支气管哮喘患者诱导痰炎性指标与气道反应性的关系

目的分析诱导痰中硝酸盐/亚硝酸盐(NO_3~-/NO_2~-)浓度和嗜酸粒细胞(EOS)计数与气道反应性的相关性,探讨上述指标对评估病情、调整支气管哮喘(简称哮喘)治疗方案的指导意义。方法 2003年2月至2004年6月华西医院哮喘门诊收集轻至中度非急性发作期哮喘患者35例,其中轻度9例,中度26例;经吸入糖皮质激素(ICS)和长效β_2受体激动剂(LABA)联合治疗1年,随访期间记录哮喘症状积分,测定气道反应性[以比气道传导率下降35%所需的激发剂浓度(PC_(35)sGaw)表示]、诱导痰中 EOS 计数和 NO_3~-/NO_2~-浓度。15名健康志愿者作为对照组,测定其诱导痰 EOS,NO_3~-/NO_2~-浓度。结果 35例患者中26例完成1年或以上的治疗和随访。26例患者 PC_(35)sGaw 治疗前为0.08g/L,治疗3个月为1.40g/L,随后7个月维持在2.64 g/L 水平。在治疗第3个月时,诱导痰NO_3~-/NO_2~-水平从治疗前的(734±72)×10~(-3)g/L 下降至(230±41)×10~(-3)g/L,差异有统计学意义(q=6.26,P<0.05),治疗7个月时 NO_3~-/NO_2~-水平降至(137±27)×10~(-3)g/L,与健康对照[(136±20)×10~(-3)g/L]比较差异无统计学意义(q=3.77,P>0.05)。治疗3个月后 EOS 计数为0.014±0.007,与健康对照(0.016±0.008)比较差异无统计学意义(q=2.94,P>0.05);随访期间任一时点PC_(35)sGaw 与 EOS 计数无相关(r_1=0.237,r_2=0.536,r_3=0.675,P 均>0.05)。5个月内 PC_(35)sGaw 与NO_3~-/NO_2~-水平呈负相关(r_1=-0.872,r_2=-0.653,r_3=-0.639,r_4=-0.656,P 均<0.05)。结论 PC_(35)sGaw 与诱导痰 NO_3~-/NO_2~-是反映哮喘气道炎症较为敏感的指标,可作为评价疗效及调整治疗方案的指标。     

嗜酸粒细胞性支气管炎与咳嗽变异性哮喘患者的气道炎症特征的研究

目的 探究嗜酸粒细胞性支气管炎(EB)和咳嗽变异性哮喘(CVA)患者气道炎症细胞、细胞因子和炎性介质的特征,阐明两者存在不同气道炎性特征的可能机制.方法检测杭州市第一人民医院门诊收治的15例EB患者(EB组)、15例CVA患者(CVA组)、14例支气管哮喘(简称哮喘)患者(哮喘组)和14名健康体检者(健康对照组)诱导痰中嗜酸粒细胞(EOS)百分比;流式细胞仪检测白细胞介素(IL)-5及干扰素(IFN)-γ刺激的EOS表面CD69的表达;实时荧光定量PCR方法检测各组诱导痰上清液中前列腺素E2(PGE2)、白三烯C4(LTC4)、IL-5、IFN-γ mRNA的表达水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组诱导痰上清液中PGE2、LTC4、IFN-γ和IL-5蛋白表达水平.结果 EB组、CVA组、哮喘组诱导痰中EOS百分比分别为(15.8±3.2)%、(13.0±2.7)%和(11.6±4.5)%,均明显高于健康对照组的(1.0±0.4)%(均P<0.05).在IL-5和IFN-γ刺激下,EB组诱导痰中EOS表达CD69分别为1.49±0.42和1.51±0.52、CVA组分别为1.37±0.41和1.42±0.32、哮喘组分别为1.42±0.72和1.37±0.46,3组间差异无统计学意义,但较健康对照组(分别为0.42±0.21和0.39±0.12)差异均有统计学意义(均P<0.05).EB组、CVA组、哮喘组诱导痰中IL-5的mRNA及蛋白表达水平明显高于健康对照组(均P<0.05),但3组间差异无统计学意义;各组诱导痰中IFN-γ的mRNA及蛋白表达水平较健康对照组差异均无统计学意义.EB组诱导痰中PGE2浓度为(839±69)ng/L,明显高于CVA组的(33±8)ng/L、哮喘组的(25±6)ng/L和健康对照组的(24±8)ng/L(均P<0.01),后3组差异无统计学意义;EB组PGE2限速酶前列腺素氧化环化酶2(PTGS2)的mRNA水平表达量显著增加,较CVA组、哮喘组及健康对照组差异均有统计学意义(均P<0.01);CVA、EB和哮喘组诱导痰中LTC4浓度明显高于健康对照组(均P<0.05),CVA、EB及哮喘组中LTC4限速酶白三烯C4合成酶(LTC4S)的mRNA表达水平明显高于健康对照组(均P<0.05),EB组LTC4的mRNA及蛋白表达水平与CVA组和哮喘组比较,差异也有统计学意义(均P<0.05).CVA组、哮喘组诱导痰中LTC4/PGE2比值明显高于EB组(t值分别为8.67和13.12,均P<0.05).结论 EB患者诱导痰中PGE2高表达以及CVA组LTC4/PGE2比值较EB组显著增高,这两者可能是EB缺乏气道高反应性的炎症基础.

Abstract：

Objective To explore the characteristics of airway inflammatory cells, cytokines and inflammatory mediators in eosinophilic bronchitis (EB) and cough variant asthma (CVA) patients and to elucidate the underlying mechanism of distinct airway inflammation between EB and CVA. Methods This study included 15 patients with EB (EB group), 15 patients with cough variant asthma (CVA, CVA group), 14 patients with bronchial asthma (asthma group) and 14 healthy controls (healthy group). Percentage of eosinophils (EOS) in sputum induced by hypertonic saline was detected by FACS. The percentage of CD+69 EOS stimulated by interleukin-5 (IL-5) and interferon γ (IFN-γ) was also detected by FACS. The expression of leukotriene C4 synthase (LTC4S) and prostaglandin-endoperoxide synthase-2 (PTGS2) mRNA in sputum was measured by real-time PCR and the concentration of leukotriene C4 (LTC4) and prostaglandin E2(PGE2) in sputum was measured by ELISA. Results The percentage of EOS in induced sputum was 15.8±3.2 (EB group), 13.0±2.7 (CVA group) and 11.6±4.5 (asthma group), respectively, which were significantly higher than 1.0±0.4 in the healthy group. The difference was significant and the t value was 16.31, 15.23 and 14.21 respectively (P<0.05). After stimulated by IL-5 and IFN-γ, the percentage of CD+69 EOS in induced sputum was 1.5±0.4 and 1.5±0.5 (EB group), 1.4±0.4 and 1.4±0.3 (CVA group) and 1.42±0.72 and 1.37±0.46 (asthma group) respectively. There was no statistical significance between these 3 groups, but when compared with 0.4±0.2 and 0.4±0.1 in healthy group, the difference was significant(P<0.05). The expression of IL-5 mRNA and protein in induced sputum of EB group, CVA group and asthma group were higher than the healthy group and the difference was all statistically different (P<0.05), but there was no statistical significance between EB group, CVA group and asthma group. The expression of IFN-γ mRNA and protein in induced sputum of each group was not different when compared with healthy group (P＞0.05). The concentration of PGE2 in induced sputum of EB group was(839±69)ng/L, which was higher than (33±8) ng/L of CVA group, (25±6) ng/L of asthma group and (24±8) ng/L of healthy group (all P<0.01). There was no statistical difference between CVA group, asthma group and healthy group. The expression of PTGS2 in induced sputum of EB group increased significantly; when compared with CVA group, asthma group and healthy group, the difference was significant (all P<0.01). The concentration of LTC4 in induced sputum of EB group, CVA group and asthma group was all higher than the healthy group (all P<0.05). The expression of LTC4S mRNA of EB group, CVA group and asthma group was also higher than the healthy group (all P<0.05). The expression of LTC4S mRNA and LTC4 in the EB group was higher than that in the CVA group and the asthma group (P<0.05). The value of LTC4/PGE2 in the CVA group and the asthma group was higher than that in the EB group (t=8.7 and 13.1, P<0.05). Conclusion These data suggest that the difference in airway function observed in subjects with eosinophilic bronchitis and CVA (or asthma) may be due to the results of differences in PGE2 production and an imbalance between the production of bronchoconstrictor LTC4 and bronchoprotective PGE2 lipid mediators.     

γ干扰素质粒基因转染对支气管哮喘小鼠气道炎症的影响

目的观察气道内γ干扰素(IFNγ)基因转染对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠气道炎症的影响。方法健康6周龄SPF级C57BL/6小鼠40只,按随机数字表法分为4组。正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、模型空质粒干预组(C组)、模型IFNγ质粒干预组(D组),每组10只。B组、C组及D组以0.1%卵白蛋白(OVA)0.1ml腹腔注射致敏,以1%的OVA50μl滴鼻激发建立哮喘模型;A组用等量生理盐水分别代替0.1%的OVA0.1ml和1%OVA50μl;C组和D组分别经鼻滴入空质粒pcDNA3.1()和Lipofentamine2000混合液50μl或重组IFNγ质粒和Lipofentamine2000混合液50μl。观察各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中的细胞成分、白细胞介素4(IL4)、IL5、IFNγ和肺组织病理学变化。结果B组小鼠BALF中炎性细胞总数、嗜酸粒细胞(EOS)、中性粒细胞和淋巴细胞计数分别为(0.102±0.020)×109/L、(0.0193±0.0047)×109/L、(0.0107±0.0039)×109/L、(0.0255±0.0042)×109/L,A组分别为(0.082±0.012)×109/L、(0.0041±0.0009)×109/L、(0.0051±0.0016)×109/L、(0.0201±0.0019)×109/L,A、B两组比较差异有统计学意义(P<0.05);D组小鼠BALF中炎性细胞总数、EOS、中性粒细胞和淋巴细胞计数分别为(0.086±0.016)×109/L、(0.0116±0.0031)×109/L、(0.0062±0.0018)×109/L、(0.0182±0.0041)×109/L,与B组比较差异有统计学意义(P<0.05)。B组小鼠BALF中IL4、IL5、IFNγ水平分别为[(39.2±5.1)pg/ml、(83.7±4.7)pg/ml、(15.7±2.7)pg/ml],A组小鼠分别为[(13.3±1.9)pg/ml、(12.1±2.3)pg/ml、(31.8±7.9)pg/ml],A、B两组比较差异有统计学意义(P<0.05);D组小鼠BALF中IL4、IL5、IFNγ水平分别为[(16.4±3.2)pg/ml、(26.3±3.4)pg/ml、(65.4±10.4)pg/ml],与B组比较差异有统计学意义(P<0.05)。A组小鼠气道无明显炎症变化,B和C组小鼠小支气管、血管黏膜下和周围肺组织有明显的炎症细胞浸润,血管壁明显水肿;D组小鼠气道炎症明显减轻。结论气道内转染干扰素质粒能有效改善哮喘小鼠细胞因子IL4、IL5和IFNγ异常,同时对EOS、中性粒细胞数和淋巴细胞肺内募集、肺组织炎症改变有一定抑制作用。     

布地奈德对咳嗽变异性哮喘诱导痰炎症介质的影响及其临床意义探讨

目的 观察布地奈德粉吸入剂使用后咳嗽变异性哮喘患者诱导痰中炎症介质的动态变化,并探讨其临床意义。方法 选取2011年2月~2013年6月山东省枣庄市王开传染病医院初次确诊进行治疗的CVA患者84例,另取我院体检中心健康志愿者40例作为正常对照。对照组和CVA组治疗前、治疗后2个月、治疗后4个月、治疗后8个月、随访4个月后行诱导痰操作,ELISA法检测诱导痰IL-6表达,细胞沉渣涂片检测嗜酸性粒细胞(EOS)比例。结果CVA患者诱导痰IL-6表达水平为76.5±12.4 μg/ml,EOS比例为14.7±4.2%,均显著高于健康对照的17.4±3.2 μg/ml和2.3±0.6%(P<0.01)。CVA患者治疗前、治疗后2个月、治疗后4个月、治疗后8个月、随访4个月后,各组之间IL-6表达水平和EOS比例存在显著性差异(P<0.05)。布地奈德治疗临床治疗有效率为95.2%,复发率为9.5%。CVA复发患者诱导痰IL-6表达水平为62.9±11.3 μg/ml,EOS比例为10.4±2.9%,均显著高于非复发患者的28.3±4.4μg/ml和5.8±1.4%(P<0.01)。结论 布地奈德气雾剂可以抑制CVA诱导痰炎症介质的表达,长期用药更有利于布地奈德抗炎作用的发挥。     

老年晚发哮喘缓解期患者气道反应性和诱导痰炎性标志物的测定

目的检测缓解期老年晚发哮喘(LOA)患者气道反应性和诱导痰嗜酸细胞、嗜酸细胞阳离子蛋白(ECP)和白介素-5(IL-5)水平,探讨其临床意义。方法选择58例缓解期 LOA 患者,测定其气道反应性,并分别采用瑞氏染色、荧光免疫法和酶联免疫吸附试验检测诱导痰中嗜酸细胞数量、ECP 和 IL-5水平;选择25例急性发作期 LOA 患者和15例健康老年人作为对照。结果 58例缓解期 LOA 患者中,49例(84.5%)支气管激发试验阳性,9例(15.5%)阴性。缓解期 LOA 组诱导痰中嗜酸细胞数量[(9.3±3.1)%]、ECP[(144.2±68.1)μg/L]和 IL-5水平[(20.3±6.3)μg/L]显著低于急性发作期 LOA 组[(21.1±9.8)%、(399.3±172.5)μg/L 和(50.6±10.7)μg/L,P<0.01],但显著高于健康老年组[(1.3±0.7)%、(48.7±21.9)μg/L 和(10.3±3.2)μg/L,P<0.01]。气道反应性增高组患者诱导痰中嗜酸细胞数量[(12.7±3.6)%]、ECP[(171.3±69.8)μg/L]和 IL-5水平[(23.6±8.5)μg/L]显著高于气道反应性正常组[(3.1±1.3)%、(52.7±21.1)μg/L 和(13.7±4.1)μg/L,P<0.01]。结论缓解期 LOA 患者多数存在气道高反应性且气道炎症持续存在,测定患者气道反应性和诱导痰中炎性标志物有助于指导缓解期治疗。     

重度支气管哮喘患者气道炎症及其与白细胞介素17的关系

目的探讨重度支气管哮喘(简称哮喘)患者气道炎症特征及其可能机制,并进一步观察吸入糖皮质激素治疗对气道炎性细胞分类计数、炎症介质、白细胞介素17(IL-17)和IL-8等细胞因子的影响。方法分别选择轻度(轻度组)、中度(中度组)和重度(重度组)持续哮喘患者16例、14例和18例,正常对照组15名,采用基线评估包括哮喘症状控制评分、肺功能测定和用诱导痰检查方法对痰炎性细胞进行分类计数;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测痰IL-17和IL-8浓度;采用酶联免疫荧光法测定嗜酸粒细胞阳离子蛋白(ECP)浓度;采用比色法测定中性粒细胞髓过氧化物酶(MPO)浓度,并用痰液蛋白含量进行校正。然后规范吸入糖皮质激素治疗4周,随访轻、中度和重度哮喘患者各15例复查上述指标。结果痰嗜酸粒细胞(EOS)比值和ECP浓度在每克蛋白中轻度组分别为0.0670±0.0740、(155±91)×10-6g;中度组分别为0.0830±0.0440、(180±83)×10-6g;重度组分别为0.1240±0.1430、(191±87)×10-6g,与正常对照组[0.0000±0.0010、(44±25)×10-6g]比较差异有统计学意义(P<0.01);但各哮喘组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。中性粒细胞比值在重度组为0.589±0.203,与轻度组(0.455±0.154)、中度组(0.449±0.194)、正常对照组(0.313±0.134)比较差异有统计学意义(P<0.01)。MPO水平在每克蛋白中,重度组为(31±10)U,轻度组为(12±4)U、中度组为(22±7)U,与正常对照组[(10±4)U]比较差异有统计学意义(P<0.01)。IL-17水平在每克蛋白中重度组为(264±137)×10-9g,中度组为(172±65)×10-9g,轻度组为(126±52)×10-9g,与正常对照组[(56±20)×10-9g]比较差异有统计学意义(P<0.01);IL-8浓度在每克蛋白中,重度组为(531±321)×10-9g,轻度组为(410±181)×10-9g,中度组为(438±148)×10-9g,正常对照组为(83±36)×10-9g,重度组与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);而轻度组与中度组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。IL-17水平与IL-8、中性粒细胞与MPO呈显著相关(r分别为0.525、0.349、0.602,P均<0.01)。经糖皮质激素治疗后,对轻、中、重度30例哮喘患者进行合并分析表明,EOS、ECP、MPO、IL-17和IL-8均显著降低;但两组患者的中性粒细胞比值在治疗后比较差异均无统计学意义(P>0.05);但重度组(0.642±0.157)与轻、中度哮喘组(0.394±0.147)比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论中性粒细胞增多是重度哮喘的气道炎症特征之一,IL-17/IL-8可能参与中性粒细胞向气道内的募集。     

肺泡巨噬细胞在慢性阻塞性肺疾病气道炎症中的作用

目的探讨肺泡巨噬细胞(AM)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道炎症中的作用.方法收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和支气管黏膜,用ELISA法测定BALF和AM培养上清液中巨噬细胞炎症蛋白(MIP)-lα、明胶酶B(MMP-9)及白细胞介素(IL)-8的浓度,用放射免疫法测内皮素(ET)浓度,用免疫组化法测BALF中淋巴细胞功能相关抗原1阳性(LFA-1+)AM数、黏膜内CD+/68细胞数和气道黏膜厚度.结果COPD组AM培养上清液中MIP-1α、MMP-9、ET、IL-8的浓度分别为(1446.9±126.7)μg/L、(16.98±5.15)μg/L、(43.98±5.54)ng/L、(168.10±21.22)μg/L,正常对照组为(1123.5.5±90.6)μg/L、(5.24±0.93)μg/L、(25.99±6.05)ng/L、(124.68±9.96)μg/L;COPD组支气管黏膜内CD+/68细胞数为(1.71±0.48)细胞/Hp,正常对照组为(0.59±0.18)细胞;COPD组支气管黏膜厚度为(1.96±0.96)×100-μm,正常对照组为(0.83±0.43)×10-1μg;两组比较差异均有显著性.BALF中AM数、AM培养上清液中MMP-9及ET的浓度、黏膜内CD+/68细胞数均与1秒钟用力呼气容积(FEV1)占预计值的百分比呈负相关(r=-0.511,P《0.01;r=-0.678,P《0.01;r=-0.871,P《0.01;r=-0.588,P《0.01);BALF中MIP-1α浓度、IFA-1+AM数与AM数呈正相(r=0.572,P《0.01;r=0.625,P《0.01).结论AM在COPD气道炎症和气道重建的发展过程中可能具有重要作用.     

支气管哮喘大鼠转录因子T-bet/GATA-3失衡表达与气道炎症的关系

目的探讨支气管哮喘(简称哮喘)转录因子T-bet/GATA-3表达量比值的变化及其与气道炎症的关系。方法24只雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、哮喘组,每组12只。用动物肺功能仪测定大鼠气道反应性;用苏木精-伊红染色观察气道病理改变;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素4(IL-4)、IL-5、γ干扰素(IFN-γ)含量;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定法检测肺组织中IL-4、IL-5、IFNγ-、T-bet和GATA-3 mRNA的表达水平;用免疫印迹(W estern b lot)法检测肺组织T-bet和GATA-3蛋白的表达水平。结果用同等剂量氯化乙酰胆碱(20、40、80、160μg/m l)激发时平均呼气阻力哮喘组分别为(6.26±0.85)、(11.55±3.09)、(28.74±5.94)、(3 710.83±197.49)cm H2O.m l-1.s-1,对照组分别为(1.51±0.18)、(2.15±0.36)、(6.08±1.06)、(37.17±6.12)cm H2O.m l-1.s-1,两组不同激素剂量比较差异有统计学意义(P均<0.01);肺组织中嗜酸粒细胞(EOS)、淋巴细胞数,管壁面积/支气管管腔内周长(WA/P i)和支气管平滑肌面积/支气管管腔内周长(ASM/P i)哮喘组分别为(26.0±1.6)个/mm2、(45.2±3.2)个/mm2、12.0±1.4、6.7±0.6,对照组分别为(2.9±1.2)个/mm2、(8.8±1.8)个/mm2、6.4±0.8、2.7±0.5,两组比较差异有统计学意义(P均<0.01);BALF中IL-4、IL-5和IFN-γ含量哮喘组为(23.4±0.7)pg/m l、(24.8±0.5)pg/m l和(21.7±1.1)pg/m l,对照组为(9.3±0.3)pg/m l、(12.5±0.3)pg/m l、(65.8±2.1)pg/m l,两组比较差异有统计学意义(P均<0.01);肺组织中IL-4、IL-5和IFN-γmRNA表达水平哮喘组分别为2.260±0.210、0.510±0.100、0.100±0.020,对照组分别为0.060±0.020、0.160±0.020、0.850±0.260,两组比较差异有统计学意义(P均<0.01)。肺组织中T-bet/GATA-3 mRNA表达量比值对照组为0.73±0.32,哮喘组为0.06±0.09,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);肺组织中T-bet/GATA-3蛋白表达量比值哮喘组为0.09±0.04,对照组为0.75±0.25,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。两组大鼠T-bet/GATA-3蛋白表达量比值与20、40、80μg/m l氯化乙酰胆碱激发时的呼气阻力呈负相关(r分别=-0.959、-0.919、-0.943,P均<0.01);与EOS数、淋巴细胞数呈负相关(r=-0.832、-0.831,P均<0.01);与WA/P i、ASM/P i呈负相关(r=-0.837、-0.863,P均<0.01);与BALF中IL-4和IL-5含量呈负相关(r=-0.921、-0.920,P均<0.01);与IFN-γ含量呈正相关(r=0.934,P<0.01);与肺组织中IL-4、IL-5mRNA表达水平呈负相关(r=-0.964、-0.931,P均<0.01);与IFN-γmRNA表达呈正相关(r=0.983,P<0.01)。结论转录因子T-bet/GATA-3失衡表达与气道炎症密切相关,能客观反应哮喘免疫失衡,很可能是哮喘气道炎症形成的重要原因之一。     

支气管哮喘大鼠气道重塑中肺泡巨噬细胞的作用

目的研究支气管哮喘(简称哮喘)大鼠气道重塑过程中肺泡巨噬细胞(AM)的变化及其作用。方法48只清洁级雄性幼年SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组(A组)、哮喘3d组(B组)、哮喘14d组(C组)和哮喘30d组(D组),每组12只。应用鸡卵白蛋白(OVA)建立哮喘大鼠模型,纯化支气管肺泡灌洗液(BALF)中的AM,测定AM中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、前列腺素E2(PGE2)的含量和基质金属蛋白酶9基因(MMP-9mRNA)及其组织抑制物1基因(TIMP-1mRNA)的表达,并测量大鼠支气管壁总面积和平滑肌面积,计算单位基底膜周径(Pbm)的支气管壁厚度(WAt)和平滑肌厚度(WAm)。结果D组WAt和WAm[(85±9)μm2/μm、(28.6±4.9)μm2/μm]与A组[(67±10)μm2/μm、(16.8±2.4)μm2/μm]比较差异有统计学意义(t值分别为2.938、3.227,P均<0.01);D组AM中TNF-α和PGE2含量[(0.68±0.25)μg/L、(0.122±0.030)μg/L]与A组[(0.37±0.09)μg/L、(0.079±0.018)μg/L]比较差异有统计学意义(t值分别为2.683、3.016,P均<0.01),与B组[(0.74±0.29)μg/L、(0.120±0.028)μg/L]、C组[(0.71±0.23)μg/L、(0.117±0.028)μg/L]比较差异无统计学意义(t值分别为1.624、0.472、0.935、0.533,P均>0.05);D组AM中MMP-9mRNA及TIMP-1mRNA含量吸光度(A)值分别为0.346±0.033、0.361±0.040,与C组(0.279±0.015、0.259±0.015)比较差异有统计学意义(t值分别为2.574、2.716,P均<0.01),D组(0.183±0.025)与B组(0.136±0.014)比较差异有统计学意义(t值分别为2.913、3.017,P均<0.01),D组(0.104±0.007)与A组(0.109±0.008)比较差异有统计学意义(t值分别为3.632、3.487,P均<0.01);各组AM中MMP-9mRNA含量与WAt、WAm呈正相关(r值分别为0.693、0.738,P均<0.01),AM中TIMP-1mRNA含量与WAt、WAm呈正相关(r值分别为0.823、0.876,P均<0.01)。结论哮喘大鼠AM及其分泌的一些细胞因子与气道重塑关系密切。     

动态监测哮喘患者诱导痰嗜酸性粒细胞的临床意义

目的　探讨利用诱导痰中嗜酸性粒细胞 (EOS)评价哮喘患者气道炎症变化的方法 ,为如何相对准确监测哮喘患者气道炎症的改变提供临床实验资料。方法　分别对 2 8例哮喘患者(哮喘组 ,其中轻度组 15例、中度组 13例 )、16例回访者 (哮喘回访组 )和 14例健康自愿者 (对照组 )进行痰的诱导 ,所有检查者通过超声雾化吸入浓度为 4%～ 5 %的高渗盐水 3 0min ,选取诱导出的痰栓 ,用 0 .1%的二硫苏糖醇处理 ,单盲法计数EOS。结果　哮喘组诱导痰EOS数占炎性细胞百分比高于对照组 ,哮喘轻度组与中度组EOS数占炎性细胞百分比比较差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,哮喘回访组缓解前后EOS比较差异有非常显著性 (P <0 .0 1)。结论　单纯一次EOS计数值不能说明患者病情的轻重 ,但对同一患者动态监测其发病过程中诱导痰EOS的变化可以在一定程度上反映其病情改变     

支气管刷检嗜酸粒细胞计数在嗜酸粒细胞性支气管炎诊断中的价值

目的探讨支气管刷检嗜酸粒细胞（EOS）计数在嗜酸粒细胞性支气管炎（EB）诊断中的价值。方法选择32例EB患者（EB组）,18例咳嗽变异性哮喘患者（CVA组）,26例其它病因咳嗽患者（其它病因组）和13名健康人（健康对照组）,分别进行诱导痰、支气管刷检洗涤液和支气管肺泡灌洗液（BALF）中EOS的检测。结果EB及CVA组各标本中EOS的比例较其它病因及健康对照组明显增高（P〈0．001）;在EB及CVA组,支气管刷检洗涤液中EOS的比例显著高于诱导痰和BALF（P均〈0．叭）;支气管刷检EOS计数诊断EB的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为100％、71．9％、66．7％和100％。结论经纤支镜支气管刷检EOS计数在EB的诊断中具有较重要的价值。     

咳嗽变异性哮喘患者诱导痰中神经生长因子和白细胞介素-4水平及气道炎症特征初探

目的 通过观察咳嗽变异性哮喘(CVA)患者诱导中神经生长因子(NGF)和IL-4水平,初步探讨咳嗽变异性哮喘的气道炎症特征.方法 选咳嗽变异性哮喘患者36例及健康体检者23例,对受试者进行痰诱导,查诱导痰中细胞分类计数,酶联免疫吸附法检测诱导痰中NGF和IL-4水平.结果 (1)咳嗽变异性哮喘患者诱导痰中嗜酸性粒细胞百分数为8%,显著高于健康体检者(1%),差异有统计学意义(P＜0.001).其中13例患者应用糖皮质激素联合长效β2受体激动剂(布地奈德/福莫特罗,每吸160μg/4.5μg,2吸/d)治疗1个月后,咳嗽症状明显好转,诱导痰中嗜酸性粒细胞百分数为2%,显著低于治疗前(5%),差异有统计学意义(P＜0.05);但仍高于健康体检者.(2)咳嗽变异性哮喘患者诱导痰中NGF和IL-4浓度高于健康体检者,差异有统计学意义(P＜0.05).其中13例患者经上述治疗后诱导痰中NGF和IL-4浓度下降,差异有统计学意义(P＜0.05);但仍高于健康体检者.(3)相关性分析:诱导痰中嗜酸性粒细胞计数与诱导痰上清中NGF、IL-4浓度呈正相关(r分别为0.397、0.332,P＜0.01).诱导痰上清中NGF与IL-4浓度呈正相关(r=0.728,P＜0.01).结论 神经-免疫机制与咳嗽变异性哮喘嗜酸性粒细胞性炎症密切相关,NGF和IL-4参与并介导了这一炎症.糖皮质激素联合长效β2受体激动剂吸入治疗,能显著降低诱导痰中NGF、IL-4和嗜酸性粒细胞水平,减轻嗜酸性粒细胞性炎症.

Abstract：

Objective To observe sputum cytology counts, the levels of nerve growth factor (NGF) and IL-4 in cough variant asthma (CVA) patients and the change of their levels after using glucocorticoids combined with β2-adrenergic agonists one month, and to investigate CVA's characteristics of airway inflammation. Methods Totally 36 patients with untreated CVA were selected, as well as 23 healthy controls. Coughed up sputum cells were obtained and HE strained for differential cell counting in each enrolled patient. In induced sputum's supernatant, the levels of NGF and IL-4 were determined by ELISA.Results Before treatment, CVA patients had a median eosinophils (EOS) percentage of 8%, which was significantly higher than that after treatment (2%, P＜0.05) and in healthy control group (1%, P＜0. 001). The levels of NGF and IL-4 in induced sputum of CVA group were (9. 50 ± 1.69) ng/L and (257.37 ± 53.57) ng/L. After treatment, they were (8.78±1.02) ng/L and (228.60 ±52.93)ng/L in CVA group, (6.98±0.69) ng/L and (166.44±24.75) ng/L in healthy control group. The levels of NGF and IL-4 before and after treatment in the CVA group , as compared with the healthy control group, had statistically significant differences (all P＜0.001). In CVA group before and after treatment, the level of NGF and IL-4 paired difference was significant (P＜0.001). The percentage of induced sputum EOS correlated with sputum supernatant concentrations of NGF and IL-4 (P ＜ 0.01). In induced sputum supernatant, the concentrations of NGF and IL-4 were significant correlated (P＜0.01). Conclusions Glucocorticoid joint long-term β2 agonist inhaled treatment significantly reduced NGF, IL-4 and EOS levels and reduced eosinophilic inflammation, which are closely related with the nerve-immune mechanism, NGF as well as IL-4 participated the inflammation. Induced sputum examination is non-invasive, economical,simple, easily accepted by patients, and repeatable, widely used in clinical.     

嗜酸细胞趋化因子在哮喘、慢性支气管炎患者诱导痰中的表达及其与气道炎症的关系

目的　探讨嗜酸细胞趋化因子 (eotaxin)在嗜酸细胞性气道炎症和气流阻塞发生中的作用。方法　收集单纯型慢性支气管炎 (A组 )、慢性喘息性支气管炎 (B组 )、支气管哮喘 (C组 )急性发作期患者各 11例和健康对照者 (D组 ) 7名。用夹心法酶联免疫吸附测定 (ELISA)诱导痰上清液中eotaxin浓度。结果　B组 [(2 3 4± 5 8) % ]、C组 [(2 0 7± 3 1) % ]诱导痰嗜酸细胞占白细胞百分比(EOS/Leu % )分别与A组 [(11 6± 2 6 ) % ]、D组 [(1 2± 0 3) % ]比较 ,差异有显著性 (P均 <0 0 0 1) ;B组eotaxin浓度 [(0 2 90± 0 170 )g/L]与A组 [(0 12 0± 0 0 2 0 )g/L]比较 ,差异有显著性 (P =0 0 0 7) ;B组与D组 [(0 0 30± 0 0 5 0 )g/L]比较 ,差异也有显著性 (P <0 0 0 1) ,C组 [(0 2 40± 0 140 )g/L]与A组比较 ,差异有显著性 (P =0 0 18) ;C组与D组比较差异也有显著性 (P =0 0 0 1) ,但B组EOS/Leu %和eotaxin浓度与C组比较差异均无显著性 (P =0 196、0 490 )。B、C组EOS/Leu %与一秒钟用力呼气容积占预计值百分比 (FEV1占预计值 % )呈负相关 (r分别 =- 0 92 1、- 0 6 6 3,P <0 0 0 1或 0 0 2 6 ) ;C组eotaxin浓度与FEV1占预计值 %呈负相关 (r =- 0 6 43,P =0 0 33)。B、C组eotaxin浓度与E     

血管内皮生长因子受体抑制剂对小鼠支气管哮喘模型气道炎症和气道重塑的影响

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)受体抑制剂对变应性气道炎症和气道重塑的影响,阐明VEGF与支气管哮喘(简称哮喘)以及气道重塑的关系。方法BALB/c小鼠按随机数字表法分为正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、VEGF受体抑制剂治疗组(C组),每组各10只。用酶联免疫吸附测定(ELISA)法对各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)和血清中VEGF进行定量分析;用免疫组化法检测VEGF在小鼠肺组织内的表达水平。采用医学图像分析软件测定支气管管壁厚度(WAt/P i)、支气管平滑肌厚度(WAm/P i)、支气管平滑肌细胞计数(N/P i)及肺组织切片中的血管计数、血管壁平滑肌厚度、血管壁平滑肌细胞计数。结果BALF中细胞总数和嗜酸粒细胞比值B组分别为(142±63)×107/L、98.0±46.9,A组分别为(30±14)×107/L、0.7±1.1,C组分别为(41±17)×107/L、4.9±3.5,A组和C组BALF中细胞总数和嗜酸粒细胞比值分别与B组比较差异有统计学意义(P均<0.01)。B组BALF中上清液和血清中VEGF水平分别为(55±26)pg/m l、(72±26)pg/m l,A组分别为(37±9)pg/m l、(49±18)pg/m l,C组分别为(34±3)pg/m l、(43±19)pg/m l,A组与B组、C组与B组间比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。免疫组化结果显示,B组大部分支气管平滑肌、黏膜上皮细胞、肺泡上皮细胞和血管周围VEGF均呈阳性表达,而A组和C组几乎没有VEGF的表达。图像分析显示,B组WAt/P i、WAm/P i、N/P i分别为(17±5)μm2/μm、(6.3±2.2)μm2/μm、(0.050±0.020)个/μm,A组分别为(8±3)μm2/μm、(3.2±0.8)μm2/μm、(0.027±0.017)个/μm,A组与B组比较差异有统计学意义(P分别<0.01、0.05)。B组和A组血管计数分别为(19±3)个、(10±5)个,A组与B组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。经抑制剂治疗后C组WAm/P i、血管计数分别为(4.5±1.3)μm2/μm、(11±3)个,C组与B组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论VEGF在小鼠哮喘模型气道及肺内过度表达,并参与了哮喘的发病和气道重塑过程。VEGF受体抑制剂可明显改善哮喘小鼠的变应性气道炎症和气道重塑的病理生理过程。     

咳嗽变异型哮喘的支气管炎症及变态反应特征

目的阐明咳嗽变异型哮喘（ＣＶＡ）的支气管炎症和变态反应特征。方法采用过敏原皮肤点刺试验、支气管肺泡灌洗术（ＢＡＬ）、支气管粘膜嗜酸性粒细胞计数及屋尘螨和兔抗人ＩｇＥ诱导灌洗液中肥大细胞释放组织胺试验，观察１７例ＣＶＡ患者的气道炎症及变态反应特征。结果ＣＶＡ组ＢＡＬＦ中嗜酸性粒细胞、肥大细胞和过敏指数（ＡＩ）均显著高于对照组（Ｐ＜０．０５）；屋尘螨诱导支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中肥大细胞释放组织胺试验，呈现一种浓度－反应正相关。结论ＣＶＡ存在有嗜酸性粒细胞和肥大细胞参与的气道慢性炎症，并有Ｉ型变态反应参与。     

布地奈德干预对卵白蛋白致敏小鼠抗原激发后气道炎症及气道重塑的影响

目的　观察早期及延迟应用布地奈德对支气管哮喘 (简称哮喘 )小鼠气道炎症和气道重塑的防治作用。方法　40只小鼠分为 5组,每组 8只。鸡卵白蛋白(OVA)致敏 /激发组 (A组 ),生理盐水对照组(B组),布地奈德 (BUD)早期治疗组 (C组 ),BUD延迟治疗组 (D组 ),OVA延迟对照组(E组)。小鼠于第 0、14天以OVA致敏,从第 1次致敏后第 24天开始雾化吸入 2.5%的OVA激发并持续 18d,建立气道重塑模型;分别在早期(抗原激发前 1d始)和延迟(第 1次抗原激发后第 18天始)雾化吸入BUD(0.5mg/ml),观察抗原激发及BUD应用后支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸粒细胞(EOS)数、上清液白细胞介素 5(IL-5)和γ干扰素 (IFN-γ)水平的变化,同时对肺组织切片行苏木精 伊红(HE)、过碘酸雪夫(PAS)、Masson三色染色,测定支气管壁周围EOS计数、定量杯状细胞百分比及黏液分泌评分并测定气道平滑肌增生高度及胶原面积。结果　经过反复抗原激发,A组BALF中EOS数为(57.460±11 060)×104 /ml,B组为[ (0.050±0.020)×104 /ml],两组比较差异有统计学意义(P<0.01);A组BALF中IL- 5水平及IFN -γ水平分别为(52.9±2.8)pg/ml、(39.5±3.2)pg/ml,B组分别为(16.8±1.5)pg/ml、(63.8±3.3)pg/ml,两组比较差异有统计学意义 (P<0.01 );A、B组支气管壁周围EOS数分别     

嗜酸粒细胞性支气管炎的气道炎症和临床特点

目的　探讨嗜酸粒细胞性支气管炎 (eosinophilicbronchitis,EB)的诊断、治疗及其气道炎症特点。方法　采用Irwin慢性咳嗽解剖学诊断程序 ,对 86例慢性咳嗽患者进行病因诊断 ;通过诱导痰 ,分析痰液中细胞分类 ,分别采用荧光酶免疫法、酶联免疫吸附法测定诱导痰上清液中嗜酸粒细胞阳离子蛋白 (ECP)、白细胞介素 8(IL 8)的浓度 ,并以 9例正常人和 9例典型哮喘患者作对照组 ;吸入布地奈德干粉剂 2 0 0～ 4 0 0 μg ,每天 2次 ,治疗 4周 ,部分患者同时口服泼尼松 10～ 15mg/d或甲泼尼龙 8～ 12mg/d ,1周。结果　本组有 13例符合EB诊断 ,占慢性咳嗽的 15 % ,多表现为慢性干咳 ,肺功能正常 ,组胺激发试验阴性。EB诱导痰嗜酸粒细胞 (Eos)为 0 186 2± 0 16 32 ,ECP浓度为(2 5 3± 2 0 7)mg/L ,均较正常人升高 (P <0 0 1) ;糖皮质激素治疗 1周后 ,13例患者的咳嗽均消失。结论　EB是引起慢性咳嗽的一个重要原因 ,气道具有以Eos为主的炎症 ,糖皮质激素治疗效果良好。     

咳嗽变异性哮喘患者疗效与布地奈德福莫特罗疗程的相关性研究

背景 咳嗽变异性哮喘(CVA)是引起成年人慢性咳嗽的主要原因,布地奈德福莫特罗作为治疗此病的重要药物,其最佳疗程目前尚无统一定论,如何在保证治疗安全性的同时尽可能使患者获益是当前临床研究热点和难点.目的 探讨CVA患者疗效与布地奈德福莫特罗疗程的相关性.方法 选取廊坊市人民医院门诊2018年8月至2020年3月收治的C...