2450 MHz微波辐照对人鼻咽癌细胞增殖与细胞周期的影响

目的〓〖HTK〗探讨微波辐照对人鼻咽癌细胞增殖与细胞周期的影响。〖HTW〗方法〓〖HTK〗运用微波理疗仪以连续波、垂直极化照射方式对人鼻咽癌细胞CNE-2行微波辐射（频率2450MHz）。实验分为4组：空白对照组,10、20、30mW/cm2微波组。利用MTT法和流式细胞技术检测微波辐照对人鼻咽癌细胞增殖与细胞周期的影响。〖HTW〗结果〓〖HTK〗随着微波剂量的增加,辐照组细胞存活率呈逐渐下降的趋势。20mW/cm2和30mW/cm2组存活率为76.75%、65.07%,两组与对照组和10mW/cm2组相比差异有高度统计学意义(P<0.01) 。随着微波剂量的增加,20mW/cm2组和30mW/cm2组均出现了亚G1峰,两组凋亡细胞的数量有随微波强度增强而增加的趋势。〖HTW〗结论〓〖HTK〗微波辐照能抑制人鼻咽癌细胞的增殖,促进细胞凋亡。     

miR-30c对鼻咽癌CNE-1细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的 观察miR-30c对鼻咽癌CNE-1细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法 过表达miR-30c质粒载体转染CNE-1细胞,同时设立空质粒载体转染阴性对照组和无处理的空白对照组。荧光定量PCR检测miR-30c表达水平,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡。结果 鼻咽癌组织中miR-30c的表达量为0.23±0.05,显著低于癌旁非肿瘤鼻咽组织的0.37±0.08（P <0.01）。过表达miR-30c组表达量（0.46±0.12）显著高于空白对照组（0.17±0.03）和阴性对照组（0.18±0.04）（P 均<0.01）。在24、48、72小时过表达miR-30c组OD值显著低于空白对照组和阴性对照组（P 均<0.01）。过表达miR-30c组G1期细胞比例（90.36±10.23）% 显著高于空白对照组（74.46±9.14）%和阴性对照组（75.25±9.23）%（P <0.01）。过表达miR-30c组凋亡细胞比例（31.06±5.12）%显著高于空白对照组（3.18±0.72）%和阴性对照组（3.56±0.78）%（P <0.01）。结论 过表达miR-30可以现在抑制鼻咽癌细胞增殖、细胞周期以及诱导细胞凋亡。     

抗癌活性肽对鼻咽癌细胞周期的影响

目的探讨抗癌活性肽(anti-cancer bioactive peptide,ACBP)肝肽和科脾肽对人鼻咽癌细胞株CNE体外增殖抑制作用及细胞周期的影响。方法将人鼻咽癌CNE细胞与不同浓度的ACBP进行体外培养,采用四甲基偶氮唑蓝法测定不同浓度的ACBP对CNE细胞的生长抑制率;光镜下观察形态学变化;流式细胞仪分析细胞周期与凋亡率。结果质量浓度5．0-20．0μg／ml的ACBP均能抑制CNE细胞的生长,且随浓度及作用时间延长抑制率上升,20．0μg／ml ACBP作用72 h后,肝肽组的抑制率为63．0％,科脾肽组抑制率为46．7％。光镜下可观察到ACBP作用后的细胞凋亡现象。流式细胞仪结果显示:5．0μg/ml肝肽和科脾肽作用CNE细胞24 h的早期凋亡率较高,分别为(11．8±0．3)％和(8．1±0．2)％,分别与对照组比较,差异均有统计学意义(t值分别为42．535和47．300, P值均为0．000);20．0μg／ml的肝肽和科脾肽作用CNE细胞,随作用时间延长S期细胞构成比有明显上升。结论肝肽和科脾肽对CNE细胞均有抑制增殖的作用,其抗鼻咽癌细胞增殖作用机制可能为诱导肿瘤细胞凋亡,调控肿瘤细胞周期。     

bcl-x_s促进三氧化二砷诱导鼻咽癌细胞凋亡的研究

目的　利用促进凋亡基因bcl-xs 降低肿瘤细胞凋亡阈值 ,增强三氧化二砷诱导的鼻咽癌细胞凋亡 ,以探索提高鼻咽癌化疗敏感性的新途径。方法　将含有人bcl -xs 基因的重组真核表达质粒导入人鼻咽癌低分化上皮细胞株 (CNE - 2Z) ,以不含有bcl-xs 基因的质粒转染CNE - 2Z作为对照细胞。用三氧化二砷处理两组细胞后 ,台盼蓝计数法求得各自的IC50 ,流式细胞仪检测凋亡细胞百分比。结果　导入bcl-xs 的细胞与对照细胞相比 ,其对三氧化二砷的IC50 值明显降低 ,流式细胞仪及荧光染色检测结果表明其凋亡细胞百分比明显高于对照细胞。结论　bcl-xs 能显著提高鼻咽癌CNE - 2Z细胞株对三氧化二砷诱导凋亡的敏感性     

田基黄对人鼻咽癌细胞CNE-2生长和凋亡的影响

目的探讨田基黄对人鼻咽癌细胞CNE-2的抑制和凋亡作用,为其临床应用提供实验依据。方法SRB法检测田基黄对CNE-2细胞生长的抑制作用,PI分析细胞周期的变化、Annexin V检测细胞凋亡的发生。结果田基黄抑制CNE-2细胞的生长,引起细胞死亡;田基黄诱导CNE-2细胞发生凋亡和坏死;田基黄作用人鼻咽癌细胞后S期细胞的比例增加,G2/M期细胞的比例减少。结论一定浓度的田基黄可明显抑制人鼻咽癌细胞CNE-2生长,并诱导其凋亡,机制可能与阻滞细胞停留在S期有关。     

bcl—xs促进三氧化二砷诱导鼻咽癌细胞凋亡的研究

目的 利用促进凋亡基因bcl-xs降低肿瘤细胞凋亡阈值,增强三氧化二砷诱导的鼻咽癌细胞凋亡,以探索提高鼻咽癌化疗敏感性的新途径。方法 将含有人bcl-xs基因的重组真核表达质粒导入人鼻咽癌低分化上皮细胞株（CNE－2Z）,以不含有bcl-xs基因的质粒转染CNE－2Z作为对照细胞。用三氧化二砷处理两组细胞后,台盼蓝计数法求得各自的IC50,流式细胞仪检测凋亡细胞百分比。结果 导入bcl-xs的细胞与对照细胞相比,其对三氧化二砷的IC50值明显降低,流式细胞仪及荧光染色检测结果表明其凋亡细胞百分比明显高于对照细胞。结论 bcl-xs能显著提高鼻咽癌CNE－2Z细胞株对三氧化二砷诱导凋亡的敏感性。     

反义细胞角蛋白13基因对人鼻咽癌HNE1细胞移植瘤放疗敏感性的影响

目的　观察反义细胞角蛋白13（cytokeratin 13,CK13）基因对鼻咽癌人嗜中性细胞弹性蛋白酶1（human neutrophil elastase,HNE1）细胞移植瘤放疗敏感性的影响。方法　将HNE1细胞株分为A组（未经处理）、B组（转染慢病毒空载体）,C组（转染慢病毒反义CK13a）和D组（转染慢病毒反义CK13b）共4组建立相应动物模型,放疗后采用流式细胞仪、免疫组化、PCR、Tunel法及Westernblotting检测。结果　细胞周期检测发现转染慢病毒质粒的C组和D组在放疗后与对照组比较G2/M期阻滞时间显著延长;免疫组化结果显示C组和D组移植瘤中CK13表达下降;Tunel法检测细胞凋亡坏死率发现C组和D组细胞凋亡率明显降低;Western blotting检测发现caspase-3凋亡标志物下降。PCR检测发现CDC25mRNA水平明显降低。结论　反义CK13基因通过调控细胞周期和凋亡可降低鼻咽癌HNE1移植瘤的放疗敏感性,并与caspase-3凋亡途径和CDC25信号通路相关。     

EB病毒核抗原1对鼻咽癌细胞增殖及细胞周期的影响

目的 研究EB病毒核抗原1(Epstein-Barr virus nuclear antigen 1,EBNA1)对人鼻咽癌细胞增殖及细胞周期的影响.方法 构建特异性的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)EBNA1慢病毒干扰载体,包装慢病毒后感染过表达EBNA1的鼻咽癌细胞C666-EBNA1(简写为CE).应用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)和细胞计数法检测细胞增殖状态,流式细胞术、荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法检测细胞周期及相关调控因子变化.结果 成功构建含shRNA EBNA1的重组慢病毒,其感染可显著下调CE细胞中EBNA1表达.细胞计数和MTT均证明CE-shRNA细胞的增殖能力较CE-对照组显著下降(P值均＜0.05).细胞周期提示干扰EBNA1后CE细胞G0-G1期比例由(62.43±6.62)%升高到(89.66±0.64)%,两者比较差异有统计学意义(t=-7.091,P=0.002),S期比例由(34.93±7.36)%下降为(7.82±2.44)%,两者比较差异有统计学意义(t=6.095,P=0.004),G2-M期无明显变化(t=0.090,P=0.933).抑制EBNA1后,c-myc、CDK4、CDK6、pRb的mRNA水平分别下调65.60%、34.06%、41.05%、55.29%.蛋白免疫印迹法证实抑制EBNA1后4种蛋白的表达亦下调.结论 沉默EBNA1基因可抑制鼻咽癌细胞增殖,其机制之一可能是通过影响c-myc、CDK4、CDK6、pRb等基因的表达使鼻咽癌细胞阻滞于G0-G1期.     

紫杉醇对鼻咽癌上皮细胞株HNE-1生长抑制和凋亡的影响

目的探讨紫杉醇对鼻咽癌上皮细胞株HNE1生长抑制和诱导凋亡作用。方法应用噻唑蓝(MTT)法、集落形成能力测定、细胞形态学观察及电镜等方法,对不同浓度紫杉醇作用不同时间后HNE1细胞进行检测和比较。结果紫杉醇浓度为1×10-8mol/L时,对HNE1细胞生长具有明显的抑制作用,并且存在时间和一定范围内的剂量依赖关系。光镜和电镜下观察,可见细胞逐渐变圆、皱缩。细胞表面微绒毛消失,核染色质致密、浓缩呈块,胞质中可见空泡形成,细胞表面脱落形成膜包裹的凋亡小体。结论鼻咽癌上皮细胞株HNE1对紫杉醇有高度的敏感,一定浓度的紫杉醇能使HNE1细胞生长受到明显抑制,并诱导其凋亡,这种诱导凋亡的能力是紫杉醇疗效的基础,本研究为紫杉醇治疗鼻咽癌提供可靠的实验依据。     

亚砷酸联合LY294002对人鼻咽癌CNE细胞的抑制作用

目的　探讨亚砷酸（As2O3）联合PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对人鼻咽癌细胞株CNE（简称CNE细胞）的抑制作用。方法　应用MTT法检测CNE细 胞对As2O3和LY294002的敏感性,Western blot方法检测p-PTEN、p-AktSer473、p-AktThr308、p-PDK1等信号分子的表达水平。结果　As2O3与LY294002均可显著抑制CNE细胞的生长,而且该作用呈现明显的剂量依赖性和时间依赖性。As2O3与LY294002的联合应用对CNE细胞生长的抑制作用具有协同效应。LY294002（10 μmol/L）处理4 h即可使CNE细胞内p-AktSer473、p-AktThr308、p-PDK1蛋白表达下调,p-PTEN蛋白表达上调。As2O3（4 μmol/L）单独作用12 h后,CNE细胞内蛋白p-AktSer473表达下调,p-AktThr308、p-PDK1、p-PTEN蛋白变化不明显。LY294002（10 μmol/L）与As2O3（4 μmol/L）联合处理12 h,CNE细胞内p-AktSer473、p-AktThr308、p-PDK1等信号分子的下调水平与p-PTEN蛋白的上调强度显著强于LY294002或As2O3的单独作用。结论　As2O3联合LY294002对CNE细胞具有协同杀伤作用。     

17-AAG联合EGCG对人鼻咽癌细胞株增殖和凋亡的影响及机制研究

目的　研究17-烯丙胺-17-去甲氧基格尔德霉素（17-allyamino-17-demethoxygeldanamycin,17-AAG）和表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate,EGCG）单药或联合使用对人鼻咽癌细胞CNE的凋亡诱导作用,寻找鼻咽癌治疗的新方向。方法　MTT法和荧光染色分别检测CNE增殖抑制率及细胞形态的变化;RT-PCR检测Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA的表达。结果　①17-AAG、EGCG单独作用于CNE细胞24、48、72 h,均有抑制作用,与时间和剂量相关（P＜0.01）;两者联合抑制作用显著增 加,且表现出时间、剂量依赖性（P＜0.01）。②RT-PCR检测联合用药时Caspase-3和Bax的mRNA表达明显高于单独用药组,Bcl-2 mRNA明显低于单独用药组。结论　17-AAG联合EGCG可显著抑制CNE细胞增殖,其可能与上调Bax和Caspase-3的表达发挥其抗鼻咽癌细胞的生长增殖作用。     

亚砷酸联合顺铂对人鼻咽癌裸鼠移植瘤及增殖细胞核抗原和Ki-67的影响

目的　研究亚砷酸（As2O3）对人鼻咽癌CNE-2Z裸鼠移植瘤与增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclearantigen,PCNA）、Ki-67的作用,探讨该药物的抗肿瘤机制。方法　建立人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组（NaCl）组、As2O3组、顺铂（Cisplatin,DDP）组和As2O3+DDP组,观察裸鼠移植瘤生长情况;采用HE染色,于光镜下观察各组移植瘤组织细胞病理形态学变化,同时观察心、肝、肺、肾组织有无病理学改变及瘤细胞转移。进行血常规检测,采用免疫组织化学方法检测PCNA、Ki-67的表达。结果　As2O3、DDP及两药联用均明显抑制人鼻咽癌裸鼠移植瘤生长,裸鼠的心、肝、肺和肾未见病理学改变和瘤转移,联合用药未增加造血系统的毒性,并能下调PCNA和Ki-67的表达。结论　亚砷酸可抑制人鼻咽癌CNE-2Z裸鼠移植瘤的生长,此作用可能与下调PCNA、Ki-67的表达相关。     

莪术醇对人鼻咽癌细胞CNE2增殖、凋亡及周期的影响

目的 探讨莪术醇( curcumoI)在体外对人鼻咽癌CNE2细胞增殖、凋亡及周期的影响,为其临床治疗鼻咽癌提供理论依据.方法 不同浓度莪术醇作用于人鼻咽癌CNE2细胞后,用MTT法和流式细胞仪检测不同时间点鼻咽癌细胞CNE2的增殖、凋亡及周期分布.结果 莪术醇在体外明显抑制鼻咽癌CNE2细胞的增殖,且呈浓度和时间依赖...     

姜黄素抗鼻咽癌细胞增殖效应研究

目的 研究姜黄素体外抗鼻咽癌NCE细胞增殖效应.方法 以浓度为25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L的姜黄素处理NCE细胞48h,以MTT法、集落形成法检测姜黄素的细胞毒作用,以AO/EB复合染色、TUNEL检测、电镜和DNA片段化分析等方法分析姜黄素对细胞凋亡的影响.结果 25μmol/L～200μmol/L的姜黄素对NCE细胞增殖的抑制率分别为39.1%、60.9 %、78.3 %与91.3%,对集落形成的抑制率分别为47.0%、72.0%、85.0%与100%;并且可诱导NCE细胞凋亡.结论 姜黄素以剂量依赖性方式抑制鼻咽癌细胞增殖活性,可能是通过细胞凋亡诱导效应而发挥作用.     

鼻咽癌CNE-2Z细胞株受IL-24影响的研究

目的探讨白细胞介素24(Interleukin 24,IL-24)对鼻咽癌CNE-2Z细胞株(简称CNE-2Z细胞)增殖的影响,为临床应用提供理论依据。方法取CNE-2Z细胞进行培养,用细胞计数及MTT抑制试验,检测IL-24对CNE-2Z细胞增殖的抑制作用,找出IL-24作用的峰浓度及最佳细胞增殖状况。采用碘化丙锭染色,流式细胞仪分析和细胞核形态两种方法同时检测体外培养的CNE-2Z细胞的凋亡状况。结果细胞计数及MTT法检测显示体外培养的CNE-2Z细胞在培养48 h增殖状况最差,并且存在峰浓度效应。IL-24 50 ng/ml可诱导CNE-2Z细胞的凋亡。结论IL-24可呈时间和剂量依赖性的抑制CNE-2Z细胞的增殖并诱导其凋亡。