实验性牙齿移动中TG内P2X3受体的表达变化

目的: 研究正畸牙移动中加力后P2X3受体在三叉神经节的表达变化规律,以探讨P2X3受体在正畸牙移动疼痛机制中的作用. 方法: 以雄性SD大鼠为实验对象,模拟临床矫治的牙移动过程,应用免疫组织化学手段进行研究. 结果: 大鼠牙齿加力后,观察到三叉神经节神经元P2X3受体免疫反应阳性率增高,并呈现一定的时间规律:实验后1 d开始出现变化,实验后3 d达高峰,14 d后下降至与对照组基本一致. 结论: 大鼠牙移动过程中,三叉神经节内(TG)的P2X3受体表达变化是一过性变化,呈现短时上调的规律,时间与正畸牙移动疼痛时间一致.     

正畸力作用期间大鼠三叉神经节内NGF表达的研究（摘要）

目的错殆畸形的矫治已有百年历史，但是对于矫治过程中出现的一系列变化和反应的机制仍不完全清楚．目前认为有多种生物因子在多个层次共同参与正畸过程中牙周组织改建．神经生长因子（nerve growth factor，NGF）是一种靶源性神经营养因子，对神经系统及非神经系统有广泛的效应．己证明NGF在痛觉感受及软硬组织损伤修复方面有重要作用．[第一段]     

前列腺炎疼痛对背根神经节细胞兴奋性的影响及P2X3表达的变化

目的探讨慢性前列腺炎疼痛对P2X介导的背根神经节(dorsal root ganglion, DRG)细胞兴奋性的影响及P2X3受体表达的变化.方法采用膜片钳全细胞记录技术、蛋白免疫印迹(Western blot)技术对急性分离的DRG细胞ATP所激发的自发放电反应及P2X3蛋白表达进行检测.结果对照组、炎症疼痛3 d组神经元膜电位波动幅度都较小,不能产生自发性动作电位.炎症疼痛10 d组神经元膜电位波动明显,部分神经元膜电位波动幅度较大,可以达到阈值产生自发动作电位,约有10.26%(4/39)神经元出现自发性电活动.炎症3 d后P2X3蛋白表达有所增加,但与对照组相比无显著性差异,炎症10 d后P2X3蛋白表达与对照组相比显著增加.结论相应节段背根节神经元兴奋性及P2X3受体表达的增加可能在前列腺炎疼痛的产生和维持中起重要作用.     

单侧咀嚼大鼠三叉神经节内P物质的表达研究

目的观察磨除单侧后牙造成单侧咀嚼的大鼠三叉神经节内P物质(substance P, SP)的表达,进一步探讨颞下颌关节紊乱病的发病机制。方法Wistar雄性大鼠30只,随机分为6组,包括3个实验组及相应的对照组,每组5只。实验组动物磨除右侧上、下颌磨牙,人为造成单侧咀嚼。双侧三叉神经节(trigeminal ganglia,TG)切片行SP免疫组织化学反应(SABC法)。光镜观察拍片,并用Image Pro Plus 5．1图像分析软件分别进行测定。结果与对照组比较,用SPSS10．0软件行统计分析。结果每一实验组咀嚼侧和非咀嚼侧TG内SP免疫阳性神经元百分比与各自对照组比较显著降低(P<0．01,P<0．05),其非咀嚼侧明显低于咀嚼侧(P<0．01,P<0．05)。结论三叉神经节内SP参与了单侧咀嚼引起的颞下颌关节紊乱病的病理过程,且两侧TG内SP释放量不同。     

坐骨神经压迫性损伤大鼠背根神经节P2X3受体表达的变化

目的观察背根神经节P2X_3受体在大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)后表达的变化,探讨慢性神经痛的发生机制。方法24只雄性SD大鼠随机分成假手术组(S组)、坐骨神经结扎组(CCI组),各组分别均分为D7组和D14组,分别在各自的时间点灌注取材L_(4～5)背根神经节,用免疫组织化学方法观察P2X_3受体表达的变化。结果CCI组术侧背根神经节P2X_3阳性神经元数目明显增加,与S组相比,差异有统计学意义(P<0.05);非术侧与S组相比则无统计学差异(P>0.05)。结论坐骨神经损伤后背根神经节P2X_3受体的激活与神经性疼痛的病理过程密切相关。     

P2X2、P2X3受体与CGRP和calretinin在大鼠脊神经节内的共存

目的研究ATP受体P2X2、P2X3在大鼠脊神经节感觉神经元的表达、形态特点及与神经肽降钙素基因相关肽(CGRP)、钙结合蛋白calretinin的共存.方法应用激光共聚焦显微镜结合免疫组织化学双标技术.结果免疫组织化学显示脊神经节内可见大量P2X2 、P2X3受体阳性的细胞和神经纤维;P2X2受体亚型阳性细胞多为大、中、小型神经元,P2X3受体亚型阳性细胞为中、小型神经元;免疫组织化学双标显示有41.2±1.9%P2X2受体阳性细胞含有CGRP,而P2X3受体亚型与CGRP共存的细胞很难见到;有8.9±1.1%的P2X2免疫阳性神经元和7.2±1.3%P2X3受体阳性神经元分别含有calretinin.结论这一结果表明大鼠脊神经节内表达的ATP受体P2X2 、P2X3是不同的受体亚型.     

隐神经部分结扎大鼠背根神经节P2X3受体表达的变化

目的观察隐神经部分结扎（saphenous partial ligation,SPL）大鼠背根神经节P2X3受体表达的改变。方法麻醉下。制备大鼠SPL模型;测定SPL大鼠机械异常性疼痛和热痛敏的变化;应用免疫组化技术观察SPL大鼠损伤相应节段（L3、L4）的背根神经节P2X3受体表达的变化。结果SPL大鼠可产生热痛敏和机械异常性疼痛;SPL术后第7、14d,损伤同侧的L3、L4节段背根节P2X3免疫阳性神经元数量明显增加。结论SPL是一种适合于病理性神经痛机制研究的模型,SPL可导致损伤同侧相应节段的背根节神经元P2X,受体表达增加。     

低频电针刺激对慢性痛大鼠背根神经节P2X3受体表达的影响

目的观察低频脉冲电针对慢性痛大鼠模型背根神经节P2X3受体表达的影响。方法使用完全弗氏佐剂复制慢性炎性痛大鼠模型,24h后用电针刺激双侧“夹脊”穴和“足三里”穴,参数为波宽0．6ms,频率2Hz,电流强度为0．5、1和2mA,各10min,共刺激30min。使用实时定量PCR法,观察慢性痛大鼠给予电针治疗后背根神经节P2）（3受体的表达变化。结果低频电针可以减轻痛觉超敏,疗效持续约70min。同时,低频电针也可以使慢性痛大鼠背根神经节增高的P2X3mRNA明显减低。结论低频脉冲电针的镇痛作用可能部分是通过抑制P2X3基因的表达实现的。电针可以通过改变初级传入神经元中基因的表达而对疼痛起到调控作用。     

雌激素对直肠炎大鼠背根神经节P2X3受体mRNA表达的影响

目的:观察结直肠三硝基苯磺酸(TNBS)致炎条件下,改变大鼠体内雌激素和孕激素水平对背根神经节(DRG)中P2X3和P2X2 mRNA表达的影响。方法:SD大鼠分为4组:假手术组、去卵巢组、去卵巢加雌激素替代组、去卵巢加雌孕激素替代组,每组手术完成后饲养5周,再行TNBS致炎,5~7 d后用于实验。实时定量RT-PCR法检测各组P2X3 和P2X2 mRNA的表达。结果:去卵巢组大鼠DRG中P2X3 mRNA表达明显低于假手术组,差异有统计学意义(1.08±0.35 vs 1.66±0.66,P<0.05,n=4),雌激素替代组有明显上升(2.06±0.58),明显高于去卵巢组(P<0.01,n=5),而雌孕激素同时替代组明显低于单独添加雌激素组(2.06±0.58 vs 0.87±0.28,P<0.01,n=5)。各组大鼠DRG中P2X2 mRNA表达无统计学差异。结论:结直肠TNBS致炎条件下,雌激素可促进大鼠DRG中P2X3 mRNA表达,但对P2X2 mRNA无明显影响;孕激素的作用可能与雌激素正好相反。炎性条件下,雌孕激素可能通过影响P2X3受体的表达发挥调节炎性痛作用。     

大鼠牙齿移动过程中牙周组织MMP-2的表达变化

目的:观察大鼠正畸牙齿移动过程中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达和分布变化。方法:选用40只雄性SD大鼠,于加力后0 d、3 d、7 d、14 d、21 d处死大鼠,免疫组化法检测明胶酶-2(MMP-2)的表达,计算平均光密度(OD)和积分光密度(IOD)。结果:牙齿移动后牙周膜两侧MMP-2表达增加,破骨细胞、破牙本质细胞、骨细胞、成纤维细胞和部分成骨细胞、成牙本质细胞染色阳性。OD表现动态变化,7 d最低,而后缓慢升高。加力后IOD逐渐升高,7 d达到顶峰而后缓慢下降,21 d时仍维持在高水平。结论:牙齿移动时MMP-2呈规律性变化,与牙齿正畸骨改建关系密切。     

大鼠正畸牙移动初期P2X3受体在牙髓及牙周膜中的表达变化

[目的]研究正常大鼠牙髓牙周膜P2X3受体的表达及正畸牙移动初期的变化.[方法]利用免疫组织化学方法检测大鼠第1磨牙牙髓及牙周组织P2X3受体的表达及分布.[结果]P2X3受体表达牙髓多于牙周膜,在牙髓主要分布于成牙本质细胞层,并伸向前期牙本质和牙本质;在牙周膜以牙根中部和根尖部居多,远离牙骨质;在正畸牙移动初期牙髓、牙周膜的表达均增强.[结论]P2X3在牙髓牙周膜均有表达,在正畸牙移动初期表达增强,可能在正畸初期疼痛信息的传递中起着一定作用.     

嘌呤受体P2X7激活介导大鼠视网膜神经节细胞死亡的实验研究

 【目的】研究嘌呤受体P2X7激动剂、拮抗剂对大鼠视网膜神经节细胞（RGCs）的影响。【方法】（1）对新生Long-Evan大鼠进行上丘注射荧光标记物Aminostilbamidine以标记RGCs。检测P2b激动剂BzATP（0、50、100、500μmol／L）和特异性拮抗剂OxATP（100μmol／L）对体外培养RGCs存活率的影响；（2）体外培养未经Aminostilbamidine标记的新生大鼠RGCs，以10μmol／L钙离子（Ca^2＋）荧光染料Fura-2标记后。利用Ca^2＋影像测定仪分别测定P2X7激动剂BzATP（50μmol／L）和拮抗剂OxATP（100μmol／L）对RGCs胞内Ca^2＋浓度的影响。【结果】P2X7受体激动剂BzATP可引起体外培养的RGCs死亡，反应呈剂量依赖性，EC50=35μmol／L。在50μmol／L浓度下，BzATP约杀死30％的RGCs；而100μmol／L OxATP则可明显减轻BzATP对RGCs的毒性作用，使RGCs存活率从77％±4％提高至96％±3％（P〈0．001）。BzATP可引起RGCs胞内Ca^2＋持续升高，在50μmol／L浓度下可使胞内Ca^2＋升高（1022±113）nmol／L。在OxATP作用下，BzATP介导的Ca^2＋升高幅度显著降低，仅升高（63±13）nmol／L（P〈0．001）。【结论】嘌呤能P2X7受体激活可导致大鼠视网膜神经节细胞死亡和胞内钙离子浓度升高。     

P2X嘌呤受体在初级伤害性感受中的作用

P2X嘌呤受体(P2X受体)为配体门控阳离子通道,可表达于与伤害性信息传递有关的初级传入神经元的胞体、中枢端和外周端. 在外周P2X受体参与对伤害性和非伤害性刺激的反应;在脊髓背角,表达于突触前背根神经节神经元上的P2X受体激活后可易化谷氨酸的释放,参与脊髓背角的突触可塑性变化. P2X3亚单位只高度选择性表达于感觉神经元,应用P2X3受体反义寡核苷酸、基因敲除技术和选择性拮抗剂A-317491的研究表明ATP和P2X3受体参与并调制伤害性信息的传递.     

神经病理性痛大鼠背根神经节P2X3受体表达及电生理学特性的改变

目的 观察坐骨神经缩窄性损伤(CCI)致神经病理性痛后大鼠背根节神经元P2X3受体的表达和电生理学特性的变化.方法 应用免疫组化技术观察CCI后不同时间相应节段(L4、L5、L6)脊髓及背根神经节P2X3受体表达的变化;全细胞膜片钳技术观察CCI后不同时间L4、L5、L6节段背根节神经元ATP反应电流的变化.结果 CCI后7、14 d,损伤同侧L4、L5、L6节段背根节P2X3免疫阳性神经元数量明显增加,而且染色加深,相应节段的脊髓背角浅层P2X3免疫反应性亦明显增加.CCI后7、14 d,损伤同侧相应节段背根节产生ATP快反应电流的细胞数量明显增加,电流幅度亦增强.应用非选择性P2X受体拮抗剂Suramin能明显抑制ATP反应电流.结论 坐骨神经缩窄性损伤致神经痛后同侧对应节段的背根节神经元P2X3受体表达明显增加,ATP快反应电流明显增强.     

大鼠神经胶质瘤和嗜铬细胞瘤中P2X受体的表达特征研究

目的：采用实时荧光定量PCR技术,研究P2X受体在大鼠神经胶质瘤和嗜铬细胞瘤及原代培养皮层神经元和星形胶质细胞上的表达差异。方法：取新生1~3天SD大鼠大脑皮层,分离纯化神经元和星形胶质细胞,并采用实时荧光定量PCR技术,比较P2X受体在大鼠胶质瘤C6细胞、大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC-12细胞、星形胶质细胞和皮层神经元上的表达差异。结果：C6细胞P2X2、P2X3和P2X5表达水平显著高于星形胶质细胞,P2X4、P2X6和P2X7表达水平显著低于星形胶质细胞,PC-12细胞P2X1、P2X2、P2X3和P2X6表达水平显著高于皮层神经元,P2X5和P2X7表达水平则显著低于皮层神经元。此外,本实验还发现P2X2、P2X5和P2X6在C6和PC-12细胞上的表达水平存在显著差异。结论：大鼠胶质瘤和嗜铬细胞瘤细胞表达多种P2X受体,且与原代培养细胞存在表达差异,提示核苷酸介导的信号传递系统可能作为潜在的肿瘤治疗靶点。     

5-HT_(1B/1D)受体亚型在大鼠三叉神经节及肺动脉表达差异性研究

目的 :研究大鼠三叉神经节与肺动脉 5 - TH1 B/1 D受体亚型基因表达 ,探讨肺动脉高压的 5 - HT受体机制。方法 :应用 RT- PCR技术研究 5 - HT1 B和 5 - HT1 D受体基因在大鼠三叉神经节及肺动脉的表达。结果 :5 - HT1 B和 5 -HT1 D受体 m RNA在大鼠三叉神经节均有表达 ,而在大鼠肺动脉只检测到 5 - HT1 B受体 m RNA,且其表达水平在慢性肺动脉高压大鼠肺动脉明显高于正常大鼠肺动脉。结论 :5 - HT1 B和 5 - HT1 D受体在大鼠三叉神经节和肺动脉的分布存在差异 ;慢性肺动脉高压大鼠肺动脉 5 - HT1 B受体 m RNA表达水平增高     

5—HT1B／1D受体亚型在大鼠三叉神经节及肺动脉表达差异性研究

目的：研究大鼠三叉神经节与肺动脉5－TH1B／1D受体亚型基因表达，探讨肺动脉高压的5－HT受体机制。方法：应用RT－PCR技术研究5－HT1B和5－HT1D受体基因在大鼠三叉神经节及肺动脉的表达。结果：5－HT1B和5－HT1D受体mRNA在大鼠三叉神经节均有表达，而在大鼠肺动脉只检测到5－HT1B受体mRNA，且其表达水平在慢性肺动脉高压大鼠肺动脉明显高于正常大鼠肺动脉。结论：5－HT1B和5－HT1D受体在大鼠三叉神经节和肺动脉的分布存在差异；慢性肺动脉高压大鼠肺动脉5－HT1B受体mRNA表达水平增高。     

低渗透压对大鼠三叉神经节神经元GABA激活电流的抑制作用

目的 探讨低渗透压对大鼠三叉神经节神经元γ-氨基丁酸(GABA)激活电流(IGABA)的调制作用及胞内信号转导机制.方法 全细胞膜片钳技术.结果 实验中大部分受检细胞(89.2%)对外加GABA(10～1000μmol/L)敏感,可产生一具有明显浓度依赖性的内向电流,该电流可被GABAA受体特异性拮抗剂荷包牡丹碱阻断.预加低渗透压(567.3、670.5、773.6 kPa)对IGABA产生抑制作用,该抑制作用呈可逆性和非电压依赖性.低渗透压 GABA的量效曲线较单独的IGABA量效曲线明显下移,而两者的阈值和最大反应浓度基本不变,分别为10μmol/L和1 000μmol/L;两条曲线的EC50.值非常接近,分别为29.41 μmol/L和33.02μmol/L;预加低渗透压后最大反应浓度时,IGABA的幅值减少了(31.38 2.13)%.低渗透压对I的抑制作用可被瞬时感受器电位辣椒素4亚型(TRPV4)受体非特异性阻断剂钌红部分阻断,可被TRPV4受体激动剂4w-PDD增强.细胞外灌流蛋白激酶C(PKC)的抑制剂BIM可部分逆转低渗透压对1GABA的抑制作用.结论 低渗透压作用于TRPV4受体,部分通过激活PKC途径来减少GABAA受体介导的电流,这可能是低渗透压对IGABA的调节机制之一.