褪黑素对早期糖尿病大鼠视网膜氧化应激反应的影响

背景氧化应激是糖尿病并发症的早期发生机制,而褪黑素是迄今已知最高效的抗氧化物质之一,目前国内就褪黑素对糖尿病并发症的防治机制研究尚不多见。目的研究褪黑素对早期糖尿病大鼠视网膜丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）含量及神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响,探讨褪黑素对早期高血糖诱导的视网膜氧化损伤的作用。方法清洁级6周龄SD大鼠48只尾静脉注射质量分数2％链脲佐菌素（STZ）制作糖尿病模型,按随机数字表法分为模型对照组和褪黑素治疗组;尾静脉注射等量柠檬酸缓冲液的大鼠24只作为正常对照组。褪黑素治疗组每日腹腔注射褪黑素10mg／kg,正常对照组和模型对照组每日给予等量的生理盐水腹腔注射。于4、6、8周时采用MMT比色法检测视网膜组织匀浆中MDA、还原型GSH的含量,并应用Western blot和免疫组织化学法分析视网膜GFAP的表达量。结果造模后4、6、8周时褪黑素治疗组视网膜MDA含量均明显低于相应时间点模型对照组（P〈0．05）;4周、6周时与正常对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）,8周时高于正常对照组（P〈0．05）。模型对照组视网膜还原型GSH的质量分数均明显低于同时间点正常对照组（P〈0．05）;4、6、8周时褪黑素治疗组视网膜还原型GSH质量分数均明显高于同时间点模型对照组（P〈0．05）,4周、6周时与正常对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）,8周时低于正常对照组（P〈0．05）。4、6、8周时褪黑素治疗组视网膜GFAP的表达量均低于同时间点模型对照组（P〈0．01）;4周、6周时与正常对照组比较差异均无统计学意义（P〉0．05）,8周时高于同时间点正常对照组（P〈0．05）。结论褪黑素能降低糖尿病大鼠视网膜MDA的含量,增加GSH水平,抑制糖尿病大鼠视网膜GFAP的过度表达,进而减轻氧化应激引起的视网膜损伤。     

去铁酮对糖尿病大鼠晶状体的抗氧化作用

背景氧化应激能促使糖尿病性白内障的发生，铁螯合剂可以减轻糖尿病患者的氧化应激反应。目的探讨去铁酮对糖尿病性白内障的干预作用。方法收集6周龄雄性Wistar大鼠40只，按随机数字表法分为4个组。正常对照组8只给予普通饲料喂养、腹腔内注射40mg／kg柠檬酸缓冲液，剩余32只大鼠采用高糖高脂饮食并腹腔内注射40mg／kg链脲佐菌素（STZ）法建立糖尿病模型，50mg去铁酮组、100mg去铁酮组分别给予50mg／kg和100mg／kg的去铁酮溶液灌胃，每日1次，共持续8周；糖尿病对照组造模后不做干预。于实验第8周用考马斯亮蓝测定各组大鼠晶状体中水溶性蛋白（WSP）、脲溶性蛋白（USP）和碱溶性蛋白（ASP）的质量浓度，分别用黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸法和二硫代二硝基苯甲酸法测定晶状体匀浆中超氧化物歧化酶（SOD）活性以及丙二醛（MDA）含量和谷胱甘肽（GSH）的质量分数。结果各组大鼠晶状体中的WSP、USP和ASP质量浓度的差异均无统计学意义（F=1．73、0．18、0．09，P〉0．05）。50mg去铁酮组和100mg去铁酮组大鼠晶状体匀浆中MDA含量分别为（1．05±0．10）mmol／g、（1．05±0．22）mmol／g，均低于糖尿病对照组的（1．49±0．38）mmol／g，差异均有统计学意义（P〈0．05）。50mg去铁酮组和100mg去铁酮组大鼠晶状体匀浆中SOD活性和GSH质量分数分别为（321．29±16．57）U／mg、（322．07±22．16）U／mg和（7．83±0．65）mg／g、（7．70±0．77）mg／g，明显高于糖尿病组的（298．70±14．69）U／mg及（5．47±1．01）mg／g，差异均有统计学意义（P〈0．05）。50mg去铁酮组和100mg去铁酮组间上述各项指标间的差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论去铁酮可以减轻晶状体的氧化应激反应，改善晶状体的能量代谢。     

枸杞多糖对糖尿病大鼠视网膜病理改变及其VEGF表达的影响

糖尿病视网膜病变（DR）的主要病理基础是缺氧和炎症引起的新生血管形成,导致血-视网膜屏障（BRB）的破坏,而血管内皮生长因子（VEGF）是主要的血管生成因子.研究证实,枸杞多糖（LBP）具有保护细胞抗氧化损伤的作用,但其在眼科疾病的应用研究较少. 目的 观察LBP对不同时期糖尿病大鼠视网膜的病理改变及VEGF表达的影响. 方法 取SPF级健康雄性SD大鼠117只,以随机数字表法将动物随机分为正常对照组、糖尿病组和LBP组.糖尿病组和LBP组大鼠一次性腹腔内注射55 mg/kg链脲佐菌素（STZ）柠檬酸缓冲液诱导1型糖尿病大鼠模型,正常对照组注射等体积的柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液.造模成功后LBP组大鼠每日以250 mg/kg LBP定时定量灌胃,分别于成模后4、10、16周取各组大鼠行伊文思蓝（EB）染色视网膜铺片,动态观察视网膜血管的形态改变;以45 mg/kg EB由大鼠右颈静脉缓慢注入,循环2h后将质量分数1％多聚甲醛由左心室灌注,循环3 min后摘除眼球并分离视网膜,用标准曲线法检测视网膜中EB质量分数.采用免疫组织化学法和实时荧光定量PCR（real-time PCR）法分别检测视网膜中VEGF蛋白及其mRNA的表达. 结果 EB视网膜铺片显示,造模后4、10、16周,LBP组大鼠视网膜血管的走行、管径及渗漏等形态学改变均明显轻于糖尿病组大鼠.造模后4、10、16周,LBP组大鼠视网膜中EB的质量分数分别为（12.17±1.55）、（16.46±1.60）和（19.55± 1.49） mg/g,均明显低于同时期糖尿病组大鼠的（15.76±1.90）、（21.61±2.05）和（26.30±2.28） mg/g,差异均有统计学意义（P＜0.05）.免疫组织化学染色结果显示,造模后4、10、16周,大鼠视网膜中VEGF蛋白的表达以视网膜神经节细胞（RGCs）层为主,LBP组大鼠各时间点VEGF蛋白的染色明显弱于糖尿病组.免疫组织化学法检测表明,造模后4、10、16周LBP组大鼠VEGF蛋白在视网膜中的表达量分别为0.234±0.011、0.331±0.023和0.536±0.031,均明显低于同期糖尿病组大鼠的0.281±0.018、0.533±0.055和0.765±0.075,差异均有统计学意义（P＜0.05）.Real-time PCR显示,造模后4、10、16周LBP组VEGF mRNA的相对表达量分别为0.157±0.013、0.505±0.114和1.577±0.074,均低于同期糖尿病组的0.235±0.209、1.043±0.084和2.446±0.061,差异均有统计学意义（P＜0.05）. 结论 LBP可以减轻糖尿病造成的视网膜血管形态改变,减少血管壁的渗漏,从而保护BRB功能.     

早期糖尿病大鼠视网膜形态变化及相关影响因子分析

背景糖尿病视网膜病变（DR）的病理基础是血-视网膜屏障受损,是多种因子共同影响的结果。目的探讨早期糖尿病大鼠视网膜形态变化与血清中血管内皮生长因子（VEGF）、内皮素（ET）和一氧化氮（NO）的关系。方法40只健康雌性SD大鼠按随机数字表法分为实验组和正常对照组,每组20只。实验组腹腔注射60mg／kg链脲佐菌素（STZ）建模成功后,按病程分为糖尿病2、4、6、8个月组;正常对照组腹腔注射等体积缓冲液,根据与实验组年龄匹配原则平均分为4组,每组5只。分别在造模后2、4、6、8个月采用ELISA双抗体夹心法测定2组大鼠血清中VEGF质量浓度,^125碘（^125I）放射免疫法测定血清中ET质量浓度,硝酸还原法测定血清中NO浓度并进行比较。于造模后8个月摘除大鼠眼球行常规视网膜组织形态学检查。结果正常对照组大鼠在实验各时间点视网膜组织形态学无明显改变。实验组大鼠造模后4个月开始出现视网膜组织水肿,视网膜各层细胞排列紊乱,造模后6个月可见视网膜出血,造模后8个月可见视网膜血管破裂。实验组大鼠在造模后2、4、6、8个月血清中VEGF和ET质量浓度较同时间点正常对照组大鼠明显升高,差异均有统计学意义（P〈0．05）,糖尿病2个月组血清中NO浓度较同时间点正常对照组升高（Z=-2．193,P〈0．05）,糖尿病4个月组与正常对照组比较,血清中NO浓度的差异无统计学意义（Z=-2．611,P〉0．05）,而糖尿病6个月组及糖尿病8个月组血清NO浓度较同时间点正常对照组低（Z=-2．449、-2．236,P〈0．05）。随着病程的延长,实验组血清中VEGF、ET质量浓度逐渐升高,NO浓度逐渐降低（P〈0．05）。糖尿病大鼠血清中VEGF与ET质量浓度间呈正相关（r=0．821,P〈0．01）,血清中VEGF质量浓度与NO浓度间呈负相关（r=-0．814,P〈0．01）;糖尿病大鼠血清中ET质量浓度与NO浓度间呈负相关（r=-0．803,P〈0．01）。结论糖尿病大鼠血清中VEGF、ET和NO水平与视网膜病理改变的严重程度密切相关,考虑血清中VEGF、ET与NO水平可以间接反映糖尿病大鼠视网膜病变的严重程度。     

左旋多巴对形觉剥夺性弱视鼠VEP及视网膜内多巴胺含量的影响

目的观察不同剂量左旋多巴对形觉剥夺性弱视大鼠视觉诱发电位（VEP）及视网膜内多巴胺质量分数的影响,探讨其治疗弱视的可能机制。方法30只14日龄SD大鼠建立单眼形觉剥夺性弱视鼠模型,按随机数字表法随机分为弱视对照组、小剂量给药组、大剂量给药组,每组10只,分别给予8％淀粉溶液及20mg／kg、80mg／kg左旋多巴灌胃,于给药前（45日龄）和给药后（75日龄）测量闪光视觉诱发电位（F-VEP）,并于75日龄时检测各组大鼠视网膜内多巴胺的质量分数。结果给药前剥夺眼P1波潜伏期较未剥夺眼明显延长,差异有统计学意义（P〈0．05）;给药后左旋多巴组剥夺眼P1波潜伏期较给药前以及对照组剥夺眼均明显缩短（P〈0．05）,且大剂量给药组较小剂量给药组P1波潜伏期更短（P〈0．05）,未剥夺眼P1波潜伏期各组比较差异无统计学意义（P〉0．05）;剥夺眼视网膜内多巴胺的质量分数较未剥夺眼低（P〈0．05）,给药后剥夺眼视网膜内多巴胺的质量分数较未剥夺眼及对照组剥夺眼明显增高,且随药物剂量的增加多巴胺质量分数提高,二者比较差异有统计学意义（P〈0．05）;未剥夺眼给药前后视网膜多巴胺质量分数差异无统计学意义（P〉0．05）。结论左旋多巴能显著提高形觉剥夺性弱视鼠弱视模型眼的视网膜内多巴胺质量分数,改善弱视眼视觉传导功能,并由此影响视觉系统发育可塑性敏感期。     

当归补血汤对2型糖尿病大鼠玻璃体和血清中血管内皮生长因子表达的影响

背景糖尿病视网膜病变（DR）主要的病理改变是新生血管生成，血管内皮生长因子（VEGF）是诱导新生血管生成的重要因子，因此是评价糖尿病（DM）血管性疾病并发症的重要指标。目的研究当归补血汤（ASD）对链脲佐菌素（STZ）诱导的DM大鼠玻璃体和血清中VEGF表达的影响，探讨其在DR治疗中的作用机制。方法雄性SPF级sD大鼠34只以高脂饮食喂养8周，然后腹腔注射小剂量（25mg／kg）STZ建立2型DM大鼠模型，将血糖〉13．9mmol／L者纳入实验并用计算机数字随机生成法随机分组。11只DM动物作为模型组，ASD治疗组10只、格列奇特治疗组（Gli组）10只，于造模第4天开始分别以3．6g／kgASD、10mg／kgGli（5m1）和饮用水灌胃至实验结束。另取10只正常匹配动物饲以正常饲料作为正常对照组，以等量饮用水灌胃，分别于灌胃后第4、第8周收集各组动物腹主动脉血检测血糖、血甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL），灌胃后第8周采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定大鼠血清和玻璃体中VEGF的质量浓度。结果灌胃治疗后第4周、第8周，ASD组血糖和TG明显低于DM组，差异有统计学意义（P〈0．05）；HDL高于DM组，差异有统计学意义（P〈0．05）；灌胃后第8周，正常对照组、ASD组、Gli组间血清、玻璃体中VEGF质量浓度的差异均无统计学意义（P〉0．05）；而DM组大鼠血清中VEGF质量浓度明显低于正常对照组，玻璃体中VEGF质量浓度明显高于正常对照组，差异均有统计学意义（P〈0．01）；DM组大鼠血清中和玻璃体中VEGF质量浓度分别为（147．65±4．55）和（673．45±100．85）ng／L，二者间无明显直线相关关系（r=0．314，P〉0．05）。结论结果提示ASD能够降低玻璃体中VEGF的质量浓度，可能有延缓DM大鼠DR的发生的作用。     

P58^IPK基因在糖尿病鼠视网膜中表达的动态变化

背景糖尿病视网膜病变（DR）的分子生物学发病机制仍不清楚,以往的研究表明内质网应激相关因子在糖尿病患者外周血中呈高表达,而P58^IPK可以抑制这些因子的表达,因此P58^IPK和糖尿病之间的关系值得深人研究。目的检测P58^IPK。在糖尿病大鼠模型视网膜中的动态表达,为进一步研究P58^IPK抑制DR的机制奠定基础。方法18只sD大鼠腹腔注射60mg／kg链脲佐菌素（STZ）制作糖尿病动物模型,分别于造模后1、3、6个月各处死6只大鼠;另6只匹配的正常SD大鼠作为正常对照组。取视网膜组织采用实时定量聚合酶链反应（real—timePCR）法检测P58^IPKmRNA在大鼠视网膜中的表达,观察P58^IPKmRNA随糖尿病的发展出现的动态变化。结果造模后糖尿病组大鼠表现出多饮、多食、多尿,血糖均≥16．5mmol／L,造模成功率为100％。造模后1个月、3个月鼠视网膜中P58^IPKmRNA／β-actinmRNA的A值分别为0．800±0．005和0．975±0．008,明显高于对照组的0．725±0．006,差异有统计学意义（t=22．589、t=62．784,P〈0．05）,造模后6个月鼠视网膜P58^IPK／β—actin的A值为0．671±0．004,并明显低于对照组,差异有统计学意义（t=-17．984,P〈0．05）。结论P58^IPK。参与DR的发病机制,可能具有延缓DR发生和发展的作用。     

脂联素调控糖尿病大鼠视网膜一氧化氮合酶的表达及意义

背景糖尿病视网膜病变（DR）是糖尿病最常见的微血管并发症,其发病机制尚未完全阐明。脂联素可以通过抑制血管内皮细胞的炎症反应、降低血管细胞间黏附能力等影响糖尿病微血管病变的发生,脂联素与一氧化氮合酶（NOS）的作用关系报道较少。目的观察脂联素对糖尿病大鼠视网膜NOS表达的影响。方法选择8～10周龄雌性SD大鼠40只,按随机数字表法将大鼠分为正常对照组10只、脂联素组及糖尿病对照组各15只。脂联素组及糖尿病对照组大鼠用一次性腹腔注射四氧嘧啶法建立糖尿病模型,注射24h后测空腹血糖值〉16mmol／L、尿糖〉＋＋＋为造模成功,纳入研究共24只糖尿病大鼠。脂联素组大鼠给予10μg／kg重组脂联素注射。采用Westernblot法检测脂联素蛋白在正常对照组、脂联素组及糖尿病对照组大鼠视网膜中的定量变化,采用免疫组织化学法观察NOS在各组大鼠视网膜中的表达和定位。结果正常对照组、脂联素组及糖尿病对照组大鼠视网膜中脂联素蛋白含量（脂联素／p—actin）分别为0．85±0．21、0．79±0．17和0．42±0．08,总体比较差异有统计学意义（,=4．236,P=0．000）;糖尿病对照组大鼠视网膜脂联素蛋白较正常对照组和脂联素组明显下降,差异均有统计学意义（q=6．615,P=0．000;q=6．026,P=0．000）。正常对照组、脂联素组、糖尿病对照组NOS阳性反应强度的4值分别为0．244±0．035、0．262±0．032和0．367±0．066,总体差异有统计学意义（F=3．752,P=0．001）;糖尿病对照组NOS含量较正常对照组、脂联素组明显升高,差异均有统计学意义（q=3．488,P=0．002;q=3．079,P=0．005）。NOS主要表达于视网膜内核层和视网膜神经节细胞（RGCs）层。结论脂联素可下调糖尿病大鼠视网膜中NOS的含量,减少NO在视网膜中的生成,减轻NO对视网膜血管内皮细胞结构和功能的损伤,从而延缓DR的发生。     

枸杞多糖对糖尿病大鼠血糖、血脂及血-视网膜屏障通透性的影响

背景糖尿病视网膜病变（DR）的特征是毛细血管闭锁、微循环障碍和局部缺血性视网膜新生血管形成,其确切的发病机制尚不十分清楚。目的观察枸杞多糖（LBP）对糖尿病（DM）大鼠血糖、血脂、血一视网膜屏障通透性的影响,探讨LBP对DR的保护作用及机制。方法SD大鼠54只,按随机数字表法随机分为3组,每组18只。其中36只大鼠尾静脉注射45mg／kg链脲佐菌素（STZ）建立DM模型,72h后血糖〉16．7mol／L、尿糖阳性者为造模成功。成模后第2天LBP治疗组给予200mg／（kg·d）LBP灌胃,DM组给予等量生理盐水灌胃,其他18只正常鼠为正常对照组。各组大鼠造模后4、8、12周抽取心脏血检测血糖、甘油三酯和总胆固醇水平,获取视网膜组织,用伊文思蓝渗漏实验检测视网膜血管的渗透性。结果各时间点DM组和LBP治疗组大鼠的血糖水平均高于正常对照组。4、8、12周时LBP治疗组大鼠的血糖水平明显较同时间点DM组明显下降,下降幅度分别为57％、40％、36％,差异均有统计学意义（P〈0．01）。DM组大鼠各时间点甘油三酯浓度明显高于正常对照组,差异均有统计学意义（P〈0．01）,LBP治疗组在4周、8周时甘油三酯的浓度与正常对照组比较差异均无统计学意义,而12周时高于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）。DM组大鼠在8周、12周时血液中的总胆固醇浓度明显高于正常对照组,差异均有统计学意义（P〈0．01）,而LBP治疗组在各时间点与正常对照组比较差异均无统计学意义（P〉O．05）。造模后4、8、12周大鼠视网膜血管渗透性增加,DM组伊文思蓝的渗透量分别为（26．23±2．00）、（29．78±1．78）、（34．08±3．03）μg／g,明显高于正常对照组的（12．34±4．30）、（12．76±2．11）和（12．45±4．40）μg／g,差异均有统计学意义（P〈0．01）,各时间点LBP治疗组伊文思蓝的渗透量明显低于DM组,差异均有统计学意义（P〈0．01）。伊文思蓝的渗透量与血糖、甘油三酯的浓度变化均呈高度正相关（r=0．896、0．859,P=0．000）,与总胆固醇的浓度变化呈显著正相关（r=0．770,P=0．000）。结论LBP可降低DM大鼠血糖及血脂水平,抑制DM大鼠血一视网膜屏障通透性的增加。     

巴曲酶对糖尿病大鼠血视网膜屏障和视网膜血管内皮生长因子表达的影响

目的 研究巴曲酶对糖尿病大鼠血视网膜屏障以及视网膜血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。 方法 将60只大鼠用链尿佐菌素腹腔注射制成糖尿病大鼠模型，分成糖尿病组（n＝20）、40mg/kg巴曲酶注射组（n＝20）和20 mg/kg巴曲酶注射组（n＝20）。另25只正常大鼠为正常对照组。7d 后处死全部大鼠，通过伊凡思蓝法观察各组大鼠血视网膜屏障情况，酶连免疫吸附法分析视网膜总蛋白中的VEGF含量，比较各组结果。 结果 正常对照组大鼠视网膜内渗漏的伊凡思蓝含量明显低于另外3个糖尿病大鼠组（P<0.01）,不同剂量巴曲酶治疗组之间伊凡思蓝含量无明显差异（P>0.05），巴曲酶治疗的2组大鼠伊凡思蓝含量均比糖尿病组大鼠低（P<0.05）。正常对照组大鼠、不同剂量巴曲酶注射的2组大鼠视网膜内VEGF含量明显低于糖尿病大鼠（P<0.01）；正常对照组视网膜内VEGF含量与20 mg/kg巴曲酶注射组比较无明显差异（P＝0.06）；40mg/kg 巴曲酶注射组视网膜内VEGF含量比正常对照组低(P＝0.01)；不同剂量的巴曲酶治疗组之间VEGF含量无明显差异（P＝0.78）。 结论 巴曲酶治疗减轻了糖尿病大鼠血视网膜屏障功能的损伤，降低了VEGF的表达，提示巴曲酶对糖尿病大鼠血视网膜屏障功能有一定的保护作用。 (中华眼底病杂志, 2006, 22: 16-19)     

Changes of the thiol levels in the corneas of the diabetic rats: effect of carnosine, aspirin and a combination eye drops

AIM: To investigate the effect of carnosine (Car), aspirin (Asp) and a combination of Car and Asp eye drops on the change of the thiol contents from glutathione (GSH) and protein in the corneas of the diabetic rats. METHODS: All the animals were randomly divided into five groups. The normal control group received injections of vehicle only. Diabetes was induced by injection of streptozotocin (STZ) in the Sprague-Dawley (SD) rats. The untreated group rats received only the vehicle solution (the placebo). One treated group rats were treated by instillation of one drop of 10g/L Car eye drops, another were treated by 0.5g/L Asp eye drops and the last group were treated alternately by Car 10g/L and Asp 0.5g/L eye drops for a period of 8 weeks. At the end of 8 weeks, the animals were killed and the thiols contents in the corneas were investigated. RESULTS: About 15.6% of the rats (blood glucose measured <14mmol/L) were rejected. In the corneas, the levels of thiols were declined in the untreated, Asp-treated group and combination-treated group, but they went up in Car-treated group. The levels of thiols in the Car-treated groups were much higher than that in the untreated group, and there was statistically significant difference between them (P<0.05). CONCLUSION: The results indicated that diabetes decreases the levels of thiols (from GSH and proteins) in the cornea. The Car eye drops in our study may protect the cornea against the oxidative damage caused by diabetes. And the combination eye drops also may have a certain protection for the diabetic corneas.     

人脐带间充质干细胞移植对小鼠干燥综合征的治疗作用及其机制

背景 干眼的发病率有逐渐升高的趋势,炎症反应参与干眼的发生和进展过程,而目前的治疗方法通常仅能缓解症状,而不能达到彻底治愈的目的.已有研究将干细胞移植用于眼表损伤引起的角膜缘干细胞缺乏症,但干细胞是否可用于干眼及其作用机制的研究鲜见报道. 目的 探讨人脐带间充质干细胞(HUCMSCs)移植治疗干燥综合征的可行性及治疗途径. 方法 采用完全随机方法将20只24周龄雄性NOD/Ltj小鼠分为尾静脉注射组、泪腺注射组、点眼组和模型组,分别采用HUCMSCs悬液尾静脉注射法、泪腺注射法和点眼法进行HUCMSCs移植,模型组小鼠不移植HUCMSCs,采用ICR雄性小鼠5只作为正常对照.分别于注射后1、2和3周采用酚红棉线法测量各组小鼠的泪液分泌量;采用角膜荧光素钠染色法对角膜上皮的缺损情况进行评分;采用ELISA法检测各组小鼠血清白细胞介素(IL)-6、IL-17a、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和γ干扰素(IFN-γ)质量浓度;采用Western blot法检测各组小鼠泪腺组织中p65、Stat3、Stat5和细胞外信号调节激酶-1(Erk-1)的相对表达量.对各组小鼠上述指标的测定结果进行比较.结果 模型组、尾静脉注射组、泪腺注射组和点眼组NOD/Ltj小鼠干预后1、2和3周时组间泪液分泌量的总体比较差异均有统计学意义(第1周:F=3.700,P=0.040;第2周:F=5.150,P=0.008;第3周:F=10.130,P＜0.001),其中注射后第1、2和3周尾静脉注射组、泪腺注射组小鼠的泪液分泌量均明显多于模型组,差异均有统计学意义(均P＜0.05),但各时间点点眼组小鼠的泪液分泌量与模型组比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).注射后1周ICR小鼠对照组、模型组、尾静脉注射组、泪腺注射组和点眼组角膜荧光素钠染色评分分别为3.00±0.63、9.40±1.62、5.20±1.17、4.20±1.17和7.20±0.98,其中尾静脉注射组、泪腺注射组和点眼组小鼠角膜荧光素染色评分值明显低于模型组,差异均有统计学意义(P=0.001、0.000、0.033).注射HUCMSCs后尾静脉注射组小鼠血清IL-6、IL-17a和TNF-α质量浓度均明显低于模型组,差异均有统计学意义(t=4.70、3.46、11.00,均P＜0.01),而各组间小鼠血清IFN-γ,质量浓度总体比较差异无统计学意义(F=1.740,P=0.170).尾静脉注射组和泪腺注射组小鼠眶外泪腺中Stat5蛋白相对表达量低于模型对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 NOD/Ltj干燥综合征模型小鼠全身和泪腺局部注射HUCMSCs能够分别抑制血清和泪腺中炎性相关因子的表达,减轻炎症反应,从而治疗干眼.HUCMSCs点眼法能够发挥润滑和营养角膜的作用,从而缓解干眼症状.     

慢性高眼压模型鼠视网膜神经节细胞及视神经中9位丝氨酸磷酸化糖原合酶激酶3β的表达变化

目的 观察慢性高眼压模型鼠视网膜神经节细胞(retina ganglion cells,RGCs)和视神经中9位丝氨酸磷酸化糖原合酶激酶3β[p-GSK3β(ser9)]的表达变化,探讨GSK3β是否在慢性高眼压RGCs及视神经退行性病变中发挥作用.方法 取健康SD大鼠30只,随机分为3组:模型对照组、慢性高眼压模型2周组、慢性高眼压模型4周组,每组10只.取大鼠右眼,采用巩膜上静脉结扎并烧灼法建立大鼠慢性高眼压模型.分别于造模后2周和4周取5只大鼠眼球行冰冻切片,尼氏染色观察RGCs数目,免疫荧光染色观察RGCs和视神经中p-GSK3β(ser9)的变化;各组取另外5只大鼠眼视网膜,Western blot检测p-GSK3β(ser9)及总-GSK3β的表达.结果 造模前3组大鼠右眼眼压差异无统计学意义(P=0.89);造模后3组间眼压差异有统计学意义(P＜0.01),慢性高眼压模型2周组和4周组眼压与模型对照组比较明显升高,分别升高了59.13％和26.93％,差异均有统计学意义(均为P＜O.01).视网膜尼氏染色RGCs计数发现模型对照组RGCs数为(149±12)个,慢性高眼压模型2周组和4周组RGCs数较模型对照组明显减少,分别为(120±10)个和(86±7)个,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);且4周组比2周组进一步减少(P＜0.01).慢性高眼压模型2周组和4周组视网膜中p-GSK3β(ser9)阳性着色,同模型对照组相比,其RGCs层及视神经中p-GSK3β(ser9)染色荧光减弱;4周组较模型对照组减弱更明显.与模型对照组相比,慢性高眼压模型2周组和4周组视网膜中总-GSK3β的表达差异无统计学意义(F=0.24,P=0.79);而3组间p-GSK3β(ser9)表达差异有统计学意义(P＜0.01),与模型对照组相比,慢性高眼压模型2周组和4周组视网膜中p-GSK3β(ser9)分别减少了19.89％和36.46％(均为P ＜0.05).慢性高眼压模型4周组比2周组视网膜中p-GSK3β(ser9)表达持续减少,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 慢性高眼压模型鼠RGCs数目减少,RGCs和视神经中p-GSK3β(ser9)表达减少,推测p-GSK3β(ser9)表达变化可能参与了慢性高眼压模型鼠RGCs及视神经退行性病变.     

PM2.5对小鼠泪膜功能和角膜上皮组织结构的影响

目的 观察PM2.5对小鼠泪膜功能和角膜上皮组织结构的影响.方法 24只雄性6～8周龄BALB/c小鼠,随机分为A、B两组,每组12只.B组采用5 mg·mL-PM2.5混悬液滴眼,A组采用PBS滴眼,每天4次.分别在干预后1d、4d、7d对各组小鼠进行泪膜功能检测,包括泪液分泌功能、泪膜破裂时间(break-up time,BUT)、荧光素染色(fluorescein staining,FL),并于干预后7d行苏木精-伊红染色观察角膜上皮情况.结果 干预后4d、7d,A组泪液分泌量、BUT较干预前无明显变化,差异均无统计学意义(均为P＞0.05),而B组泪液分泌量、BUT较干预前明显分别减少和恶化,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).干预后7d,A组FL评分较干预前无明显变化,差异无统计学意义(P＞0.05),而B组FL评分较干预前明显增加,差异有统计学意义(P=0.003).干预后7d,A组上皮细胞层数为(4±1)层,而B组上皮细胞层数为(7±1)层,差异有统计学意义(P＜0.05).与A组比较,B组整个角膜FL着染明显增加,角膜表面上皮细胞层损伤,层数增厚.结论 PM2.5会影响小鼠泪膜功能,损伤小鼠角膜上皮的组织结构.     

溴莫尼定治疗大鼠视神经夹挫伤机制探讨

目的观察0.2%酒石酸溴莫尼定对视神经夹挫伤大鼠视网膜形态及bcl-2/bax表达的影响,探讨其作用机制。方法雌性SD大鼠90只随机分为正常组、模型组、治疗组,每组30只。60只大鼠用视神经钳夹法制作SD大鼠视神经夹挫伤模型,治疗组30只鼠给予0.2%酒石酸溴莫尼定点眼,于实验的l、3、5、7、14、21d处死大鼠,用苏木精-伊红染色计数各组鼠视网膜神经节细胞（RGCs）的数量,用透射电镜观察和比较各组鼠视网膜的超微结构改变,免疫组织化学染色检测鼠视网膜中bcl-2及bax的表达。结果正常组视网膜结构正常,治疗组较模型组视网膜形态损伤减轻。造模后3～21d,模型组和治疗组较正常对照组RGCs数量明显减少（P〈0.05）,但治疗组较模型组RGCs数量明显增加（P〈0.01）。造模后5～7d,治疗组bcl-2在鼠视网膜中的表达量较模型组明显增加（P〈0.01）,但bax表达量明显减少（P〈0.01）。模型组和治疗组的bcl-2在鼠视网膜中的表达量较正常组增加但bax表达量明显减少（P〈0.05）。结论0.2%酒石酸溴莫尼定对大鼠视神经夹挫伤有一定的治疗作用,其机制与抑制凋亡有关。     

汉防己甲素滴眼液治疗大鼠角膜移植排斥反应及植片变化

目的:探讨汉防己甲素(Tet)滴眼液治疗实验性角膜移植排斥反应效果及植片变化。方法:建立大鼠角膜移植排斥反应模型,随机分4组:A、B、C、D组为SD-Wistar大鼠行同种异体角膜移植术,SD鼠为受体,Wistar鼠为供体,其中A组为空白对照组,B～D组分别为3,5,10g/L汉防己甲素滴眼液治疗组。术后不同时间裂隙灯显微镜记录及比较各组角膜植片新生血管情况,并观察植片病理学改变。结果:植片内主要为淋巴细胞及巨噬细胞浸润。B、C、D组术后7,14,21,28d时角膜植片水肿、淋巴细胞及巨噬细胞浸润及新生血管明显少于A组(P<0.05)。不同Tet浓度组间比较C组排斥指数最低(P<0.05)。结论:高浓度(10g/L)Tet治疗角膜移植排斥反应时可出现角膜基质水肿及角膜大泡,但5g/L浓度Tet滴眼液可有效抑制角膜移植排斥反应,且无明显毒副作用。     

羊毛甾醇合酶及羊毛甾醇在大鼠角膜、晶状体和视网膜组织中的分布

背景 已有研究证实与羊毛甾醇结构相似的三萜类化合物对于全身多种疾病具有治疗作用,近年来发现羊毛甾醇合酶(LSS)及羊毛甾醇对白内障具有治疗作用,但羊毛甾醇及其抑制剂与其他眼病的关系尚不清楚.了解羊毛甾醇在眼组织中的分布有助于阐明其与眼病的关系. 目的 研究正常大鼠角膜、晶状体和视网膜中LSS及羊毛甾醇的表达及分布,为相关眼科疾病的靶向治疗提供依据.方法 取SPF级雄性SD大鼠15只,采用戊巴比妥钠过量麻醉法处死实验大鼠,立即摘取眼球,分别采用Western blot和逆转录(RT)-PCR法检测大鼠角膜、晶状体和视网膜组织中LSS蛋白及其mRNA的表达情况;采用免疫荧光化学法对LSS在角膜、晶状体和视网膜组织中的表达进行定位;采用液相色谱-质谱联用仪(LC-MS)检测羊毛甾醇在正常大鼠角膜、晶状体和视网膜组织中的含量. 结果 Western blot法检测显示,大鼠视网膜中无LSS蛋白表达,LSS蛋白在晶状体组织的相对表达量为0.43±0.05,明显高于角膜组织中的0.25±0.03,差异有统计学意义(t =-5.35,P＜0.01).RT-PCR结果显示,正常大鼠视网膜中无LSS mRNA表达,大鼠角膜和晶状体组织中LSS mRNA的相对表达量为0.51±0.04,明显高于角膜组织中的0.29±0.02,差异有统计学意义(t=-8.34,P＜0.01).免疫荧光化学法结果表明,LSS主要表达于角膜上皮、基质和内皮层角膜细胞的细胞质以及晶状体上皮细胞和浅皮质层细胞,而视网膜组织中未检测到LSS表达,且视网膜中LSS与NeuN标记的神经元及谷氨酰胺合成酶(GS)标记的Müller细胞无共表达.LC-MS检测显示,正常大鼠视网膜中未检测到羊毛甾醇,大鼠晶状体中含羊毛甾醇为(24.37±2.91) ng/mg,明显高于角膜组织中的(5.31±0.58) ng/mg,差异有统计学意义(t=-11.13,P＜0.01).结论 LSS及羊毛甾醇分布于大鼠角膜各层组织以及晶状体组织中,在视网膜各层组织中均无LSS表达.     

石斛多糖对糖尿病大鼠血-视网膜屏障的保护作用及其机制

背景 糖尿病视网膜病变(DR)的发病机制涉及多条通路,近年来炎症因子相关的通路学说在DR发病中的作用越来越受到人们的关注.研究表明,高糖环境下视网膜内肿瘤坏死因子-α(TN F-α)等促炎因子含量增加,从而加速视网膜中紧密连接蛋白的异常,导致血-视网膜屏障(BRB)破坏.研究发现石斛多糖可抑制TNF-α的高表达,但其在DR早期对TNF-α表达的影响尚不清楚. 目的 研究石斛多糖对糖尿病大鼠TNF-α诱导的BRB通透性异常及视网膜内紧密连接蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白(occludin)、连接蛋白-5(claudin-5)表达的影响.方法 将50只清洁级成年SD大鼠分为正常对照组、糖尿病模型组及低、中、高剂量石斛多糖组,每组10只大鼠,糖尿病模型组和低、中、高剂量石斛多糖组大鼠均采用链脲佐菌素腹腔内注射法诱导糖尿病模型.低、中、高剂量石斛多糖组于建模成功后6周按照分组分别用100、200及300 mg/(kg·d)石斛多糖灌胃,正常对照组和糖尿病模型组大鼠用生理盐水灌胃.干预后8周各组大鼠心脏灌注伊文思蓝并获取双侧眼球,分别进行相关指标检测,通过测定大鼠视网膜中伊文思蓝质量浓度评估大鼠视网膜渗漏量;采用Western blot法检测大鼠视网膜内ZO-1、occludin、claudin-5蛋白的相对表达量,采用ELISA法检测大鼠视网膜中及血清中TNF-α的质量浓度.结果 正常对照组、糖尿病模型组及低、中、高石斛多糖组大鼠视网膜伊文思蓝渗漏量分别为(12.68±1.30)、(30.45±2.60)、(22.12±1.15)、(17.99±1.00)和(21.49±1.00) μg/μl,糖尿病模型组大鼠视网膜伊文思蓝渗漏量明显高于正常对照组,低、中、高石斛多糖组视网膜伊文思蓝渗漏量明显低于糖尿病模型组,差异均有统计学意义(均P＜0.01).Western blot检测显示,糖尿病模型组大鼠视网膜中TNF-α蛋白相对表达量为1.12±0.10,明显高于正常对照组的0.27±0.03,低、中、高石斛多糖组视网膜中TNF-α蛋白表达量明显低于糖尿病模型组,ZO-1、occludin和claudin-5蛋白表达量明显高于糖尿病模型组,差异均有统计学意义(均P＜0.05);ELISA法检测显示,糖尿病模型组大鼠视网膜和血清中TNF-α质量浓度明显高于正常对照组,低、中、高石斛多糖组大鼠视网膜和血清中TNF-α质量浓度明显低于糖尿病模型组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).不同剂量石斛多糖组各指标的比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 石斛多糖可能通过下调糖尿病大鼠视网膜中TNF-α的表达和上调紧密连接蛋白的表达而改善糖尿病大鼠BRB通透性的异常.     

神经生长因子滴眼液对兔眼LASIK术后角膜神经修复的影响

目的探讨神经生长因子（NGF）对兔眼准分子激光原位角膜磨镶术（LASIK）后角膜神经损伤再生修复的影响。方法实验研究。将15只（30眼）薄瓣LASIK术后新西兰大白兔随机分为NGF组（NGF治疗）、阳性对照组（人工泪液玻璃酸钠滴眼液治疗）与阴性对照组（0.9%氯化钠溶液滴眼）,每组各5只（10眼）。利用共聚焦显微镜分别测量术前,术后1周、1个月、3个月中央角膜上皮下神经密度（SND）、上皮下神经数量及浅基质神经密度、浅基质神经数量,并进行比较。采用重复测量方差分析比较不同时间点及3组之间各神经参数的差异。结果术前阴性对照组、阳性对照组、NGF治疗组SND分别为（10 801±3 331）µm/mm2、（11 619±3 932）µm/mm2、（12 299±2 622）µm/mm2,上皮下神经纤维数量分别为12.2±3.4、11.6±2.7、13.1±2.7,浅基质神经密度分别为（7 258±1 242）µm/mm2、（8 148±2 462）µm/mm2、（8 984±1 526）µm/mm2,浅基质神经数量分别为8.5±1.4、8.9±2.6、10.1±2.1。与术前相比,3组所有的神经参数在术后1周均明显减少（P＜0.01）。与术后1周相比,NGF治疗组SND、浅基质神经密度在术后1个月均上升,而阴性对照组和阳性对照组的SND、浅基质神经密度在术后3个月才开始上升,差异有统计学意义（P＜0.01）;3组上皮下神经数量在术后3个月开始上升（P＜0.05）;NGF组和阳性对照组的浅基质神经数量在术后1个月上升（NGF组P＜0.01,阳性对照组P＜0.05）,并且NGF组的浅基质神经数量在术后1个月恢复到术前水平。结论NGF滴眼液对LASIK术后角膜神经的损伤再修复有明显促进作用。