3个不同细胞株用于垫料毒性实验的效果比较

目的：选择一种比较敏感的细胞用以进行垫料物质的细胞毒性研究。方法：将不同浓度的垫料物质丙酮提取物分别加入体外培养的小鼠成纤维细胞、小鼠H22-H2D8细胞株和小鼠S180-S2D9细胞，孵育72h后用考马斯亮蓝法测定总蛋白，计算细胞存活率，比较3种细胞对不同垫料丙酮提取物的细胞毒性反应。结果：在1—40mg／ml浓度范围，H22-H2D8对各种垫料物质细胞毒性反应最敏感。结论:H22-H2D8细胞可作为垫料物质细胞毒性研究的细胞株。     

5种垫料物质的细胞毒性研究

目的研究松木、麦秸、玉米秸、玉米芯和国外商品垫料5种垫料物质的细胞毒性作用.方法将五种垫料物质的丙酮提取物按1、3、5、10、20和40mg/ml的终浓度梯度加入到H22-H2D8细胞中,培养72h后用考马斯亮蓝法测定细胞的总蛋白量,计算细胞的半数致死量(LD50);用MTT法测定H22-H2D8细胞在492nm的吸光度值(A492),计算细胞的相对增值率,用6级毒性分类法进行毒性分级.结果松木的LD50<5mg/ml,麦秸、玉米秸、国外商品垫料的LD50<20mg/ml,玉米芯的LD50>40mg/ml.麦秸和商品垫料的细胞毒性为2～3级,松木的细胞毒性2～5级,玉米秸的细胞毒性为1～3级,玉米芯的细胞毒性为1～2级.在垫料提取物浓度为5mg/ml、10mg/ml时,麦秸组的A492值显著低于玉米秸组和商品垫料组的A492值(P<0.05),而玉米秸组和商品垫料组相比无显著差异(P>0.05);在浓度为20mg/ml、40mg/ml时,王米秸组的A492值大于麦秸组和商品垫料组的A492值(P<0.05),麦秸组和商品垫料组相比差异无显著性(P>0.05).结论松木的细胞毒性最大,玉米芯的细胞毒性作用最小,玉米秸、国外商品垫料、麦秸三种物质均显示有细胞毒性作用,但它们的毒性显著低于松木,高于玉米芯.     

实验动物对凹土玉米芯垫料适应性的研究

目的 研究实验动物对凹土玉米芯垫料的适应性.方法 比较凹土玉米芯与普通刨花、玉米秸的吸水性能;对凹土玉米芯、普通刨花和玉米秸进行Co60辐照和高压蒸汽脉动灭菌,检验灭菌后3种垫料的细菌生长情况;观察孕鼠、乳鼠、青年鼠对3种垫料的适应性.结果 凹土玉米芯的吸水性能显著优于普通刨花和玉米秸(P<0.01),Co60辐照灭菌和高压蒸汽脉动灭菌的3种垫料经检验均无细菌生长,孕鼠、乳鼠、青年鼠对凹土玉米芯垫料的适应性均较好.结论 凹土玉米芯组织蓬松通气,吸水性强,且安全、可靠、来源广泛、价格低廉,较普通垫料更适合于SPF级实验动物,可大范围推广使用.     

大潮气量致急性肺损伤犬呼吸机相关性肺损伤模型的构建

目的探讨实验动物垫料对小鼠细胞生长活性的影响及其可能的细胞毒性。方法体外培养的小鼠肝癌细胞Hepal-6（mouse hepatoma cell line Hepal-6，Hepal-6）、小鼠肺癌细胞（Lewis Lung carcinoma，LLC）和小鼠黑色素瘤细胞B16（Melanoma，B16）培养液中分别加入不同浓度的3种实验动物常用垫料（玉米芯、松木、杨木）丙酮提取物，采用MTT方法测定细胞生长活性，并比较3种垫料对细胞的生长毒性。结果小鼠Hepal-6细胞生长活性与3种垫料之间的线性相关系数分别为：玉米芯-0．875。松木-0．747，杨木-0．826；LLC细胞分别为：玉米芯-0．527，松木-0．812，杨木-0．865；B16细胞分别为：玉米芯-0．727，松木-0．860，杨木-0．888。松木、杨木、玉米芯垫料对小鼠Hepal-6细胞的半致死量（IC50）分别为：8．86，19．10，91．37mg／ml；对LLC细胞的IC50分别为：4．42，7．72，24．65mg／ml；对B16细胞的IC50分别为：8．86，19．10，91．37mg／ml。结论3种垫料与小鼠细胞Hepal-6、LLC、B16的生长活性之间具有显著负相关性（P〈0．001），其抑制细胞生长作用依次为：松木〉杨木〉玉米芯。     

5个S180克隆细胞株RAPD特征及S180-S2D9传代细胞生物学特性研究

目的 研究5个S180克隆细胞株随机扩增多态性DNA（RAPD）特征以及S180-S2D9传代细胞的生物学特性。方法 运用23条引物对S180-S2D9、S180-S2D7、S180-S1F11、S180-S1H10、S180-S1B11的基因组DNA进行RAPD-PCR扩增,以琼脂糖电泳观察结果;对S180-S2D9原代、25代、50代、75代细胞基因组DNA．进行RAPD分析;计数染色体数目;原代、50代细胞分别接种入KM小鼠腹腔,观察腹水的生长情况及小鼠的存活天数;流式细胞仪测DNA含量。结果 筛选出3条在各克隆株扩增产物间有差异的引物,通过这3条引物分析S180-S2D9的RAPD特征,原代、25代、50代、75代细胞之间的RAPD条带无差异;原代、25代、50代、75代细胞的染色体数差异无统计学意义。原代、50代细胞分别接种于10只昆明小鼠腹腔,两组的存活天数分别为13～23d、13～20d,原代与50代组存活天数的差异无统计学意义。流式细胞仪测DNA相对含量分别为0．3890、0．3542、0．3575、0．3984。以上结果提示,S180-S2D9传到75代时未发现遗传变异。结论 可以运用RAPD-PCR技术对克隆细胞株进行质量控制。S180-S2D9克隆株性质均一,致瘤特性稳定。     

垫料水提取物的急性毒性及微核试验

目的 对4种常用垫料(松木刨花、枫木刨、纸皮、稻草)的水提取物进行小鼠急性毒性试验和骨髓嗜多染红细胞微核试验,为检测分析垫料提取物的毒性和致突变作用提供参考依据.方法 采用热煎煮法收集4种垫料的水提取物,选用40只体重18～22 g的NIH小鼠和140只体重25～30 g的NIH小鼠,进行急性毒性试验和骨髓嗜多染红细胞微核试验.结果 4种垫料对NIH雄性和雌性小鼠的急性口服MTD均大于100 g/kg,4种垫料水提取物的微核率与阴性生理盐水组比较差异均无显著差异(P＞0.05).结论 4种垫料的水提取物对小鼠无明显的毒性,均无诱导小鼠骨髓嗜多染红细胞微核生成的作用.     

红花提取物细胞毒性作用研究

目的：研究红花提取物体外对人肝癌细胞株SMMC7721、人张氏肝细胞株 Chang liver、小鼠胚胎成纤维细胞株3T3-Swiss albino生长的影响,探讨其细胞毒性作用。方法：采用MTT法检测红花提取物对SMMC7721、Chang liver、3T3-Swiss albino细胞生存率的影响,并观察不同时间点的半数抑制浓度IC50。结果：红花提取物对人肝癌SMMC7721细胞的生长具有明显的抑制作用,且生长抑制作用呈现明显的剂量-效应依赖性和时间-效应依赖性。对人张氏肝细胞株 Chang liver、小鼠胚胎成纤维细胞株3T3-Swiss albino也具有较低的细胞毒性作用。结论：红花提取物可抑制人肝癌SMMC7721细胞的增殖,而对人张氏肝细胞Chang liver、小鼠胚胎成纤维细胞株3T3-Swiss albino增殖的影响不大,即细胞毒性较小。故红花提取物有可能用于抗肿瘤治疗。     

对5个S180克隆细胞株RAPD特征的研究

目的运用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术建立S180的5个克隆细胞株的特异性图谱。方法运用23条引物对S180-S2D9、S180-S2D7、S180-S1F11、S180-S1H10、S180-S1B115个克隆细胞株的基因组DNA进行RAPD-PCR扩增,以琼脂糖电泳观察结果。结果筛选出3条在各克隆株扩增产物间有差异的引物。结论5个S180克隆细胞株的RAPD特征有明显区别。     

垫料对小鼠血常规值和血清生化指标的影响

目的比较松木刨花、枫木刨花、纸皮和稻草四种垫料对NIH小鼠血常规和血清生化指标的影响,为选择对小鼠无毒害作用的垫料材料提供参考依据。方法将NIH小鼠繁殖群随机分4组,分别以松木刨花、枫木刨花、纸皮及稻草作为垫料,每组20对,按雌雄1：1长期同居随机交配方式进行正常繁殖。仔鼠21日龄离乳后按原繁殖群使用的垫料饲养,饲养至30、40、60、90日龄时,各取160只（♀♂各半）用于测定血常规值（80只）和血清生化指标（80只）。结果松木刨花垫料导致小鼠血液白细胞、中性粒细胞升高,其它3种垫料对小鼠血常规值影响较小;松木刨花垫料导致小鼠血清γ-GT、ALT酶活性升高和总蛋白降低,其它3种垫料对小鼠血清生化值影响较小。结论松木刨花垫料对小鼠肝功能有影响,可能存在对小鼠免疫系统产生影响的物质,在实际生产中应尽量减少使用松木材料的垫料,从经济角度可考虑推广使用枫木材料的垫料。     

S180-S2D9传代细胞的DNA指纹图谱、细胞核型、生物学特性及DNA含量的比较研究

目的:通过比较S180-S2D9传代细胞的DNA指纹图谱、细胞核型、生物学特性及DNA含量,对其进行质量控制.方法:提取S180-S2D9传代细胞的DNA后,进行RAPD分析;细胞培养加秋水仙碱,涂片、染色后,显微镜下计数染色体数目;原代、50代、100代细胞分别接种KM小鼠腹腔,观察腹水的生长情况及小鼠的存活天数;培养的细胞用70%乙醇固定,流式细胞仪测DNA含量.结果:与原代、50代细胞相比,100代细胞的DNA指纹图谱发生变异;50代、100代、100代克隆株1、100代克隆株2、100代克隆株3,其染色体均数做方差分析表明,两两单位比较均无显著统计学差异(P＞0.05).原代、50代、100代细胞分别接种于10只昆明小鼠腹腔,3组的存活天数分别为13～23d、13～20d、10～14d,与原代、50代相比,100代均数有显著统计学差异(P＜0.05),原代与50代均数比较无显著统计学差异(P＞0.05).流式细胞术DNA含量分析表明,5株细胞的相对分子质量分别为0.3575、0.3984、0.3542、0.3919、0.3890.结论:在细胞核型与DNA含量的比较上,5株细胞无显著统计学差异;在DNA指纹图谱与对小鼠致死性方面提示传代细胞发生了变异.     

两种牙科材料对人胚胎干细胞来源成纤维细胞的细胞毒性研究

目的:观察口腔常用材料氢氧化钙(calcium hydroxide,CH)和复合树脂对人胚胎干细胞来源成纤维细胞(embryo body fibroblasts-H9,EBf-H9)、原代培养人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)及小鼠成纤维细胞L929的细胞毒性,探讨使用EBf-H9评价牙科材料生物安全性的可行性。方法:诱导人胚胎干细胞(H9)分化为EBf-H9,原代培养hDPCs,并经免疫细胞化学染色鉴定。用细胞计试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测比较梯度浓度CH和复合树脂浸提液对EBf-H9、hDPCs和L929细胞的细胞毒性。结果:CH或复合树脂分别作用24 h和48 h(或72 h)之后,L929细胞的存活率显著低于EBf-H9和hDPCs(P<0.05),但EBf-H9和hDPCs的细胞存活率没有统计学差异(P>0.05)。结论:对于CH和复合树脂的毒性反应,L929细胞与hDPCs有较大差异,EBf-H9比L929细胞更接近hDPCs的反应,提示在牙科材料生物安全性评价中,人胚胎干细胞来源成纤维细胞具有替代现有细胞检测模型的潜力。     

两种牙科材料对人胚胎干细胞来源成纤维细胞的细胞毒性研究

目的：观察口腔常用材料氢氧化钙（calcium hydroxide,CH）和复合树脂对人胚胎干细胞来源成纤维细胞（embryo body fibroblasts-H9,EBf-H9）、原代培养人牙髓细胞（human dental pulp cells,hDPCs）及小鼠成纤维细胞L929的细胞毒性,探讨使用EBf H9评价牙科材料生物安全性的可行性。方法：诱导人胚胎干细胞（H9）分化为EBf-H9,原代培养hDPCs,并经免疫细胞化学染色鉴定。用细胞计试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）检测比较梯度浓度CH和复合树脂浸提液对EBf-H9、hDPCs和L929细胞的细胞毒性。结果：CH或复合树脂分别作用24 h和48 h（或72 h）之后,L929细胞的存活率显著低于EBf-H9和hDPCs（P<0.05）,但EBf-H9和hDPCs的细胞存活率没有统计学差异（P>0.05）。结论：对于CH和复合树脂的毒性反应,L929细胞与hDPCs有较大差异,EBf-H9比L929细胞更接近hDPCs的反应,提示在牙科材料生物安全性评价中,人胚胎干细胞来源成纤维细胞具有替代现有细胞检测模型的潜力。     

广西甜茶提取物体内抗肿瘤实验研究初探

目的探讨广西甜茶对小鼠肉瘤S180与肝癌H22移植性肿瘤的作用。方法广西甜茶以50%的乙醇提取制得提取物。分别考察提取物对小鼠肉瘤S180和小鼠肝癌H22移植瘤的作用。取肉瘤S180细胞/肝癌H22细胞分别接种于小鼠右前肢腋皮下,随机分为模型对照组、环磷酰胺(CTX)组及甜茶提取物低、中、高(1、3、9 g.kg-1.d-1)3个剂量组。CTX组按20 mg.kg-1.d-1腹腔注射给药,其余各组均灌胃给药,连续给药10 d后,剥离瘤体并称质量,计算抑瘤率,观察体质量、脾脏及胸腺的变化。结果甜茶提取物低、中、高剂量组均对小鼠肉瘤S180或肝癌H22移植瘤有不同程度的抑制作用,其中高剂量组对2种瘤体的抑制作用均显著(P<0.01),且对小鼠体质量、脾脏及胸腺质量均无明显影响。结论广西甜茶提取物对小鼠肉瘤S180与肝癌H22有较明显的体内抑制作用。     

煤焦沥青烟雾提取物的细胞毒性和遗传毒性研究

采用人外周血淋巴细胞非程序DNA合成(UDS)试验和人胚肺成纤维细胞转化试验,测试了煤焦沥青烟雾提取物(ECTPF)对人体细胞的细胞毒性和遗传毒性。UDS试验结果表明,ECTPF可使淋巴细胞UDS值明显增加,并有剂量一反应关系。引起半数淋巴细胞死亡的浓度(LC50)为33.8μg/ml。细胞转化试验表明,ECTPF能诱发人胚肺成纤维细胞明显的形态学转化,且转化细胞具有部分恶性转化细胞的特性。引起半数人胚肺成纤维细胞生长抑制的浓度为41.3μg/ml。实验结果提示,ECTPF是一种具有细胞毒性和遗传毒性的物质。     

乙肝核酸疫苗对荷瘤小鼠免疫保护作用的实验研究

目的 观察乙肝病毒(hepatitis B virus, HBV)核酸疫苗pCMV-S2S免疫小鼠后的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答, 及对表达HBV preS2S抗原的SP2/0-S2S肿瘤细胞攻击的保护作用.方法 将BALB/c小鼠随机分为3组, 于0、4及8周分别接种pCMV-S2S(实验组)、乙肝表面抗原蛋白疫苗(HBsAg,对照组1)、空载质粒( pCMV,对照组2 )各3次.末次免疫后4周,每组各取3只小鼠,以乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测特异性CTL活性.各组其它小鼠均用于肿瘤细胞攻击实验:分别于一侧胁部皮下种植SP2/0-S2S细胞,同时于另一侧种植不表达HBV preS2S抗原的SP2/0-CMV 细胞作阴性对照.种植肿瘤细胞(荷瘤)后观察成瘤时间、肿瘤大小和荷瘤后小鼠的生存时间及生存率.结果 pCMV-S2S组CTL活性为(34.21±1.38)%,高于HBsAg组[(19.64±1.50)%]和pCMV组[(3.45±1.89)%](P＜0.05).荷瘤后10 d,pCMV-S2S组小鼠SP2/0-S2S细胞的成瘤率为58.3%,低于SP2/0-CMV细胞的成瘤率(91.7%)(P＜0.05);两对照组SP2/0-S2S细胞与SP2/0-CMV细胞的的成瘤率无明显差异.荷瘤后pCMV-S2S组初次出现死亡小鼠的时间为24 d,较两对照组均延迟了13 d,平均生存时间为(31±1) d,较两对照组延长(P＜0.05);4周生存率(75%)高于两对照组(P＜0.05), 两对照组之间生存时间及生存率差异无统计学意义.结论 HBV核酸疫苗pCMV-S2S能在小鼠体内诱生较强的特异性CTL活性,对荷瘤小鼠具有特异性免疫保护作用,可望用于HBV感染的免疫保护.     

桃仁乙醇提取物对小鼠移植性S180肿瘤的抑制作用

[目的]探讨桃仁乙醇提取物对小鼠移植性S180肿瘤的抑制作用.[方法]于昆明种小鼠右前肢腋下接种S180细胞建立荷瘤小鼠模型,接种当日随机分为模型组、环磷酰胺组及桃仁乙醇提取物大、中、小剂量组.口服给予模型组生理盐水,腹腔注射给予环磷酰胺组环磷酰胺25mg/kg,分别口服给予桃仁乙醇提取物大、中、小剂量组2.8,1.4,0.7g/kg桃仁乙醇提取物,连续给药10d,第11d停药.第12d处死小鼠观察桃仁乙醇提取物对移植性肿瘤S180的抑制作用,计算肿瘤抑制率、胸腺指数、脾脏指数、体质量变化等,测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量.[结果]桃仁乙醇提取物可减轻S180荷瘤小鼠的肿瘤质量,增加胸腺指数,提高SOD活性,降低MDA含量;大剂量(2.8g/kg)桃仁乙醇提取物可提高脾脏指数和体质量.[结论]桃仁乙醇提取物可抑制小鼠S180移植性肿瘤的生长.     

大叶小檗水提取物对小鼠S_(180)荷瘤生长的抑制作用

[目的]探讨大叶小檗水提取物对小鼠S180荷瘤生长的抑制作用.[方法]按照标准方法给小鼠接种S180荷瘤细胞,随机分组,分别灌胃给予不同剂量的大叶小檗水提取物.观察大叶小檗水提取物对小鼠S180荷瘤的生长抑制率、免疫器官质量分数及体重等指标的影响.[结果]小、中、大剂量大叶小檗水提取物均显著抑制S180荷瘤生长,肿瘤抑制率分别为31.77%,47.90%,33.33%;大剂量大叶小檗水提取物明显降低S180荷瘤小鼠胸腺质量分数.[结论]大叶小檗水提取物可抑制小鼠S180荷瘤的生长.     

多聚赖氨酸与 EDTA 交联物对小鼠成纤维细胞的毒性研究

目的：观察多聚赖氨酸与乙二胺四乙酸（EDTA）的交联物（PLE）对体外培养的小鼠成纤维细胞L929的毒性程度。方法：小鼠成纤维细胞 L929分为正常组、对照组、多聚赖氨酸组、PLE 组和 EDTA 组,采用MTT 法比较相同浓度下,EDTA、多聚赖氨酸与 EDTA 交联物对小鼠成纤维细胞 L929相对增殖率的影响。结果：以正常组作为标准（100％）,多聚赖氨酸组、EDTA 组、PLE 组和对照组对小鼠成纤维细胞 L929的相对增殖度（RGR）分别为79．87％、69．35％、81．47％和20．12％,均较正常组下降,差异有统计学意义（P ＜0．05）;在质量浓度达为1000μmoL／L 时,EDTA 对小鼠成纤维细胞 L929的毒性为2级,PLE 和多聚赖氨酸对小鼠成纤维细胞L929的毒性为1级。结论：实验浓度的 PLE 和 EDTA 对小鼠成纤维细胞 L929毒性较低,具有一定的安全性。     

颌面部赝复用硅橡胶老化后体外细胞毒性研究

目的 研究颌面部赝复用硅橡胶老化后的体外细胞毒性.方法 以A-2186硅橡胶和液态双组份SEI硅橡胶作为受试材料,根据GB/T3512-2001分别制备24、48、72 h老化试件.以小鼠成纤维细胞(L-929)培养液为浸提介质,参照GB/T16886.5-2003制备相应浓度的浸提液培养L-929细胞.根据试件的老化时间和浸提液的浓度进行实验分组,同时设立阴性和阳性对照.于加入浸提液后的2、4、7 d分别收集细胞,MTT法检测细胞增殖,以测得的吸光度值(D490nm)计算细胞相对增殖率并以此评价受试件的毒性程度.结果 加入浸提液后2、4 d,SEI老化72 h 50%和100%浓度组的D490nm均较阴性对照组显著降低,评价细胞毒性为2级.加入浸提液后7 d,A.2186老化48 h 100%浓度组及老化72 h 50%和100%浓度组的D490nm均较阴性对照组显著降低,评价细胞毒性均为2级;SEI老化48 h 50%和100%浓度组及老化72 h 50%和100%浓度组的D490nm均较阴性对照组显著降低,评价细胞毒性均为2级.除A-2186老化24 h 50%浓度组外(细胞毒性为0级),其余各组细胞毒性评价均为1级.结论 老化48 h后,液态双组份SEI硅橡胶表现出轻微的细胞毒性;老化72 h后,A-2186硅橡胶和液态双组份SEI硅橡胶均有一定的细胞毒性.建议临床使用赝复体的患者定期更换赝复体.     

颌面部赝复用硅橡胶老化后体外细胞毒性研究

目的 研究颌面部赝复用硅橡胶老化后的体外细胞毒性.方法 以A-2186硅橡胶和液态双组份SEI硅橡胶作为受试材料,根据GB/T3512-2001分别制备24、48、72 h老化试件.以小鼠成纤维细胞(L-929)培养液为浸提介质,参照GB/T16886.5-2003制备相应浓度的浸提液培养L-929细胞.根据试件的老化时间和浸提液的浓度进行实验分组,同时设立阴性和阳性对照.于加入浸提液后的2、4、7 d分别收集细胞,MTT法检测细胞增殖,以测得的吸光度值(D490nm)计算细胞相对增殖率并以此评价受试件的毒性程度.结果 加入浸提液后2、4 d,SEI老化72 h 50%和100%浓度组的D490nm均较阴性对照组显著降低,评价细胞毒性为2级.加入浸提液后7 d,A.2186老化48 h 100%浓度组及老化72 h 50%和100%浓度组的D490nm均较阴性对照组显著降低,评价细胞毒性均为2级;SEI老化48 h 50%和100%浓度组及老化72 h 50%和100%浓度组的D490nm均较阴性对照组显著降低,评价细胞毒性均为2级.除A-2186老化24 h 50%浓度组外(细胞毒性为0级),其余各组细胞毒性评价均为1级.结论 老化48 h后,液态双组份SEI硅橡胶表现出轻微的细胞毒性;老化72 h后,A-2186硅橡胶和液态双组份SEI硅橡胶均有一定的细胞毒性.建议临床使用赝复体的患者定期更换赝复体.