脂氧合酶抑制剂NDGA对胰腺癌细胞PCNA-1增殖和凋亡的影响

目的：探讨脂氧合酶抑制剂NDGA对人胰腺癌细胞株PCNA-1生长抑制、诱导凋亡及其对bcl-2、bax表达的影响。方法：采用MTT法检测NDGA对胰腺癌细胞株PCNA-1增殖活性的影响,流式细胞术检测NDGA处理的胰腺癌细胞株PCNA-1的细胞周期及凋亡相关蛋白bcl-2、bax的表达。结果：NDGA抑制胰腺癌细胞株PCNA-1的增殖活性,呈剂量依赖效应关系;细胞经100μmol／L的NDGA处理后G0／G1期细胞减少（P〈0．05）、S期细胞增多（P〈0．05）,G2／M期细胞无明显变化;细胞经100μmol／L的NDGA处理48h后bcl-2蛋白与对照组相比表达下调（P〈0．01）、bax蛋白与对照组相比表达上调（P〈0．01）。结论：NDGA对胰腺癌细胞株PCNA-1有抑制增殖、诱导其凋亡作用,诱导细胞凋亡的机制可能与细胞凋亡相关基因bcl-2表达下调、bax表达上调有关。     

紫杉醇对人骨肉瘤细胞凋亡及对bcl-2 、bax基因表达的影响

 目的 了解紫杉醇诱导人骨肉瘤细胞的凋亡效果,以及凋亡与bcl-2和bax表达之间的关系。方法 用不同浓度的紫杉醇作用于骨肉瘤细胞MG63。采用胎盼蓝染色法,于细胞记数板进行活细胞率检测计算。采用光镜和电子显微镜对细胞形态改变进行观测,采用原位缺口末端标记凋亡检测法（TUNEL）和流式细胞术（Annexin-V-FITC＆PI）对细胞凋亡进行检测。采用免疫组织化学法对凋亡调节基因bcl-2和bax表达进行检测。结果 骨肉瘤活细胞率随着紫杉醇作用时间延长和浓度增高而降低。紫杉醇诱导骨肉瘤细胞MG63凋亡表现为典型的凋亡特征,包括：细胞形态学改变,细胞染色质浓聚,染色质新月形变,胞核碎裂等。TUNEL法检测到了细胞DNA片段的断裂。随着细胞凋亡的发生,开始出现G2/M期阻滞。紫杉醇可以降低凋亡相关基因bcl-2的表达和增加bax基因的表达。结论 紫杉醇可以通过时间依赖性和剂量依赖性方式,促使细胞G2/M期阻滞和抑制细胞有丝分裂,从而诱导人骨肉瘤细胞凋亡。这种凋亡可能受到凋亡相关基因bcl-2低表达和bax高表达的调控。     

别直参抑制人乳腺癌细胞MCF-7体外增殖

[目的]评价别直参对MCF-7细胞体外增殖的影响,并检测其对凋亡相关蛋白bax/bcl-2表达的影响.[方法]采用MTT比色法检测对MCF-7细胞增殖的作用;流式细胞术检测对MCF-7细胞凋亡的影响;免疫组化法检测bax/bcl-2的表达.[结果]别直参高剂量组作用MCF-7细胞24h后,MTT检测增殖率为89.83％,提示有抑制MCF-7细胞体外增殖的作用(P＜0.05);流式细胞术检测高剂量组细胞凋亡率明显升高(P＜0.05);免疫组化法检测高剂量组能上调MCF-7细胞bax的表达,并下调bcl-2的表达.[结论]别直参高剂量组具有一定的诱导MCF-7细胞凋亡效应作用,其机制可能通过上调bax的表达和下调bcl-2的表达.     

脂质体介导反义C-FLIP对BGC823细胞凋亡的影响

目的：探讨脂质体介导下c-FLIP（Cellular—FLICE Inhibitory Protein）反义寡核苷酸对胃癌细胞系BGC823的作用。方法：RT—PCR和Western Blot方法检测c-FLIPL、c—FLIPs的mRNA和蛋白的表达；MTT法检测细胞抑制率：原位末端标记法、流式细胞术检测细胞凋亡：Western Blot检测蛋白表达变化。结果：c-FLIP基因编码的2种mRNA和蛋白在Hela、BGC823细胞中呈阳性表达。MTT显示脂质体介导反义寡核苷酸可显著抑制BGC823细胞增殖：反义寡核苷酸作用细胞36h后．TUNEL检测可见明显阳性染色，流式细胞分析发现在G1峰前出现凋亡峰；Western Blot可见c-FLIPL和c-FLIPs蛋白表达显著下降。结论：c-FLIPL、c—FLIPs mRNA和蛋白在Hela、BGC823细胞中表达。脂质体介导c-FLIP反义寡核苷酸转染BGC823细胞后抑制目的蛋白表达，抑制细胞生长、促进凋亡．其作用呈剂量依赖性。研究靶向c-FLIP的反义基因治疗药物可能为胃癌的临床治疗提供新的方法和思路。     

二烯丙基二硫化物诱导胃癌BGC823 细胞周期G2/M期阻滞的机制*

目的:以细胞周期作为抗癌药物新靶点的研究,可能是很有前途的。笔者的前期工作发现,二烯丙基二硫化物（diallyl disulfide,DADS）可抑制人胃癌BGC 823 细胞增殖,其增殖抑制与细胞周期G2/M期阻滞有关;DADS可能是通过抑制细胞分裂周期蛋白25C（Cell division cycle protein 25C,Cdc25C）、cyclinB 1 表达使部分BGC 823 细胞停滞在G2/M期,但G2/M期阻滞的机制还未完全阐明。本研究进一步探讨DADS诱导人胃癌BGC 823 细胞周期G2/M期阻滞的可能机制。方法:RT-PCR 检测Chk1 和Chk2 在mRNA 水平的改变;Western blot检测DADS处理BGC 823 细胞前后细胞周期相关蛋白ATM-RAD3 相关基因（ATM-RAD3-related gene,ATR ）、细胞周期检查点蛋白激酶1（checkpoint kinase1,Chk1）、细胞周期检查点蛋白激酶2（checkpoint kinase2,Chk2）表达和ATR 、Chk1、Chk2 的磷酸化程度;免疫共沉淀检测Chk1、Chk2 与Cdc25C 结合情况。结果:RT-PCR 检测显示,Chk1 和Chk2 的mRNA 水平在处理组与未处理组之间无显著性差异（P>0.05）。 Western blot检测显示,总Chk1 和Chk2 蛋白表达在细胞处理前后均无明显改变,但15mg/LDADS刺激BGC 823 细胞2h 后,处理组细胞Chk1 磷酸化程度明显增加,并呈时间依赖性（P<0.05）,而Chk2 磷酸化程度在处理组与未处理组之间无显著性差异（P>0.05）。 15mg/L DADS 作用15～120min,ATR 磷酸化程度明显增加,呈时间依赖性（P<0.05）,而ATR 表达无改变。免疫共沉淀分析表明,DADS 能促进BGC 823 细胞Chk1 与Cdc25C 结合,而对Chk2 与Cdc25C 结合无影响。结论:DAD诱导人胃癌BGC 823 细胞G2/M期阻滞与Chk1 的活化有关,DADS可能是通过激活ATR 、Chk1,调节Cdc25C 的表达引起人胃癌BGC 823 细胞G2/M期阻滞。      

双歧杆菌脂磷壁酸体外诱导胃癌细胞凋亡的研究

目的 探讨双歧杆菌表面分子脂磷壁酸（LTA）的抗肿瘤作用及其机制.方法 应用MTT法、透射电镜及流式细胞术等方法观察双歧杆菌LTA对胃癌细胞BGC823的增殖抑制作用及其对细胞形态和细胞周期的影响,并用免疫细胞化学染色法检测LTA处理前后细胞凋亡相关蛋白表达的变化.结果 双歧杆菌LTA对体外培养的BGC823细胞具有明显的生长抑制作用,且具有剂量和时间依赖性.经LTA处理的BGC823细胞超微结构改变,出现凋亡小体,同时细胞周期发生变化,细胞被阻滞于G0/G1期.免疫细胞化学染色结果显示,LTA能下调Bcl-2蛋白和c-myc蛋白的表达,同时上调p53蛋白和c-fos蛋白的表达.结论 双歧杆菌LTA能抑制胃癌细胞BGC823的增长,其机制可能是通过调节凋亡相关蛋白的表达变化,将细胞阻滞在G0/G1期并诱导细胞凋亡.     

脂氧合酶抑制剂NDGA对胰腺癌细胞PCNA-1增殖和凋亡的影响

目的:探讨脂氧合酶抑制剂NDGA对人胰腺癌细胞株PCNA-1生长抑制、诱导凋亡及其对bcl-2、bax表达的影响.方法:采用MTT法检测NDGA对胰腺癌细胞株PCNA-1增殖活性的影响,流式细胞术检测NDGA处理的胰腺癌细胞株PCNA-1的细胞周期及凋亡相关蛋白bcl-2、bax的表达.结果:NDGA抑制胰腺癌细胞株PCNA-1的增殖活性,呈剂量依赖效应关系;细胞经100μmol/L的NDGA处理后G0/G1期细胞减少(P＜0.05)、S期细胞增多(P＜0.05),G2/M期细胞无明显变化;细胞经100μmol/L的NDGA处理48h后bcl-2蛋白与对照组相比表达下调(P＜0.01)、bax蛋白与对照组相比表达上调(P＜0.01).结论:NDGA对胰腺癌细胞株PCNA-1有抑制增殖、诱导其凋亡作用,诱导细胞凋亡的机制可能与细胞凋亡相关基因bcl-2表达下调、bax表达上调有关.     

MTT法检测C-FLIP反义寡核苷酸对BGC823细胞的抑制效果

目的探讨脂质体Lipofectamine2000介导下c-FLIP反义寡核苷酸对胃癌细胞系BGC823生长的抑制作用.方法 RT-PCR和Western Blot方法检测c-FLIPL/S的mRNA和蛋白的表达变化;原位末端标记法、流式细胞术检测细胞凋亡;MTT法检测细胞抑制率.结果 Western Blot可见c-FLIPL和c-FLIPS蛋白表达显著下降;反义寡核苷酸作用细胞36 h后,TUNEL检测可见明显阳性染色,流式细胞分析发现在G1峰前出现凋亡峰;MTT显示脂质体介导反义寡核苷酸可显著抑制BGC823细胞增殖.结论 c-FLIPL、c-FLIPS mRNA和蛋白在Hela、BGC823细胞中表达.脂质体介导c-FLIP反义寡核苷酸转染BGC823细胞后抑制目的蛋白表达,抑制细胞生长、促进凋亡,其作用呈剂量依赖性.研究靶向c-FLIP的反义基因治疗药物可能为胃癌的临床治疗提供新的方法和思路.     

重组人白细胞介素24抑制淋巴瘤raji细胞生长及其分子机制

目的：研究重组人白细胞介素24体外对淋巴瘤raji细胞的生长抑制作用及其分子机制。方法：用rhIL-24蛋白作用于淋巴瘤raji细胞,MTT法检测rhIL-24蛋白对raji细胞的生长抑制作用,激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）观察rhIL-24蛋白诱导raji细胞凋亡的形态学改变,流式细胞仪（VACS）检测rhIL-24蛋白诱导raji细胞的凋亡率及细胞周期改变,免疫细胞化学分析凋亡相关因子Bcl-2和Bax的改变。结果：rhIL-24蛋白作用于淋巴瘤raji细胞后,可以显著抑制raji细胞的生长,诱导G2／M期阻滞和凋亡,rhIL-24蛋白能使raji细胞中bcl-2的表达下调和bax的表达上调。结论：rhIL-24蛋白对淋巴瘤raji细胞具有显著的生长抑制及凋亡诱导作用,其作用机制可能与下调bcl-2和上调bax的表达有关。     

靛玉红甲肟对人食管癌细胞株EC-1和Kyse70体外增殖和细胞周期的影响

目的:探讨靛玉红甲肟(indirubin-3'-monoxime)对体外培养的人食管癌细胞株EC-1和Kyse70细胞增殖和细胞周期的影响.方法:不同浓度靛玉红甲肟处理食管癌EC-1和Kyse70细胞后,采用MTT法检测细胞的增殖活性,FCM法和RT-PCR法检测细胞周期分布及bcl-2和bax mRNA表达的变化.结果:靛玉红甲肟对人食管癌细胞EC-1和Kyse70的生长具有明显的抑制作用,且表现为剂量依赖性和时间依赖性(P<0.05).FCM法检测发现,以5 μmol/L的靛玉红甲肟对EC-1细胞处理24、48和72 h后,G0/G1期细胞比例逐渐下降(P<0.05),S期细胞比例未见明显改变,G2/M期细胞比例逐渐上升(P<0.05),呈时间依赖性.RT-PCR法检测发现人食管癌细胞bcl-2和bax mRNA比例呈时间依赖性下调.结论:靛玉红甲肟对人食管癌细胞EC-1和Kyse70具有明显的增殖抑制作用,其作用机制可能与阻滞细胞周期G2/M期和下调bcl-2/bax 表达比例有关     

DHA 联合葫芦素B对人胃癌BGC -823细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究二十二碳六烯酸（docosahexaenoicacid，DHA）联合葫芦素 B（cucurbitacin B）体外对人胃癌BGC -823细胞增殖及凋亡的影响。方法：利用 NADH 酶染色、吉姆萨染色显微镜下观察人胃癌 BGC -823细胞经 DHA 联合葫芦素 B 作用后细胞形态学上的变化。采用 MTT 法、流式细胞仪检测细胞增殖、周期及凋亡的情况。结果：根据 MTT 法 DHA 联合葫芦素 B 作用于胃癌细胞比分别利用 DHA、葫芦素 B 直接作用细胞增殖抑制更为明显，更有效降低细胞的存活率，且在相同时间随着药物浓度的提高，作用效果也随之提高。NADH 酶染色法、吉姆萨染色法在显微镜下明显可见细胞凋亡现象。流式细胞仪检测肿瘤细胞，药物联合干预 G0/ G1期细胞明显增多，G2/ M 期和 S 期细胞明显减少。结论：DHA 联合葫芦素 B 可抑制人胃癌 BGC -823细胞增殖、诱导细胞凋亡，其联合具有协同作用。     

胰岛素样生长因子Ⅱ mRNA结合蛋白3在肺腺癌中的表达及临床意义

目的:研究胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白3(IMP3)在肺腺癌患者中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学方法检测92例肺腺癌患者的标本及30例癌旁正常标本中IMP3的表达,并分析与患者的年龄、性别、病理分级、TNM分期、远处转移、肿瘤的大小及与预后的关系。结果:IMP3在肺腺癌组中的阳性表达率为56.5%,明显高于对照组(均为阴性),差异具有统计学意义(P<0.001);IMP3在肺腺癌中的表达与患者的年龄、性别以及肿瘤的大小无关(P>0.05);与病理分级(P<0.001)、临床分期(P<0.05)及是否有远处转移有关(P<0.05);IMP3表达与肺腺癌患者术后3年生存率呈负相关(P<0.001)。结论:IMP3在肺腺癌组织中表达,且与肺腺癌的病理分级、临床分期及远处转移有关。     

剪接因子SF3b6通过MAPK信号通路促进胃癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨剪接因子3b亚基6(splicing factor 3b subunit6,SF3b6)对胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移等的影响及其作用机制.方法:通过组织芯片检测SF3b6在胃癌和癌旁组织中的表达,采用WB和qPCR检测SF3b6在正常永生化胃上皮细胞(GES-1)和胃癌细胞系(HGC27、AGS、BGC8...     

沉默YAP通过Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌BGC823细胞的凋亡

目的 本研究探讨Yes相关蛋白（YAP）对胃癌BGC823细胞凋亡的影响。方法 BGC823细胞中转染YAP小干扰RNA（YAP siRNA1、YAP siRNA2）,用qRT-PCR和蛋白质印迹法分别测定细胞中YAP表达,筛选干扰效果较好的YAP siRNA1做后续实验。MTT测定细胞增殖,平板克隆实验测定克隆形成能力,流式细胞术测定凋亡情况,分光光度法检测Caspase-3、Caspase-9活性,蛋白质印迹法检测β-catenin、c-myc、CyclinD1蛋白水平。用Wnt/β-catenin的激活剂处理下调YAP后的BGC823细胞,按照上述方法测定细胞增殖凋亡和克隆形成能力。结果 YAP siRNA1、YAP siRNA2下调BGC823细胞中YAP的转录和表达,YAP siRNA1对YAP表达的干扰效率较好。敲低YAP后的细胞增殖能力、克隆形成能力降低,细胞凋亡率由（6.32±0.58）%升高至（32.71±2.64）%,Caspase-3、Caspase-9活性升高,β-catenin、c-myc、cyclinD1蛋白表达减少,与正常培养的BGC823细胞相比,差异有统计学意义（P<0.05）。Wnt/β-catenin的激活剂处理可以部分逆转敲低YAP对BGC823细胞的凋亡、增殖、克隆形成能力和细胞中Caspase-3、Caspase-9活性的影响。结论 YAP敲低诱导胃癌细胞凋亡,且作用机制与抑制Wnt/β-catenin通路激活有关。     

西妥昔单抗增强放疗对人胃癌细胞株MGC803及BGC823的作用及其机制

目的 观察西妥昔单抗（C225）联合放疗对人胃癌细胞株MGC803及BGC823增殖的影响,并探讨其机制。方法 （1）采用MTT法观察C225联合放疗对细胞生长增殖的影响,评价两者联合效应;（2）采用FCM检测C225联合放疗对细胞周期分布及细胞凋亡的影响;（3）通过Western blot法检测C225联合放疗对EGFR细胞信号蛋白及其下游信号蛋白AKT、MAPK磷酸化的影响。结果 （1）当C225联合三种不同剂量放疗时,均可显著抑制细胞的增殖,两者具有协同作用。（2）单用C225可使细胞阻滞于G0/G1期,并减少S期细胞比例。在C225作用后,G0/G1期及S期MGC803细胞比例分别为67.3％及24.8％,BGC823细胞则分别为71.9％及18.8％。单用放疗可使细胞阻滞于G2/M期。在放疗作用于MGC803细胞及BGC823细胞后,G2/M期比例分别为18.2％及19.5％。当C225与放疗联合作用时,G2/M期MGC803细胞及BGC823细胞比例进一步升高,分别为25.7％及26.4％,而S期细胞比例进一步下降,分别为18.6％及13.5％。（3）在C225处理后MGC803细胞及BGC823细胞的凋亡率分别为4.9％及9.9％,放疗处理后MGC803细胞及BGC823细胞的凋亡率分别为11.7％及19.8％,与对照组相比差异均具有统计学意义。当C225与放疗联合作用时,MGC803细胞及BGC823细胞的凋亡率分别为20.1％及47.3％,与单用放疗组相比差异均具有统计学意义。（4）C225与放疗联合应用时,可使细胞EGFR信号蛋白表达下降,并能使其下游信号蛋白AKT、MAPK磷酸化活性降低。结论 （1）西妥昔单抗可增强放疗对MGC803和BGC823细胞株的生长抑制作用;（2）其增敏作用的机制可能与抑制EGFR信号转导通路、诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡增加等有关。     

Effect of lentinan combined with docetaxel and cisplatin on the proliferation and apoptosis of BGC823 cells

We studied the inhibitory effects of lentinan alone or lentinan combined with docetaxel and cisplatin on growth of gastric cancer cell line BGC823. The cells were divided into lentinan group, docetaxel combined with cisplatin group, and lentinan combined with docetaxel and cisplatin group. Gastric cancer cell line BGC823 was treated with different concentrations of drugs in each group. Tetrazolium-based colorimetric assay (MTT), Annexin V/propidium iodide method and flow cytometry were used to determine the proliferation and apoptosis of the cells in each group. The inhibition ratio was positively related with the concentrations of drugs when BGC823 cells were treated with docetaxel combined with cisplatin from low to high dose. The inhibition ratio of each group further increased after lentinan was added into the medium. The apoptosis rate of 6.25 μg/ml lentinan on BGC823 cells was 19.84 %. The apoptosis rate of BGC823 cells was significantly increased from 50.22 % to 72.06 % after treatment with 6.25 μg/ml lentinan combined with 2.5 μg/ml docetaxel and 50 μg/ml cisplatin. Lentinan has an inhibitory effect on the proliferation of gastric cancer cell line BGC823. Lentinan combined with docetaxel and cisplatin increases the inhibitory effect on the proliferation of BGC823 cells mediated by docetaxel combined with cisplatin. Low concentration of lentinan combined with docetaxel and cisplatin has better therapeutic effects on the proliferation of BGC823 cells compared with high concentrations of docetaxel combined with cisplatin. Lentinan has the ability of inducing BGC823 cell apoptosis and this effect is enhanced when combined with docetaxel and cisplatin.     

白龙灵沙汤提取物对A549人肺癌细胞凋亡的影响

 目的 探讨白龙灵沙汤提取物对A549人肺癌细胞凋亡的影响。 方法 提取白龙灵沙汤中的有效成分,使之与A549人肺癌细胞作用48、72h后,免疫细胞化学法检测 bcl-2、bax表达。 结果 白龙灵沙汤提取物与A549人肺癌细胞作用 48、72h后,下调A549人肺癌细胞 bcl-2,上调 bax的表达。 结论 白龙灵沙汤提取物可下调 bcl-2和上调bax的表达。     

新城疫病毒感染体外诱导胃癌细胞热休克蛋白70的表达及意义

目的 :观察NDV在体外抗胃癌细胞活性 ,研究NDV感染诱导胃癌细胞热休克蛋白 70 (HSP70 )的表达及其意义。方法 :应用倒置显微镜观察细胞形态 ,MTT法测细胞生长抑制状况 ,血凝试验检测NDV在细胞中的增殖状况 ,免疫组化染色观察细胞中HSP70表达情况 ,流式细胞术检测胃癌细胞HSP70的表达。结果 :NDV在体外可使BGC 82 3胃癌细胞形成明显的细胞病变效应及生长抑制作用 ,且这种抑制作用与肿瘤细胞被NDV感染后HSP70表达增加呈正相关。结论 :NDV的抗BGC 82 3胃癌细胞活性显著 ,其杀伤机制之一为通过感染而诱导BGC 82 3产生过多的HSP70。     

右旋柠烯诱导人胃癌细胞凋亡

目的　探讨右旋柠烯 (D limonene)诱导人胃癌细胞株凋亡作用的机制。方法　采用噻唑蓝 (MTT)比色法、电镜、流式细胞术以及免疫细胞化学法 ,对p5 3和bcl 2在肿瘤细胞内的表达以及细胞凋亡的定性与定量指标进行检测。结果　经D limonene处理的BGC 82 3细胞出现核固缩 ,染色质边集 ,凋亡小体形成。凋亡细胞发生率与药物浓度呈正相关 ,即药物浓度为 0 .2 5 μg/ml(4 8h) ,凋亡细胞的发生率从 (2 .71± 0 .78) %上升至 (31.6 2± 7.81) %。经D limonene处理的BGC 82 3细胞内p5 3蛋白表达较对照组明显增加 ,bcl 2蛋白表达较对照组降低。结论　D limonene对人胃癌细胞的杀伤主要是通过诱导细胞凋亡 ,升提p5 3及降低bcl 2的蛋白表达为其诱发肿瘤细胞凋亡的机制之一。     

菝葜皂苷元对胃癌BGC-823细胞增殖、凋亡影响的实验研究

目的：观察不同浓度菝葜皂苷元对体外培养胃癌BGC-823细胞增殖、凋亡的影响.方法：BGC-823细胞经不同浓度菝葜皂苷元处理后,采用MTT法检测细胞的生长活性,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果：随菝葜皂苷元浓度的增加,胃癌BGC-823细胞增殖抑制率、凋亡率亦升高.结论：菝葜皂苷元对胃癌BGC-823细胞的增殖有抑制作用,并可诱导细胞凋亡.