槲皮素抑制HSP70表达对紫外线C致DNA损伤的影响

目的研究热休克蛋白70(HSP70)在紫外线C致DNA损伤中的保护作用。方法用254 nm紫外线不同照射剂量(10,20,40,80 J/m2)照射槲皮素(quercetin)抑制HSP70表达的A549细胞株(A549/quercetin),用Western-blot检测HSP70的水平,用碱性单细胞凝胶电泳检测DNA损伤,用彗星细胞率和Olive尾矩评价DNA损伤情况。A549细胞作为正常对照组,DMSO处理作为溶剂对照组(A549/DMSO)。结果无论在A549组、A549/DMSO组,还是在A549/quercetin组,DNA损伤的彗星细胞率随着紫外照射的剂量增加而逐渐增加,在10 J/m2时,未观察到HSP70的保护作用,3组的彗星细胞率差异无统计学意义;在20 J/m2照射时,可以观察到HSP70的保护作用,但不明显;40 J/m2照射时,观察到HSP70对DNA有很明显的保护作用;80 J/m2照射时,HSP70的保护作用又逐渐地消失了。进一步分析40 J/m2照射的Olive尾矩显示,与A549组或A549/DMSO组相比,A549/quercetin组Olive尾矩明显增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论HSP70能保护细胞免受一定剂量范围内的紫外线C照射引起的DNA损伤。     

HSP70过表达对紫外线C致DNA损伤的影响

[目的]研究HSP70过表达对紫外线致DNA损伤的影响.[方法]设A549、A549/pcDNA、A549/HSP70 3个组,分别用不同紫外线照射剂量(0、10、20、40、80 J/m2)照射HSP70表达正常和过表达的A549细胞株,用Western-blot检测HSP70的水平,用碱性单细胞凝胶电泳检测DNA损伤情况.[结果]DNA损伤的彗星率随紫外线照射的剂量增加而逐渐加重.当在相同剂量40J/m2时,A549/HSP70组的彗星率为24 %、尾矩为14.31±1.60,A549相应为40 %、18.83±0.41,A549/pcDNA为40%、18.67±0.81.在40 J/m2照射所致的Olive尾矩明显减少,与对照组比较差异有显著性(P＜0.01).[结论]HSP70能保护细胞免受一定剂量范围内的紫外线引起的DNA损伤.     

槲皮素抑制HSP70表达的体外研究

目的探讨不同浓度槲皮素抑制正常细胞和肿瘤细胞热休克蛋白70(HSP70)的表达规律,寻找槲皮素抑制HSP70表达的最佳浓度,为研究HSP70的功能提供一种可行的方法。方法加入槲皮素至终浓度为50,100,150,200μmol/L,继续37℃培养6 h后,置42℃水浴受热1 h,于37℃恢复培养2 h,收获细胞。设立37℃培养组(正常对照)、42℃培养组(阳性对照)和0.1%DMSO组(溶剂对照)。分别处理肿瘤细胞株A549细胞和正常细胞株2BS细胞,用Western-blot检测细胞HSP70的表达水平。结果在A549细胞和2BS细胞中,随着槲皮素浓度的增加,HSP70表达逐渐降低。与正常对照组相比,阳性对照组和溶剂对照组的HSP70水平表达增高,差异有统计学意义(P<0.01)。在A549细胞中,当槲皮素浓度达到50μmol/L时,HSP70表达开始下调,但与阳性对照组相比,差异没有统计学意义(P>0.05);当槲皮素浓度达到100μmol/L时,与阳性对照组相比,HSP70表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);当槲皮素浓度达到150,200μmol/L时,与阳性对照组相比,A549细胞HSP70表达降低更加明显(P<0.01);150μmol/L组和200μmol/L组相比,HSP70水平差异无统计学意义(P>0.05)。在2BS细胞中,当槲皮素浓度达到50μmol/L时,HSP70表达开始下调,与阳性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);当槲皮素浓度达到100,150,200μmol/L时,与阳性对照组相比,HSP70水平也有显著性降低(P<0.01);150μmol/L组和200μmol/L组相比,HSP70水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论槲皮素可以抑制肿瘤细胞和正常细胞HSP70的表达,150μmol/L的槲皮素处理A549和2BS细胞,抑制HSP70表达的效果最佳。     

染锰鼠睾丸增殖细胞核抗原与热休克蛋白表达

目的研究锰对小鼠精子数量与睾丸增殖细胞核抗原(PCNA)和热休克蛋白70(HSP70)表达的影响。方法将小鼠随机分为3个不同剂量MnCl2(7.5,15,30 mg/kg)组和对照组,分别于染锰,3,7,14,28,56 d计数精子数量,用免疫组化S-P法结合图象分析技术测定睾丸PCNA和HSP70表达。结果随染锰剂量增加和时间延长精子数量减少、睾丸PCNA表达降低。3个不同剂量MnCl2组精子计数于染锰28 d明显低于对照组(P<0.05,P<0.01,P<0.01),睾丸PCNA表达于染锰14,28,56 d比对照组明显降低(P<0.05,P<0.01,P<0.01),直线相关分析各染锰组小鼠精子数量与睾丸PCNA表达呈正相关(r=0.794,P<0.01)。睾丸HSP70表达,15,30 mg/kg组染锰56 d明显低于染锰28 d(P<0.01)。结论锰对小鼠生精功能的损伤呈一定的剂量-效应和时间-效应关系。各染锰组小鼠精子数量与睾丸PCNA表达呈正相关(r=0.794,P<0.01)。锰可诱导小鼠睾丸HSP70表达,染锰28 d达高峰。     

血浆中抗热休克蛋白70表达水平与冠心病的相关性研究

目的研究冠心病(CHD)患者血浆中抗热休克蛋白70(HSP70)的表达水平,分析其与冠心病发生发展之间的关系。方法选取90例冠心病患者为观察组,90例健康体检者为对照组。依据冠脉造影结果将观察组细分为ACS组和SAP组,根据冠脉病变支数分为SV组、DV组及MV组,以冠脉病变分型为依据分为A型组、B1型组、B2型组及C型组。采用ELISA法测定受检者血浆HSP70水平。比较各组间HSP70阳性表达率,分析冠心病与HSP70之间的关系。结果观察组(SAP组、ACS组)HSP70阳性表达率显著高于对照组(P<0.05)。观察组中,ACS组HSP70阳性表达率显著高于SAP组(P<0.05);SV组、DV组及MV组三组间HSP70阳性表达率两两比较,差异具有统计学意义(P<0.05),MV组数值最高;A型组HSP70阳性表达水平显著低于其它三组(P<0.05),其它三组间比较无统计学差异(P>0.05)。结论 HSP70与冠心病发生发展具有密切联系,是该病症的危险因素,与患者发病性质、病变程度存在相关性,可作为指导冠心病的临床诊治依据。     

硝酸铅诱导L-02细胞HSP70表达及氧化应激的研究

目的研究硝酸铅诱导人胚胎肝细胞株L-02细胞热应激蛋白70(HSP70)表达以及细胞氧化应激的变化,并探讨HSP70表达与抗氧化作用的关系。方法以0、10、20和40μmol/L硝酸铅染毒人胚胎肝细胞株L-02细胞,以免疫组化技术观察HSP70表达的变化,并检测L-02细胞裂解液超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物还原酶(GSH-Px)活力以及丙二醛(MDA)含量的变化。结果 20、40μmol/L硝酸铅组L-02细胞未出现细胞毒作用,HSP70出现阳性表达,且40μmol/L剂量组呈明显阳性;同时40μmol/L剂量组SOD活力高于对照组(P0.05)。结论该研究剂量的硝酸铅能够诱导L-02细胞HSP70表达明显增强,且细胞抗氧化作用增强。     

锰对大鼠大脑热休克蛋白27、70 mRNA表达的影响

[目的]探讨锰染毒条件下大鼠大脑热休克蛋白27(HSP27)和70(HSP70)的变化规律。[方法]健康2月龄雄性SD大鼠50只,随机分为5组:生理盐水对照组和Mn2+染毒2.5、5.0、10.0、20.0mg/kg组(分别以A、B、C、D和E组表示)。每只大鼠每天腹腔注射染毒0.5mL,连续30d,处死大鼠后采用等离子体原子发射光谱(ICP-AES)测定脑组织锰含量。通过实时荧光定量PCR(QT-PCR)检测大鼠亚慢性锰染毒后脑组织中HSP27和HSP70mRNA的相对表达水平。[结果]不同剂量组脑组织中的锰含量与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.01)。与对照组相比,B、C、D、E组HSP27mRNA的相对表达量增加,分别为对照组的2.00、5.51、8.78和6.61倍;HSP70mRNA的相对表达量也增加,分别是对照组的1.68、10.27、22.88和2.20倍。[结论]锰可以调节大鼠脑组织HSP27和HSP70表达的变化。     

短波紫外线诱导V79细胞凋亡模型的建立

目的探讨短波紫外线(UVC)诱导V79细胞凋亡的最佳暴露剂量并建立细胞凋亡模型。方法处于对数生长期的V79细胞,以4.5 mJ/cm~2强度UVC分别照射0、10、20、30、60、90 s,对应的照射剂量分别为0(对照)、45、90、135、270、405mJ/cm~2。采用MTT法检测细胞存活率,采用流式细胞仪检测细胞凋亡和坏死情况及细胞内活性氧(ROS)的水平。结果与对照组比较,各剂量UVC暴露组V79细胞的存活率均较低,差异有统计学意义(P0.05);且随着UVC暴露剂量的升高,V79细胞的存活率呈下降趋势。当UVC暴露剂量为90 mJ/cm~2时,V79细胞的存活率为(50.4±5.7)%。与对照组比较,各剂量UVC暴露组V79细胞的凋亡率均较高,差异有统计学意义(P0.05);而坏死率无明显改变。且随着UVC暴露剂量的升高,V79细胞的凋亡率呈上升趋势。与对照组比较,各剂量UVC暴露组V79细胞内ROS的水平均较高,差异有统计学意义(P0.05);且随着UVC暴露剂量的升高,V79细胞内ROS的水平呈上升趋势。结论 UVC诱导V79细胞凋亡的最佳暴露剂量为90 mJ/cm~2。     

热休克蛋白70在心脏跳动中二尖瓣置换术心房肌细胞中的表达

目的 观察心脏跳动中二尖瓣置换术患者心房肌细胞热休克蛋白70(HSP70)的表达情况.方法 将同期30例行二尖瓣置换术的风湿性心脏病患者随机分为两组,试验组(浅低温心脏跳动中施术组,16例)与对照组(传统中低温心脏停跳中施术组,14例).分别于体外循环(CPB)前,拔除上腔静脉插管时留取右心房组织标本,采用Western blot法测定心房肌细胞HSP70的表达情况.结果 对照组CPB前与CPB后心房肌细胞HSP70的表达分别为(160.23±7.12)μg/ml,(165.25±6.29)μg/ml;试验组CPB前与CPB后分别为(163.59±6.35)μg/ml、(196.34±4.23)μg/ml.与CPB前比较,试验组CPB后心房肌细胞HSP70的表达明显升高(P<0.01);而对照组CPB前后,心房肌细胞HSP70虽有所表达,但差异无统计学意义(P>0.05);两组CPB后心房肌细胞HSP70的表达,试验组要比对照组高(JP<0.05).结论 在心脏跳动中施术能较好地诱发HSP70高表达从而具有较好的心肌保护效果,此术式对心肌细胞的缺血-再灌注损伤要比传统手术小.     

微波辐射对家兔心脏损伤及其机制的研究

目的探讨不同强度微波辐射对家兔心脏的损伤作用及其机制。方法分别以强度为50、100、150和200 m W/cm2,频率为2450 MHz微波照射家兔20 min,照射后6 h,取家兔心脏,检测心肌细胞中ATP含量、线粒体呼吸链复合体Ⅳ和Ⅴ活性,HE染色观察心脏组织结构的改变,Western blotting检测心肌细胞内Caspase-3和HSP 70蛋白表达量变化。结果随着微波辐射强度的增加(100、150和200 m W/cm2),辐射组家兔心肌细胞中ATP含量、线粒体呼吸链复合体Ⅳ和Ⅴ活性呈现降低趋势,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果显示,微波辐射组家兔心肌细胞轻度水肿,肌纤维排列不整,心肌细胞出现明显的损伤。Western blotting结果显示,微波辐射后心肌细胞内Caspase-3和HSP 70蛋白表达水平随着辐射强度的增加呈上升趋势(P<0.05)。结论微波辐射对家兔心脏具有明显的损伤作用,其可能机制是通过改变心肌细胞内应激水平而引发细胞凋亡。     

热应激作用下人肺腺癌A549细胞中HSP70B’的动态表达

[目的]探讨热休克蛋白70B’（HSP70B’）的产生条件，分析HSP70B’在人肺腺癌A549细胞中的表达特征。[方法]采用Western-blot方法检测正常培养细胞（37℃）和不同温度（38、39、40、41、42、43、44、45℃）下热应激1h；选择HSP70B’表达最高的温度42℃，应激1h后恢复培养（37℃，5％CO2）不同时间（0、3、6、9、12、15、18、24h）；在42℃应激不同时间（0、20、40、60、80、100、120、140、180min）恢复培养6h的肺腺癌A549细胞中HSP70B’蛋白的表达水平。[结果]HSP70B’在正常状态的A549细胞中不表达；在不同应激温度作用下，HSP70B’在39℃开始表达，在42℃时表达量达到最高水平；细胞维持42℃应激后恢复培养不同时间作用下，HSP70B’表达在恢复培养6h后达最高，恢复培养24h后降到最低水平；在42℃应激不同时间后均恢复培养6h作用下，热应激60min时HSP70B’表达最高。[结论]肺腺癌细胞株A549细胞中HSP70B’产生的最优条件是42℃应激60min后37℃恢复培养6h。HSP70B’在热应激后的A549细胞中迅速表达，其在细胞热应激中的作用及意义有待进一步研究。     

微波及γ射线单独或联合辐射对人神经胶质瘤细胞HSP70表达的影响

[目的]探讨微波及γ射线单独或联合照射对入神经胶质瘤细胞（SHG44细胞）热休克蛋白70（HSP70）表达的影响。[方法]SHG44细胞按是否接受γ射线照射（5Gy）分为单独微波组（M组）和射线微波联合组（IM组）;两组又均以接受微波强度不同（0、2、4、6mW／cm^2）分为4个亚组,即M0、M2、M4、M6亚组和IM0、IM2、IM4、IM6亚组。用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定细胞存活率,用western blot和RT-PCR方法检测HSP70的表达。[结果]与M0组相比,M4、M6、IM6组的细胞存活率均明显下降（P〈0.05或P〈0.01）,尤以IM6组下降为甚;且IM6组的细胞存活率也低于单独γ射线照射组（IM0组）,P〈0.01。与M0组相比,各剂量M组的HSP70表达差异无统计学意义;经γ射线照射后,即各IM组的HSP70表达较M0组均明显下降（P〈0.01）;而与IM0组相比,各IM组的HSP70表达差异无统计学意义（P〉0.05）。[结论]本实验条件下,微波和γ射线单独或联合辐射均能降低细胞存活率;γ射线照射能抑制HSP70的表达,但微波不能引起HSP70表达的明显变化。     

子宫内膜热休克蛋白表达与习惯性流产的相关性研究

目的 :探讨习惯性流产与热休克蛋白 (HSP)表达的关系。方法 :选取 36例不明原因习惯性流产患者作为观察组 ,40例正常妊娠、要求人工流产者作为对照组 ,分别选取其蜕膜组织做常规染色 ;免疫组织化学染色 (S-P法 )标记 HSP70和 HSP90 a在蜕膜组织中的表达。结果 :HSP70阳性表达在观察组和对照组蜕膜组织中分别为 72 .2 %和 42 .5% (P<0 .0 1 ) ;HSP90阳性表达在观察组和对照组蜕膜组织中分别为 66.7%和 45.0 % (P<0 .0 5)。结论 :在习惯性流产患者中 ,HSP通过持续诱导炎症反应和免疫反应、引起体内激素紊乱、子宫敏感性增强等多种原因而导致流产     

苯并[a]芘对体外培养大鼠皮层神经元HSP70表达的影响

目的 研究苯并[a]芘(B[a]P)对体外培养大鼠皮层神经元热休克蛋白70(HSP70)表达的影响.方法 分离培养SD大鼠皮层神经元,用0、0.1、0.5 、1、5和10μmol/L浓度的B[a]P染毒24h观察剂量-效应关系;用0、0.5和5μmol/L浓度的B[a]P染毒24、48和72h观察时效关系.培养液中均添...     

冶炼工人铅暴露水平与HSP70表达的相关性研究

目的通过对冶炼工人血铅和热应激蛋白70（HSP70）的测定,分析铅作业工人铅暴露水平与HSP70表达的相关性,探讨HSP70作为铅暴露人群监控的生物性标志物的可行性。方法选取某铅冶炼厂铅作业工人155名为铅接触组,另选该厂管理、后勒人员56名为对照组,采集2组人员外周静脉血5ml,并测定血铅及血浆中HSP70含量,分析两者的相关关系。结果 HSP70含量和血中铅含量之间存在相关性,相关系数为0.322（P〈0.05）。结论血铅与HSP70含量之间具有正相关关系,HSP70可作为铅接触人群监控的生物性标志物。     

束缚-低氧交叉适应的心血管机制及其与HSP70表达的关系

[目的]研究束缚-低氧交叉适应大鼠心功能变化及与心肌HSP70表达水平间的关系。[方法]雄性Wistar大鼠随机分为对照组、低氧应激组、束缚适应组和低氧适应组。通过检测血浆肾上腺素浓度,评价交叉适应模型的建立;测定各组经低氧暴露后的心率、心电图、血清LDH活性,从而评价大鼠心功能的变化。同时测定各组中心肌细胞HSP70表达水平,并分析HSP70与大鼠血清LDH活性的相关性。[结果]交叉适应组大鼠的心率、异常心电图率和血清LDH活性均明显低于低氧应激组,而心肌HSP70表达水平明显高于低氧应激组。HSP70表达水平与大鼠血清LDH活性具有负相关性。[结论]束缚适应可通过提高机体的心功能产生对低氧应激的保护作用,交叉适应的建立与HSP70在细胞中的表达量相关。     

微波暴露对原代培养大鼠海马神经元热休克蛋白家族表达的影响

目的 研究微波暴露对原代培养大鼠海马神经元中热休克蛋白(heat shock proteins,HSPs)表达调控的影响.方法 采用平均功率密度为90 mW/cm2微波辐照成熟的原代培养大鼠海马神经元10 min,于辐照后0、3、6、12、24 h提取细胞总蛋白,采用免疫印迹(Western blot)法检测HSP27、HSP70、HSP90和热休克转录因子(heat shock factor 1,HSF1)蛋白表达情况;于辐照后0、3、6、12、24 h分别提取细胞总RNA和总蛋白,采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测hsf1的mRNA表达水平;于辐照后20、40 min提取细胞核蛋白,凝胶迁移滞后实验(electrophoretic mobility shift assays,EMSA)法检测HSF1的活性变化.结果 90 mW/cm2微波辐照10 min后,HSP27蛋白表达水平在辐照后3、6、12 h分别明显升高22%、36%、18%,HSP70蛋白表达水平在辐照后3、6、12 h分别明显升高23%、32%、26%,与辐照前比较,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).HSP90蛋白表达水平在辐照后6、12 h分别明显升高27%、33%,与辐照前的差异亦有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).HSF1 mRNA和蛋白表达水平未见明显变化,但微波辐照可激活HSF1的DNA结合活力. 结论微波辐照后大鼠海马神经元发生热休克反应,被活化的HSF1在转录水平上调控HSPs的表达,从而发挥拮抗微波损伤的作用.     

高温、苯并芘-7,8-二醇-9,10-环氧化物单独作用对人肺腺癌细胞Hsp27、Hsp70表达的影响

目的研究不同温度和不同浓度B(a)P7,8二醇9,10环氧化物(BPDE)作用A549细胞后,热休克蛋白27(HSP2)、热休克蛋白70(Hsp70)的表达规律。方法体外培养的A549细胞分为高温应激组和BPDE组。37℃培养的细胞作对照,高温应激组细胞置于高温(39℃、42℃、43℃)应激2小时。BPDE组用不同浓度的BPDE(0、2、4、8μmolL)染毒2h。利用Westernblot技术分析A549细胞株中Hsp27、Hsp70的表达水平。结果高温应激组细胞Hsp27的表达较37℃对照明显升高,差异均有显著性(P<0.05)。在39℃,Hsp27的表达水平达到峰值。高温处理后,Hsp70的表达也增加,在42℃达到最高,且与对照相比差异有显著性(P<0.05)。BPDE组Hsp27、Hsp70的表达均较对照明显升高,其中Hsp27的表达水平在实验用最高浓度8μmolL达到最高,且与对照比较差异有显著性(P<0.05),但仍处于上升阶段。Hsp70在4μmolL达到最高,在4μmolL和8μmolL时,Hsp70的表达水平与对照比较差异有显著性(P<0.05)。结论高温和BPDE均能诱导A549细胞Hsp27、Hsp70的表达。高温应激时,Hsp27和Hsp70的表达水平分别在39℃和42℃达到峰值。BPDE处理时,Hsp27在8μmolL时表达最高,但仍处于上升趋势,而Hsp70在4μmolL时表达最高。