c-myc反义寡核苷酸对胃癌SGC7901增殖及凋亡的影响

目的 通过脂质体将c-myc正反义寡核苷酸转入人胃癌细胞SGC7901,测定c-myc正反义寡核苷酸对SGC7901细胞的增殖和凋亡的影响.方法 通过脂质体将c-myc正反义寡核苷酸转入人胃癌细胞SGC7901,western blot检测c-myc蛋白的表达变化,MTT法检测增殖,流式细胞术检测凋亡.结果 c-myc反义寡核苷酸可以抑制SGC7901细胞c-myc蛋白的表达,并在72小时达到高峰,MTT检测到c-myc的反义寡核苷酸使细胞生长受到了明显的抑制.流式细胞仪监测c-myc反义寡核苷酸可明显的使得凋亡率上升其作用的高峰在第72小时达到高峰.结论 c-myc反义寡核苷酸可以明显得使得癌基因c-myc的表达受到抑制,从而发挥促进胃癌细胞SGC7901的凋亡并抑制细胞增殖的作用,而这些作用是与c-myc表达的抑制水平相平行的.     

脂质体介导c-myc反义寡核苷酸诱导HeLa细胞凋亡的实验研究

目的体外研究C-MYC反义寡核苷酸(ASODN)对人宫颈癌HELA细胞凋亡的影响,寻求提高肿瘤细胞放射敏感性的方法。方法免疫组化、流式细胞术、半定量RT-PCR法鉴定ASODN的有效性;GIEMSA染色、流式细胞术检测凋亡指数(AI)、DNA LADDER检测细胞凋亡。结果转染后,免疫组化结果显示C-MYC蛋白表达降低;半定量RT-PCR结果显示C-MYC MRNA表达较空白对照组及阴性对照组明显减弱(P<0.05)。GIEMSA染色可见凋亡小体;流式细胞术结果显示转染后凋亡指数为(10.29±0.66)%,转染ASODN(C-MYC)联合放射的凋亡指数为(16.83±0.57)%,均明显高于空白对照组(1.79±0.19)%(P<0.05);DNA LADDER呈现具有凋亡特征的梯带。结论本实验所设计的ASODN能有效地抑制C-MYC基因的表达;转染ASODN(C-MYC)能够显著增加HELA细胞凋亡,从而提高肿瘤细胞的放射敏感性。     

survivin反义寡核苷酸激活caspase-3诱导SGC7901胃癌细胞凋亡的实验研究

目的研究转染生存素（survivin）反义寡核苷酸诱导SGC7901胃癌细胞凋亡及其可能的作用机制。方法实验分为空白对照组（Control组）、脂质体组（Lip组）、正义寡核苷酸组（Sodn组）及反义寡核苷酸组（Asodn组）。人工合成正、反义寡核苷酸,经脂质体将survivin正、反义寡核苷酸转染人胃癌细胞48h后,MTT检测细胞增殖抑制率,Western blot检测caspase-3蛋白表达改变,Hoechst染色观察细胞凋亡形态改变及流式细胞仪检测凋亡率。结果Hoechst染色荧光显微镜下Control组、Lip组及Sodn组细胞核呈正常的蓝色,而Asodn组细胞核染色增强、核质浓缩、核碎裂,呈凋亡改变;Asodn组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、caspase-3蛋白表达均增高,与Control组、Lip组及Sodn组相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论survivin反义寡核苷酸可诱导胃癌细胞凋亡,其作用机制可能是通过激活caspase-3表达,启动凋亡信号传导。     

Survivin反义寡核苷酸诱导胃癌SGC7901细胞凋亡及对白藜芦醇的增敏作用

目的:观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对胃癌SGC7901细胞的增殖、凋亡及对白藜芦醇敏感性的影响. 方法:人工合成survivin硫代ASODN,通过脂质体转染胃癌细胞株(SGC7901)后,用MTT法检测细胞毒作用;用荧光染色、流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR、免疫组化技术检测survivin mRNA及蛋白的表达. 结果: ①survivin ASODN抑制胃癌SGC7901细胞的增殖呈时间和剂量依赖性; ②survivin ASODN处理组SGC7901细胞24 h后凋亡率为(33.6±1.2)%,正义寡核苷酸(SODN)组为(10.7±0.8)%,两组相比,差异有显著性(P＜0.05);③survivin ASODN处理组SGC7901细胞survivin蛋白及mRNA的表达水平显著下降. ④survivin ASODN和白藜芦醇联合处理组SGC7901细胞24,48,72 h生长抑制率,显著高于单用survivin ASODN组(P＜0.05)和单用白藜芦醇组(P＜0.05). 结论:survivin ASODN能够抑制胃癌SGC7901细胞的增殖、诱导凋亡,并能增加胃癌细胞株SGC7901对白藜芦醇的敏感性,推测可能通过下调survivin mRNA及蛋白表达而起作用.     

Survivin反义寡核苷酸诱导胃癌SGC7901细胞株凋亡的实验研究

目的 观察Survivin反义寡核苷酸（ASODN）对胃癌细胞株（SGC7901）增殖、凋亡的作用。方法 人工合成Survivin硫代ASODN，通过脂质体转染胃癌细胞株（SGC7901）后，用MTT法检测细胞毒作用；用荧光染色、流式细胞术检测细胞凋亡；用RT-PCR、免疫组化技术检测SurvivinmRNA及蛋白的表达。结果 （1）Survivin ASODN抑制胃癌SGC7901细胞增殖呈时间和剂量依赖性；（2）Survivin ASODN处理组SGC7901细胞24h后凋亡率为33．6％，正义寡核苷酸（SODN）组为10．7％，2组相比，有显著性差异（P〈0．05）；（3）SurvivinASODN处理组SGC7901细胞Survivin蛋白及mRNA的表达水平显著下降。结论 Survivin ASODN能够抑制增殖、诱导凋亡，推测可能通过下调Survivin mRNA及蛋白表达而起作用。     

脂质体介导hTERT反义寡核苷酸对HL60细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究经脂质体介导转染端粒酶逆转录酶(hTERT)反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞增殖、凋亡的影响.方法 运用四唑盐比色(MTT)法检测HL-60细胞的增殖、Annexin VFITC/PI双标记法细胞早期凋亡流式检测法检测HL-60细胞的凋亡.结果 hTERT ASODN组(终浓度10 μmol/L)、脂质体介导hTERT ASODN组(终浓度0.5 μmol/L)均能抑制HL60细胞增殖,诱导HL-60细胞凋亡,两组比较差异无显著性.各ASODN组对HL-60的抑制作用及诱导凋亡作用均弱于阿糖胞苷(终浓度10 μmol/L)(P<0.01).结论 脂质体的介导增强了hTERT AS0DN抑制HL-60细胞增殖及诱导凋亡的作用效果.脂质体介导hTERT ASODN有可能成为化疗外治疗急性白血病的有益补充.     

survivin反义寡核苷酸诱导胃癌细胞凋亡及对多西他赛的增敏作用

目的探讨生存素（survivin）反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide,ASODN）对人胃癌细胞株SGC7901的凋亡诱导、对多西他赛的化疗增敏作用。方法设计合成特异性靶向survivin ASODN。将胃癌细胞株分为空白对照组（Sham组）、单纯脂质体对照组（Lip组）、正义寡核苷酸转染对照组（Lip-SODN组）、ASODN转染组（Lip-ASODN组）。转染48 h后,Western blot法检测各组细胞survivin表达情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,MTT法检测转染细胞对多西他赛的敏感性。结果脂质体介导survivin ASODN转染后的胃癌细胞survivin蛋白表达明显下降,细胞凋亡率明显高于各对照组（P〈0.05）,对多西他赛的IC50值明显低于各对照组（P〈0.05）,细胞生长抑制率明显高于各对照组（P〈0.05）。结论survivin ASODN转染胃癌细胞能下调survivin蛋白表达,诱导胃癌细胞凋亡,抑制细胞增殖,增强多西他赛化疗敏感性。     

阳离子脂质体介导端粒酶反义寡核苷酸促进对HeLa细胞生长的抑制作用

目的 考察阳离子脂质体(CL)为载体的反义寡核苷酸(ASODN)序列对HeLa细胞的抑制作用.方法 选择以人端粒酶模板RNA(hTR)和人逆转录酶催化亚基(hTERT)为靶点的两种ASODN,用3β[N-(N‘,N‘-二甲氨基乙基)氨甲酰基]-胆固醇(DC-Chol)和二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)制备CL,考察其形态和粒径分布,并用其介导反义寡核苷酸转染HeLa细胞,通过噻唑蓝比色法(MTT)研究对细胞的抑制作用.结果 CL外观呈圆形,粒径均匀,在体外能够有效转染反义hTR和反义hTERT寡核苷酸序列(anti-hTR,anti-hTERT).CL/ASODN处理后的HeLa细胞,72 h后的存活率为(19.82&#177;12.19)%(antihTR,2.0 μmol&#183;L-1)和(16.59&#177;4.10)%(anti-hTERT,2.0 μmol&#183;L-1),而相同浓度游离的ASODN没有发现抑制作用.CL/ASODN复合物能够在120 h内持续抑制HeLa细胞的生长.结论 CL能够有效提高ASODN对HeLa细胞的抑制作用,作为端粒酶抑制剂的新型非病毒载体,具有良好的应用前景.     

Ki—Ras反义寡核苷酸对人胃癌细胞及血管内皮细胞的作用

目的 用Ki-Ras的反义寡核苷酸（ASODN）作用于人胃癌细胞和血管内皮细胞，为其抑制胃癌生长及其内血管生成进行前期基础研究。方法 MTT法观察Ki-Ras ASODN对两种细胞增殖的影响，电镜下观察细胞的超微结构变化及有无凋亡发生。结果 Ki-Ras ASODN可明显抑制人胃癌细胞和血管内皮细胞的增殖。在一定剂量下还可诱发细胞凋亡。结论 Ki-Ras P21在人胃癌细胞和血管内皮细胞的增殖与凋亡调控中具有重要作用。     

虾青素诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的研究

目的 研究虾青素对人胃癌细胞 SGC-7901 增殖和凋亡的影响。方法 采用体外培养、细胞增殖实验,以可见光、荧光、激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM) 观察胃癌细胞的形态变化。结果 虾青素对 SGC-7901 细胞增殖具有抑制作用,IC₅₀ 为 2.5 mmol/L;分别用含 0.42、0.84、1.68 mmol/L 的虾青素的培养介质处理 SGC-7901 细胞 48 h,在可见光、荧光显微镜、LSCM 下观察细胞形态,分别出现了细胞数量明显减少、皱缩变形、体积缩小、触角伸长、细胞表面凸起多个小泡,显示亮黄色荧光的细胞核呈现“新月状”、条状甚至碎片状形状,凋亡小体,DNA 面积较明显减小等典型的凋亡细胞形态特征。结论 虾青素对 SGC-7901 细胞的增殖具有明显的抑制作用,且诱导胃癌细胞凋亡。     

bcl—2 mRNA反义寡核苷酸对胃癌SGC—7901细胞端粒酶活性的影响

目的 探讨bcl-2反义寡核苷酸（antisense phosphorothioate oligodeoxynucleotide,ASODN)对胃癌SGC－7901细胞端粒酶活性的影响。方法 应用脂质体瞬时转染法介导bcl-2反义寡核苷酸,处理人胃癌细胞系SGC－7901后,分别采用Northern blot、Western blot检测bcl-2 mRNA、蛋白表达,用端粒微孔板杂交法检测端粒酶活性。结果 bcl-2 ASODN处理的胃癌SGC－7901细胞端粒酶活性明显受到抑制,并与ASODN的浓度和处理时间有关。结论 bcl-2反义寡核苷酸可抑制胃癌细胞端粒酶活性。     

附子提取物抗胃癌SGC-7901细胞增殖及诱导癌细胞凋亡实验研究

[目的]观察附子提取物诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的作用及机制。[方法]分别采用不同浓度(20、40、80 mg·mL~(-1))的附子溶液干预SGC-7901胃癌细胞24h、48h、72h,用四唑盐(MTT)比色法检测附子提取物对肿瘤细胞的抑制作用:采用以上浓度梯度的附子干预SGC-7901细胞24h(或采用80 mg·mL~(-1)的附子干预0h、24h、48h),应用Annexin V-FITC/PI双重染色,通过流式细胞仪观察SGC-7901的凋亡情况。[结果]附子提取物能显著地抑制SGC-7901细胞的生长,并具有浓度及时间依赖性,细胞有明显的凋亡改变。[结论]附子提取物具有抗胃癌SGC-7901细胞增殖和诱导癌细胞凋亡的作用。     

c—myc反义寡核苷酸对白血病细胞凋亡的影响

目的 研究c-myc反义寡核苷酸对白血病细胞凋亡的影响。方法 用针对c-myc mRNA 5'端非翻译区的一个18bp的反义寡核苷酸与HL60细胞、分离的急性粒细胞白血病病人白细胞共培养10h,用凋亡细胞计数、DNA凝胶电泳、ELISA、流式细胞仪等方法测白血病细胞的调亡。结果 c-myc反义寡核苷酸能够诱导HL60细胞凋亡,且此作用随着作用浓度的提高而增加;此反义核酸只诱导白血病患者的白血病细胞凋亡,对正常白细胞的凋亡无影响。结论 c-myc反义核酸可以通过诱导白血病细胞凋亡来治疗急性粒细胞白血症,且该作用的特异性好。     

5-氟尿嘧啶诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡及其机制研究

目的 研究５－氟尿嘧啶（５－ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ,５－ＦＵ）体外诱导胃癌ＳＧＣ－７９０１细胞凋亡作用,及细胞凋亡与Ｋｉ－６７抗原、核增殖抗原（ＰＣＮＡ）、Ｐ５３蛋白、Ｂａｘ蛋白、死亡受体Ｆａｓ表达的关系。探讨５－ＦＵ诱导胃癌细胞凋亡作用的机制。方法 应用流式细胞仪和３’－ＯＨ末端标记法（ＴＵＮＥＬ）检测凋亡细胞,电镜观察凋亡细胞的形态改变,免疫组织化学法检测细胞Ｋｉ－６７、ＰＣＮＡ、Ｐ５３、Ｂ     

c-myc反义核苷酸对淋巴瘤细胞系CA46凋亡的作用

目的 研究c—myc反义核苷酸对体外培养的淋巴瘤细胞系CA46基因表达及诱导凋亡的作用。方法 c—myc反义核苷酸(ASPO)为人工合成的针对c—myc基因的一段外源性基因片段，以无义的寡核苷酸作为对照，导入CA46细胞后观察其基因表达及诱导凋亡的作用。流式细胞仪检测c—myc基因产物表达，荧光染色观察CA46细胞的凋亡形态，流式细胞仪定量检测凋亡百分率，TUNEL检测加用VP16后的CA46原位凋亡。结果 c—myc反义核苷酸(ASPO)作用CA46细胞后，RT—PCR示c—myc mRNA表达降低。荧光染色ASPO组细胞胞体缩小，胞膜完整，核质浓缩，出现黄绿色不规则或局部致密荧光，凋亡细胞约占23．3％，而SPO组及空白组未见明显凋亡细胞，细胞呈均匀绿色荧光。流式细胞仪检测仅用VP16 10mg／L 3d，ASPO作用2d后加VP16 10mg／L 1d及ASPO作用3d均出现凋亡峰，凋亡率分别为16％，72％及52％，而SPO组及空白但均未见凋亡峰。流式细胞仪检测CA46细胞c—myc蛋白为95．3％，经ASPO作用后降为23．7％，同时SPO组c—myc表达率为90．6％，TUNEL检测ASPO组凋亡细胞为25．5％，加用VP16后的CA46凋亡率为36．7％。结论 体外实验中CA46特异地被c—myc反义核酸抑制生长，细胞出现凋亡表现，c—myc mRNA癌基因表达降低。     

榄香烯乳对胃癌SGC—7901细胞株端粒酶活性及细胞凋亡的影响

目的 探讨榄香烯乳治疗胃癌细胞的作用机制。方法 应用四唑盐比色试验、端粒重复扩增--微孔板杂交法、TUNEL染色研究榄香烯乳对胃癌细胞SGC-7901的细胞生长、端粒酶活性及诱导凋亡的作用。结果 榄香烯乳对胃癌SGC-7901细胞生长具有较强的抑制作用。榄香烯乳抗癌作用与抑制端粒酶活性和诱导细胞凋亡有关。榄香烯乳抑制端粒酶活性的效果与浓度及时间相关。结论 榄香烯乳对胃癌细胞生长具有很强的抑制作用,与抑制端粒酶活性、诱导凋亡有关。     

hTERT反义寡核苷酸对乳腺癌细胞增殖的影响

目的探讨hTERT反义寡核苷酸抑制端粒酶活性对乳腺癌细胞增殖的影响。方法用脂质体介导反义寡核苷酸转染MCF-7乳腺癌细胞株,采用TRAP-ELISA法检测转染后细胞端粒酶的活性,观察其前后的变化。MTT法检测细胞活性,流式细胞仪观察细胞周期及细胞凋亡率变化。结果转染细胞的端粒酶活性及细胞生长都明显受到抑制。流式细胞仪检测到细胞凋亡峰,细胞阻滞于S期,正义寡核苷酸则无此作用。结论端粒酶hTERT为靶点的反义寡核苷酸可明显抑制乳腺癌细胞的增殖,且具有促凋亡作用。     

联合应用反义bcl-2和反义IL-6寡核苷酸对小细胞肺癌细胞株NCI-H446的作用

目的　观察联合应用反义 bcl- 2硫代磷酸寡脱氧核苷酸 (bcl- 2 AS- PS- ODN)和白细胞介素 6 (IL - 6 )AS- PS- ODN对小细胞肺癌细胞株 NCI- H4 4 6增殖和活力的影响。　方法　以 bcl- 2 AS- PS- ODN和 IL- 6 AS- PS-ODN单独及联合作用于 NCI- H4 4 6 ,经细胞克隆形成实验、细胞增殖实验观察其对细胞增殖和活力的影响 ,经细胞凋亡线粒体流式检测试剂盒检测细胞凋亡的变化 ,经半定量 RT- PCR检测 IL - 6 m RNA表达水平的变化。　结果　细胞增殖曲线、细胞克隆形成实验及细胞凋亡实验显示联合用药能更强地抑制细胞活力 ,促进细胞凋亡。 bcl- 2 AS-PS- ODN单独作用时 ,IL- 6 m RNA表达上升 74 .3% ,IL- 6 AS- PS- ODN单独作用以及与 bcl- 2 AS- PS- ODN联合作用时 ,IL- 6分别下调 6 7.7%和 5 2 .4 %。　结论　联合用药较单独用药对 NCI- H4 4 6细胞株显示出更好的抑制效果     

Bcl-2、c-myc与胃癌细胞凋亡的关系

目的：探讨癌基因Ｂｃｌ ２、ｃ ｍｙｃ对细胞凋亡的影响。方法：用免疫组化ＬＳＡＢ法检测两者在６０例胃癌中的表达，并在光镜下对受检组织ＨＥ片进行凋亡细胞计数。结果：Ｂｃｌ ２、阳性胃癌的细胞凋亡指数明显低于阴性胃癌（０４１±０２９比０．８６±０．５１，Ｐ＜００５），ｃ ｍｙｃ阳性组织较阴性组织有更高的凋亡指数（０７１±０．３１比０．３２±０．２０，Ｐ＜００５）。结论：Ｂｃｌ ２与ｃ ｍｙｃ对胃癌细胞凋亡有相反的调控作用。     

多糖对人胃癌SGC7901细胞生长抑制的研究

目的研究多糖对人胃癌SGC7901细胞生长的抑制作用。方法培养人胃癌SGC7901细胞,采用多糖处理后观察其形态变化、凋亡率、BCL－2蛋白及BAX蛋白的表达。结果多糖可以抑制入胃癌SCC7901细胞的增殖,并呈现出对剂量和时间的依赖性。用10mg／ml的多糖处理培养细胞48h后,细胞凋亡率达到39．72％;并出现明显的DNA片段化;BCL－2蛋白的表达下降,而BAX蛋白的表达增加。结论多糖可以通过诱导细胞发生凋亡来抑制入胃癌SGC7901细胞的生长,从而达到}台疗胃癌的目的。