高效液相色谱-荧光法同时测定血清5-羟色胺和色氨酸方法的建立

目的建立一种同时测定血清中5-羟色胺(5-HT)和色氨酸(Trp)浓度的高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FD)。方法采用的色谱柱为Hypersil C18柱(250mm×4.6mmi.d.,7μm),流动相为0.1mol/L磷酸二氢钾/甲醇(85:15,V/V)溶液,流速1.0ml/min,荧光检测激发波长和发射波长在0～6min分别为278和338nm,6～10min转换为280和340nm。结果5-HT保留时间约为4.9min,线性方程为Y=4223461X-35303.9,最低检出浓度为0.001μmol/L,回收率为82.70%～95.40%,日内和日间RSD分别为2.03%和3.42%;Trp保留时间约为8.4min,线性方程为Y=421314X+38292.9,最低检出浓度为0.007μmol/L,回收率为83.67%～94.98%,日内和日间RSD分别为1.32%和3.31%;苯丙氨酸、酪氨酸、犬尿氨酸和犬尿喹啉酸等物质对本方法无干扰;健康成人(n=71)血清中5-HT和Trp的浓度分别为(544.8±156.8)nmol/L和(53.08±8.29)μmol/L。结论该方法简便、快速、灵敏,适于临床和科研应用。     

反相高效液相色谱法测定大鼠胰腺组织中头孢噻肟钠的含量

[目的]建立反相高效液相色谱法测定大鼠胰腺组织中头孢噻肟钠含量. [方法]以茶碱为内标,采用YMC-C18柱,以0.015 mol/L 磷酸二氢钾缓冲液-甲醇溶液 (pH 调4.70) (82:18) 为流动相,流速 0.8 ml/min,紫外检测波长为254 nm. [结果]标准曲线线性范围为:16～0.5(μg/ml);头孢噻肟检测限为0.25μg/ml;提取回收率为:76.70%～85.24%;方法回收率为 106.21%～107.79%;日内RSD在5.74%～10.76%之间,日间 RSD 在5.53%～9.14%之间. [结论]该方法揉作简单,结果准确,重现性好,用于大鼠胰腺组织中头孢噻肟钠含量测定得到满意结果.     

偏二甲肼废水中亚硝基二甲胺的高效液相色谱测定法

目的建立高效液相色谱法测定亚硝基二甲胺的方法。方法采用反相高效液相色谱法测定火箭推进剂偏二甲肼废水中亚硝基二甲胺的含量。色谱条件:色谱柱CNWSIL-C18(4.6×250 mm,5μm),流动相甲醇∶水为15∶85,流速为1.0ml/min,柱温28℃,紫外检测器检测波长为230 nm。结果亚硝基二甲胺在10～500μg/L范围内线性关系良好(r2=0.999 9);高、中、低3种浓度加标平均回收率分别为104.1%、96.93%、92.5%(RSD分别为1.6%、1.8%、1.7%),高、中、低3种浓度精密度RSD为0.13%、0.75%、0.47%,最低检测限为0.5μg/L。结论该方法准确,快速,可用于亚硝基二甲胺的测定。     

高效液相色谱-荧光检测法分析血浆中ALA的含量

目的建立血浆中δ-氨基-γ-酮戊酸(ALA)含量的高效液相色谱-荧光检测方法。方法将血浆样品与乙酰丙酮工作液(乙酰丙酮-乙醇-水,15∶10∶75,V/V)和10%甲醛溶液在沸水浴中反应10 min后,置于冰水浴中充分冷却。经微孔滤膜过滤后以C18柱为分析柱进行高效液相色谱测定。色谱分析以甲醇-水-乙酸(1 000∶1 000∶2,V/V)为流动相,流速为0.6 ml/min;荧光检测器的激发波长为370 nm,发射波长为460 nm,柱温为40℃。结果 ALA浓度为5μg/L~100μg/L时,与色谱峰面积之间呈良好的线性关系。本方法的最低检出限为0.5μg/L,定量限为2.0μg/L,多次重复测定结果的RSD为0.35%(n=6),不同浓度的平均加标回收率为86.56%~100.09%。结论所建立的血浆中ALA含量的高效液相色谱-荧光检测法,简便、准确,可用于血浆中ALA含量的测定,为生物样品中ALA低浓度水平的检测提供了新的途径。     

反相高效液相色谱法测定大鼠全血中虫草素含量

目的建立一种测定血液中虫草素含量的反相高效液相色谱法。方法大鼠全血0.4 ml,加入甲醇1.6 ml,4℃12000 r/min离心10 min,取上清液50℃氮气吹干,用0.15 ml甲醇复溶,12000 r/min离心15 min,取上清液10μl进样;色谱条件为ODS-SP C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇∶水=27∶73为流动相;流速0.8 ml/min;柱温35℃;紫外检测波长259 nm;检测血中虫草素含量。结果虫草素浓度在0.1~5.0μg/ml范围内线性关系良好,相关系数为0.9998;浓度为0.2、1.0、5.0μg/ml时日内RSD(%)分别为5.38、0.63、2.95,日间RSD(%)分别为2.20、4.41、2.57;检出限(S/N=3)为0.05μg/ml;全血中浓度为0.1、0.8、1.5μg/ml时回收率为85%~102%。结论该反相高效液相色谱法灵敏度高,重复性好,能有效分离检测血中虫草素含量。     

柱前衍生HPLC-FLD法测定水产品中3种麻痹性贝类毒素

目的建立水产品中3种麻痹性贝类毒素成分(GTX2,3、dcSTX和STX)的柱前荧光衍生高效液相色谱(HPLC-FLD)检测方法。方法样品用1%乙酸提取,C18固相萃取柱净化,2%H2O2荧光衍生,以Symmetry?C18柱(4.6mm×150mm,5μm)为色谱柱分离,以乙腈和0.1mol/L甲酸铵(595)作为流动相,流速1.0mL/min,荧光检测器激发波长340nm,发射波长395nm。结果该法在10~500μg/L范围内线性关系良好,平均加标回收率为72.5%~88.6%,RSD为2.8%~4.7%。方法的检出限分别为dcSTX 3μg/kg、STX 10μg/kg和GTX2,34μg/kg。结论本方法灵敏度高、结果可靠,为检测水产品贝类麻痹性毒素的含量提供了一种高效便捷的方法。     

HPLC-FLD方法检测早孕期大鼠胚胎的苯并芘水平

目的:建立一种高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FLD),检测给药大鼠早孕胚胎组织中苯并芘(BaP)水平,为其临床应用提供实验依据。方法:采用日本岛津高效液相色谱仪和岛津RF-535荧光检测器,检测给药大鼠早孕胚胎组织中BaP的浓度。样品用乙腈提取处理,无需净化。使用Kromasil C_(18)色谱柱(250mm×4.6 mm,5μL),流动相为甲醇/水(95∶5,V/V);流速为1.0 mL/min;荧光检测器的参数设定:激发波长(Ex)为364 nm,发射波长(Em)为427 nm;柱温为室温;进样量为20μL。结果:BaP在0.002～0.5μg/mL范围内呈良好的线性范围,提取标准曲线的回归方程■=426 174x-316.95,相关系数0.999 9,本方法的样品提取回收率大于95%,日内差实验的精密度相对标准偏差(RSD)为3.38%,日间差实验的精密度RSD为2.80%,稳定性(n=6)RSD为2.58%,实验检测出样品中BaP的浓度范围在0～0.583 7μg/g。结论:本方法操作简便、实验成本低,准确度、敏感度符合要求,样品前处理过程简单、用时少,可用于给药大鼠早孕胚胎组织中BaP的检测和研究。     

HPLC法测定血清肉碱的研究

目的:建立高效液相色谱(HPLC)测定血清中肉碱浓度的方法。方法:血清样品用乙腈、甲醇沉淀蛋白,加入肉碱衍生剂,60℃恒温水浴2h后进样10μl。色谱柱为AtlantisC18柱(4.6mm×150mm,5μm),流动相为甲醇∶异丙醇∶乙腈(35∶45∶20,v/v),流速1.0ml/min,紫外检测波长260nm。结果:在上述色谱条件下,血清肉碱分离良好,回归方程为Y=8490X-48200,r=0.9999,线性范围为12.5~400μmol/L。最低检测浓度为12.5μmol/L。日内精密度1.6%~13.2%,日间精密度(%)1.8%~12.1%,回收率98.5%。结论:通过加入肉碱衍生剂,建立了HPLC法测定血清中肉碱浓度的方法。此法操作简单,耗时少,有良好的准确度,适用于临床检测。     

邻苯二甲醛-柱后衍生-高效液相色谱荧光法测定功能型饮料中的牛磺酸

目的建立功能型饮料中牛磺酸的柱后衍生-高效液相色谱荧光法。方法样品稀释后直接进样,柱后OPA衍生,荧光检测器检测,外标法定量。色谱条件:流动相:乙腈-水(20∶80,V/V);柱后衍生反应温度:55℃;荧光检测器激发波长:330 nm;发射波长:450 nm。结果牛磺酸的浓度为0μg/L~80μg/L时,标准曲线线性关系良好,线性相关系数(r)为0.999 9,检出限为1μg/L,相对标准偏差(RSD)为0.2%~1.0%,加标回收率为97.2%~102.8%,精密度和准确度符合检测要求。结论本方法具有选择性好、精密度高和准确度好等优点,而且由于采用荧光检测器,大大提高了灵敏度,可采取大体积稀释,更易排除其他组分的干扰,更简便,更快捷,适用于日常的检测工作中。     

HPLC法测定人血浆中莫西沙星的浓度

目的建立一个高效液相-荧光色谱方法测定患者血浆中莫西沙星的浓度,为临床研究提供分析方法。方法临床血透患者血样经过液液萃取处理后,采用高效液相-荧光测定;色谱柱:依利特SinoChromODS-BP(5μm,4.6 mm×150 mm);流动相为乙腈:缓冲液(25∶75),缓冲液为每1 000 ml水溶液中含有磷酸二氢钾10 mmol和四丁基硫酸氢胺1.5 mmol;流速:1 ml/min;柱温:40℃;激发波长为290 nm;发射波长为488 nm。进样体积:10μl。结果血浆中莫西沙星浓度在0.1～10.0 mg/L范围呈良好的线性关系(r=0.9999),定量下限浓度为0.1 mg/L,准确性平均为97%,RSD为8.7%;绝对回收率大于78%;批内RSD为1.12%～2.08%、批间RSD为3.2%～5.7%,方法回收率在91.0%～101.3%之间。结论本分析方法具有快速、灵敏、准确、可靠,适用于临床药理研究及药动学分析。     

HPLC-FLD方法检测早孕期大鼠胚胎的苯并芘水平

目的：建立一种高效液相色谱－荧光检测法（HPLC-FLD）,检测给药大鼠早孕胚胎组织中苯并芘（BaP）水平,为其临床应用提供实验依据。方法：采用日本岛津高效液相色谱仪和岛津RF-535荧光检测器,检测给药大鼠早孕胚胎组织中BaP的浓度。样品用乙腈提取处理,无需净化。使用Kromasil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μL）,流动相为甲醇/水（95∶5,V/V）;流速为1.0 mL/min;荧光检测器的参数设定：激发波长（Ex）为364 nm,发射波长（Em）为427 nm;柱温为室温;进样量为20 μL。结果：BaP在0.002～0.5 μg/mL范围内呈良好的线性范围,提取标准曲线的回归方程■=426 174x－316.95,相关系数0.999 9,本方法的样品提取回收率大于95%,日内差实验的精密度相对标准偏差（RSD）为3.38%,日间差实验的精密度RSD为2.80%,稳定性（n=6）RSD为2.58%,实验检测出样品中BaP的浓度范围在0～0.583 7 μg/g。结论：本方法操作简便、实验成本低,准确度、敏感度符合要求,样品前处理过程简单、用时少,可用于给药大鼠早孕胚胎组织中BaP的检测和研究。     

荧光高效液相色谱法测定血清中总唾液酸含量的分析

【目的】 探讨荧光高效液相色谱法测定血清中总唾液酸含量的最佳条件。 【方法】 按优化实验的原则,将人体血清分别用三氟乙酸、硫酸、盐酸80℃水解,酸化浓度分别为0.05、0.10、0.15、0.20 mol/L,酸解时间分别为30、60、90、120 min,经50℃避光衍生150 min后进行色谱分析。 【结果】 用0.10 mol/L TFA溶液80℃水解60 min测定的唾液酸浓度最佳,唾液酸的最适宜浓度在0.625~80 μmol/L范围内,其平均回收率为94.0%,精密度、稳定性、重复性试验的相对标准差分别为1.3%、1.1%和1.0%。Neu5Ac的最低检出限为0.02 μmol/L,16~19岁健康青少年血清中唾液酸(Neu5Ac)含量的平均值为(2.12±0.15) mmol/L。 【结论】 荧光高效液相色谱法测定唾液酸简单、重复性好、灵敏度高,可广泛用于人体血清唾液酸含量测定。     

高效液相色谱法测定普洱茶中茶氨酸、EGCG及咖啡因

目的建立了未衍生化高效液相色谱法(HPLC)测定普洱茶中茶氨酸含量,非梯度洗脱的HPLC分析方法测定表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)及咖啡因含量。方法普洱茶中的茶氨酸在热水浴中以水提取,EGCG及咖啡因以70%的乙醇超声提取,采用C18色谱柱,HPLC-PDAD方法进行测定,流速为1.0ml/min。以乙腈-0.005mol/L十二烷基磺酸钠(0.1%磷酸调pH为6)(28:72)为流动相测定茶氨酸,以甲醇-5×10-5mol/LKH2PO4溶液(磷酸调pH为5)(20:80)为流动相测定EGCG及咖啡因。结果在2～400μg/ml浓度范围内,各组分峰面积与相应浓度呈良好线性关系,r0.999。各组分的加标回收率在85%～110%之间,方法精密度相对标准偏差小于10%。结论该方法准确、稳定、分离效能好。     

测定外周血核黄素及其衍生物含量的HPLC方法研究

目的:建立测定外周血核黄素及其衍生物FMN、FAD含量的高效液相色谱方法。方法:血浆和红细胞样品用乙腈、三氯甲烷处理,离心后取上清液进样分析。采用WatersAtlantisTMC18色谱柱(150mm×4.6mmi.d.,5μm)分离,以甲醇-5mmol/L乙酸铵(体积比为35:65)为流动相,流速1.0ml/min,荧光检测器检测(激发波长450nm,发射波长520nm)。结果:本法测定核黄素、FMN、FAD的线性范围均为1~400nmol/L,最低检测限依次分别为0.2、0.25、0.25nmol/L(S/N=3);日内和日间测定的峰面积的相对标准偏差(RSD)核黄素分别为1.3%,2.2%,FMN分别为2.9%,3.7%,FAD分别为2.0%,3.6%。三者在血浆样品和红细胞样品中的加标回收率均达到要求。结论:本法灵敏、快速、准确,可用于测定血浆和红细胞中核黄素、FMN、FAD含量。     

雌性大鼠血清和组织中壬基酚的高效液相色谱测定法

目的建立大鼠血清及组织样品中壬基酚(NP)的液-液萃取和高效液相色谱荧光检测方法。方法清洁级SD雌性大鼠血清采用正己烷-乙醚混合溶剂(V∶V=7∶3)提取,组织采用甲醇-乙酸铵缓冲液(pH值为4.5,V∶V=2∶8)提取,采用C18色谱柱分离,乙腈-乙酸铵缓冲液(pH值为4.5,V∶V=95∶5)为流动相,柱温40℃,在激发波长227nm,发射波长313nm处用荧光检测器检测。结果血清和组织中NP含量与峰面积呈良好的线性关系,线性范围为0.1～30.0μg/ml。检出限为13ng/ml,加标回收率为92.60%～108.00%,日内精密度RSD为0.29%～1.51%,日间精密度RSD为0.74%～1.57%,均小于2%。结论该方法简便易操作、灵敏准确,回收率好,精密度高,适用于动物血清及组织中环境雌激素NP含量的检测。     

湛江市区1177名1～7岁儿童血铅水平调查

目的 :了解湛江市区 1～ 7岁儿童的血铅水平。方法 :用原子吸收分光光度法对随机抽取的 1 1 77名 1～ 7岁儿童的血铅水平进行测定。结果 :所调查儿童的血铅浓度为 0 .488± 0 .1 6 6μmol/L。血铅浓度≥ 0 .483 μmol/L者 ,占总调查人数的 49.3 % ,其中血铅水平在 0 .483～0 .72 4× μmol/L、>0 .72 4 μmol/L者分别占总调查人数的 45 .3 %、4.0 % ;不同年龄和性别的血铅水平无差异 ,但血铅浓度≥ 0 .483 μmol/L者在 5～ 6岁有一个高峰期 ,明显高于其它各年龄组 (P<0 .0 1 )。结论 :湛江市 1～ 7岁儿童的血铅水平较高。     

RP-HPLC法测定浓维磷糖浆中咖啡因和维生素B1的含量

目的:采用反相高效液相色谱法测定浓维磷糖浆中咖啡因和维生素B1的含量。方法:采用Dia-monsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-庚烷磺酸钠缓冲液为流动相(10∶90),检测波长为272 nm。结果:咖啡因与维生素B1浓度分别在3.5μg/ml～282.6μg/ml(r=1.0000)和0.7μg/ml～54.7μg/ml(r=0.9999)内与峰面积呈良好的线性关系(n=9),方法回收率(n=9)分别为99.2%和99.1%,RSD分别为1.8%和1.7%。结论:该方法操作简便,结果准确可靠,可以有效地控制产品质量。     

脑神经细胞膜脂流动性的荧光偏振测定法

以大鼠大脑神经细胞为实验材料，探索用荧光偏振法测定完整神经细胞的膜脂流动性、荧光探针ＤＰＨ（１，６－Ｄｉｐｈｅｎｙｌ－１，３，５－Ｈｅｘａｔｒｉｅｎｅ）标记的实验条件。适合条件为ＤＰＨ浓度２×１０－６ｍｏｌ／Ｌ，细胞浓度１×１０１０个／Ｌ，标记温度２５℃，时间３０ｍｉｎ。本文还对无血清体外培养的人胚大脑神经细胞的膜脂流动性进行了初步动态观察，发现神经细胞在培养至３、６、９和１２天时，膜脂流动性维持在相对稳定的水平。     

高效液相色谱法测定血清中维生素A的含量

目的探讨高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定血清中维生素A含量。方法取血清200μL,用无水乙醇沉淀蛋白,再加入正己烷震荡提取维生素A,取一定量烷层经氮吹挥干,残渣加无水乙醇溶解后采用HPLC法分析,保留时间定性,标准曲线法定量。分析柱为C18柱(250 mm×46 mm,5μm),流动相:甲醇+水(98+2),检测波长325 nm。结果维生素A在0.25～125.50μg/mL之间线性良好(r>0.999 6),平均回收率为98.20%,RSD为0.85%。结论 HPLC法测定血清中维生素A的含量简便、快速,灵敏度高,准确性好。