Y-27632预处理对心肌缺血再灌注损伤过程中d凋亡的影响研究

目的：探讨Rho激酶抑制剂Y-27623对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中细胞凋亡的影响,以及对丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase,MAPK）和凋亡相关蛋白表达水平的变化和意义。方法：成年雄性SD大鼠60只, 随机分为4组（n=15）:正常对照组(Sham组) 、缺血再灌注组(ischemia-reperfusion即I/R组) 、Dil组( diltiazem即地尔硫卓组)、Y-27632组。Dil组每日给予地尔硫卓(10mg/kg)灌胃, Y-27632组每日给予Y-27632（5mg/kg）,其余两组给予等体积清水。给药五天后Sham组只穿线,不结扎冠状动脉左前降支,I/R组、Dil组和Y-27632组建立MIRI模型。TUNEL法检测各组心肌凋亡,计算心肌细胞凋亡指数(AI),western blotting 法检测心肌组织中MAPK信号传导途径相关蛋白（p-JNK/ERK/P38）和凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9）的表达。结果：相对于Sham组,I/R组AI明显增加（P<0.01）,MAPK信号传导途径和心肌促凋亡相关蛋白（Bax、Caspase-3和Caspase-9）表达显著增加（均为P<0.05）,心肌抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著减少（P<0.05）;相对于I/R组,Y-27632治疗组AI明显下降（P<0.01）,与Dil治疗组没有显著差异(P>0.05),Y-27632治疗组MAPK信号传导途径相关蛋白和Bax、Caspase-3和Caspase-9表达均显著降低（P<0.05）,Bcl-2表达显著增加（P<0.05）,与Dil治疗组没有显著差异(P>0.05)。结论：Y-27632通过抑制JNK/ERK/P38的磷酸化,抑制Bax、Caspase-3和Caspase-9的表达,加强Bcl-2的表达,来减少心肌细胞的凋亡,从而减轻心肌缺血再灌注损伤。     

Rho激酶抑制剂对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌肥厚的影响

目的 研究Rho激酶抑制剂对异丙肾上腺素(isoproterenol,Iso)诱导大鼠心肌肥厚的影响及其机制.方法 40只雄性Wistar大鼠随机分为5组:空白对照组、Iso模型组、法舒地尔(fasudil,Fas)低剂量组、高剂量组及卡托普利(captopril,Cap)组,每组8只.除空白对照组外,各组皮下注射Iso建立大鼠心肌肥厚模型.给药结束后分别测定各组大鼠体重(BW)、心脏重量(HW),计算心脏重量指数(HW/BW);测定左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、左心室压力上升及下降最大速率(±dp/dtmax)等指标;取心肌组织作病理学检测;RT-PCR测定心肌组织RhoA、Rho激酶mRNA表达.结果 Iso模型组大鼠HW/BW增大;LVEDP增加,而LVSP、±dp/dtmax下降;心肌细胞直径增大、胶原纤维增生;左心室组织RhoA、Rho激酶mRNA表达上调.使用Fas和Cap干预,上述指标均出现不同程度的改善.结论 肾上腺素β受体兴奋所诱导的心肌肥厚伴有Rho激酶信号通路的激活,Rho激酶抑制剂可改善Iso所致心肌肥厚动物模型的心功能和病理学变化.     

Rho激酶信号通路与大鼠心肌细胞凋亡的关系

目的探讨Rho激酶信号通路在心肌梗死模型大鼠心肌细胞凋亡组织中的表达变化及对心肌细胞凋亡的影响作用。方法选取健康雄性Wistar大鼠,通过结扎左前降支建立大鼠心肌梗死模型,将24 h后仍然存活的大鼠选取30只,随机分为模型组和治疗组(法舒地尔5 mg/kg,2次/d)各15只,并另外选取健康雄性大鼠15只作为假手术组,假手术组和模型组给予等量生理盐水处理,比较4 w后3组心肌梗死面积及Rho激酶mRNA、蛋白等指标的表达差异。结果 3组左心室收缩压(LVSP)、左室舒张压(LVEDP)、左室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、左室内压最大下降速率(-dp/dtmax)差异均有统计学意义(P0.05),模型组LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax显著低于治疗组和假手术组(P0.05),LVEDP显著高于治疗组和假手术组(P0.05),治疗组LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax显著低于假手术组(P0.05),LVEDP显著高于假手术组(P0.05)。治疗组心肌缺血面积低于模型组但差异不显著(P0.05);治疗组心梗面积显著低于模型组(P0.05)。3组Rho激酶mRNA、Bax蛋白、Bcl-2蛋白表达差异有统计学意义(P0.05);组间差异均有统计学意义(P0.05)。结论心肌梗死大鼠心肌组织中的Rho激酶mRNA、Bax蛋白达显著增加,同时Bcl-2蛋白表达降低,法舒地尔能够降低Rho激酶mRNA表达,减少心肌细胞凋亡,减轻心肌梗死面积。     

高糖通过Rho/ROCK信号通路诱导人肾小球系膜细胞的炎症反应及纤维化

目的 探讨Rho/ROCK信号通路在高糖诱导的人肾小球系膜细胞(HMCs)炎症反应及纤维化中的作用.方法 将传代培养的HMCs同步化后分组:(1)正常糖浓度对照组(NG,5.5 mmol/L葡萄糖);(2)高糖组(HG,30 mmol/L葡萄糖);(3)甘露醇渗透压对照组(Man,5.5 mmol/L葡萄糖+24.5 mmol/L甘露醇);(4)NG+Y-27632(10 μmmol/L)组;(5)HG+Y-27632(10 μmmol/L)组,培养12、24、36、48、72 h后收集上清及细胞,用Western印迹检测RhoA蛋白的活化,用实时PCR检测细胞中RhoA、ROCK-Ⅰ、结缔组织生长因子(CTGF)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA浓度的变化,用ELISA方法检测上清中纤维连接蛋白(FN)、CTGF、TNF-α的蛋白含量.结果 (1)高糖刺激HMCs的RhoA活化,于30 min即可出现活性升高,1 h达到高峰,之后活化的RhoA表达逐渐下降(P=0.02).(2)高糖培养下的HMCsRhoA、ROCK-Ⅰ、CTGF、TNF-α mRNA的表达较NG组明显升高(P＜0.05),并有一定的时间依赖性,Man组与NG组相比差异无统计学意义(P＞0.05).(3)经Y-27632预处理后,在正常糖和高糖浓度培养24 h或48 h后,NG+Y-27632组和HG+Y-27632组与未处理组相比RhoA、ROCK-Ⅰ、CTGF、TNF-α mRNA的表达明显下降(P＜0.01).(4)高糖呈时间依赖方式增加HMCs的FN、CTGF、TNF-α分泌(P＜0.05).(5)经Y-27632预处理,继续培养12、24、36、48、72 h后NG组和HG组中FN、CTGF、TNF-α蛋白的分泌较处理前明显降低(P＜0.05).结论 高糖可通过Rho/ROCK信号通路介导HMCs的炎症反应和纤维化,抑制此通路可作为减缓糖尿病肾病发生发展的潜在靶点.

Abstract：

Objective To investigate the role of Rho/ROCK signaling pathway in the process of human mesangial cells (HMCs) inflammation and fibrosis induced by high glucose. Methods Synchronized HMCs were divided into following groups: ( 1 ) Normal glucose control group ( NG, 5.5 mmol/L glucose); ( 2 ) High glucose group ( HG, 30 mmol/L glucose); (3) Mannitol group( Man,5.5 mmol/L glucose+ 24.5 mmol/L mannitol); (4) NG +Y-27632 group( 10 μ mmol/L Y-27632 ); ( 5 ) HG Y-27632 group ( 10 μmmol/L Y-27632 ). The supernatant and cells were collected at 0,12,24,36,48, and 72 h. Western blot was used to detect the active RhoA and total RhoA,while RhoA, ROCK-Ⅰ, CTGF, and TNF-α mRNA expressions were determined with realtime PGR method in the cells, then ELISA method was used to check protein levels of FN, CTGF, and TNF-α in the supernatant. Results ( 1 ) RhoA activation was stimulated after treatment for with 30 mmol/L glucose, peaked at 1 h, and then decreased ( P = 0. 02). (2) RhoA, ROCK-Ⅰ, CTGF, and TNF-α mRNA expressions in HMC cultured under high glucose were higher than those in the normal group ( P ＜ 0.05 ), and there was certain time-dependence. Besides, there was no statistical significance between Man and NG groups( P＞0. 05 ). ( 3 ) After Y-27632 pretreatment and being cultured with normal glucose and high glucose for24 h or48 h, RhoA, ROCK-Ⅰ, CTGF, and TNF-α mRNA expressions were significantly decreased ( P＜0.01 ) as compared with groups without treatment. (4) High glucose increased FN, CTGF,and TNF-α protein secretion of HMC in a time-dependent manner( P＜0. 05 ). ( 5 ) After Y-27632 pretreatment and being cultured with normal and high glucose for 12,24,36,48,72 h, FN, CTGF, and TNF-α protein secretions were significantly reduced( P＜0.05 ). Conclusion Rho/ROCK signaling pathway may mediate inflammation and fibrosis induced by high glucose in HMCs, supporting a potential role for inhibitors of Rho/ROCK in the treatment of diabetic nephropathy.     

法舒地尔对压力超负荷诱导大鼠心肌肥厚的影响

目的 研究Rho激酶抑制剂法舒地尔(fasudil)对大鼠腹主动脉缩窄压力超负荷诱导的心肌肥厚的影响及机制.方法 50只雄性Wistar大鼠随机分为5组:假手术组、压力超负荷模型组、法舒地尔低剂量组、法舒地尔高剂量组及阳性对照(卡托普利)组,每组10只.除假手术组外,其他4组大鼠结扎肾上方腹主动脉制备压力超负荷模型,4周后建立心肌肥厚模型并开始给药,疗程4周.给药结束后,检测各组血流动力学指标,心脏重量指数(HW/BW)及左心室重量指数(LVW/BW);取心肌组织,经不同染色方法,观察心肌病理改变并检测心肌细胞直径(MD)和心肌胶原百分比(CVF);RT-PCR法检测心肌组织中RhoA、Rho激酶mRNA的表达.结果 与假手术组比较,模型组的LVEDP明显增加,LVSP明显下降;HW/BW、LVW/BW明显增加;MD增大(P＜0.01),CVF明显增加(P＜0.05);RhoA、Rho激酶mRNA的表达明显上调(均P＜0.01).与模型组比较,经法舒地尔及阳性药物治疗后,上述指标均有不同程度的改善(均P＜0.05,P＜0.01).结论 Rho激酶抑制剂法舒地尔可以改善心功能,抑制心肌胶原的合成及心肌纤维化,改善压力超负荷所引起的心肌肥厚.     

ROCK抑制剂Y-27632对TGF-β1介导的A549细胞上皮—间质转化的抑制作用

目的 探讨Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶（ROCK）抑制剂Y-27632对转化生长因子-β1（TGF-β1）介导的A549细胞上皮一间质转化（EMT）的抑制作用.方法 将常规培养并传代的非小细胞肺癌A549细胞分为3组,分别为对照组、TGF-β1组（用TGF-β1诱导A549细胞发生EMT）、Y-27632组（对发生EMT的A549细胞行Y-27632干预）.采用MTr法检测各组细胞增殖情况;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;免疫细胞化学染色法检测波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白（ot-SMA）表达;Western blot法检测E-钙黏蛋白、波形蛋白、α-SMA、ROCK、血清应答因子（SRF）、心肌相关转录因子（MATF-A）表达.结果 与对照组比较,TGF-β1组能诱导A549细胞发生EMT,伴有迁移能力提高、E-钙黏蛋白表达下调,以及波形蛋白、α-SMA、ROCK、SRF、MATF-A表达上调（P均＜0.05）;Y-27632组能显著抑制上述变化（P均＜0.05）.结论 Y-27632能通过阻断ROCK蛋白表达,抑制TGF-β1介导的A549细胞发生EMT,并抑制其迁移能力.     

Rho激酶在急性心肌梗死大鼠中的表达及其对心肌细胞凋亡的影响

目的: 分析心肌梗死(MI)后大鼠心肌组织中Rho激酶表达的变化,探讨Rho激酶信号通路与心肌细胞凋亡的关系及其选择性抑制剂法舒地尔对MI后心肌的保护作用。 方法: 选取雄性Wistar大鼠,结扎其左前降支建立急性心肌梗死(AMI)模型。将术后24 h存活的24只大鼠随机分为治疗组（n=12）和AMI组（n=12）,另随机选取10只大鼠作为假手术组,只在其左前降支下穿线不结扎。治疗组腹腔注射法舒地尔5 mg/kg,每日两次;AMI组和假手术组给予等量的生理盐水。4周后,用Evens蓝及四唑氮蓝试验(NBT)双染确定缺血及梗死面积;用RT-PCR法测定Rho激酶mRNA的表达;DNA片段分析观察心肌细胞凋亡的情况;用免疫组化染色法测定凋亡相关蛋白bcl-2及bax表达的变化。结果: 与AMI组相比,治疗组的梗死面积显著减小(P<0.05)。AMI大鼠缺血心肌组织中DNA片段分析显示,有DNA梯状条带(ladder)形成,假手术组大鼠却没有。AMI组大鼠中Rho激酶mRNA及凋亡相关蛋白bax的表达明显增加(P<0.01,P<0.01);bcl-2的表达明显减少(P<0.01)。以法舒地尔治疗4周后,Rho激酶mRNA及bax的表达均显著减少,bcl-2的表达显著增加(均P<0.01)。结论: MI大鼠心肌组织中Rho激酶的表达升高,心肌细胞凋亡增加。法舒地尔能够减少Rho激酶的表达,减少心肌细胞凋亡,发挥对心肌的保护作用。     

Rho激酶抑制剂Y-27632对人气道平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响

目的观察Rho激酶抑制剂Y-27632对人气道平滑肌细胞（ASMCs）增殖的影响，为哮喘防治提供新思路。方法组织块贴壁法培养人ASMCs，对数传代后随机分为4组，A组加入含10％FBS的DMEM培养基，B、C、D组分别加入浓度为0．4、2．0、10．0μmol／L的Y-27632＋含10％FBS的DMEM培养基，非放射性细胞增殖（MTS）／吩嗪甲酯硫酸盐（PMS）法检测各组细胞增殖情况（490nm处A值），流式细胞仪分析细胞周期。结果C、D组A值均显著低于A组（P〈0．05、0．01）；C、D组G0／G1期细胞比例显著高于A组，S、G2／M期细胞比例显著低于A组（P〈0．05、0．01）。结论Rho激酶抑制剂Y-27632可抑制人ASMCs增殖，阻滞细胞周期于G0／G1期；本研究为哮喘防治提供了新的选择。     

巨噬细胞移动抑制因子在动脉粥样硬化中的作用及法舒地尔对其干预机制

目的探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在动脉粥样硬化(AS)形成过程中的作用机制及法舒地尔对其的干预。方法选择健康雄性Wistar大鼠30只,随机分为三组:对照组,AS组,法舒地尔组,每组10只。检测血脂水平、并行苏木素-伊红(HE)染色及免疫组织化学检测。结果AS组总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)较对照组和法舒地尔组明显升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)明显降低(P<0.05)。对照组镜下无特殊改变;AS组血管壁可见典型AS改变,内膜增厚、血管内膜向管腔内突出,斑块内可见脂质沉积、泡沫细胞,内膜可见少量炎性细胞和增生的平滑肌细胞,内弹力板破坏,中膜平滑肌细胞明显增生,并呈灶状或片状钙化;法舒地尔组血管内膜和中膜无明显增生,仅内皮下见少量散在的脂质沉积、泡沫细胞形成和炎性细胞浸润。AS组内皮细胞和平滑肌细胞中MIF表达较对照组和法舒地尔组明显增多。对照组血管壁中可见少量Rho激酶表达;AS组内皮细胞和平滑肌细胞的细胞质中可见大量Rho激酶表达;法舒地尔组内皮细胞和平滑肌细胞的细胞质中Rho激酶表达与AS比较明显减少。结论 Rho激酶抑制剂法舒地尔抑制粥样硬化病灶Rho激酶及MIF的表达上调;MIF可能通过Rho/Rho激酶途径在AS中发挥作用。     

Ras同源基因家族蛋白A/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶抑制剂对冠状动脉微栓塞引起心肌损伤的预防作用

目的:探讨Ras同源基因家族蛋白A(Rho A)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)信号通路在冠状动脉微栓塞(CME)大鼠心肌凋亡的作用机制。方法:将60只SD大鼠随机分为3组:假手术组、模型组、抑制剂组;模型组、抑制剂组经左心室注入微栓塞球构建CME模型;构建CME模型前1 h抑制剂组尾静脉注射Rho A/Rho信号通路抑制剂(Y-27632)(5 mg/kg)。术后12 h依次采用:苏木素碱性品红苦味酸(HBFP)染色、脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)染色、免疫印迹法(Western blot)检测心肌缺血微梗死面积、心肌细胞的凋亡率以及p-Rho A、ROCK1、ROCK2的表达水平。结果:与假手术组相比,模型组大鼠心脏的微梗死面积、心肌细胞凋亡率、p-Rho A、ROCK1、ROCK2的表达明显升高,与模型组相比,抑制剂组大鼠的心脏的微梗死面积、心肌细胞凋亡率、p-Rho A、ROCK1、ROCK2的表达明显降低,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论:CME激活Rho A/ROCK通路,抑制Rho A/ROCK通路能明显降低心肌的凋亡率,改善CME大鼠心功能。     

Rho/Rho激酶在压力负荷心力衰竭大鼠心肌组织的表达

目的　探讨升主动脉缩窄压力超负荷心力衰竭 (心衰 )大鼠心肌组织Rho/Rho激酶的表达及Rho激酶抑制剂法舒地尔 (fasudil)对心衰的影响。方法　结扎大鼠升主动脉 ,同时制备假手术模型。 2 0周后成功建立慢性心衰模型。随机分为三组 ,每组 10只大鼠 :(1)假手术组 :生理盐水 0 1ml,腹腔注射 ,每日 2次 ;(2 )心衰组 :生理盐水 0 1ml,腹腔注射 ,每日 2次 ;(3)fasudil组 :fasudil 5mg/kg ,腹腔注射 ,每日 2次 ,疗程 4周。治疗前后检测各组大鼠血流动力学指标 ,疗程结束后处死大鼠 ,检测左室肥厚指数、心肌组织RhoA、Rho激酶mRNA表达及Ca2 + 浓度即 [Ca2 + ]i 的变化。结果心衰组与假手术组相比 ,左室舒张末压明显增高 ,而左室收缩压和左室压力变化最大上升和下降速率明显减低 ,P <0 0 1;左室肥厚指数明显增加 ,P <0 0 1;心肌组织RhoA、Rho激酶mRNA表达显著增高 ,P <0 0 1;心肌组织内 [Ca2 + ]i 显著增高 ,P <0 0 1。fasudil组与心衰组相比 ,左室舒张末压明显减低 ,左室收缩压和左室压力变化最大上升和下降速率明显增高 ,P <0 0 1;左室肥厚指数下降 ,P <0 0 1;心肌组织RhoA、Rho激酶mRNA表达明显下降 ,P <0 0 1;心肌细胞内 [Ca2 + ]i 变化无统计学意义 ,P >0 0 5。结论　心衰大鼠心肌组织RhoA、Rho激     

阿托伐他汀抑制内皮细胞Rh0/Rho激酶信号通路改善细胞骨架

目的探讨阿托伐他汀对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)Rho/Rho激酶信号通路中Rho激酶和磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)表达的影响。方法体外培养HUVEC,分4组:对照组;AngⅡ组;阻断剂组(Rho激酶阻断剂Y-27632);阿托伐他汀组。硝酸还原酶法检测NO含量;免疫细胞化学法观察p-MLC蛋白定位表达,Western blot法测定Rho激酶和p-MLC蛋白定量表达。结果与对照组比较,AngⅡ组NO含量显著减少(P<0.01);阻断剂组和阿托伐他汀组NO含量较AngⅡ组显著升高(P<0.01)。AngⅡ组细胞质内出现大量棕色颗粒积聚、浓染;阻断剂组和阿托伐他汀组细胞质中仅有少量棕色淡染颗。与AngⅡ组比较,阻断剂组和阿托伐他汀组Rho激酶及p-MLC蛋白表达显著降低(P<0.01),但仍高于对照组(P<0.01);2组间蛋白表达仍有明显差异(P<0.01)。结论阿托伐他汀对AngⅡ诱导的HUVEC保护作用,是通过抑制Rho/Rho激酶信号通路中Rho激酶及其下游的p-MLC蛋白表达,减弱AngⅡ对内皮细胞骨架的损伤。     

Y-27632对家兔心肌缺血／再灌注损伤的有益作用

目的研究Rho激酶抑制剂Y-27632对家兔心肌缺血／再灌注损伤（IRI）是否有心脏保护作用。方法健康家兔18只，体重2．0～2．5kg，随机分为3组：IRI组、Y-27632（Y）组和假手术（C）组。用结扎左冠状动脉前降支60min后剪断结扎线恢复血流30min的方法建立在体心肌IRI模型，Y组于再灌注前5min，经耳缘静脉注射Y-276320．35mg/kg。检测左心室收缩功能，血浆肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）及心肌缺血、梗死范围。结果IRI组缺血／再灌注导致左心室舒缩功能受损，左心室收缩峰压（LVSP）、左心室内压最大上升速率（＋dp／dtmax）下降，左心室舒张末期压力（LVEDP）升高，CK、LDH的释放增加，心肌梗死范围为（5．3±0．7）％；Y组在再灌注早期LVSP、±dp／dtmax下降的幅度和LVEDP升高的幅度、CK和LDH的释放，均明显低于IRI组，组间比较P均〈0．05。心肌缺血、梗死范围也明显较IRI组小（缺血：40．5％ vs 51．3％，P〈0．05；梗死：1．7％ vs 5．3％，P〈0．01）。结论Y-27632对家兔心肌IRI有部分心脏保护作用。     

Rho/Rho激酶信号通路与糖尿病肾病

糖尿病肾病(DN)是糖尿病重要的微血管并发症之一,其发病机制是多种因素共同作用的结果.近年来发现Rho/Rho激酶(Rho/ROCK)信号通路与多种组织重构如血管、心肌、肾纤维化等相关.高糖能够刺激肾脏细胞内Rho/ROCK信号通路的激活,后者通过调控转录因子的DNA结合活性上调多种基因的表达,从而引起各种炎性反应及肾...     

盐酸法舒地尔对血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉内皮细胞骨架损伤的保护作用

目的 探讨盐酸法舒地尔对血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉内皮细胞Rho激酶和肌球蛋白轻链磷酸化表达的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,并将其分为对照组、血管紧张素Ⅱ组、特异性阻断剂组(Y-27632)和盐酸法舒地尔组,MTT法观察血管紧张素Ⅱ对细胞活力的影响;免疫荧光法观察各组细胞骨架肌动蛋白F-actin形态及分布的变化,Western Blotting法测定内皮细胞Rho激酶和磷酸化肌球蛋白轻链的表达.结果 与对照组相比,血管紧张素Ⅱ对内皮细胞活力有明显抑制作用(P<0.01),Rho激酶特异性阻断剂和盐酸法舒地尔能明显减弱血管紧张素Ⅱ对内皮细胞活力的抑制作用(P<0.01).与对照组相比,血管紧张素Ⅱ组内皮细胞F-actin形态学发生明显的改变,细胞间裂隙增大.与血管紧张素Ⅱ组比较,Rho激酶阻断剂和盐酸法舒地尔组均可使Rho激酶蛋白表达降低(P<0.01),但仍高于对照组(P<0.01).结论 盐酸法舒地尔对血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉内皮细胞的保护作用是通过抑制Rho/Rho激酶信号通路中Rho激酶和磷酸化肌球蛋白轻链蛋白的表达,以减弱血管紧张素Ⅱ对内皮细胞骨架的损伤.     

瑞舒伐他汀对糖尿病合并冠心病大鼠动脉粥样硬化Rho激酶表达的影响

目的探讨瑞舒伐他汀对糖尿病合并冠心病大鼠动脉粥样硬化的防治作用及其相关机制。方法 Wistar大鼠50只,随机取10只大鼠以普通饮食喂养作为对照组,另40只以链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠内膜损伤存活后,高脂饮食8周,取大鼠20只随机分为模型组、治疗组,每组10只,继续高脂饮食4周,之后治疗组用瑞舒伐他汀20mg/(kg·d)灌胃干预2个月。3组大鼠常规查血脂及RT-PCR检测主动脉血管细胞黏附分子1(VCAM-1)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)及Rho激酶mRNA表达。结果干预前,与对照组比较,模型组和治疗组大鼠TC、TG、LDL-C水平显著升高,HDL-C水平显著降低(P0.05)。干预后,与对照组比较,模型组大鼠TC、TG、LDL-C水平明显升高,HDL-C水平明显降低;VCAM-1、ICAM-1和Rho激酶mRNA表达增加,差异有统计学意义(P0.01);与模型组比较,治疗组上述各指标均改善,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论瑞舒伐他汀通过干预 Rho/Rho激酶信号通路表达而抑制血管内皮炎症,起到延缓、抑制动脉管腔狭窄的作用,这可能为其抗动脉粥样硬化的新机制。     

法舒地尔对急性心肌梗死大鼠心肌组织Caspase-3、Rho激酶表达及血流动力学功能的影响

目的：研究法舒地尔对急性心肌梗死大鼠心肌组织Caspase-3、Rho激酶表达及血流动力学功能的影响。方法：取假手术和心肌梗死手术24 h后存活的雄性Wistar大鼠入组,随机分为3组,每日腹腔注射给药1次,至术后满3周。A组（正常大鼠假手术组）：磷酸盐缓冲盐水（PBS）+生理盐水。B组（心肌梗死组+安慰剂对照组）： PBS+生理盐水。C组（心肌梗死组+法舒地尔治疗组）：PBS+法舒地尔（100 mg/kg）。3周后通过HE染色观察心肌组织病理形态学变化,采用Masson检测心肌梗死面积,采用Western blot检测心肌组织Caspase-3蛋白的表达;RT-PCR法测定Rho激酶mRNA的表达;并分别检测血流动力学指标左心室内压峰值（LVSP）、左心室舒张末压（LVEDP）及左心室压力上升和下降最大速率（&#177;dp/dtmax）的变化。结果：HE染色显示A组心肌组织未出现任何变化,其心肌细胞以及肌纤维排列整齐,细胞核清晰,无中性粒细胞浸润。B组心肌组织中有大量炎性细胞,心肌横纹严重破坏,肌纤维断裂、溶解、坏死、心肌细胞间质充血水肿,间隙增大,局部存在炎细胞浸润。C组较B组来讲,组织形态学改变程度明显好转,中性粒细胞浸润减少,肌纤维排列有序,心肌组织充血、肿胀减轻。A组无心肌梗死,B组心肌梗死面积为（0.48&#177;0.03）%,C组心肌梗死面积为（0.20&#177;0.05）%,C组心肌梗死面积明显低于B组（t=16.793,P=0.000）。与A组相比,B组大鼠心肌细胞Caspase-3蛋白表达增加,Rho激酶mRNA表达增加,差异均有显著性（P=0.000）;与B组比较,C组大鼠Caspase-3蛋白表达显著减少,Rho激酶mRNA显著减少,差异均具有统计学意义（P=0.000）。血流动力学指标方面,与A组相比,B组大鼠LVSP、+dp/dtmax及-dp/dtmax降低,LVEDP指标升高,差异均有显著性（P&lt;0.01）;与B组相比,C组大鼠LVSP、+dp/dtmax及-dp/dtmax显著升高,LVEDP显著降低,差异均有统计学意义（P&lt;0.01）。结论： Caspase-3和Rho激酶在AMI大鼠中表达明显升高,两者可能参与了心肌细胞凋亡。法舒地尔能减少Caspase-3和Rho激酶表达,改善血流动力学功能,其对心肌的保护作用可能与抗心肌细胞凋亡机制有关。     

芎芍胶囊对动脉粥样硬化模型兔血脂和超敏C反应蛋白的影响

目的观察芎芍胶囊对高脂饮食致兔动脉粥样硬化(AS)模型血脂水平和超敏C反应蛋白(hs-CRP)的影响,探讨其抗AS的机制。方法将60只雄性新西兰大耳兔随机分为对照组、模型组、芎芍胶囊小剂量组(小剂量组)、芎芍胶囊中剂量组(中剂量组)、芎芍胶囊大剂量组(大剂量组)、辛伐他汀组,每组10只,除对照组外均釆用高脂饲料喂养复制兔AS模型,连续14周。于造模前及第6周、12周、14周时从耳缘静脉取血测定总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、载脂蛋白AⅠ(ApoAⅠ)、载脂蛋白B100(ApoB100)、hs-CRP,比较各组血脂水平和hs-CRP变化。结果 6周及12周时,各用药组血脂指标与模型组比较差异无统计学意义(P0.05);14周时,各用药组HDL与模型组比较差异无统计学意义(P0.05),小剂量组、中剂量组、辛伐他汀组TC、LDL较模型组降低(P0.05或P0.01),小剂量组TC低于大剂量组(P0.05),中剂量组、辛伐他汀组LDL低于大剂量组(P0.05),各用药组ApoAⅠ、ApoB100、hs-CRP较模型组下降(P0.05或P0.01)。结论芎芍胶囊可降低TC、LDL、ApoB100、hs-CRP,芎芍胶囊可能通过调节血脂、抗炎发挥抗AS作用。     

全反式维甲酸对高糖诱导的HK-2细胞外基质合成的影响及可能机制

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对高糖诱导HK-2细胞外基质合成的影响及其在延缓糖尿病肾病肾间质纤维化中的可能作用机制。方法将体外培养的HK-2细胞随机分为七组:A组(5.5 mmol/L D-葡萄糖)、B组(30 mmol/L D-葡萄糖)、C组(5.5 mmol/L D-葡萄糖+24.5 mmol/L甘露醇)、D组(10~(-7)mol/L ATRA+30 mmol/L高糖)、E组(10~(-6)mol/L ATRA+30 mmol/L高糖)、F组(10~(-5)mol/L ATRA+30 mmol/L高糖)、G组(10μmol/L Y-27632+30 mmol/L高糖),各组细胞均培养48 h。应用ELISA法检测细胞培养液结缔组织生长因子(CTGF)和Ⅳ型胶原的表达水平;RT-PCR法检测细胞Rho A、ROCK1的表达水平。结果 B组Rho A mRNA及ROCK1 mRNA的表达较A组显著升高(P<0.05),D、E、F组Rho A mRNA及ROCK1 mRNA较B组均表达减少(P<0.05),且随着ATRA浓度的升高呈现剂量依赖性。G组Rho A mRNA的表达与B组无明显差异,但ROCK1 mRNA的表达较B组显著减少(P<0.05);直线相关分析显示高糖组,D、E、F组Rho A mRNA与ROCK1 mRNA表达呈正相关(r=0.854,P=0.030;r=0.895,P=0.016;r=0.883,P=0.020;r=0.867,P=0.025);ELISA结果显示D、E、F组及G组CTGF、Ⅳ型胶原表达较B组显著下降(P<0.05),且下降程度与ATRA浓度呈现剂量相关性。结论 ATRA在一定浓度范围内可抑制高糖诱导的HK-2细胞外基质的合成,延缓肾间质纤维化,其机制可能与抑制Rho A/ROCK通路有关。     

全氟化碳对动脉粥样硬化大鼠内皮功能的影响

目的:观察腹腔注射全氟化碳(PFC)对动脉粥样硬化(AS)大鼠血清及主动脉组织一氧化氮(NO)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、内皮素-1(ET-1)含量的影响,初步探讨PFC对AS大鼠内皮的可能保护作用。方法:将40只Wistar雄鼠随机分为空白对照组、动脉粥样硬化模型组、PFC低剂量组、PFC高剂量组,每组10只。除对照组用普通饲料外,其余均以高脂饲料喂养,建立实验性大鼠AS模型,治疗组在造模的同时给予不同剂量药物干预。12周后,测定各组大鼠血清及主动脉组织eNOS、NO、ET-1的含量,行HE染色观察各组大鼠主动脉病理变化。结果:模型组eNOS、NO含量显著降低,ET-1含量显著升高,与对照组比较有显著差异(P0.05);PFC高剂量组较模型组血清及主动脉eNOS、NO含量显著升高,ET-1含量显著降低(P0.05);PFC低剂量组与模型组相比血清中各指标差异无统计学意义,主动脉组织中ET-1含量显著降低(P0.05);PFC高剂量组与低剂量组相比eNOS、NO含量显著升高,ET-1含量显著降低(P0.05);PFC高剂量组较PFC低剂量组减轻AS大鼠主动脉组织形态学变化更明显。结论:PFC可能通过升高AS大鼠血清及主动脉组织eNOS、NO含量,降低ET-1含量,起到内皮保护功能,发挥抗AS的作用。