液体芯片-飞行时间质谱对结膜松弛症患者泪液蛋白质的分析

目的应用液体芯片-飞行时间质谱系统分析结膜松弛症患者的泪液蛋白质表达谱,寻找潜在具有结膜松弛症诊断意义的生物学标志物。方法收集10例结膜松弛症患者和9例正常对照的泪液,利用毛细管法每眼收集15μL泪液。经ClinProt磁珠纯化、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）分析及ClinProTools生物信息学软件研究其泪液蛋白表达谱,比较2组人群泪液蛋白质谱表达的差异。结果 2组共检测发现了77个蛋白质峰,其中13个蛋白质峰差异有统计学意义（P〈0.05）。其中质荷比（m/z）为1 632.48和3 401.87者为差异蛋白质,能较好地鉴别结膜松弛症组和正常对照组。结论液体芯片-飞行时间质谱系统可高效、精确地筛查泪液蛋白质。结膜松弛症组与正常对照组泪液蛋白存在差异,值得进一步研究,可能对发现结膜松弛症的发病机制和寻求有效的防治手段有指导作用。     

结膜松弛症患者泪液蛋白质组学研究

目的 比较结膜松弛症和正常人泪液中蛋白质成分的差异,从而探讨结膜松弛症的发病机制.方法 病例对照研究.收集结膜松弛症组和正常对照组各8例(8只眼),采用毛细管从每只眼收集15ul泪液,应用shotgun方法 检测泪液蛋白质,分别行溶液内酶解、反向高效液相色谱(RP-HPLC)分离、电喷雾离子化质谱(ESI-MS/MS)行质谱鉴定后生物信息分析.结果 结膜松弛症组泪液中共有蛋白质356个,正常人泪液中共有蛋白质352个,两组中有119个蛋白质相同.对泪液中蛋白质按基因本体注释(GOA)分类后,发现结膜松弛症组中出现的部分调节凋亡相关蛋白质、凋亡相关蛋白质及炎性反应相关蛋白质在正常对照组中缺失,并且在结膜松弛症泪液中发现了防御素.结论 shotgun方法 可有效分离和分析泪液蛋白质,结膜松弛症患者泪液中的特异性成分提示结膜松弛症可能与细胞凋亡和炎性反应有关.(中华眼科杂志,2009,45:135-140)     

结膜松弛症泪液蛋白质肽质量指纹谱分析

目的 分析结膜松弛症泪液蛋白表达谱的变化.方法 收集22例结膜松弛症患者和13例正常对照组的泪液样本,毛细管从每眼收集15μL泪液,采用Zip Tip C18柱浓缩和纯化泪液样本,利用基质辅助的激光解吸质谱进行线性模式和肽质量指纹谱(PMF)检测,并对PMF图谱数据进行多变量数据统计分析,比较结膜松弛症组和正常对照组的泪液PMF的差异.结果 2组泪液的质谱检测峰在数量上差异无统计学意义(P>0.05),主成分分析结合偏最小二乘法分析显示结膜松弛症组泪液蛋白质表达与正常对照组比较有差异,结膜松弛症组泪液蛋白质表现为"离群"样本,且离群分散度较大的样本为结膜松弛症Ⅳ级的患者.结论 应用Zip Tip C18柱分离联合基质辅助的激光解吸质谱技术可有效筛查泪液蛋白质.对PMF图谱进行多变量数据统计分析,可以观察到结膜松弛症组与正常对照组泪液蛋白质存在差异,并可为结膜松弛症,临床诊断、疾病发生发展的机理及治疗提供参考.     

凋亡调节蛋白Bcl-2 相关死亡因子Bad在正常人眼视神经组织中的表达

目的 探讨促凋亡蛋白Bcl-2相关死亡因子Bad在正常人眼视神经组织中的表达及其意义。方法 采用免疫组织化学SP法观察8例正常人眼视神经组织中Bad蛋白的表达情况。结果 Bad蛋白表达在正常人眼视神经髓鞘部位，在无髓鞘组织即筛板前视神经及束间隔处未见表达。结论 Bad蛋白可能参与维持正常人视神经组织的生理过程。     

干眼颌下腺移植术后泪液蛋白分析

目的分析自体颌下腺游离移植治疗严重干眼术后分泌的泪液蛋白成分及其与正常泪液的异同。方法收集自体颌下腺游离移植成功后的8例患者的泪液,测定其总蛋白含量及淀粉酶、表皮生长因子(EGF)、分泌性免疫球蛋白A(SIgA)等主要蛋白成分的含量,同时通过不连续的SDS-PAGE蛋白电泳观察其形成的蛋白电泳条带,并与正常人的泪液对比。结果自体颌下腺游离移植后分泌的泪液总蛋白含量明显低于正常泪液(P<0.05),SIgA含量接近正常泪液(P>0.05),EGF含量高于正常泪液(P<0.05),而其所含的淀粉酶浓度则远高于正常泪液(P<0.05)。SDS-PAGE蛋白电泳显示颌下腺移植术后分泌的泪液与正常泪液具有相似的电泳条带及相近的蛋白成分。结论自体颌下腺游离移植术后分泌的泪液具有与正常泪液相近的蛋白成分,但其总蛋白含量较低,淀粉酶含量较高。     

功能性泪溢患者泪道泵功能及泪液蛋白成分的初步研究

目的：分析功能性泪溢患者泪道泵功能及泪液蛋白成分与正常泪液的异同。
　　方法：功能性泪溢患者100例200眼,正常对照20例40眼。观察指标包括 Schirmer I试验、按压泪囊部时Schirmer I试验、泪膜破裂时间,同时采用ELISA测定功能性泪溢患者泪液主要蛋白含量,并与正常人的泪液对比。
　　结果：正常受试者按压泪囊部时与开放泪囊部时的Schirmer I测试值比较,差异有显著意义( t=-4.008, P<0.05),而功能性泪溢患者在不同时间点的Schirmer I试验测试值比较,差异无显著意义(t=-0.811,P>0.05)。功能性泪溢患者泪膜破裂时间缩短( t=-5.382, P<0.01),功能性泪溢组与对照组泪液蛋白含量比较,溶菌酶、白蛋白浓度降低(P<0.05),乳铁蛋白、分泌型免疫球蛋白A含量无明显差异(P>0.05)。
　　结论：泪道泵功能破坏在功能性泪溢中存在重要影响,功能性溢泪患者泪液蛋白质发生变化。     

比较蛋白质组学技术筛选葡萄膜黑色素瘤相关蛋白

目的 应用比较蛋白质组学技术,分析鉴定葡萄膜黑色素瘤与正常人葡萄膜差异蛋白质,筛选出葡萄膜黑色素瘤相关蛋白.设计实验性研究.研究对象手术中切除的人葡萄膜黑色素瘤标本4例以及正常人捐献眼葡萄膜标本4例.方法 研磨组织提取蛋白质后,应用双向凝胶电泳进行总蛋白分离,考马斯亮兰染色,Image Master 5.0软件分析蛋白胶图,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定部分差异蛋白质点,通过MASCOT软件在NCBI数据库中检索蛋白质信息.主要指标差异蛋白质.结果 建立了葡萄膜黑色素瘤和正常人葡萄膜组织的双向凝胶电泳图谱,鉴定了葡萄膜黑色素瘤与正常人葡萄膜之间差异表达的蛋白质30种,其中24种蛋白只在葡萄膜黑色素瘤中出现.葡萄膜黑色素瘤中表达上调的蛋白5种,表达下调的蛋白1种.这些差异蛋白可能执行新陈代谢酶、信号转导调节、细胞骨架、免疫调节等生物学功能.结论 通过比较蛋白质组学初步筛选出与葡萄膜黑色素瘤发生演进相关的蛋白质.需要进一步验证蛋白的定位及功能.(眼科,2008,17:230-234)     

2型糖尿病患者泪液分泌及泪膜功能的初步研究

目的 探讨2型糖尿病患者泪液分泌及泪膜功能。方法 非增生型糖尿病视网膜病变(NPDR)患者25例(50眼)；增生型糖尿病视网膜病变(PDR)患者25例(50眼)；正常对照25例(50眼)。观察指标包括泪膜破裂时间、孟加拉玫瑰红染色及SchirmerI试验。NPDR组、PDR组及对照组各10例(10眼)测定泪液总蛋白和泪液主要蛋白质含量。结果 糖尿病组分别与对照组比较，Schirmer I测定值降低，泪膜破裂时间缩短，孟加拉玫瑰红染色阳性率增加，PDR患者尤其显著。泪液总蛋白含量三组间两两比较差异均无显著性。糖尿病组分别与对照组比较，溶菌酶、乳铁蛋白及泪液特异性前白蛋白浓度降低，PDR患者尤其显著。结论 糖尿病患者易发生泪液分泌及泪膜功能异常，PDR患者泪膜功能低下更加明显。泪液SDS-PAGE有助于发现糖尿病患者泪液蛋白质的变化。     

应用二维电泳法对视网膜色素上皮细胞光损伤后蛋白质组学的初步研究

目的 应用二维电泳法观察光损伤后视网膜色素上皮细胞蛋白质组的表达。 方法 运用冷白光以（2200±300）Lx光照人视网膜色素上皮细胞(ARPE 19)6 h，建立光损伤模型；提取细胞可溶性蛋白并通过二维电泳分离和凝胶图像分析，寻找光损伤细胞的蛋白质谱变化。 结果 软件分析显示全细胞可溶性蛋白在图谱上出现（390±10）个清晰斑点,11个蛋白斑点有明显表达差异。光损伤细胞内8种蛋白表达上调,1种下调，2种蛋白表达缺失。 讨论 二维电泳实验能够找出光损伤RPE细胞与正常细胞的蛋白表达差异，为进一步研究在此改变中发挥重要作用的蛋白质奠定基础。     

糖尿病2型患者眼表及泪液蛋白初步分析

目的:分析糖尿病2型患者眼表及泪液蛋白成分与正常泪液的异同。方法:糖尿病2型患者46例92眼;正常对照39例(78眼)。观察指标包括角膜知觉、泪膜破裂时间、角膜荧光素染色、SchirmerI试验及结膜印记细胞学检查,将糖尿病患者按病程DM≤5a,5a10a分为3组并分别测定各组泪液总蛋白和泪液主要蛋白质含量,同时通过不连续的SDS-PAGE蛋白电泳观察其形成的蛋白电泳条带,并与正常人的泪液对比。结果:糖尿病组分别与对照组比较,角膜知觉减退(Z=-2.488,P<0.05),SchirmerI测定值降低(t=-3.854,P<0.05),泪膜破裂时间缩短(t=-7.212,P<0.05),角膜荧光素染色阳性率增加(Z=-2.161,P<0.05),杯状细胞密度下降(t=-6.498,P<0.01),结膜鳞状化生程度增加(Z=-3.022,P<0.05),泪液总蛋白两组间比较差异无显著性,但糖尿病组与对照组比较,乳铁蛋白、溶菌酶及分泌性免疫球蛋白IgA浓度降低。结论:糖尿病患者易发生眼表异常,泪液SDS-PAGE有助于发现糖尿病患者泪液蛋白质的变化。