RGD肽对体外培养的人晶状体上皮细胞粘附与增殖的影响

目的:研究RGD肽对体外培养的人晶状体上皮细胞粘附与增殖的影响,为RGD肽防治晶状体后囊混浊提供理论依据。方法:将在体外分离培养的人晶状体上皮细胞中分别加入系列浓度的RGD肽(50,125,250,500,1000mg/L)作为实验组,不含RGD肽的培养基作为对照组。以2×107个/L密度接种到预孵化含有纤维连接蛋白和I型胶原蛋白的96孔培养板中,于1h后应用MTT法检测RGD肽对细胞粘附的影响。细胞接种于培养板,加入系列浓度RGD肽(125,250,500,1000,2000mg/L)后的24,48,72h检测对细胞增殖的影响。结果:RGD肽对人晶状体上皮细胞粘附的抑制呈明显的剂量依赖性,随着其浓度增大,细胞粘附数就越低,500mg/L时,抑制作用最强(P<0.05);RGD肽对人晶状体上皮细胞增殖的抑制呈明显的时间剂量依赖性,在48h,1000mg/LRGD条件下,对细胞的抑制作用最强。结论:RGD肽可抑制晶状体上皮细胞的粘附与增殖,具有潜在的防治后囊混浊的作用。     

染料木黄酮对体外人LECs增生的抑制作用

目的研究染料木黄酮对人晶状体上皮细胞（LECs）增生的影响。方法通过集落实验和四唑溴盐（MTT）比色法观察不同质量浓度染料木黄酮作用12、24、48、72h后对LECs增生的影响，流式细胞仪检测其对人LECs周期的影响及凋亡的诱导作用。结果12．5、25、50、75mg／L组对细胞集落形成均有抑制作用（P〈0．05），随质量浓度增加，集落形成率减少。作用12h、24h组质量浓度75mg／L、48h组质量浓度12．5、25、50、75mg／L以及72h组各质量浓度对LECs的抑制作用与对照组相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。流式细胞仪结果显示随质量浓度的增大，S期细胞明显增多。作用12h、24h诱导凋亡不明显；48h组12．5mg／L组出现凋亡峰，50mg／L组凋亡明显；72h组6．25mg／L组出现凋亡，随质量浓度的增加凋亡细胞数量增加。结论不同质量浓度的染料木黄酮可以抑制LECs的增生，有剂量效应关系和时间效应关系；作用一定时间，达到一定浓度可诱导人LECs凋亡。     

多西他赛对人晶状体上皮细胞的抑制作用

背景一些已知的抑制人晶状体上皮细胞（LECs）增生的药物由于严重的不良反应限制了其临床应用，寻找高效、安全的抑制LECs增生的药物是防治晶状体后囊膜混浊（PCO）的研究热点。目的探讨多西他赛对LECs增生的影响，并与盐酸表柔比星、盐酸吡柔比星和雷替曲塞的作用进行比较。方法对永生系人LECs细胞株SRAOI／04进行培养及传代，将不同浓度的多西他赛、盐酸表柔比星、盐酸吡柔比星和雷替曲塞加入LECs中分别作用24、48、72h，以MTT法评价不同浓度的多两他赛对人LECs增牛的抑制作用并与其他药物进行比较。用流式细胞术分析不同浓度的多西他赛作用48h后对LECs细胞周期的影响，采片jAnnexinV-FITC／PI标记法和蛋白印迹分析法评估不同浓度的多西他赛作用48h后LECs细胞bcl-2蛋白的表达和凋亡情况。结果8～519pmol／L多西他赛组LECs的增生率为100％，LECs形态正常，而66nmol／L多西他赛组干预48h和72h后LECs的增生率分别为34．7％和27．4％，LECs形态出现异常。23．22～523．56μmol／L雷替曲塞对人LECs的增生无明显抑制作用。多西他赛作用48h和72h时，半数抑制量（IC50）明显低于盐酸吡柔比星和盐酸表柔比星。多西他赛作用LECs48h后，随着多西他赛浓度的增高，处于G2／M期的LECs百分数明显增加，各组的总体差异有统计学意义（F=2633．05，P〈0．01）；8．3nmol／L和266nmol／L多西他赛浓度组干预48h后，LECs的凋亡率分别为22．4％和27．9％，较细胞对照组升高，差异均有统计学意义（χ2=20．00，P〈0．01；χ2=42．68，P〈0．01）。Westernblot检测表明不同浓度多西他赛干预后bcl-2蛋白在LECs中的表达条带均较对照组淡，8．3nmol／L多西他赛组bcl-2蛋白表达降低更为明显。结论多西他赛、盐酸表柔比星和盐酸吡柔比星均可抑制人LECs的增生，而雷替曲塞对人LECs的增生无明显的抑制作用。多西他赛对LECs增生的抑制作用强于其他药物，其作用强度呈浓度和时间依赖性。     

LY294002对bFGF诱导的兔晶状体上皮细胞增生的影响

目的探讨LY294002对碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）诱导的兔晶状体上皮细胞（LECs）增生的影响。方法兔眼LECs经培养后,将10^-8、10^-7、10^-6、10^-5、10^-4mol／LLY294002分别加入LECs培养基中培养48h为LY294002组。另将10^-8、10^-7、10^-6、10^-5、10^-4mol／LLY294002＋bFGF（10mg／L）加入培养基中培养LECs48h。bFGF（10mg／L）诱导LECs增生48h为阳性对照组,空白对照组仅用无血清DMEM。MTT比色法测定吸光度（A）值,分析各组药物对LECs增生的抑制率,流式细胞仪检测各细胞周期的LECs百分率。结果bFGF组与空白对照组相比A值升高,LY294002组随着药物浓度的增加,4值明显降低,差异有统计学意义（P〈0．01）。bFGF＋LY294002组与LY294002组相比,A值下降更明显,差异有统计学意义（P〈0．01）。流式细胞仪分析LY294002对LECs的抑制作用与MTT呈现相同趋势,随着LY294002浓度的增加,处于G0／G1期的LECs逐渐增加（P〈0．01）,而S期和G2／M期逐渐减少。结论LY294002可明显抑制体外培养的bFGF诱导的兔LECs的增生,并呈剂量依赖关系,为临床筛选防治后发性白内障的药物提供依据。     

PI3K抑制剂LY294002对人晶状体上皮细胞中S期激酶相关蛋白2表达的影响

目的探讨PI3K抑制剂LY294002对体外培养的人晶状体上皮细胞（LECs）增生和细胞周期S期激酶相关蛋白2（Skp2）表达的影响。方法 MTT比色法检测25μmol/L的LY294002处理人LECs细胞株SRA01/04后12h和24h细胞的增生情况;流式细胞仪检测LY294002作用24h后细胞周期的分布情况;Westernblot和real-timePCR法分别测定LY294002处理24h后细胞中Skp2及其mRNA的表达情况。结果 25μmol/L的LY294002作用于SRA01/04细胞0～24h,SRA01/04细胞的增生受抑制,且作用24h时对SRA01/04细胞的抑制作用最明显。LY294002组中处于G1期和S期的细胞占总细胞数的百分率分别为（66.15±2.63）%和（27.34±6.58）%,对照组为（56.73±1.35）%和（37.32±5.54）%,LY294002组细胞Skp2及其mRNA的表达量明显减少。结论 PI3K抑制剂LY294002可抑制人LECs的增生,使部分细胞停滞于细胞周期的G1期,LY294002抑制人LECs的增生可能与Skp2的表达下调有关。     

核心蛋白多糖对兔晶状体上皮细胞增生的抑制作用

背景 研究发现,白内障囊外摘出术后组织修复反应可诱导房水中活性转化生长因子β(TGF-β)的增加,残留的晶状体上皮细胞(LECs)移行、分化,细胞外基质沉积,引起上皮-间质转化,导致后囊膜混浊(PCO)的发生.寻求有效的抑制LECs增生的药物对于临床上防治PCO的发生具有重要意义. 目的 探讨核心蛋白多糖( decorin)对兔LECs增生的抑制作用及其剂量-效应与时间-效应的关系. 方法 兔LECs细胞株进行培养和传代,将处于指数生长期的细胞以8×106个/L密度接种于96孔板,将0.1、1.0、10.0 mg/Ldecorin分别加入培养基中培养24、48、72 h,加入体积分数0.1％ DMSO培养的细胞为阳性对照组,常规培养基培养的细胞为空白对照组.MTT比色法分别测定不同质量浓度的decorin作用于LECs不同时间后的细胞生长抑制率;采用流式细胞技术测定各组细胞的细胞周期,用ELISA法检测各组培养液上清中TGF-β的水平,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定TGF-βmRNA在LECs中的表达,免疫细胞化学法观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.结果 ELISA检测结果表明,各组培养基上清液中TGF-β表达量的差异有统计学意义(F=39.24,P=0.03),不同质量浓度组TGF-β水平均明显低于空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.01),1.0 mg/L、10.0 mg/L decorin组TGF-β水平均明显低于0.1 mg/L decorin组(P＜0.05).MTT比色法结果显示,≥1.0 mg/L decorin组LECs增生的抑制率明显高于空白对照组,各质量浓度decorin组药物作用48 h和72 h后LECs增生的抑制率明显高于24 h的值,药物作用72 h后LECs增生的抑制率明显高于48 h的值,差异均有统计学意义(P＜0.05),各质量浓度decorin组G0/G1期LECs所占比例均较空白对照组明显增加,差异均有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR检测显示,TGF-β mRNA的表达随着decorin质量浓度的升高而降低.免疫组织化学染色表明,10.0 mg/L decorin组α-SMA在LECs中的表达明显弱于空白对照组. 结论 Decorin可以抑制LECs的增生,也可以诱导LECs凋亡,其效应呈明显的剂量和时间依赖性,有望成为最具潜力的防治PCO的药物之一.     

ILK siRNA对高浓度葡萄糖诱导的人LECs增生和上皮向间质转化的抑制作用

目的探讨整合素连接激酶（ILK）对高浓度葡萄糖诱导的人晶状体上皮细胞（LECs）增生和转化的作用。方法将体外培养的人LECs系SRA01/04细胞分别培养在含葡萄糖5.5mmol/L（正常对照组）和30.5mmol/L（高糖组）的培养液中,用RT-PCR检测培养0、6、24h后ILK mRNA的表达;用ILK siRNA脂质体转染细胞,转染6h后,加入2组培养液处理24h,检测ILK、细胞增生核抗原（PCNA）、LECs转化指标α-SMA和FN在mRNA水平的表达。结果高糖组培养6h和24h,SRA01/04细胞ILK mRNA是正常对照组的2.48倍和2.32倍（P〈0.01）,刺激后24h,SRA01/04细胞PCNA、α-SMA、FN的mRNA表达分别是正常对照组的1.75、1.96和1.75倍（P〈0.01）。ILK siRNA干扰后,正常对照组ILK的表达是非转染细胞的30%,高糖组转染细胞ILK mRNA水平（P〈0.01）是非转染细胞的21%（P〈0.01）,转染细胞PCNA、α-SMA和FN的表达分别是非转染细胞的29%、33%和39%（P〈0.01）。结论高浓度葡萄糖可诱导LECs增生、上皮向间质转化及ILK表达上调,抑制ILK的高表达能阻止这些过程。     

丝裂素蛋白激活激酶信号途径介导水杨酸钠诱导的人晶状体上皮细胞中HSP27表达

背景热休克蛋白（HSPs）是生物体在各种应激情况下产生的高度保守蛋白,HSP27与人晶状体中α-晶状体蛋白在氨基酸和基因水平上高度同源,其结构和表达的异常与白内障的形成密切相关。此研究先前的研究证实水杨酸钠对H2O2造成的人品状体上皮细胞（LECs）损伤具有保护作用。目的探讨水杨酸钠诱导的人LECs中HSP27的表达及与丝裂素蛋白激活激酶（MAPK）信号途径的关系。方法人LECs—B3系在含质量分数15％胎牛血清的DMEM中进行培养,将不同浓度的水杨酸钠（0～55mmol／L）加入培养基中刺激人LECs不同时间,然后去除刺激再分别培养。在阻断实验中,分别给予P38MAPK、ERK1／2及JNK／SAPK信号通路特异性阻断剂SB20350（10μmol／L）、PD98059（20μmol／L）及SP600125（10μmol／L）预孵育细胞1h,在给予水杨酸钠刺激后检测相关指标,采用Westernblot法检测各种处理情况下人LECs中HSP27的表达,用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测HSP27mRNA的表达;免疫组织化学法检测HSP27蛋白在人LECs中的表达。结果正常人LECs仅有微弱的HSP27表达,35～55mmol／L水杨酸钠刺激人LECs1h去除刺激再培养6h后可使HSP27表达显著增加,与正常对照组比较差异有统计学意义（F=509．953,P〈0．01）;55mmol／L水杨酸钠刺激人LECsI～5h不能诱导HSP27的表达（F=2．119,P〉0．05）,而去除刺激再分别培养6h后可诱导HSP27表达,差异有统计学意义（F：452．534,P〈0．01）;55mmol／L水杨酸钠刺激人LECs1h后去除刺激再培养3h后HSP27表达明显增加,6h达到高峰,直至24h恢复到基础水平,差异有统计学意义（F=419．234,P〈0．01）。水杨酸钠刺激30min时磷酸化p38MAPK表达增加,1h表达显著,各组总体差异有统计学意义（F=865．680,P〈0．01）;磷酸化ERK1／2在水杨酸钠刺激时间内未见升高;去除水杨酸钠刺激再培养1h后开始增加,6h达到高峰,各时间点总体差异有统计学意义（F=388．840,P〈0．01）;水杨酸钠刺激1h及去除刺激再培养过程中未见到磷酸化JNK的表达;加入P38MAPK、ERK1／2特异性阻断剂预处理人LECs1h后可使水杨酸钠诱导的HSP27表达受到显著抑制,加入JNK特异性阻断剂未见对水杨酸钠诱导的HSP27表达产生影响。结论水杨酸钠可诱导人LECs中HSP27的表达,P38MAPK和ERK1／2信号途径促进水杨酸钠诱导的HSP27在人LECs中的表达。     

MG132对人晶状体上皮细胞增生、移行和上皮-间充质转化的抑制作用

背景 晶状体后囊膜混浊（PCO）发生的主要病理机制是白内障术后后囊膜残留的晶状体上皮细胞（LECs）的增生、移行和分化,研究发现蛋白酶体抑制剂MG132可抑制牛LECs的增生,但对人LECs的生物学影响尚不明确. 目的 研究蛋白酶体抑制剂MG132对体外培养的人LECs增生、移行和上皮-间充质转化（EMT）的抑制作用.方法 收集白内障超声乳化摘出术中连续环形撕囊的囊膜片用组织块培养法进行原代培养并传代,取第2代或第3代LECs进行常规消化,调整细胞密度至5×105个/ml,以200 μl/孔接种至96孔板常规培养24 h,分别加入成纤维细胞生长因子-2（FGF-2）、MG132或MG132＋FGF-2,以基础培养液培养的细胞作为对照组,培养24 h后用MTT法测定吸光度（A490）值,计算LECs的增生率.在移行能力测定中,应用传代的人LECs分别加入FGF-2、MG132或MG132＋FGF-2,以基础培养液培养的细胞作为对照组,用无菌棉棒在细胞层中划出细胞裸露区,继续培养24 h,计数移行至裸露区的细胞,评估细胞移行率.在传代的人LECs培养液中分别加入转化生长因子-β2（TGF-β2）、MG132或MG132＋TGF-β2,以基础培养液培养的细胞作为对照组,培养24 h后用免疫组织化学法检测细胞质中纤维连接蛋白（FN）的表达. 结果 对照组、FGF-2组、MG132组和MG132＋FGF-2组的LECs增生值（A490）分别为0.582±0.020、0.723 ±0.010、0.434±0.011和0.465±0.008,总体差异有统计学意义（F=110.482,P＜0.01）,FGF-2组LECs增生值明显高于对照组,MG132组和MG132＋FGF-2组的LECs增生值明显低于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.对照组、FGF-2组、MG132组和MG132＋FGF-2组LECs移行数目分别为8.67±1.08、11.58±1.59、2.67±0.09和2.75±0.09,差异有统计学意义（F=34.301,P＜0.01）,其中FGF-2组LECs的移行数明显多于对照组,而MG132组和MG132＋FGF-2组LECs移行数明显少于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.与对照组比较,MG132组LECs的增生率和移行率分别降低25.4％和75.0％,FGF-2组LECs增生率和移行率分别增加24.2％和33.6％,MG132＋FGF-2组LECs的增生率和移行率分别下降20.1％和68.3％.对照组、TGF-β2组、MG132组和MG132＋TGF-β2组LECs中FN表达量（A值）分别为1.242±0.023、2.329±0.113、1.043±0.021和1.163±0.018,差异有统计学意义（F=113.752,P＜0.01）,TGF-β2组LECs中FN表达量明显高于对照组,而MG132组和MG132＋TGF-β2组明显低于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.TGF-β2可以诱导人LECs转分化,FN表达增强;MG132与TGF-β2同时存在时可以减弱人LECs转分化,FN表达下降. 结论 MG132抑制体外培养的人LECs的增生与移行,并可阻止TGF-β2诱导的人LECs的EMT.     

表皮生长因子对氧化损伤的人眼Muller细胞增生及迁移的保护作用

背景目前认为氧化损伤机制在年龄相关性黄斑变性（AMD）的发病中起着重要作用,主要与血一视网膜屏障的破坏有关,而Mailer细胞是稳定血一视网膜内屏障功能的主要细胞成分。研究表明,表皮生长因子（EGF）可促进实验动物视网膜Muller细胞的增生和迁移,但其对人Muller细胞的作用研究较少。目的探讨EGF对体外氧化损伤的人眼Muller细胞增生和迁移的影响及其作用机制。方法将人眼Maller细胞系MIO—M1细胞进行培养并用胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、第Ⅷ因子、a-平滑肌肌动蛋白（Ot—SMA）、人角蛋白及S-100免疫组织化学法进行鉴定。在无血清DMEM中加入不同质量浓度（0、1、10、30、100mg／L）EGF,用5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）标记法测定MIO—M1细胞的阳性率。根据干预方式的不同将培养细胞分为EGF组、H2O2损伤组、EGF＋H2O2组、葡萄糖氧化酶（GO）组、GO＋EGF组、EGF＋LY294002＋H2O2组,采用MTT比色法测定各组培养细胞的增生情况（A590）。对培养的人眼Muller细胞采用划痕实验观察H2O2损伤条件下0、1、10、30、100mg／LEGF作用24、48、72h后对Miiller细胞增生、迁移的影响;采用Westernblot技术检测EGF对体外不同培养条件下MUller细胞Akt信号传导通路的作用。结果正常培养条件下10、30、100mg／LEGF作用后Muller细胞的增生率分别为28．0％、32．9％、39．O％,明显高于0mg／L、1mg／LEGF组（24．5％、26．2％）。在H2O2和GO分别培养细胞的条件下,高质量浓度的EGF组Muller细胞的吸光度（A570）值明显大于低质量浓度组,各组总体差异有统计学意义（F=23．582,P=0．000）。与EGF＋H2O2组比较,EGF＋LY294002＋H2O2组Muller细胞的吸光度（A570）值明显下降。10mg／LEGF促进Muller细胞迁移的作用最强。0．08mmol／L H2O2作用Mfiller细胞后Akt信号通路激活,提前2h加入外源性EGF后,100mg／LEGF对抗氧化所致Mtiller细胞的损伤作用最明显,同时提前2h加入外源性EGF和Akt信号通路阻断剂LY294002后,Akt信号传导通路的保护作用减弱。结论EGF对体外培养的Muiler细胞具有促进增生及迁移的作用,10mg／LEGF促进Muller细胞迁移作用最强。100mg／L外源性EGF抗Muller细胞氧化损伤作用最强,其作用机制是激活Akt信号传导通路。     

C-Met抑制剂对人晶状体上皮细胞增殖的抑制作用

目的:探讨 c-M et抑制剂 K252a 对人晶状体上皮细胞增殖的抑制作用。方法 : 取原代培养人晶状体上皮细胞加入 H G F、H G F K252a,以 D M EM 为对照,应用四唑盐法(M TT法)观察 K252a 对晶状体上皮细胞生长的抑制作用,蛋白质免疫印迹(W estern blot)方法检测 K252a 对 Bcl-2,C aspase-3 蛋白表达的影响。结果:H G F (50nm ol/L) K252a(30nm ol/L)组与对照组光密度值无显著差异 (P>0.05),Bcl-2 和 C aspase-3 的表达水平变化都不明显。结论:c-M et抑制剂 K252a 对人晶状体上皮细胞增殖有抑制作用。     

雷帕霉素对人视网膜色素上皮细胞增生和凋亡的影响

背景雷帕霉素（RAPA）是哺乳动物RAPA靶蛋白（mTOR）特异性抑制剂,能有效抑制晶状体上皮细胞（LECs）及多种肿瘤细胞增生并具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用,研究其对视网膜色素上皮（RPE）细胞是否具有类似作用对临床上预防和治疗增生性玻璃体视网膜病变（PVR）具有重要意义。目的研究RAPA对体外培养的人RPE细胞增生和凋亡的影响。方法对人RPE细胞（D407细胞株）进行体外传代培养,按照培养基中加入药物的不同将培养的细胞分为9组,空白对照组进行常规培养;二甲基亚砜（DMSO）对照组在培养基中加入质量分数0．1％。DMSO;实验各组将5、10、20、40、80、160、320nmol／LRAPA分别加入培养基中并分别培养12、24、48h。应用噻唑蓝（MTT）法检测各组吸光度（A490）值并计算各组人RPE细胞增生的抑制率,应用Hoechst染色法检测各组人RPE细胞的凋亡率,评价上述各浓度RAPA作用不同时间后对人RPE细胞增生和凋亡的影响。结果不同浓度RAPA组对人RPE细胞的抑制率随浓度的增高而明显升高,差异有统计学意义（F=484．451,P〈0．01）,20～320nmol／LRAPA组在各时间点所测细胞增生抑制率均明显高于DMSO溶剂对照组,差异均有统计学意义（P〈0．01）。RAPA对细胞增生的抑制率随作用时间的延长明显增加,差异有统计学意义（F=232．262,P〈0．01）,各浓度的RAPA作用24h和48h后细胞增生的抑制率均明显高于12h,差异均有统计学意义（P〈0．05）。与空白对照组及溶剂对照组比较,10nmol／LRAPA作用12、24、48h均有诱导细胞凋亡的作用,差异均有统计学意义（P〈0．05）;20～320nmol／LRAPA组细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义（P〈0．叭）。各浓度RAPA组随作用时间的延长人RPE细胞的凋亡率明显增加（F=625．584,P〈0．01）。Hoechst33258染色可见凋亡细胞核碎裂并呈块状致密浓染,染色质固缩。结论RAPA以浓度和时间依赖的方式抑制体外培养的人RPE细胞增生并诱导其凋亡。     

In vitro bovine and human lens epithelial cell culture studies on inhibition of posterior capsule opacification using a cyclic RGD peptide

BACKGROUND: RGD peptides competitively inihibit adhesion molecules of the lens epithelial cells (LEC). The purpose of our study was to investigate whether this peptide is capable of detaching adherent cells and preventing posterior capsule opacification (PCO). METHODS: Cultures of bovine and human LECs on culture dishes and discs of bovine anterior lens capsules were used. The inhibition of adhesion and the detachment of confluent LEC layers by the cyclic RGD peptide cRGDdFV were studied (incubation time was 3 days and 1 h and concentrations of 10(-4) and 10(-3) M were used). RESULTS: A dose-dependent inhibition of adhesion (48% and 42%, respectively) was obtained. There was a significant difference between the control peptide group and cRGDdFV (p < 0.0001). Cell detachment from lens capsules was not achieved but complete detachment from the culture dish occurred after 37 min. CONCLUSIONS: Short-term incubation of LECs by cRGDdFV did not lead to a sufficient inhibition of adhesion in vitro. A detachment of adherent LECs by cRGDdFV was not achieved.     

Modified BIGH3 with an RGDRGD motif promotes human corneal epithelial cell adhesion and migration in vitro

PURPOSE: BIGH3 protein plays an important role in mediating human corneal epithelial (HCE) cell adhesion and migration. The aim of this study was to investigate the effects of native and modified BIGH3 protein containing an Arg-Gly-Asp-Arg-Gly-Asp (RGDRGD) motif on the adhesion and migration of HCE cells. METHODS: A modified human BIGH3 gene containing an RGDRGD motif was obtained by rapid site-directed mutagenesis. Recombinant human native and modified BIGH3 proteins were then obtained and purified. The effects of the native and the modified version on the adhesion and migration of HCE cells were examined in the presence or absence of anti-alpha3beta1 antibody or anti-BIGH3 antibody or RGD peptide in vitro. RESULTS: Recombinant native and modified BIGH3 proteins were successfully obtained and significantly promoted the adhesion and migration of human HCE cells in vitro, and the construct with the RGDRGD motif was more effective. The enhanced adhesion and migration were blocked by anti-alpha3beta1antibody or anti-BIGH3 antibody or RGD peptide. CONCLUSION: BIGH3 promotes HCE cell adhesion and migration; modified RGDRGD-BIGH3 was more effective than native BIGH, and this is mediated by the Arg-Gly-Asp (RGD) motif and alpha3beta1integrin in a RGD-dependent manner.     

重组水蛭素Ⅲ对半乳糖损伤的人晶状体上皮细胞凋亡相关基因表达的影响

背景重组水蛭素Ⅲ（rHV3）对半乳糖损伤的人晶状体上皮细胞（LECs）有较好的保护作用,但其分子机制尚不清楚。目的探讨rHV3对半乳糖损伤的人LECs凋亡相关基因表达的影响。方法用本课题组构建的表达重组水蛭素工程菌,参照Markwardt的凝血酶滴定方法进行水蛭素生物学活性的测定。将培养的人LECs分为3组,培养于含质量分数10％胎牛血清（FBS）的D／F12培养液作为正常组、用含125×10^-3mol／LD一半乳糖的D／F12培养液建立人LECs株SRAOI／04损伤模型为模型组,用2000U／ml（商品单位）rHV3加入部分损伤模型培养液中进行干预作为rHV3组。采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测各组人LECs内凋亡相关基因的表达,包括醛糖还原酶（AR）、bcl2、bax、p53基因mRNA的表达水平,各目的基因表达丰度用目的基因的吸光度（A）值与3一磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）A值的比值表达。结果与正常组比较,模型组人LECs中ARmRNA／GAPDHmRNA、baxmRNA／GAPDHmRNA和p53mRNA／GAPDHmRNA值明显高于对照组,差异均有统计学意义（t=3．90E一06、t=8．44E一04、t=5．15E一08,P〈0．叭）,而水蛭素干预组人LECs中ARmRNA／GAPDHmRNA、baxmRNA／GAPDHmRNA和p53mRNA／GAPDHmRNA值明显低于模型组,差异均有统计学意义（t=5．90E一06、t=1．51E．04、t=3．42E一06,P〈0．01）。与正常组比较,模型组人LECs中的bcl2mRNA／GAPDHmRNA值明显降低,差异有统计学意义（t=1．86E一05,P〈O．01）,与模型组相比,水蛭素干预后人LECs中的bcl2mRNA／GAPDHmRNA值显著提高,差异有统计学意义（t=8．56E一05,P〈0．01）。结论D一半乳糖导致人LECs损伤,rHV3可能通过抑制多元醇途径和线粒体介导的凋亡途径对人LECs起保护作用。     

水通道蛋白-1在高糖培养人晶状体上皮细胞中的表达

目的研究水通道蛋白-1（AQP-1）在糖尿病性白内障发病机制中的作用。方法从健康的供体眼中分离出人晶状体囊膜,用组织块培养法将人晶状体囊膜分别置于1g/L葡萄糖＋体积分数15%胎牛血清的DMEM培养液中（对照组）或4.5g/L葡萄糖＋15%胎牛血清的DMEM培养液中进行培养（高糖组）。培养3d、28d后观察2组人晶状体上皮细胞（LECs）的生长状态。采用免疫荧光技术和流式细胞术检测AQP-1在人LECs中表达的平均荧光强度,应用流式细胞术检测2组人LECs的凋亡和坏死情况,并进行比较。结果培养第3天2组LECs的生长形态近似,但培养28d高糖组坏死细胞增加。培养3d后高糖组人LECs的AQP-1免疫荧光表达较对照组明显增强,2组间平均荧光强度的差异有统计学意义（t=3.934,P=0.004）,但2组间LECs的凋亡率和坏死率差异均无统计学意义（t=1.681,P=0.131;t=1.064,P=0.318）。培养28d后高糖组人LECs的AQP-1免疫荧光表达较对照组弱,差异有统计学意义（t=3.069,P=0.015）,LECs凋亡率、坏死率较对照组升高,差异均有统计学意义（t=11.213,P〈0.01;t=15.778,P〈0.01）。结论 AQP-1的异常表达在糖尿病性白内障的发生发展中起重要作用。     

Prevention of posterior capsule opacification by intraoperative single-dose pharmacologic agents

PURPOSE: To determine whether an intraoperative single dose of dexamethasone, diclofenac, ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), a combination of EDTA and RGD peptide (arginine-glycin-aspartic acid sequence), or mitomycin-C (MMC) is a pharmacological means of preventing or reducing the development of posterior capsule opacification (PCO). SETTING: Department of Ophthalmology, Celal Bayar University, School of Medicine, Manisa, and Department of Pathology, Dokur Eylül University, School of Medicine, Izmir, Turkey. METHODS: Fifty-four rabbits were randomly divided into 6 groups. Dexamethasone (4 mg/cc), diclofenac (2.5 mg/cc), EDTA (8 mg/cc), a combination of EDTA and RGD peptide (2.5 mg/cc), or MMC (0.04 mg/cc) was given, 0.1 cc by hydrodissection and 0.9 cc into the capsular bag after phacoemulsification. The sixth group served as a control group. After 3 months, the PCO was graded clinically and the proliferation of lens epithelial cells (LECs) was evaluated histologically. RESULTS: The drugs were significantly effective in preventing PCO compared with the control (P <.005). Dexamethasone had a weaker effect than the other drugs. In histological analysis, although monolayer LECs in the dexamethasone and diclofenac groups were observed, there was no proliferative activity on the posterior capsules in the EDTA, EDTA+RGD, and MMC groups in contrast to the multilayer cells in the control. CONCLUSIONS: Intraoperative single-dose application of EDTA, EDTA+RGD peptide combination, and MMC significantly prevented the development of PCO in rabbit eyes. Diclofenac was less effective but also reduced PCO. Although dexamethasone did not prevent the proliferation of LECs, it decreased PCO clinically.