行检测 ,探讨蓝氏贾第鞭毛虫基因检测方法。用人源蓝氏贾第鞭毛虫河北株 (CD)和江苏株 (XZ)的包囊分别接种两组C5 7BL 6N小鼠 ,于接种后第 6天、1 0天和 1 4天收集粪便标本 ,采用酚 氯仿法提取总DNA。将提取液分别按 1 0 0 、 1 0 - 1 、 1 0 - 2 和 1 0 - 3稀释并纯化。根据该虫磷酸丙糖异构酶 (Triosephosphateisomerase,tim)基因合成 1对特异性引物 ,采用PCR技术分别扩增各个稀释度的样本。结果贾第虫阳性样本均被扩增出相应基因的 1条 683bp长的片段 ,纯化后的各个稀释度样本的PCR检测阳性率随稀释倍数的增加而增高。本研究结果为贾第虫感染基因检测方法的进一步研究提供了实验资料。     

先天性尿道下裂与SRD5A2及SRY基因突变关系研究

目的　探讨中国人先天性尿道下裂的发生与５α还原酶２（ Ｓ Ｒ Ｄ５ Ａ２） 基因突变及 Ｓ Ｒ Ｙ 基因突变的关系。方法　收集先天性尿道下裂患儿静脉血２３ 例,抽提 Ｄ Ｎ Ａ。经 Ｐ Ｃ Ｒ 分别扩增 Ｓ Ｒ Ｄ５ Ａ２ 基因的第１ 至第５ 外显子及 Ｓ Ｒ Ｙ 基因的 Ｄ Ｎ Ａ 片段。对各扩增片段采用单链构象多态性诊断法（ Ｐ Ｃ Ｒ Ｓ Ｓ Ｃ Ｐ） ,筛选基因突变标本,有电泳异常的标本进行测序分析。结果　经 Ｐ Ｃ Ｒ Ｓ Ｓ Ｃ Ｐ 发现３ 例 Ｓ Ｒ Ｄ５ Ａ２ 基因的第４ 外显子 Ｄ Ｎ Ａ 扩增片段电泳带位置异常,经 Ｄ Ｎ Ａ 序列分析证实２ 例为纯合子型第２２７ 位密码子由 Ｃ Ａ Ａ 替代 Ｃ Ｇ Ａ（ Ａｒｇ２２７ Ｇｌｎ） ;１ 例为双重杂合子型突变,第２２７ 位密码子由 Ｃ Ａ Ａ 替代 Ｃ Ｇ Ａ,同时第１８６ 位密码子由 Ｔ Ｔ Ｇ 替代 Ｔ Ｔ Ｔ（ Ｐｈｅ１８６ Ｌｅｕ） 。 Ｐ Ｃ Ｒ Ｓ Ｓ Ｃ Ｐ 检测 Ｓ Ｒ Ｙ 基因片段未发现异常电泳带。结论　 Ｓ Ｒ Ｄ５ Ａ２ 基因突变,可能是先天性尿道下裂的病因之一, Ｓ Ｒ Ｄ５ Ａ２ 基因的第２２７ 位密码子可能为中国人该基因的突变热点,而尿道下裂中 Ｓ Ｒ Ｙ 基因的突变少见。     

用PCR扩增tim基因检测蓝氏贾第鞭毛虫

采用聚合酶链反应(PCR)对蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)的磷酸丙糖异构酶(triose phosphate isomerase,缩写为tim)基因进行特异性扩增,结果扩增出1条683bp的DNA片段.此方法的特异性可高达100%,而其它DNA样本,如日本血吸虫(Schistosoma japonicum)、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)、微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)、溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica)、旋毛虫(Trichinella spiralis)和阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis),以及人体血细胞等均未出现扩增反应.本法的敏感性也很高,可检测到0.4pg贾第虫包囊的DNA.13株来自不同地理位置和/或宿主的贾第虫DNA样本在PCR中均各产生1条长为683bp的目的片段.上述结果表明本实验建立的检测贾第虫的PCR方法有效.     

STUDIES ON VARIANT CYSTEINE-RICH SURFACE PROTEINS IN SWISS ISOLATES OF GIARDIA LAMBLIA

从羊、牛和人各自分离出的贾第虫株都具有一个大的膜蛋白。用生物素和放射性碘标记后，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示此膜蛋白分子量的大小，在不同种群之间有着明显的差异。［３５Ｓ］半胱氨酸代谢标记及电泳分析表明每个克隆化虫株都有一个主要蛋白，此蛋白的大小与表面标记技术展示的表面蛋白相似。贾第虫株富含半胱氨酸表面蛋白（ＣＲＩＳＰｓ）具有变异能力。虫株在连续体外克隆化培养几代后，在克隆化的群体中自发的出现了一些新的ＣＲＩＳＰｓ，用抗Ｏ２－４Ａ１虫株表面抗原的特异性抗血清对此虫株进行攻毒反应，结果发现在Ｏ２－４Ａ１的培养液中，这一克隆却存活下来。对重新克隆存活下来的滋养体进行半胱氨酸代谢标记，发现大量新的变异子，而不同克隆的ＣＲＩＳＰ其分子量存在着明显的差异。本文研究提示来自不同宿主的贾第虫株都存在着富含半胱氨酸表面蛋白（ＣＲＩＳＰ）。ＣＲＩＳＰｓ的变异不仅限于从人分离的贾第虫株，而在各类贾第虫株之间是一种普遍现象。     

SOLUBLE PROTEIN AND ISOENZYME ANALYSIS OF FOUR GIARDIA ISOLATES FROM CHINA AND AMERICA

对四株蓝氏贾第虫［三株分离自中国（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３）］,一株分离自美国（ＣＤＣ）］的可溶性蛋白和同工酶分别用ＳＤＳ—ＰＡＧＥ和ＰＡＧＥ法进行分析。结果表明,每一受试虫株在ＳＤＳ—ＰＡＧＥ中均显示出众多蛋白带,其主带数目分别为９、１３、１３、１１。大多数带的分子量介于１７．５ＫＤａ～９４ＫＤａ之间。同工酶分析结果表明,在酯酶（ＥＳＴ）分析中,ＣＤＣ出现４条带,其中３条深染。Ｃ３呈现３条浅带,但Ｃ１和Ｃ２未见条带出现。在酸性磷酸酶（ＡＰ）分析中,三个中国虫株均各出现１条浅带和１条深带,而在ＣＤＣ中只出现１条。在苹果酸脱氢酶（ＭＤＨ）分析中,Ｃ１可见１条带,而在Ｃ３为２条,Ｃ２和ＣＤＣ未见条带。在苹果酸酶（ＭＥ）分析中,中国三个虫株均各出现１条带,而ＣＤＣ则无     

中国登革2型病毒分离株乳鼠致病性差异与基因变化关系的研究

本文报道１９８７年从广西病人血清中分离的登革２型（Ｄ２）病毒Ｄ２－４３株和１９８５年从海南病人血清中分离的Ｄ２－０４株乳鼠致病性的差异与基因变化的关系。结果表明Ｄ２－４３株对乳鼠致病，Ｄ２－０４株不致病。Ｄ２－４３株和Ｄ２－０４株Ｃ到ＮＳ１基因的读码框架基本相同，均由３３８１核苷酸组成，编码氨基酸总数１１２７。包含三个结构蛋白Ｃ．ＰｒＭ（Ｍ）、Ｅ和一个非结构蛋白ＮＳ１。该两株病毒核苷酸序列同源性为９３．８％，氨基酸序列的类似性为９１．３％。Ｃ和Ｅ基因同源性为９５．０％～９５．８％，ＮＳ１基因为９２．２％，Ｍ基因为８６．７％，两株之间核苷酸序列的主要差异是在Ｍ基因。两株病毒的Ｃ－ＮＳ１基因与国际参考毒株比较，４３株与ＪＡＭ株类侧性最高，其次是ＮＧＣ株，与Ｓ１株类似性最小。而０４株只有Ｃ、Ｅ和ＮＳ１与ＪＡＭ株最高，ＰｒＭ（Ｍ）都与ＮＧＣ株最高。４３株与０４株的Ｍ基因相比较，０４株的ＰｒＭ（Ｍ）基因的同源性低于４３株，说明两株与国际参考毒株比较，主要差异也在Ｍ基因，乳鼠致病性差异可能与Ｍ基因变化有关。     

雌二醇诱致大鼠垂体催乳素瘤细胞中催乳素基因第1,2,4外显子的…

本工作探讨了雌二醇（Ｅ２）诱致的雄性ＳＤ大鼠垂体催乳素（ＰＲＬ）瘤中ＰＲＬ基因含ＣＣＧＧ位点的第１、２、４外显子中ＣＣＧＧ位点甲基化状态的改变。提取基因组ＤＮＡ并分别用对非甲基化ＣＣＧＧ位点不敏感而对甲基化ＣＣＧＧ敏感的ＨｐａⅡ及对甲基化和非甲基化ＣＣＧＧ位点均不敏感的ＭｓｐⅠ进行完全消化后，利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法，对含有ＣＣＧＧ位点的ＰＲＬ基因第１、第２和第４外显子的部分序列进行扩增。结     

从我国5城市分离的10株GBV-CHGV基因型分析

最近研究表明〔１,２〕,世界各地分离的ＧＢＶＣ／ＨＧＶ株间存在不同的基因型,即１型、２型和３型。上述分型所采用的核酸序列大多数来自非洲、欧美和日本等地,我国ＧＢＶＣ／ＨＧＶ分离株的基因型及其分布则报道较少。为此,本研究应用分子进化学方法对从我国５城市分离的１０株ＧＢＶＣ／ＨＧＶ５′ＵＴＲ部分序列进行基因分型。结果报道如下：材料与方法１－血清标本：ＨＧＶＲＮＡ阳性的血清标本共１０份,其中ＢＪ１和ＳＪＺ１～２分别采于北京市和石家庄市的献血员血清;ＢＪ２和ＮＣ１为北京市和南昌市急性乙型肝炎病人…     

用聚合酶链反应—银染单链构象多态性鉴别腮腺炎病毒株

用腮腺炎病毒小疏水蛋白（ＳＨ）基因及其旁侧区的逆转录（ＲＴ）套式聚合酶链反应（Ｎ－ＰＣＲ）产物进行银染单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析，建立了较适的样品变性和聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）条件。根据单链电泳模式可将所测６株腮腺炎病毒分为四种ＳＳＣＰ模式，３株兰州野毒株Ｗｌｚ１，Ｗｌｚ２，Ｗｌｚ３呈现一种模式，这３株病毒的ＳＨ基因及其旁侧区ｃＤＮＡ序列之间平均差异仅为０．９６％；两株上海野毒株Ｗｓｈ１和Ｗｓｈ２株的相应序列之间差异为４％，呈现另两种模式。Ｅｎｄｅｒｓ株呈现一种与野毒株差别较大的特殊模式。３株兰州野毒与２株上海野毒相应区域序列之间差异为３．４％～４．５％，故本法可区别ＳＨ基因及其旁侧区ｃＤＮＡ序列之间差异为３．４％的野毒株，且ＳＳＣＰ模式的相近程度与相应区域中核苷酸序列同源性大小一致。此法可用于腮腺炎病毒株分子特性和遣传变异的初步鉴定和分子流行病学研究     

铜绿假单胞菌随机扩增多态性DNA指纹法基因分型研究

建立了铜绿假单胞菌（ＰＡ）随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）指纹图基因分型方法，并应用于流行病学相关或不相关的７５个ＰＡ菌株的基因分型。分型率为１００％。３２株新生儿暴发感染菌株，可分成４个血清型和５个ＲＡＰＤ谱型，其中２５株属于同一谱型。在８例患者的垂直追踪菌株中，除有１例其第１和第３个分离株的血清型和ＲＡＰＤ谱型均相同，但与第２个分离株的血清型和ＲＡＰＤ谱型不同外，其余７例前后菌株的谱型相同。１３株散发菌株可分成３个血清型和１０个ＲＡＰＤ谱型；１２株流行病学无关菌株的ＲＡＰＤ谱型均不相同。本研究结果表明，ＲＡＰＤ指纹图基因分型法具有分型率高、分辨力强、比较快速简便等优点，并且不需要已知核酸序列，是在分子水平上对微生物感染的病原学、发病机理及流行病学研究的较理想的方法。     

人朊蛋白基因外显子Ⅰ及其上游序列具有启动子样活性

目的 鉴定朊蛋白（ＰｒＰ）基因转录启动子位置。方法 利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增人ＰｒＰ基因外显子Ⅰ及其上游序列，序列鉴定后插入ＣＡＴ报道质粒ｐＢＬ－ＣＡＴ６，分别转染ＨｅＬａ、ＣＯＳ７和Ｓｈ－ｓｙ５ｙ细胞系，检测ＣＡＴ表达值；提取三种细胞蛋白，以条带移动实验检测细胞转录激活因子ＳＰ１含量。结果 人ＰｒＰ基因外显子Ｉ及其上游序列为ＧＣ富含，带有多个ＳＰ１可能性综合位点，但无明显ＴＡＴＡ盒；瞬时转染结果显示这段序列可诱导２～３倍的ＣＡＴ表达增强；定量移动条带实验证明ＨｅＬａ细胞中含有较高浓度的ＳＰ１，而ＣＯＳ７和Ｓｈ－ｓｙ５ｙ细胞中ＳＰＩ含量极低。结论 人ＰｒＰ基因外显子Ｉ及其上游序列具有启动子样功能，为弱的非ＴＡＴＡ盒启动子；不同组织来源的细胞中ＳＰ１含量不同，在神经细胞系Ｓｈ－ｓｙ５ｙ中人ＰｒＰ基因外显子Ｉ     

抗HSV糖蛋白单克隆抗体可变区基因的克隆和序列测定

选用具有动物体内高保护作用的抗ＨＳＶ－１／ＨＳＶ－２型共同性糖蛋白Ｃ（ｇＣ）单克隆抗体１Ａ１２，从其杂交瘤细胞中提取总ＲＮＡ，以Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）１５为引物反转录合成ｃＤＮＡ，用一对鼠抗体通用ＶＨ引物和一对Ｖ引物进行ＰＣＲ，扩增出１Ａ１２ＶＨ和１Ａ１２ＶＬ基因，并分别克隆入ｐＵＣ１８质粒中，序列分析结果表明，１Ａ１２ＶＨ基因由３３６ｂｐ组成，编码１１２个氨基酸，隶属于小鼠重链第３组亚组（Ｄ）；１Ａ     

中国狂犬病固定毒aG株N,NS和M蛋白基因的核苷酸序列测定

报告了中国狂犬病固定毒ａＧ株核衣壳蛋白（Ｎ蛋白），核蛋白壳磷酸蛋白（ＮＳ蛋白，又称Ｍ１蛋白）和基质蛋白（Ｍ蛋白，又称Ｍ２蛋白）蛋白基因的核苷酸序列和氨基酸推导序列。各基因编码区的全长分别是：Ｎ基因１３５２，ＮＳ基因８９４和Ｍ基因６０９个核苷酸。ａＧ和ＣＶＳ株的Ｎ，ＮＳ和Ｍ基因的核苷酸序列都具有高的同源性，分别为９１．９５％，９０．２７％和９０．８０％。