SV_(40)LT抗原基因肝细胞——理想的肝细胞来源

目的制备并初步评估一种理想的肝细胞来源—SV40LT抗原基因永生化肝细胞。方法将SV40LT抗原基因在逆转录病毒介导下转入原代培养的大鼠肝细胞,获得能在体外增殖的肝细胞。通过绘制生长曲线了解转染肝细胞的体外生长特性,细胞冻存复苏试验评估转染肝细胞的冻存价值并与原代肝细胞和大鼠肝癌细胞CBRH7919比较。结果SV40LT抗原基因转入原代培养的大鼠肝细胞能在体外增殖。SV40LT抗原基因转染肝细胞比原代肝细胞生长速度快(P<0.05),与肿瘤细胞相比生长曲线差异无显著性(P>0.05)。复苏后冻存的SV40LT抗原转染的肝细胞的细胞活率为(74±4)%,原代肝细胞的细胞活率为(72±6)%。两者差异无显著性(P>0.05)。结论肝细胞经SV40LT抗原基因转染后获得永生化特性,冻存复苏后获得满意的细胞活率,是一种理想的肝细胞来源。     

肝硬化鼠自体肝细胞脾内移植实验研究

本实验通过诱导大鼠肝硬变，在模型上进行半肝切除，正体肝细胞脾内移植，通过光镜，电镜，组织化学及＾９９ｍ锝标记亚锡酸钠（ＥＨＩＤＡ）扫描等，观察肝硬变情况下移植于脾内的肝细胞在不同时期的形态结构与功能变化，结果显示：移植于脾内的肝细胞能长期存活，并维持基本正常的肝细胞形态结构和功能，而且增殖能力较正常强，显示肝细胞脾内移植可能成为临床上难治性肝病的一种治疗手段。     

肝细胞脾内移植治疗大鼠肝衰竭

目的:优化急性肝衰竭模型的构建方法及探讨经脾内同种异体肝细胞移植治疗大鼠急性药物性肝衰竭的疗效,并观察脾内移植肝细胞的生物学活性。方法:采用D-氨基半乳糖(D-gal)建立大鼠急性药物性肝衰竭模型。腹腔注射不同剂量的(1.0,1.2,1.4,1.6g/kg)D-gal后,以肝功能指标、病理形态学、死亡率等综合评估肝脏细胞损伤的状态,确定模型构建的最佳方案。造模后24h,随机分为2组进行治疗,Ⅰ组:经脾内移植肝细胞悬液1ml(4.4×107个);Ⅱ组:经脾内移植不含肝细胞的培养液1ml。观察大鼠1周的存活率、肝脏功能和病理变化及移植肝细胞的生物学活性。结果:①不同剂量的D-gal可导致不同程度的肝损伤,而以1.2g/kgD-gal造模组的大鼠死亡率适中,肝功能损害及其肝脏病理组织学改变均符合临界急性肝衰竭的程度,较好地模拟了急性肝衰竭的病理生理改变且稳定性较好。②移植后3d,Ⅰ组与Ⅱ组大鼠存活率相比具有显著性差异(P<0.01);肝功能指标:丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)和总胆红素(TBiL)均有明显改善(P<0.01);肝组织病理切片显示:Ⅰ组的肝组织损伤程度明显比Ⅱ组轻。经HE和PAS染色证实,移植的肝细胞在受体脾内结构和功能保持较好。结论:①D-gal1.2g/kg腹腔注射可较好构建SD大鼠急性肝衰竭模型。②经脾内肝细胞移植能明显提高药物性肝衰竭大鼠的存活率、改善肝功能及肝组织病理变化。     

小鼠脾保留和自体移植脾组织抗疟原虫感染的超微结构动态观察

目的：探讨脾脏在急性疟原虫感染中所发挥的作用和移植脾组织的结构和功能。方法 90只昆明株小鼠分为假手术组、半脾保留组和半脾移植组。手术后3个月经疟原虫感染后动态进行组织学观察。结果 各组脾脏病理变化基本一致,感染中期脾脏红髓内分化增殖的网状细胞与网状纤维连接成网状支架,和被其包围的各种血细胞共同构成血脾屏障,从而保护了机体。结论 在疟原虫作用下,移植脾组织与保留脾组织变化近似,具有同样的保护功能。     

自体肝细胞脾内移植治疗急性肝衰竭的实验研究

目的 为临床应用自体肝细胞脾内移植治疗急性肝衰竭探索新路。方法 用Ｗｉｓｔａｒ大白鼠制备急性外科型肝衰竭模型，采用肝中叶门静脉分枝插管，用Ｉ型胶原酶灌注制备游离肝细胞，行自体肝细胞脾内移植。结果 病理组织学观察移植组１０周后大鼠脾内有弥散状、团状或单排列状肝细胞存在；同位素＾９９ｍＴｃ－ＨＩＤＡ测定证实其肝功能接近正常；对照组术后２４ｈ死亡３０％，４８ｈ累计死亡５５％，移植组分别为２０％和３０％。     

小鼠自体脾组织网膜内移植后的形态学观察

目的 探讨自体脾组织移植后的形态学变化规律，为临床及实验研究提供参考资料。方法 采用100只小鼠进行体脾组织网膜内移植，于术后不同时相点切取移植脾组织，通过光镜和电镜技术，观察自体移植脾组织的生长特点及规律。结果 自体移植脾组织历经坏死再生过程，于移植术后6月移植脾组织与正常脾组织结构相近。结论 自体脾组织网膜内移植有正常膜组织的基本结构，有发挥脾功能的结构基础，并具有一定的脾功能。     

倒千里光碱处理SD大鼠永生化肝细胞同种脾内移植增殖实验研究

目的探讨倒千里光碱(Retrorsine, Rts)处理对SD大鼠永生化肝细胞同种脾内移植增殖效率的影响。方法SV40 T抗原转染法制备永生化肝细胞。成熟SD大鼠24只,随机分为A、B、C 3组,A组为Rts处理SD大鼠永生化肝细胞移植组;B组为Rts处理SD大鼠正常肝细胞移植组;C组为正常SD大鼠永生化肝细胞移植组。A、B两组SD大鼠分2次腹腔注射Rts,间隔2周,第2次注射Rts 4周后备用。20%肝叶切除后,3组SD大鼠分别行永生化肝细胞移植或肝细胞移植,常规病理切片检查脾内移植永生化肝细胞增殖效率,免疫组化检测脾脏内移植永生化肝细胞白蛋白表达,透射电镜检测移植永生化肝细胞形态。结果病理检查显示,肝细胞移植后3周内,3组SD大鼠脾脏内均可见移植肝细胞;免疫组化结果显示,3组SD大鼠脾脏实质内均可见散在棕黄色白蛋白颗粒,A组大鼠脾脏内肝细胞面数密度与B组比较无显著差异,但与C组有显著差异;透射电镜检测结果显示,脾内移植永生化肝细胞具有正常肝细胞的超微结构。结论脾内移植永生化肝细胞具有正常肝细胞的形态、结构及白蛋白表达功能;Rts可促进永生化肝细胞SD大鼠脾脏内移植的增殖效率。     

猴异体椎间盘移植--组织形态学研究

目的：探索治疗椎间盘病变的较好方法。方法选用恒河猴１２只进行腰椎间盘两两配对移植,观察术后不同时期间盘组织形态学变化。结果移植间盘高度术后１－５ｍｏ呈下降趋势,６－１２ｍｏ基本保持稳定,光镜下纤维环和软骨终板形态结构基本完好,有较度退变表现,未见炎症细胞浸润及骨坏死现象,透射电镜观察到移植组间盘髓核退变细胞较正常对照组增多,髓核基质中胶原原纤维数量较对照组增多,结论猴异体移植间盘在受体能够存活,移     

自体肝细胞脾内移植治疗急性肝衰竭的实验研究

目的 探索临床应用自体肝细胞脾内移植治疗急性肝衰竭的新路。方法 用Wistar大白鼠制备急性外科型肝衰竭漠型,采用肝中叶门静脉分枝插管,用Ⅰ型胶原酶灌注制备游离肝细胞,行自体肝细胞脾内移植。结果 病理组织学观察移植组10wk后大鼠脾内有弥散状、团状或单排列状肝细胞存在;同位素^99mTc-HIDA测定证实其肝功能接近正常;对照组术后24h死亡30％,48h累计死亡55％．移植组分别为20％和30％。结论 实验提示脾内移值肝细胞可以存活且有一定代谢功能．能显提高急性肝衰竭大鼠的存活率。     

微囊化肝细胞移植治疗大鼠急性肝功能衰竭的研究

[目的 ]探讨微胶囊包裹肝细胞 (microencapsulatedhepatocyte)腹腔移植治疗急性肝功能衰竭的机制与可行性 ,评价生物膜功能。 [方法 ]D -氨基半乳糖 (D - gal)诱发急性肝功能衰竭大鼠模型 ,分成 4组 :Ⅰ组生理盐水组 ;Ⅱ组空微胶囊对照组 ;Ⅲ组促肝细胞生长素 (hepatocytegrowthfac tor ,HGF)组 ;Ⅳ组微囊化肝细胞组 ,观察 2周存活率、肝功生化指标的变化 ,2周后收集腹腔内微胶囊 ,观察其形态与功能。 [结果 ]Ⅳ组存活率较Ⅲ、Ⅱ、Ⅰ组有明显改善 (分别为 6 6 .7%、2 0 .0 %、1 3.3%、2 0 .0 % ,P <0 .0 5 ) ,其他组间存活率无显著性差异 ;Ⅳ组自移植后 2 4h起白蛋白 (ALB)、总胆红素 (TBIL)、凝血酶原时间 (PT)较其他组有明显改善 (P <0 .0 5 )。 2周后收集的空微胶囊形态完整 ,微囊内肝细胞部分保持存活。 [结论 ]微囊化肝细胞移植可以明显改善肝功能衰竭大鼠的存活率 ,显著改善肝脏生化功能。生物微胶囊可以有效阻断免疫排斥作用 ,保护移植肝细胞 ,有利于其发挥生物功能。     

内毒素及肿瘤坏死因子对肝细胞超微结构的影响

目的：研究内毒素及肿瘤坏死因子对肝细胞超微结构的影响。方法：我们采用胶原酶二步法灌注一月龄ＳＤ雄性大鼠肝脏,制备肝细胞悬液并进行了原代培养,重点研究了内毒素、肿瘤坏死因子对原代短期培养肝细胞超微结构的影响。结果：表现为糖原减少、溶酶体增多、线粒体肿大、嵴溶解、内质网扩张及断裂、甚至可见核空泡化、染色质消失。其中以肿瘤坏死因子引起的肝细胞损伤为重;若二者联合作用,则肝细胞受损更加严重。结论：内毒素与     

大鼠肝细胞的分离及BRL细胞培养上清对原代肝细胞增殖的影响

目的 :研究大鼠肝细胞分离的方法及正常大鼠肝细胞来源的BRL细胞培养上清对原代大鼠肝细胞贴壁和增殖的影响。方法 :采用体外胶原酶 2步灌注法分离大鼠肝细胞 ,台盼兰染色法计算细胞数及细胞活率。以四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法检测不同浓度的BRL细胞培养上清及含体积分数 15 %胎牛血清的普通培养液对肝细胞贴壁和增殖的影响。结果 :平均每只大鼠可获 2× 10 8个肝细胞 ,平均活力 94 .3%。用普通培养液培养肝细胞 ,肝细胞贴壁率低 ;BRL细胞培养上清能明显促进肝细胞的贴壁和生长 ,且有量效关系 (P <0 .0 5 )。结论 :用本法分离的大鼠肝细胞有较高的获取率和活力 ,BRL细胞培养上清能促进正常大鼠肝细胞的贴壁及增殖     

移植气管软骨再生的实验

目的 研究同种异体移植气管软骨的再生能力。方法 将供体犬气管置于受体犬腹腔内，以带蒂大网胞包绕，分别在术后1，2，3，4，5，6，7，8及12wk时，共9个时间段将移植段气管取出作病理及透射电镜检查，部分标本软骨用^3H-TDR(^3H-脱氧胸苷）标记，行放射自显影检查。结果 软骨再生存在于移植后的各个时间段的气管软骨膜下，其再生的程度与良好的血液循环有关。结论 同种异体气管移植，血液循环充分建立的条件下，软骨具有良好的再生能力。     

小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究

目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,检测HPCs在小鼠脾脏内分化和移植细胞的功能及其在脾脏组织中的整合情况,探讨肝细胞合适的替换治疗细胞来源.方法体外培养ESC并制备拟胚体(EBs),体外诱导EBs 18 d后得到HPCs,然后用Hochest 3342荧光标记HPCs并制备成6.0×107/ml细胞悬液.移植受体小鼠用2-乙酰氨基芴(2-AAF)处理,移植前受体鼠经过7 Gy 60 Coγ全身辐照和50%肝脏切除,造成小鼠体内对肝细胞的极大需求;然后将0.1 ml含6.0×106 HPCs细胞悬液经尾静脉注射移植入脾脏,细胞移植4周后,检测移植细胞在小鼠脾脏整合分化情况.结果体外培养ESC并制备出EBs,EBs经体外诱导为HPCs,并将HPCs移植到小鼠脾脏,4周后观察到移植细胞能够嵌合到受体脾脏组织,在脾脏组织中未形成畸胎瘤,并且移植细胞能表达肝细胞较特异标志物白蛋白、CK19和糖原PAS染色呈阳性反应.结论本实验建立一种将体外ESC诱导的HPCs移植并整合到脾脏的细胞移植技术,为研究肝细胞分化的分子机制和肝病的细胞替换治疗提供基础.     

次声90 dB和130 dB致大鼠肝细胞损伤的超微结构改变

目的：探讨相同频率(16 Hz)不同声压水平(90 dB与130 dB)次声作用下大鼠肝细胞超微结构损伤特点及意义．方法：将雄性SD大鼠66只，随机分为对照组(6只)、实验1(90 dB)和实验2(130 dB)组．根据次声作用时间，实验1，2组各分为1，7，14，21和28 d时间组，每组6只．在相同频率不同声压水平次声环境下每日暴露1次，每次2 h；取肝左右叶两个部位组织用戊二醛和锇酸固定，透射电镜下观察肝超微结构变化．结果：1 d组：90 dB环境作用下肝超微结构无明显损伤变化，130 dB环境作用下肝细胞内有脂滴出现；7，14和21 d组不同环境和天数次声作用后肝损伤出现脂滴逐渐增多和肝细胞部分变性坏死改变，发现肝细胞内的各种结构随次声作用次数增多其损伤程度逐渐加重；28 d组其损伤程度均有一定程度恢复．结论：次声下可以对肝细胞超微结构造成不同程度损伤，28 d后肝细胞对次声的损伤作用存在着一定适应现象．