良,恶性卵巢肿瘤C—Ha—ras1位点的等位基因型与杂合性缺失

为了探讨Ｃ－Ｈａ－ｒａｓｌ位点的等位基因型与杂合性缺失在卵巢癌发生中的意义，应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹技术，在１７例良、恶性卵巢肿瘤患者中研究Ｃ－Ｈａ－ｒａｓＩ位点的多态性和等位片段缺失。结果表明，在ＢａｍＨ Ｉ酶切、Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ１探针杂交的放射自显影图上显示７．８ｋｂ（Ｌ）和６．８ｋｂ（Ｓ）两个等位片段，基因型ＳＳ的个体在恶性卵巢肿瘤组的比例（７／１１）显著高于良性肿瘤组（２／６）（Ｐ〈０．０     

人类肿瘤中6号染色体长臂的杂合性缺失的研究进展

多年来的研究表明 ,6号染色体长臂的杂合性缺失 ( L OH)是人类肿瘤中最常见的染色体改变之一 ,人们认为在区域上可能存在有一个或几个肿瘤抑制基因 ,并且它 (们 )的缺失或失活在肿瘤的发生发展过程中起重要作用     

散发性肾癌中VHL基因的两个单核苷酸多态位点分析和杂合性缺失检测

目的检测79例散发性肾癌中抑癌基因VHL内部的两个单核苷酶多态(single nucleotide polymorphism，SNP)位点并分析杂合性缺失(loss of heterozygosity，LOH)发生情况，探讨VHL基因LOH与肾癌临床病理特征的关系。方法从肿瘤和正常肾组织中提取DNA，应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法检测VHL基因5′端SNP位点rs779805和3′端SNP位点rs1642742的基因型。在两个位点的杂合子中进行LOH检测，并分析VHL基因LOH与临床病理特征的关系。结果我们计算了两个位点的基因型、基因频率、杂合度、多态信息含量等遗传学参数。综合两个位点发现杂合子29例．其中12例(41．4％)存在LOH。VHL基因LOH与肾癌发生年龄、性别、临床分期、病理分级无显著相关性。结论在散发性肾癌中，VHL基因LOH是肿瘤发生的重要机理，其发生率达41．4％，VHL基因LOH与肾癌分期、分级无关。     

散发性乳腺癌和乳腺增生细胞8p、16q微卫星DNA位点的杂合性缺失

目的研究散发性乳腺癌细胞和乳腺增生细胞中位于8p和16q的3个微卫星DNA(microsatellite,MS)位点D8S264、D8S258、D16S413的杂合性缺失(loss of heterozygosity,LOH)的频率;探索3个MS的LOH频率同乳腺癌淋巴结转移状态的关系。方法分离乳腺癌和乳腺增生病理切片上的病变细胞和正常对照细胞并分别提取DNA,采用PCR-变性PAGE电泳检测18例单纯增生(usual hyperplasia,UH)、15例不典型增生(atypical hyperplasia,AH)以及35例浸润性乳腺导管癌(invasive ductalcarcinoma,IDC)细胞中位于8p的D8S264、D8S258和位于16q的D16S413位点的LOH频率。结果 UH、AH、IDC组发生D8S264、D8S258和D16S413的LOH频率分别为7.1%、0、0,18.2%、11.1%、20%和42.8%、32%、34.7%,除D16S413外,IDC组的D8S264和D8S258的LOH频率明显高于UH组和AH组(P0.05);UH、AH、IDC组3个MS位点总LOH频率分别为5.6%、40%、57.1%,UH组与其余两组的差异有统计学意义(P0.05),AH与IDC组差异无统计学意义(P0.05);淋巴结转移阳性组和阴性组D8S264、D8S258、D16413的LOH频率及总LOH频率分别为36.4%、28.6%、42.9%、55.6%和47.1%、33.3%、31.7%、58.3%,组间的差异均无统计学意义(P0.05)。结论 IDC组频繁发生D8S264、D8S258、D16413的LOH,UH和AH组也发生了不同程度的LOH,其中发生于UH组的D8S264以及较高频率发生于AH组的D16S413值得关注和进一步研究;AH组与IDC组的3个MS位点总LOH频率较接近;D8S264、D8S258、D16413的LOH与淋巴结转移状态无关。     

蛋白激酶C活性的阻抑对人胃癌细胞BGC－823恶性表型的影响

以人胃癌细胞ＢＧＣ－８２３为模型，在佛波酯（ｐｈｏｒｂｏｌ１２－ｍｙｒｉｓｔａｔｅ１３－ａｃｅｔａｔｅ，ＰＭＡ）导致蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）负效应条件下，探讨了ＰＫＣ活性的阻抑与细胞恶性表型变化的相关性及其可能作用机理。ＰＭＡ（１００μｇ／Ｌ）处理ＢＧＣ－８２３细胞７２ｈ，细胞质、膜和核中ＰＫＣ活性分别下降３５．６％和７２．３％。经电泳分析，观察到细胞核蛋白质磷酸化水平也明显下降。在ＰＫＣ活性被阻抑的同时，人胃癌细胞形态发生变化，细胞呈单层生长，出现接触抑制，在软琼脂中不能形成集落。表现出部分恶性表型丢失，并且与人胃癌细胞恶化密切相关的癌基因Ｈａ－ｒａｓ基因表达也明显被阻抑。这可能是ＰＫＣ活性被阻抑引起人胃癌细胞部分恶性表型丢失的分子机理之一。     

宫颈癌基因组HLA-Ⅰ类基因微卫星不稳定和杂合性缺失的研究

目的　探讨人白细胞抗原 Ⅰ类基因在宫颈癌中微卫星不稳定和杂合性缺失的情况 ,并构建宫颈癌基因组在该区域的精细缺失图谱。方法　应用聚合酶链反应 单链长度多态性 银染技术 ,对 3 0例宫颈癌活检标本进行杂合性缺失和微卫星不稳定的检测。结果　在 3 0例宫颈癌活检组织中 ,有 2 3例( 76.7% )存在有 1个或多个位点的杂合性缺失 ,微卫星位点C3 2 11的杂合性缺失频率最高 ,可达5 0 % ( 15 /3 0 )。微卫星不稳定的发生率为 66.7% ( 2 0 /3 0 ) ,其中位点D6S2 5 8发生微卫星不稳定频率最高 ,达 40 % ( 12 /3 0 )。结论　人白细胞抗原 Ⅰ类基因的微卫星不稳定和杂合性缺失在宫颈癌的发生和发展过程中起着重要作用 ,同时发现位点C12 5～C3 2 11之间是宫颈癌患者的一个最小的共同缺失区域 ,该区域可能存在有与宫颈癌相关的抑癌基因。     

神经鞘瘤D22S268杂合缺失与组织学类型的相关性研究

目的　探讨神经鞘瘤组织学类型与NF2基因微卫星标记D2 2S2 6 8杂合性缺失 (LOH)的相关性。方法　选择与NF2基因密切相关的微卫星标记D2 2S2 6 8,应用PCR方法检测 35例神经鞘瘤患者的新鲜肿瘤组织标本。结果　病理分型为AntoniA型 2 0例 ,其中LOH 15例 ;AntoniB型 15例 ,LOH 0例。两种病理分型中D2 2S2 6 8LOH发生率存在着显著差异 (P <0 .0 1)。结论　NF2基因的LOH可能在AntoniA型的神经鞘瘤发生过程中起决定性作用。     

乙型肝炎病毒基本核心启动子及前C区突变与基因型的关系

目的　探讨乙型肝炎病毒 (HBV)基本核心启动子 (BCP)及前C区突变与基因型之间的关系。方法　随机选取 113例慢性HBV感染者外周血 ,采用INNO LiPA法测定BCPT176 2 A176 4双突变及前C区A1896突变 ,测定HBVS基因序列明确基因型。结果　在C基因型感染者中BCPT176 2 A176 4双突变率明显高于B基因型感染者 ,差异有显著性 (34.2 %∶10 % ,χ2 =6 .74 ,P <0 .0 1) ,而前C区A1896突变率在B基因型和C基因型感染者中差异无显著性 (2 .5 %∶4 .1% ,χ2 =0 .0 0 ,P >0 .0 5 )。结论　与B基因型相比 ,C基因型感染者更易发生BCPT176 2 A176 4双突变。     

一例MEF2C缺失变异相关的5q14.3微缺失综合征的遗传学分析CSCD

目的对1例热性惊厥患儿及其父母进行相关基因检测,分析其可能的致病原因和遗传学特征。方法抽取患儿外周静脉血4 mL分别行染色体核型分析以及FMR1基因的变异检测,同时留取患儿及父母外周静脉血各2 mL予神经系统panel针对性进行基因检测和分析,对发育迟缓、智力障碍、语言发育迟缓、癫痫及特殊面容相关基因进行特异性捕获、测序。结果患儿常规染色体核型分析(400条带)显示核型无异常。检测范围内FMR1基因CGG重复序列区域未见异常扩增。基因测序显示患儿MEF2C基因(chr5:88027545)存在c.864+1delG杂合变异,为调控区域的剪切变异。该变异可能导致蛋白质功能受到影响。患儿父母该位点均未检测到变异,提示患儿MEF2C基因变异为新发变异(de novo)。根据美国医学遗传学与基因组学学会遗传变异标准与指南,MEF2C基因c.864+1delG变异判定为致病性变异(PVS1+PS2+PM2)。结论MEF2C基因是染色体5q14.3缺失综合征的致病关键基因,为常染色体显性遗传方式。患儿染色体5q14.3区段MEF2C基因c.864+1delG变异可能为患儿热性惊厥的原因。     

HBV前C基因突变及分型与HBV母婴传播关系的研究

目的探讨HBV(乙型肝炎病毒)前C基因突变、血清型及基因型分型与HBV母婴传播的关系。方法100份HBsAg阳性孕产妇及其新生儿的外周血,发生母婴传播血清为病例组,其他为对照组。ELISA法检测乙肝两对半,根据S基因判断HBV血清型和基因型。对HBV前C基因进行扩增及序列分析。结果99份HBV血清型全为adw型;39例发生母婴传播HBV基因C型25例;B型13例;E型1例。60例未发生母婴传播,HBV基因B型50例;C型10例。两组HBV基因分型结果差异有统计学意义(P0.05)。39例发生母婴传播中27例发生了点突变,12例无任何突变,突变发生率为69%。结论HBV母亲C基因型可能更易发生母婴传播。HBV母婴传播中大多存在HBV前C基因变异并导致氨基酸取代,其中主要涉及丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸等的磷酸化位点,这些重要位点氨基酸的取代可能在HBV母婴传播的发病中起作用。     

白血病染色体易位断裂点区域微卫星的不稳定性和杂合性丢失

目的探讨白血病染色体微卫星不稳定性（ＭＳＩ）及杂合性丢失（ＬＯＨ）。方法用白血病易位断裂点区域附近的多个微卫星位点检测３０例不同类型白血病基因的不稳定性及杂合性丢失。结果２１例白血病存在ＭＳＩ或者ＬＯＨ。其中１５例急性白血病中１１例示１个以上位点有ＭＳＩ；６例慢性粒细胞性白血病中４例患者在３个以上位点有ＭＳＩ；１５例急性白血病中２例有ＬＯＨ，比其他白血病发生率高。结论白血病和骨髓增生异常综合征均存在较高的基因不稳定性，但这些基因变化与不同类型的白血病的染色体易位断裂点没有特殊联系     

人胰腺癌组织3、5、7、9和18号染色体部分位点的杂合性丢失

目的了解人胰腺癌组织３、５、７、９和１８号染色体部分位点的杂合性丢失的状况。方法选择来自３、５、７、９和１８号染色体不同位置的９对多态性引物，对４５例胰腺癌存档石蜡标本经显微镜下剥离后，以ＰＣＲ－ＳＳＬＰ－银染法检测胰腺癌中这些位点的杂合性丢失。结果胰腺癌组织在１８ｑ２１．１、３ｐ１４．２、３ｐ２１．１和９ｑ２２－３１等处存在较高频率的杂合性丢失。结论胰腺癌的发生和发展可能涉及这些部位基因的改变     

食管癌组织染色体位点特异性的杂合性丢失和微卫星DNA序列不稳定

为了寻找在食管癌中发生缺失的染色体位点，根据以往细胞遗传学的工作基础，选取２４个分别位于１、２、３、５、７、９、１１、１７号染色体的食管癌染色体畸变＂热点＂及已知基因的位点，以微卫星序列－ＰＣＲ法检测这些位点处的杂合性丢失和微卫星序列不稳定。对３６对来自北京和山西阳泉的散发食管癌标本和相应正常组织的检测结果显示：在对应于９ｐ２２－２３、３ｐ１４．２、２ｐ２２、３ｐ２４－２６、１１ｑ１３．１、３ｐ２３、３ｐ２１．３、７ｑ３５、３ｑ２１－２２等染色体位点处存在较高频率（＞２０％）的杂合性丢失。同时，发现了染色体位点特异的微卫星ＤＮＡ不稳定。杂合性丢失和微卫星ＤＮＡ序列不稳定可能与食管癌的发生、发展过程有关。     

中国汉族乳腺癌中BRCA1基因的杂合性丢失和微卫星不稳定性

目的探讨中国汉族妇女乳腺癌与乳腺癌基因１的关系。方法对ＢＲＣＡ１区域内的４个微卫星多态位点，应用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）－聚丙烯酰胺尿素凝胶电泳（ＰＡＵＧＥ）－ＤＮＡ银染方法，对上海市５０例乳腺癌患者进行了ＢＲＣＡ１有关微卫星的ＬＯＨ和ＭＳＩ研究。结果患者中ＬＯＨ的发生率为５８％，ＭＳＩ的发生率为４６％；对患者进行临床分组，发现病期越晚ＬＯＨ率越高，ＭＳＩ与临床分期的关系不很确定。结论提示中国汉族人的乳腺癌的发生同与ＢＲＣＡ１基因相连锁的微卫星ＤＮＡ有关，因而也可能与ＢＲＣＡ１基因的突变有关。     

胃粘膜细胞系GES-1和MC微卫星DNA不稳定性及杂合性缺失研究

为了解细胞在体外传代过程中以及在细胞离体诱导癌变过程中，遗传不稳定性及其规律，选择了１１个多态微卫星ＤＮＡ标记，采用ＰＣＲ－聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染技术对本室建立的永生性胃粘膜细胞系ＧＥＳ－１的不同代数及化学致癌剂转化的ＧＥＳ－１细胞系ＭＳ进行了ＭＳ中的微卫星ＤＮＡ不稳定及杂合性缺失分析。     

胃癌组织DCC,APC／MCC基因杂合性缺失研究

对胃癌组织中结直肠癌缺失基因（ＤＣＣ）腺瘤性息肉病基因／结直肠癌突变基因（ＡＰＣ／ＭＣＣ）基因杂合性缺失（ＬＯＨ）进行分析，以探讨其在胃癌发生发展中的作用。采用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ技术，对４５例手术切除胃癌组织ＤＣＣ、ＡＰＣ／ＭＣＣ基因ＬＯＨ进行检测。结果表明ＤＣＣ基因ＬＯＨ率为３３．３％（１５／４５）、ＡＰＣ／ＭＣＣ为３０．０％（９／３０），ＬＯＨ率在肠型及胃型胃癌中无明显差异，与肿瘤大小、组织学分类、浸润深度、淋巴结转移无关。ＤＣＣ基因ＬＯＨ率在Ⅲ、Ⅳ期胃癌组（４８．０％）显著高于Ⅰ、Ⅱ期组（１５．０％）（Ｐ＜０．０５）．ＡＰＣ／ＭＣＣ基因ＬＯＨ在早期及进展期均可见到，与ＤＣＣ基因ＬＯＨ无相关性。结果提示ＤＣＣ、ＡＰＣ／ＭＣＣ基因ＬＯＨ对两型胃癌的发生发展均有一定作用。ＡＰＣ／ＭＣＣ基因ＬＯＨ在胃癌的早期发生及发展中起作用，而ＤＣＣ基因ＬＯＨ则是晚期改变，可能与临床预后相关。     

THE FREQUENCY AND MECHANISM OF LOSS OF HETEROZYGOSITY ON CHROMOSOME 11q IN BREAST CANCER

Loss of heterozygosity (LOH, allele loss) occurs frequently on the long arm of chromosome 11 in breast cancer. Seventy-one paired tumour/normal DNA samples from breast cancer patients under 50 years old were studied for allele loss at four microsatellite loci on 11q: D11S29 (11q23.3), NCAM (11q22–q23), D11S968 (11qtel), and D11S1313 (11qcen). The maximum frequency of LOH (≈35 per cent) was found at the D11S29 and NCAM loci. This result is consistent with previous studies and the frequency of allele loss is moderate to high compared with the usual baseline of 0–20 per cent. In most of the cases studied, LOH on chromosome 11q could be accounted for by one of two mechanisms. Either chromosomal non-disjunction had occurred, or sequences stretching from the telomere at least as far as NCAM had undergone deletion or mitotic recombination. These results suggest that a putative tumour suppressor gene is most likely to exist near 11q22–q23. There was a very low frequency of microsatellite instability in the tumours. An association was found between lack of progesterone receptor (PgR) expression and LOH at NCAM , suggesting that deletion of sequences on 11q may prevent high levels of PgR expression in some cases.     

原发性肝癌中YNZ22串联重复序列的杂合性丢失现象

ＹＮＺ２２位于１７染色体短臂的１区３带（１７ｐ１３），含有以７０个碱基对为单位的重复序列。作者用多聚酶链反应的方法扩增了ＹＮＺ２２基因中可变（数目）串联重复序列的片段，计算其等位基因频率、多态信息量值，并将结果与国外的有关资料作比较。同时应用该可变（数目）串联重复序列片段，对原发性肝细胞癌的杂合性丢失进行了检测。     

肝细胞癌17p13.3位点CpG岛甲基化状态的分析及其意义

为探讨ＤＮＡ甲基化异常在肝细胞癌中的作用，采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交技术对１２例肝细胞癌１７ｐ１３．３位点ＣｐＧ岛甲基化状态进行了检测，发现６例正常肝组织ＣｐＧ岛均未被甲基修饰，而４１．７％（５／１２）的肝细胞癌ＣｐＧ岛被不同程度的重新甲基化；甲基化程度显著升高者多伴１７ｐ１３．３位点的杂合缺失。结果表明：ＣｐＧ岛重新甲基化可能是１７ｐ１３．３位点基因失活的重要机理之一，过度的高甲基化状态与杂合缺失有关。为肝癌的病因学研究提供了资料。     

ALLELOTYPE OF ADENOMA AND DIFFERENTIATED ADENOCARCINOMA OF THE STOMACH

The molecular mechanism of gastric tumourigenesis has not yet been clarified, although investigators have postulated that differentiated adenocarcinoma may arise from pre-existing adenoma, similarly to the colorectal adenoma–carcinoma sequence. An allelotype analysis has been performed to identify chromosomal regions which are frequently deleted in gastric tumours and to examine the significance of the adenoma–carcinoma sequence in gastric tumourigenesis. Forty-five gastric tumours, 20 adenomas, and 25 differentiated adenocarcinomas were examined for loss of heterozygosity (LOH) using 39 microsatellite markers covering each non-acrocentric chromosome arm. Frequent LOH in the adenocarcinomas was observed on chromosomes 2q (33 per cent), 4p (33 per cent), 5q (50 per cent), 6p (33 per cent), 7q (43 per cent), 11q (36 per cent), 14q (38 per cent), 17p (45 per cent), 18q (36 per cent), and 21q (40 per cent). In contrast, the incidence of LOH in adenomas did not exceed 10 per cent at any of the loci examined. In addition to the p53 gene on 17p and the DCC gene on 18q, which are known to be frequently deleted in differentiated adenocarcinomas of the stomach, other unknown tumour suppressor genes on the above-mentioned chromosomes may also be inactivated. These observations suggest that the adenoma–carcinoma sequence is not a major pathway in gastric tumourigenesis.