体外诱生人白细胞介素-2的实验条件

探讨用植物血凝素(PHA)诱导人外周血单核的细胞(PBMC)产生白细胞介素-2(IL-2)的实验条件,并用PHA诱导正常人PBMC产生IL-2及用IL-2依赖细胞株(CTLL-2)增殖试验来滴定IL-2活性单位。结果:(1)PHA-M诱导人PBMO产生IL-2的最适条件:PBMC为1×10~3/ml、PHA-M浓度为0.5～1％、诱生时间为24h、RPMI1640营养液中需加入2～10％灭活的人AB型血清;(2)无论是PHA-M或PHA在较高剂量时(分别≥0.25％和6.25μg/m1)均抑制aTLL-2的生长;(3)用PHA-M诱导19例正常人PBMG产生IL-2,其活性单位为64±65u/mL(±SD,范围4～260)。     

白细胞介素2的检测

白细胞介素2是Th细胞产生的一种调节机体免疫功能的重要因子,具有多种生物学效应,已被广泛应用于免疫学的基础研究和临床诊断及治疗。 对白细胞介素2(IL-2)的生物学效应进行鉴定、分离纯化和重组IL-2的制备及临床应用研究都需要对其活性进行检测。因此,建立检测IL-2的实验室方法是开展研究的必要前提。 IL-2活性检测总体上有生物学检测法和免疫学检测法两大类。     

IL2吸收试验检测CTLL2细胞和Con A活化-小鼠脾细胞的IL2受体

用初步纯化的白细胞介素2(IL2)建立了检测IL2受体的实验方法——IL2吸收试验,以IL2吸收率表示IL2受体的数量。IL2依赖细胞株(CTLL2)细胞和Con A活化一小鼠脾细胞有能力吸收除去,而正常休止状态小鼠脾细胞和未经con A刺激的脾细胞不能吸收除去上清液中的IL2活性。此外,IL2的吸收与CTLL2细胞的数量有关,细胞数量为8×10~6/ml时几乎吸收除去上清液中全部IL2活性,随着细胞数量的减少,IL2吸收率随之降低。结果证实IL2吸收试验检测IL2受体有特异性强,稳定,半定量和可重复等特点。     

胃癌患者外周血单个核细胞白细胞介素2的诱生能力

应用［＾３Ｈ］－ＴｄＲ掺入法，测定３０例胃癌患者外周血单个核细胞白细胞介素２（ＩＬ－２）诱生能力。结果表明，胃癌患者ＩＬ－２诱生能力显著低于正常对照及胃慢性良性病者；随肿瘤进展，ＩＬ－２诱生能力逐渐降低；肿瘤分化越差，ＩＬ－２诱生能力则越低；血清可溶性ＩＬ－２受体与ＩＬ－２放生能力呈负关；去除肿瘤负荷，可降低血清ｓＩＬ－２Ｒ和升高ＩＬ－２诱生水平。     

白细胞介素-1的诱生和检测条件与冬虫夏草和黄芪对其诱生作用

用冬虫夏草和黄芪初步观察其诱生白细胞介素-1(IL-1)的作用。结果表明:脂多糖和二氧化硅均可诱导小鼠腹腔粘附细胞产生IL-1,两者协同作用可诱导高滴度的IL-1活性。为提高检测IL-1活性的敏感性和稳定性,应注意:①用于取胸腺细胞的鼠种以C3H/HeJ为好;②检测IL-1活性时要选择一合适的伴刀豆蛋白A浓度;③标本必需经透析除去小分子抑制物。中药冬虫夏草和黄芪均有诱生IL-1的作用,前者可诱生较高滴度的IL-1。     

喉癌患者白细胞介素2及可溶性白细胞介素2受体的检测

目的：观察喉癌患者的白细胞介素2（IL—2）与可溶性白细胞介素2受体（sIL—2R）水平的变化．方法：IL—2测定采用IL—2诱生及活性测定法,sIL—2R采用双抗体夹心法。结果：喉癌患者IL—2水平明显低于对照组，经统计学处理差异显著（P＜0．01），而sIL—2R水平则显著增高（P<0．01），并且与喉癌的分型及分期有明显的相关性；结论：sI-2R水平测定配合IL—2测定可作为喉癌临床监测的重要指标。     

白细胞介素-2和干扰素诱生的相互调节作用

探讨人外周血单个核细胞(PBMC)在丝裂原刺激后产生白细胞介素-2(IL_2)和干扰素(IFN_s)的关系。PHA、SPA、ConA、PolyI:C均可诱导IL_2的产生。如联合采用PolyI:C PHA、PolyI:C ConA在IL_2的诱生中有明显诱生协同作用。IFN-α PHA、IFN-γ PHA对IL_2的诱生也能明显提高效应。IL_2还能明显增强IFN-α和IFN-γ的生成。若将IL_2 PHA联合刺激可加强IFN-γ生成作用,IL_2 NDV联合刺激可提高IFN-α的生成。     

参考白细胞介素2的制备和活性单位的滴定

参考白细胞介素2(IL2)的制备和活性单位的滴定。取伴刀豆蛋白A(Con A)诱生的大鼠脾细胞培养上清液(粗制IL2)为IL2源,诱生时培养液中加入牛血清白蛋白替代牛血清,以排除血清成分的混杂。粗制IL2经Amicon系统加压浓缩和充分透析后,再经SephadexG 200凝胶柱层析纯化,得到2240 IL2活性单位(u)/ml的纯化IL2。纯化IL2经稀释调正至60IL2u/ml即参考IL2。     

慢性活动性乙型肝炎患者PBMC培养上清液sIL-2R检测的报告

用生物学方法检测28例慢活肝患者PBMC的IL-2活性,用葡萄球菌免疫球蛋白间接花环法检测其IL-2R表达细胞(IL-2R~+,mIL-2R)的百分率,用ELISA法定sIL-2R。结果显示慢活肝患者IL-2与IL-2R~+均较正常对照值明显下降(IL-2分别为99.04±26.22与184.15±84.09,P<0.01;IL-2R~+分别为37.15±12.15与54.76±8.91,P<0.01;IL-2R~+分别为37.15±12.15与54.76±8.91,P<0.01),且两者下降呈正相关(n=28,r=0.705,P<0.01)。与此同时,慢活肝患者sIL-2R较正常对照值明显增高(sIL-2R分别为314.6±199.2与65±31.5,P<0.05),sIL-2R的增高与ALT的升高相关(ALT异常组与正常的sIL-2R分别为349.23±199.75与139.0±48.48,P<0.05)。提示慢活肝患者存在免疫调节功能异常,sIL-2R在免疫调节中具有重要意义。     

小鼠白细胞介素-3的制备及其检测条件的分析

从小鼠白细胞介素-3(IL-3)分泌细胞株WEHI-3获取了IL-3,同时用小鼠IL-3依赖细胞株32-D检测IL-3和滴定标本中IL-3的活性单位,并对检测条件进行了探索。结果表明,WEHI上清中含高活性IL-3,不含IL-2,其最佳收集条件是5×10~5/ml细胞浓度培养48h。32-D细胞生长依赖于IL-3。检测细胞的浓度、培养时间及同位素加入时间直接影响检测结果,最佳检测条件是(5～10)×10~5/ml细胞浓度、培养36h、终止前12h加~3H-TdR。     

带瘤小鼠淋巴细胞产生IL-2能力的动态变化及其机理

用SRS实体瘤模型对带瘤小鼠产生白细胞介素2(Interleukin 2,IL-2)的能力作了动态观察,发现随着肿瘤的不断增大,宿主淋巴细胞产生IL-2的能力不断下降,淋巴细胞对Con A的增殖反应能力也逐渐下降。进一步研究发现,宿主体内的抑制性巨噬细胞和抑制性淋巴细胞功能增强;后者经鉴定主要是带有Thy1Lyt2表面标志的淋巴细胞。此外,还证实带瘤宿主淋巴细胞表达IL-2受体能力低下。上述抑制细胞功能增强可能是导致IL-2分泌功能低下的重要原因;带瘤小鼠淋巴细胞除IL-2分泌功能异常外,可能还伴有IL-2受体表达能力的缺陷。它们均会引起宿主细胞免疫功能的下降。     

IL-6及其受体mRNA在胃癌发生发展中的表达及意义

目的：观察白细胞介素6（interleukin-6,IL-6)及白细胞介素－6受体（IL－6receptor,IL-6R)在胃正常粘膜，癌前病变，早期胃癌，进展期胃癌中的表达，探讨它们与癌发生发展的关系及临床意义。方法：应用原位杂交技术检测91例不同胃粘膜标本中IL－6及其受体mRNA表达情况，其中正常粘膜20例，慢性萎缩性胃炎伴重度不典型增生和（或）肠上皮化生20例，早期胃癌25例，进展期胃癌26例，结果：IL－6 mRNA在正常粘膜，癌前病变，早期胃癌，进展期胃癌中的阳性表达率分别为10％，55％，84％，84．6％，IL－6受体mRNA在胃粘膜不同病变中的阳性表达率分别为10％，50％，80％，88．4％，IL－6及其受体mRNA在正常粘膜中的表达明显低于癌前病变（P＜0．05），IL－6及其受体mRNA在癌前病变中的表达明显低于早期胃癌（P＜0．05），而早期胃癌中的IL－6及其受体mRNA的表达与进展期胃癌无明显差异（P＞0．05），结论：IL－6及其受体与胃癌的发生发展有着密切关系。     

恶性肿瘤病人T淋巴细胞亚群和IL-2水平的变化

目的探讨恶性肿瘤病人外周血Ｔ淋巴细胞亚群和白细胞介素－２（ＩＬ－２）水平的变化。②方法采用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶（ＡＰＡＡＰ）法和３Ｈ－ＴｄＲ掺入法,检测了６０例恶性肿瘤病人和６０例健康人Ｔ淋巴细胞亚群和ＩＬ－２水平的变化。③结果恶性肿瘤病人ＣＤ２,ＣＤ４,ＣＤ４／ＣＤ８和ＩＬ－２明显降低,而ＣＤ８明显增高,与对照组比较差异均有显著性（ｔ＝３．８２～１６．３９,Ｐ＜０．００１）。恶性肿瘤病人ＣＤ４／ＣＤ８与ＩＬ－２呈正相关（ｒ＝０．７６４,Ｐ＜０．００１）。④结论恶性肿瘤病人免疫功能明显异常。     

四甲基偶氮唑盐比色法测定白细胞介素-2活性及淋巴细胞增殖反应

用改良MTT(四甲基偶氮唑盐)比色法检测白细胞介素-2(IL-2)活性和淋巴细胞转化反应,并与~3H-dT掺入法相比较。结果表明,改良MTT比色法具有简单、快速、敏感的优点,不仅适用于检测IL-2,同时也可用于淋巴细胞转换试验。在与~3H-dT掺入法平行试验时发现,两者平行相关(相关系数均>0.90)。本法无需接触同位素,便于推广应用。     

IL-2活性单位测定的微机实现

目的探讨白细胞介素－２活性单位的测定，编程在微机上实现。方法以生物学方法检测白细胞介素－２的活性单位，在微机上运行该程序。结果使用该程序快速、简便、误差小、效果良好。结论该程序同样适用于其它生物制品的测定。