两相体系中固定化细胞生物合成(S)-3,5-双三氟甲基苯乙醇

建立了在有机/水两相体系中固定化酵母细胞牛物合成(S)-3,5-双三氟甲基苯乙醇的方法.考察了有机溶剂、缓冲液pH、底物浓度、温度、转化时间、辅助底物对转化率和对映体过量值(ee)的影响.结果显示,采用辛烷-缓冲液两相体系,缓冲液pH 8,初始底物浓度5.55 mmol/L,30℃转化36 h,转化率和产物的ee值分别为93.2%和96.3%.添加与底物等当量的葡萄糖或蔗糖作为辅助底物,固定化细胞可以反复使用6次,转化率维持在50%以上.     

用固定化氧化葡萄糖酸菌转化6-(N-羟乙基)胺基-6-脱氧-L-山梨呋喃糖

目的探索用固定化氧化葡萄糖酸菌转化6-(N-羟乙基)胺基-6-脱氧-L-山梨呋喃糖的最优条件。方法以海藻酸钠为载体把氧化葡萄糖酸菌固定化,考察固定化细胞在不同转化条件时对底物的转化率。结果通过条件优化,确定固定化细胞转化时间为24 h,底物质量浓度为10 g.L-1,采用的海藻酸钠质量浓度为40g.L-1,菌体包埋量为每g凝胶包埋3.1 g菌体,最适pH为7.0,最适温度为28℃,摇床转速要求高于100r.min-1;用60mmol.L-1的MnCl2替代原转化液中20mmol.L-1的MgSO4;固定化细胞与原游离细胞工艺相比,24h内底物转化率由原来的47%上升到93%,连续转化10次后,转化率仍为38%。结论用固定化氧化葡萄糖酸菌转化6-(N-羟乙基)胺基-6-脱氧-L-山梨呋喃糖,转化率提高46%并能连续转化约10次。     

开孔明胶固定酵母细胞生产三磷酸腺苷

用开孔明胶包埋啤酒酵母制成固定化细胞，在含15g／L单磷酸腺苷、150mmol／L葡萄糖、16mmol／L硫酸镁的250mmol／L磷酸二氢钠缓冲液（pH7．0）中35℃振荡反应2h，生产三磷酸腺苷（ATP）的转化率可达95％。在前一批底物溶液灭菌和添加烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的条件下，固定化酵母细胞可反复使用10次，ATP转化率稳定维持在90％以上。     

应用固定化细胞连续生产胞二磷胆碱的研究

<正> 利用酵母糖酵解-分子葡萄糖可使二分子ADP磷酸化的特性,并应用固定化技术将酵母细胞固定化,便可成为能反复使用的ATP再生体系。当此体系与酵母中存在的胞苷酸激酶、胞二磷胆碱焦磷酸化酶偶联时,在反应溶液中只要添加葡萄糖、磷酸盐、胞苷酸和磷酸胆碱即可生成胞二磷胆碱(图1)。这种固定化酵母是带有ATP再生的多酶体系的综合应用,它还可以用于S-腺苷甲硫氨酸、辅酶A、辅酶Ⅱ等需要ATP参与的各种生物合成反应。     

固定化微生物细胞应用于三磷酸腺苷的再生和二磷酸胞苷-胆碱的合成

引言本文选择二个例子作为生物合成核苷酸的模式反应。第一个例子是Tochikura等人用啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)细胞从一磷酸腺苷(AMP)生产三磷酸腺苷(ATP)。图1表明,为了从1克分子AMP产生1克分子ATP,必须从2克分子二磷酸腺苷(ADP)再生2克分子ATP,而酵母细胞的糖酵解过程起一个ATP再生器的作用。第二个例子是Nakayma和Hagino和Tochikura等人报道的用啤酒酵母从一磷酸胞苷(CMP)和氯化胆碱生产二磷酸胞苷-胆碱(CDPCholine)。     

利用κ—卡拉胶—魔芋多糖复配交固定化酵母生产三磷酸腺苷

利用κ－卡拉胶－魔芋多糖复配胶包埋的固定化啤酒酵母细胞,由腺苷（ＡＲ）生产三磷酸腺苷（ＡＴＰ）。采用ＨＰＬＣ法分析固定化细胞反应过程核苷（酸）的变化以及用琼脂糖平板电泳法对其工艺条件进行了优化。固定化细胞反应１ｈ,ＡＴＰ转化率接受１００％。底物溶液灭菌和添加ＮＡＤ＾＋后,该固定化酵母细胞可反复使用１２次,ＡＴＰ的转化率稳定维持在９５％以上。     

固定化谷氨酸脱羧酶转化γ-氨基丁酸的研究

目的用固定化谷氨酸脱羧酶转化制备γ-氨基丁酸(GABA)。方法以海藻酸钠与明胶为协同作用载体包埋固定化酶,考察影响固定化酶活性的因素,获得固定化酶的优化条件,并将酶应用于制备GABA。结果海藻酸钠、明胶、氯化钙和戊二醛浓度分别为2.5%,1.0%,3.0%和0.3%,硬化时间4 h,固定化酶的相对活性最高,酶活回收率达到65.3%。以谷氨酸为底物,固定化谷氨酸脱羧酶为催化剂,采用填充床反应器连续制备GABA,连续反应60 h,酶相对活性仍保持在初始值的76.9%,谷氨酸转化率为98.7%。结论该固定化谷氨酸脱羧酶可应用于生物转化法连续制备GABA。     

外源性腺苷三磷酸和腺苷对食管癌TE-13细胞株凋亡的影响

目的　探讨腺苷三磷酸 (ATP)和腺苷 (ADO)是否具有诱导人食管低分化鳞癌细胞株TE 13凋亡的作用。方法　MTT法 ,AO/EB双荧光染色法 ,琼脂糖凝胶电泳 ,流式细胞仪方法。结果　ATP在0 .1～ 1.0mmol·L- 1或ADO在 0 .0 1～ 1mmol·L- 1浓度范围内 ,可不同程度地抑制TE 13细胞的增殖 ,ATP和ADO作用 72h后 ,对TE 13细胞的最大抑制率分别达 (80 .5± 6 .2 ) %和 (74 .0± 5 .3) %。细胞经0 .3mmol·L- 1的ATP或ADO处理 4 8h后 ,细胞形态出现了凋亡特征 ;电泳可见明显的“梯状”条带 ;ATP和ADO可浓度依赖性地诱导细胞的凋亡 ,1mmol·L- 1的ATP和ADO诱导细胞的凋亡率分别为 (16 .6± 1.1) %和 (16 .9± 1.2 ) %。结论　ATP和ADO均有诱导食管癌TE 13细胞凋亡的作用     

用于5’-三磷酸腺苷生产的酶及细胞酶系

文章对用于合成5’-三磷酸腺苷(ATP)的生物酶及细胞酶系的研究情况作了扼要综述，分析了我国ATP生产的工业化现状，并对今后的研究和开发提出了建议。     

三磷酸腺苷对国人食管癌Eca-109和肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响

目的研究三磷酸腺苷(ATP)对人食管癌细胞株Eca-109和人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖的影响。方法采用MTT法测定ATP、腺苷(ADO)和三磷酸尿苷(UTP)抑制肿瘤细胞增殖的作用,W rights-G iem sa染色观察细胞形态学的改变。结果ATP(0.03~0.3 mmol.L-1)和ADO(0.1~0.3 mmol.L-1)可不同程度地抑制Eca-109和SMMC-7721的增殖,ATP对两株肿瘤细胞增殖的抑制作用均强于ADO。ATP和ADO对Eca-109细胞的最大抑制率分别为86.36%和29.88%,IC50分别为0.056和0.823 mmol.L-1;对SMMC-7721细胞的最大抑制率分别为82.06%和52.84%,IC50分别为0.218和0.517 mmol.L-1。UTP对Eca-109细胞有很弱的抑制增殖作用,最大抑制率仅为18.27%;对SMMC-7721无抗增殖作用。两株细胞经高浓度(0.3 mmol.L-1)ATP处理后,部分SMMC-7721细胞形态出现了明显的凋亡特征,而Eca-109细胞凋亡特征不明显。结论ATP具有较强的抗Eca-109细胞增殖作用,其抗增殖作用主要由ATP自身所致,代谢产物ADO也具有一定的作用;而对于SMMC-7721细胞,ATP可能较大程度地通过降解为ADO而发挥抗增殖作用。