乳脂肪球表皮生长因子8（MFG-E8）对脂多糖诱导小胶质细胞炎症反应的抑制作用及其机制

目的　探讨乳脂肪球表皮生长因子8（MFG-E8）对脂多糖（LPS）诱导小胶质细胞（BV-2细胞）炎症反应的抑制作用,并探讨可能作用机制。方法　CCK-8法检测0~200 mg·L^-1 MFG-E8对细胞活力影响。建立LPS诱导BV-2细胞视网膜变性疾病体外模型,分为对照组、LPS组、LPS + MFG-E8组、LPS + LY294002组和LPS + PDTC组。倒置显微镜观察BV-2细胞的形态改变,ELISA检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达变化,Western blot检测TNF-α和白细胞介素-6（IL-6）的蛋白表达变化,及PI3K-Akt和NF-κB相关通路蛋白表达变化。结果　0 mg·L^-1、10 mg·L^-1、50 mg·L^-1、100 mg·L^-1和200 mg·L^-1的MFG-E8对BV-2细胞的活性无明显影响,细胞活力差异无统计学意义（P>0.05）;MFG-E8对LPS诱导的BV-2细胞形态变化具有一定的逆转作用;ELISA检测结果显示,LPS组BV-2细胞中TNF-α的含量较对照组明显升高（P<0.001）,LPS + MFG-E8组BV-2细胞中TNF-α的含量较LPS组显著下降（P<0.001）。Western blot检测结果显示,LPS组BV-2细胞中TNF-α和IL-6蛋白相对表达量均显著高于对照组（均为P<0.05）,LPS + MFG-E8组BV-2细胞中TNF-α和IL-6蛋白相对表达量均较LPS组明显降低（均为P<0.05）。LPS组BV-2细胞中NF-κB p-p65蛋白相对表达量明显高于对照组,p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达量均明显低于对照组（均为P<0.001）;LPS + MFG-E8组BV-2细胞中NF-κB p-p65蛋白相对表达量较LPS组明显降低,p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达量均较LPS组明显升高（均为P<0.001）。结论　MFG-E8可能是通过抑制NF-κB信号通路的激活,从而减轻LPS诱导的小胶质细胞炎症反应。     

慢性高眼压SD大鼠视网膜小胶质细胞CD11b表达研究

目的 探讨慢性高眼压SD大鼠在不同眼压下视网膜小胶质细胞CD11b表达情况及视网膜损害程度与小胶质细胞功能的相关性.方法 实验研究.采用532-激光建立SD大鼠慢性高眼压模型,对大鼠前房角进行90～110个点的光凝固,分别在光凝后2周、1…2 3 5及6个月测量大鼠眼压,在相应的时间点,以免疫组织化学方法检测大鼠视网膜小胶质细胞膜表面抗原CD11b表达阳性率.四甲基葡聚糖罗丹明标记视网膜神经节细胞(RGC)并计数.应用SPSS 13.0统计学软件进行数据处理,采用组间对比t检验,比较对照组与实验组不同时间点的眼压值.回归分析判断眼压升高率与RGC损失率及小胶质细胞CD11b表达阳性率的相关性.结果 造模后2周,实验组SD大鼠眼压开始升高,但与对照组相比差异无统计学意义(t=1.124,P=0.287);1个月时实验组眼压升高达到峰值为(24.156±2.704)mm(1 mmHg=0.133 kPa),与对照组(15.930±3.278)mm Hg比较,差异有统计学意义(t=2.487,P=0.036);其后眼压逐渐下降,6个月时眼压恢复至对照组水平(t=1.103,P=0.290).造模后2周,实验组视网膜小胶质细胞CD11b表达阳性;1个月时,CD11b表达阳性细胞明显增多,与对照组相比差异有统计学意义(t=3.333,P=0.008);1个月后,小胶质细胞表达CD11b仅限于视网膜内丛状层和内颗粒层;CD11b表达水平与眼压的升高峰值时间一致(r=0.891,P=0.014).实验组RGC呈持续性损害,至6个月时,RGC数量降至最低值,与对照组比较差异有统计学意义(t=2.316,P=0.045).RGC密度下降率与眼压升高率呈显著相关性(r=0.757,P=0.021).结论 慢性高眼压SD大鼠在造模后不同时段视网膜小胶质细胞CD11b表达水平与眼压升高程度具有明显的相关性,提示小胶质细胞有可能在眼压导致的损伤中发挥呈递损伤抗原作用,从而导致自体抗原产生,启动免疫过程.     

转化生长因子-β2在糖尿病大鼠视网膜中基因表达的研究

目的:糖尿病视网膜病变(diabetic retinophthy,DR)是糖尿病在眼部的主要并发症,为我国四大致盲眼病之一。DR的病理基础是微血管病变,研究其发生、发展的机理对预防和治疗这一疾病具有重要的临床意义。而转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)是一类能够调节细胞生长和分化的多肽,具有多种生物学作用。本研究选择转化生长因子-β2(TGF-β2)为研究对象,检测其在不同时相点糖尿病大鼠视网膜中的基因表达情况,观察和分析TGF-β2的动态表达变化,探讨其在糖尿病视网膜病变发生、发展中的作用机制。方法:选10w龄正常雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,用链脲佐菌素(STZ)诱导SD大鼠建立糖尿病动物模型,血糖浓度大于16.7mmol/L定为糖尿病模型大鼠,于第4,8,12,16,20,24wk分别分离视网膜,液氮保存,应用RT-PCR检测糖尿病大鼠视网膜中不同时相点TGF-β2的基因表达。结果:(1)制备大鼠视网膜总RNA,甲醛变性凝胶电泳显示RNA样品完好无降解,能够用于基因表达分析。(2)用STZ成功诱导建立了大鼠糖尿病动物模型。(3)与正常对照组相比,糖尿病组大鼠视网膜中TGF-β2mRNA表达于4wk时升高,但统计学上差异无显著性(P>0.05);8wk时则下降,差异有显著性(P<0.05);12wk时仍下降,差异有显著性(P<0.05),较8wk时已出现上升趋势;16wk时与正常对照组无明显差异(P>0.05);20wk时则开始升高,但差异无显著性(P>0.05);24wk时继续升高,差异有显著性(P<0.05)。结论:TGF-β2的mRNA表达在糖尿病大鼠视网膜中较对照组于第8wk、12wk时明显降低,第24wk时明显升高,可以看出TGF-β2随时间变化呈双相性。一方面说明TGF-β作为一种重要的细胞生长调节因子的双向调控特点,另一方面也说明TGF-β2在DR中可能发挥着重要作用。     

白介素-18及信号转导和转录激活因子5在 糖尿病大鼠视网膜的表达

目的观察白介素-18（IL-18）及信号转导和转录激活因子5（STAT5）在4 ～24周糖尿病大鼠视网膜的表达，初步探讨其在糖尿病视网膜病变（DR）中可能的分子机制。方法用限制性片段差异显示聚合酶链反应（RFDD-PCR）技术,建立正常大鼠和糖尿病8周大鼠视网膜基因表达谱。以生物信息学分析两者差异，筛选出候补基因IL-18及STAT5。以半定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）观察IL-18及STAT5在4、8、24周糖尿病大鼠视网膜的表达。结果RFDD-PCR结果显示，正常组IL-18表达明显强于糖尿病组；正常组STAT5无表达，糖尿病组较强表达。RT-PCR结果显示，与正常相比，糖尿病4周时，视网膜高表达IL-18，8周IL-18表达降低，24周表达最低。 STAT5在正常及糖尿病4周视网膜未见表达； 8周开始表达，24周时最强。结论IL-18表达变化及STAT5的活化与DR发生有关。IL-18的表达不依赖于STAT5的活化。(中华眼底病杂志,2005,21:258-260)     

转化生长因子-β受体Ⅰ/Ⅱ在大鼠视网膜中基因表达的定量检测

目的:定量检测转化生长因子-(受体Ⅰ(transforming growth factor-(typeⅠreceptor,TβRⅠ)和受体Ⅱ(TβRⅡ)基因在大鼠视网膜中的表达水平,探讨TGF-(不同受体在视网膜中表达的差异及其意义。方法:分离取出大鼠视网膜,抽提RNA并逆转录,实时荧光定量PCR技术分析视网膜中TβRⅠ和TβRⅡ的mRNA含量。结果:TβRⅠ相对于18S的mRNA含量是0.00034±0·00013,TβRⅡ相对于18S的mRNA含量是0.0001±0·00005,差异有统计学意义(P<0.01)。在大鼠视网膜中以TβRⅠ表达为主,TβRⅠ和TβRⅡ比值的平均值为3·9±1.7。结论:实时荧光定量PCR技术能够针对性地精确分析极少量组织细胞的基因表达,TβRⅠ的mRNA在视网膜中的表达明显高于TβRⅡ,提示这可能是与TβRⅠ及TβRⅡ本身结构特点和在TGF-β信号转导过程中的不同作用有关。当TβRⅠ/TβRⅡ比例改变时,可影响细胞对TGF-β的应答反应,可能是增殖性视网膜病变的发生机制之一。     

激活的小胶质细胞在大鼠视网膜缺血再灌损伤模型中的作用

目的探讨活化的小胶质细胞在视网膜缺血再灌注损伤过程中的作用。方法前房灌注法建立视网膜缺血再灌注动物模型,在损伤发生后2 h、12 h、24 h、48 h、72 h,采用免疫组织化学染色方法检测特异性抗原标志物CD68的表达,观察活化小胶质细胞的分布、活化程度等,同时观察相应时间点的视网膜超微结构变化。结果对照组中视网膜小胶质细胞主要位于神经节细胞层。缺血再灌注损伤后2 h组视网膜小胶质细胞的分布部位、表达量等基本与对照组相同;缺血再灌注损伤后12 h组视网膜中CD68+细胞表达增多,内丛状层可见阳性细胞。缺血再灌注损伤后24 h组CD68+细胞表达明显增多,部分向视网膜外层迁移。缺血再灌注损伤后48 h组进入视网膜外层的CD68+细胞多数出现于视网膜内丛状层、内核层、外丛状层。缺血再灌注损伤后72 h组活化小胶质细胞数量达到最高水平。视网膜超微结构显示:缺血再灌注损伤后12 h组开始出现损伤表现,视网膜神经节细胞间隙扩大、光感受器细胞外节膜盘疏松变形、可见散在小胶质细胞;缺血再灌注损伤后24 h组病变继续加重,小胶质细胞数量明显增多;缺血再灌注损伤后72 h组病变继续加重,视网膜神经节细胞数量明显减少,细胞核膜肿胀溶解,细胞器溶解,大鼠视网膜神经节细胞层内可见凋亡小体、小胶质细胞,证明了小胶质细胞对光感受器的损伤作用。结论视网膜缺血再灌注损伤出现明显小胶质细胞活化,活化的小胶质细胞在视网膜超微结构的损伤中发挥着重要作用。     

实时荧光定量PCR检测糖尿病大鼠视网膜中转化生长因子β受体-1和受体-2基因表达

目的:定量检测转化生长因子β受体-1(TransformingGrowthFactor-βreceptortype1,TβR1)和转化生长因子β受体-2(TransformingGrowthFactor-βreceptortype2,TβR2)编码基因在糖尿病大鼠视网膜中不同时相点的动态表达水平,以探讨转化生长因子β及转化生长因子β受体在糖尿病视网膜病变(DR)中的作用。方法:选择健康成年SD大鼠28只,随机分为正常对照组(CON)和糖尿病组(DM)。利用链尿佐菌素(STZ)诱导大鼠糖尿病视网膜病变模型,制备RNA并逆转录,实时荧光定量PCR技术分析TβR1和TβR2在不同时相点相对于内参照基因18s的相对mRNA含量。结果:TβR1在4,12wk时相对于18s的mRNA含量分别为0.000493±0.000133和0.000608±0.000232。TβR2在4,12wk时相对于18s的mRNA含量分别为0.000166±0.000057和0.000113±0.000049。TβR1基因表达水平随着病变进展呈上升趋势,TβR2在4wk时表达量较正常增加,到12wk时表达量又减少,逐渐恢复到正常水平。结论:糖尿病大鼠视网膜中TβR1和TβR2基因表达水平变化可能影响TGF-β信号的转导过程,TGF-β及其受体介导的信号转导通路在糖尿病视网膜病变中具有重要作用。     

转化生长因子-β2（TGF-β2）诱导人视网膜色素上皮层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达及意义

目的　探究转化生长因子-β２（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ-β２,ＴＧＦ-β２）诱导人视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ,ＲＰＥ）层细胞上皮-间质转分化中ｍｉＲＮＡ-２９ｂ的表达变化及意义。方法　使用不同浓度ＴＧＦ-β２刺激ＲＰＥ细胞上皮-间质转分化后,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、ＲＴ-ＰＣＲ检测成纤维化相关分子纤维连接蛋白（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｏｎ,ＦＮ）、神经钙粘连蛋白（ｎｅｒｖｅｃａｌｃｉｕｍａｄｈｅｓｉｏｎｐｒｏ-ｔｅｉｎ,Ｎ-Ｃａｄｈｅｒｉｎ）的表达。采用ＲＴ-ＰＣＲ检测不同浓度ＴＧＦ-β２及不同时间ＴＧＦ-β２（５μｇ·Ｌ－１）刺激ＲＰＥ细胞后ｍｉＲＮＡ-２９ｂ的表达。结果　ＴＧＦ-β２刺激后的ＲＰＥ细胞形态呈纤维化改变。在一定浓度范围内（１μｇ·Ｌ－１、５μｇ·Ｌ－１、１０μｇ·Ｌ－１）,随着ＴＧＦ-β２浓度的增加ＦＮ、Ｎ-Ｃａｄｈｅｒｉｎ及相应ｍＲＮＡ随之增加,１μｇ·Ｌ－１、５μｇ·Ｌ－１、１０μｇ·Ｌ－１组与对照组（０μｇ·Ｌ－１）相比,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）。ＴＧＦ-β２在一定浓度范围内（０μｇ·Ｌ－１、１μｇ·Ｌ－１、５μｇ·Ｌ－１）以剂量依赖的方式诱导ＲＰＥ细胞ｍｉＲＮＡ-２９ｂ表达的降低,１μｇ·Ｌ－１、５μｇ·Ｌ－１、１０μｇ·Ｌ－１组与对照组（０μｇ·Ｌ－１）相比,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）,在ＴＧＦ-β２浓度为５μｇ·Ｌ－１时ｍｉＲＮＡ-２９ｂ表达量最低。ＴＧＦ-β２在一定时间范围内（０ｈ、３ｈ、６ｈ、１２ｈ）以时间依赖的方式诱导ＲＰＥ细胞ｍｉＲＮＡ-２９ｂ表达的降低,３ｈ、６ｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ组与０ｈ相比差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。结论　一定范围内ＴＧＦ-β２以剂量和时间依赖的方式诱导ＲＰＥ细胞ｍｉＲＮＡ-２９ｂ的表达,为进一步研究ｍｉＲＮＡ-２９ｂ与ＴＧＦ-β２在ＲＰＥ细胞上皮-间质转分化过程中的相互作用提供理论基础。     

整合素α5β1在视网膜下膜中的表达

目的 研究整合素α5β1及其配体纤维粘连蛋白(FN)在视网膜中的表达.方法 通过玻璃体切割术采集14例视网膜脱离病例的视网膜下膜标本,用免疫组织化学法检测下膜中角蛋白、整合素α5β-1及FN的表达.免疫荧光双标记法研究视网膜下膜色素上皮细胞与整合素α5β1表达的关系,用激光扫描共聚焦显微镜定量分析视网膜下膜与正常视网膜下膜组织中整合素α5β1表达的差异.结果 14例下膜标本中整合素α5β1和FN表达均呈阳性,免疫组织化学染色呈棕黄色,免疫荧光呈绿色或红色.角蛋白表达呈阳性的视网膜色素上皮(RPE)细胞的细胞膜上表达α5β1,见于下膜的全层;正常视网膜组织中α5β1的表达见于邻近Bruch膜的表面.两者比较差异有统计学意义(t=12.01、9.20,P＜0.05).结论 在视网膜下膜组织中RPE细胞整合素α5β1表达上调,其配体FN也显著表达,表明整合素α5β1与FN参与了视网膜下膜的形成.     

Nogo-66蛋白对慢性高眼压大鼠视网膜小胶质细胞功能的影响

目的 探讨Nogo-66蛋白对慢性高眼压大鼠视网膜小胶质细胞表面抗原CD11b及MHC-Ⅱ表达的影响及其对损伤组织抗原呈递作用的干预性质.方法 对照实验研究.采用随机数字表法,将实验动物分为4组:高眼压+Nogo-66蛋白组,正常眼压+Nogo-66蛋白对照组,高眼压+损伤对照组,正常眼压+损伤对照组.应用532-激光行周边前房角光凝+巩膜浅层静脉关闭术,建立慢性高眼压动物模型.实验组大鼠接种:于双后足趾及背部皮下多点注射无菌等渗10%Nogo-66蛋白磷酸缓冲液(PBS),注射后7 d、1个月,分别以0.005%的Nogo-66蛋白PBS注射液2 μl进行玻璃体腔内注射.对照组大鼠接种:以等渗PBS等量于相同部位注射.初次接种后1个月,免疫组织化学法标记视网膜小胶质细胞表面抗原CD11b和MHC-Ⅱ,应用Image-Pro Plus Version 6.0图像分析软件进行图像处理,获得小胶质细胞表面抗原阳性表达的量化指标.实验组与对照组大鼠眼压均值比较,采用两样本计量资料的方差分析;小胶质细胞表面抗原阳性表达水平比较,采用配伍设计多个样本均数比较的t检验.结果 实验组大鼠于建模后7 d眼压开始升高,1个月时眼压最高为(24.16±2.70)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),与对照组(15.93±3.28)mm Hg比较,差异有统计学意义(F=2.10,P<0.05).在Nogo-66蛋白干预下,正常眼压+Nogo-66蛋白组大鼠视网膜小胶质细胞MHC-Ⅱ阳性表达百分比为(11.45±1.97)%,显著高于高眼压+Nogo-66蛋白组(3.92±1.03)%,差异有统计学意义(t=2.14,P<0.05);正常眼压+Nogo-66蛋白组大鼠视网膜神经节细胞层小胶质细胞CD11b表达百分比为(8.15±1.97)%,显著高于高眼压组(1.78±0.63)%,差异有统计学意义(t=2.35,P<0.05).结论 外源性Nogo-66蛋白能够刺激视网膜神经节细胞层及神经纤维层小胶质细胞表面抗原CD11b及抗原呈递分子MHC-Ⅱ的阳性表达,提示Nogo-66蛋白具有中枢免疫原性,其有可能激活抗原呈递细胞,完成其呈递损伤抗原的作用.     

Nogo-66蛋白对慢性高眼压大鼠视网膜小胶质细胞功能的影响

Objective To study the effect of protein Nogo-66 on the expression of CD11b and MHC-Ⅱ in retinal microglia of chronic ocular hypertension SD rats and the effects of protein Nogo-66 on the immunogenicity of injured retinal tissues.Methods It was a control experimental study.Chronic ocular hypertension rat model was established by laser photocoagulation on the anterior chamber angle and superficial vein of the sclera.One ml of Nogo-66(0.01%)in PBS was injected subeutaneouly on the day of laser treatment and 0.005% Nogo-66 PBS solution was injected into the vitreous 7days and 1 month latter.PBS without Nogo-66 was injected in the control group.The expression of cell surface antigen CD11b and MHC-Ⅱ were detected by immunohistochemistry 1 month and 1 day after the establishment of hypertension model.The difference of average IOP among groups was analyzed by variance analysis.The difierence of expression of CD11b and MHC-Ⅱ between the experimental and control groups was analyzed by t-test.Results The intraocular pressure (IOP) of experimental groups rised from the soventh day after modelbuilding and the highest IOP was(24.16±2.70)mm Hg (1 mm Hg=0. 133 kPa) 1 month later while that in the control groups was(15.93 ± 3.28 )mm Hg. The difference between them was statistically significant (F= 2.10, P<0. 05). Expression of CD11b was ( 1.78 ± 0. 63 )% and MHC-Ⅱ was (3.92 ± 1.03 ) % inNogo-66 with hypertension groups, these results was significantly lower than those in Nogo-66 with normal intraocular pressure groups in which the expression of CD11b was ( 8.15 ± 1.97 ) % ( t = 2.35, P < 0. 05 )and MHC-Ⅱ was(11.45 ±1.97)% (t =2.14, P <0.05). Conclusions Protein Nogo-66 activated the cell surface antigen CD11b in nerve fiber layer of retina and induced antigen presenting molecules (MHC-Ⅱ). This indicates that Nogo has the center immunogenicity and this protein could activate antigenpresenting cells to present injury antigen.     

Nogo-66蛋白对慢性高眼压大鼠视网膜小胶质细胞功能的影响

Objective To study the effect of protein Nogo-66 on the expression of CD11b and MHC-Ⅱ in retinal microglia of chronic ocular hypertension SD rats and the effects of protein Nogo-66 on the immunogenicity of injured retinal tissues.Methods It was a control experimental study.Chronic ocular hypertension rat model was established by laser photocoagulation on the anterior chamber angle and superficial vein of the sclera.One ml of Nogo-66(0.01%)in PBS was injected subeutaneouly on the day of laser treatment and 0.005% Nogo-66 PBS solution was injected into the vitreous 7days and 1 month latter.PBS without Nogo-66 was injected in the control group.The expression of cell surface antigen CD11b and MHC-Ⅱ were detected by immunohistochemistry 1 month and 1 day after the establishment of hypertension model.The difference of average IOP among groups was analyzed by variance analysis.The difierence of expression of CD11b and MHC-Ⅱ between the experimental and control groups was analyzed by t-test.Results The intraocular pressure (IOP) of experimental groups rised from the soventh day after modelbuilding and the highest IOP was(24.16±2.70)mm Hg (1 mm Hg=0. 133 kPa) 1 month later while that in the control groups was(15.93 ± 3.28 )mm Hg. The difference between them was statistically significant (F= 2.10, P<0. 05). Expression of CD11b was ( 1.78 ± 0. 63 )% and MHC-Ⅱ was (3.92 ± 1.03 ) % inNogo-66 with hypertension groups, these results was significantly lower than those in Nogo-66 with normal intraocular pressure groups in which the expression of CD11b was ( 8.15 ± 1.97 ) % ( t = 2.35, P < 0. 05 )and MHC-Ⅱ was(11.45 ±1.97)% (t =2.14, P <0.05). Conclusions Protein Nogo-66 activated the cell surface antigen CD11b in nerve fiber layer of retina and induced antigen presenting molecules (MHC-Ⅱ). This indicates that Nogo has the center immunogenicity and this protein could activate antigenpresenting cells to present injury antigen.     

透镜诱导型近视眼视网膜色素上皮细胞肝细胞生长因子表达的变化

目的观察豚鼠镜片诱导型近视眼（LIM）眼球前部及后极部视网膜色素上皮（RPE）细胞中肝细胞生长因子（HGF）的表达变化,探讨近视眼的发病机制。方法取2周龄豚鼠10只,随机选择一眼作为实验眼,制备近视眼模型（眼前配戴凹透镜45d）,对侧眼作为自身对照。实验前后测量豚鼠双眼屈光度和眼轴长度。原代培养豚鼠视网膜前部及后极部RPE细胞,传1代后,对各组RPE细胞HGF表达进行免疫细胞化学分析。采用SPSS12．0统计软件对相关数据进行配对t检验和单因素方差分析。结果①豚鼠经过45d的透镜诱导后,形成（-6．70±1．93）D的相对近视,眼轴延长（1．53±0．31）mm,前后差异有统计学意义（t=-9．25,t=9．17,P〈0．05）,近视模型造模成功。②在光镜下观察免疫细胞化学爬片显示．HGF存RPE细胞中的表达定位于细胞浆,细胞核无着色。近视眼前部和后极部RPE细胞的HGF表达明最高于自身对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）;近视模型眼和对照眼自身前部与后极部HGF表达比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论体外培养的豚鼠RPE细胞稳定表达HGF：HGF在近视模型眼前部和后极部RPE细胞中的活性都升高,参与了实验性近视眼的形成。     

Growth stimulating activity of heparin-binding growth factor in the neural retina for retinal pigment epithelial cells

Retinal pigment epithelial cells (RPE cells) participate in intraocular fibrocellular proliferation in proliferative vitreoretinopathy (PVR). The initial signal for proliferation and migration of RPE cells on PVR is not clear. However, water soluble extract from neural retina has been known to stimulate RPE cells, and fibroblast growth factor had a high affinity for heparin. In this experiment, we purified heparin-binding growth factor (HBGF) from neural retina using heparin-affinity chromatography. Then we examined the growth stimulating activity of HBGF for RPE cells proliferation. RPE cells were stimulated by HBGF, on the other hand heparin non-binding component could not stimulate RPE cells. This result suggests that the grwth-stimulating activity of retinal extract on RPE cells is related to HBGF.     

抗血管生成作用的VEGFxxxb在缺氧视网膜色素上皮细胞中的表达

背景 缺氧可诱导视网膜色素上皮（RPE）细胞分泌血管内皮生长因子A（VEGF-A）,从而促进脉络膜新生血管（CNV）形成.VEGF-A依选择性剪接方式的不同,可形成具有促血管生成作用的VEGFxxx和具有抗血管生成作用的VEGFxxxb,但后者在常氧和缺氧状态下在人RPE细胞中的表达变化及其作用尚不清楚.目的 从mRNA水平和蛋白水平检测模拟缺氧状态培养的RPE细胞中VEGFmb的表达,研究VEGFxxxb在常氧和缺氧培养的RPE细胞中的表达变化.方法 以人RPE细胞系ARPE-19为研究对象,将150 μmol/L化学诱导剂CoC12加入细胞培养液制备缺氧细胞模型,分别于0h（常氧培养）及缺氧培养3、6、12和24 h收获细胞或细胞上清液,采用逆转录PCR（RT-PCR）法检测细胞内VEGFxxxmRNA和VEGFxxxb mRNA的表达;采用Western blot法检测细胞内总VEGF-A蛋白和VEGFxxxb蛋白的表达;采用ELISA法检测细胞上清中总VEGF-A蛋白和VEGFxxxb蛋白的含量.结果 在常氧及诱导缺氧后,ARPE-19细胞中均可检测到VEGFxxxmRNA和VEGFxxxb mRNA的表达,检测出的VEGFxxxmRNA中同时出现VEGF121、VEGF165和极微弱的VEGF189条带;检出的VEGFxxxb mRNA中可见VEGF165b条带.缺氧培养的细胞中随着缺氧时间的延长,VEGFxxxmRNA显示出表达逐渐增加的趋势,而VEGFxxxb mRNA则显示出表达逐渐减少的趋势.Western blot法可检测到细胞中VEGFxxxb蛋白的表达,尤以VEGF165b表达最强,随缺氧培养时间的延长,VEGF165b蛋白表达逐渐减少.培养的细胞上清中VEGFxxxb蛋白质量浓度由常氧培养时的（166.82±2.55） pg/ml下降至缺氧培养24 h的（125.35±2.10）pg/ml,而总VEGF-A蛋白则由（294.27±11.97） pg/ml上升至（582.26±12.98） pg/ml.细胞中VEGFxxxbb蛋白占总VEGF-A蛋白的比例随缺氧培养时间的延长,由常氧培养条件下的（56.71±1.02）％逐渐下降至缺氧培养24 h的（21.53±0.08）％.结论 ARPE-19细胞在常氧和缺氧培养条件下均可检测到VEGFxxxbb mRNA和蛋白的?     

碱性成纤维细胞生长因子在糖尿病大鼠视网膜血管中的表达

目的　通过糖尿病大鼠视网膜血管铺片的原位杂交及免疫组化 ,直接证明视网膜血管中碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)蛋白质及mRNA的表达 ,并探讨bFGF在糖尿病视网膜病变 (DR)发展过程中的作用。方法　复制链脲佐菌素 (STZ)糖尿病大鼠动物模型 ,取不同组、不同时期大鼠视网膜的血管进行铺片 ,并在铺片上进行免疫组化及原位杂交 ,检测铺片的血管上bFGF蛋白质及mRNA的表达情况。结果　 ( 1)正常对照组 (M)、血糖恢复组及糖尿病 1个月组(M1 )大鼠视网膜血管的形态及周细胞数均无明显差异 ,bFGF蛋白质及mRNA均无阳性表达。 ( 2 )糖尿病 3个月组 (M3)血管周细胞数减少 (P <0 0 1) ,细胞核可见bFGFmRNA表达 ( 78% ) ,血管壁可见bFGF蛋白表达阳性 ( 5 6% )。 ( 3 )糖尿病5个月组 (M5)血管周细胞数减少 (P <0 0 1)且可见闭塞毛细血管及血栓 ,细胞核bFGFmRNA表达阳性率高于M3为 89% ,血管壁bFGF蛋白质表达也高于M3为 89%。结论　bFGF在STZ大鼠的视网膜血管中有表达 ,且随着病程的延长其表达加强。     

前速激肽原mRNA在小鼠视网膜细胞发育过程中的表达

目的观察新生期视网膜神经细胞发育过程中前速激肽原mRNA的表达，探讨其是否参与视网膜神经细胞发育成熟过程。方法昆明系小鼠在出生后10d（睁眼前）、20d（睁眼后）、30d（睁眼后）分别取材双侧眼球，利用原位杂交组织化学技术对视网膜全层组织细胞的前速激肽原mRNA表达水平进行观察和比较。结果前速激肽原mRNA阳性表达细胞在光学显微镜下胞浆呈现靛蓝色，散在分布于视网膜各个层区，主要见于神经节细胞层、内核层、外核层。10d龄新生小鼠前速激肽原mRNA阳性表达细胞数最多；而与10d龄时比较，20d龄小鼠前速激肽原mRNA阳性细胞数目在神经节细胞层、内核层、外核层显著减少（P〈0．05），30d龄时前速激肽原mRNA阳性细胞数目分别较10d龄时、20d龄时显著减少（P〈0．05）。结论在新生小鼠视网膜神经细胞发育早期，前速激肽原mRNA阳性表达水平最高；随着个体生长发育至成熟，前速激肽原mRNA阳性表达水平逐渐减低或消失，提示前速激肽原参与视网膜神经细胞的发育成熟过程并起重要作用。     

Inhibition of growth factor effects in retinal pigment epithelial cells

Several agents were examined for their effect on growth factor-stimulated processes in retinal pigment epithelial (RPE) cells. DNA synthesis was assessed by 3H-thymidine incorporation in density-arrested cells using previously determined maximally effective concentrations of various growth factors with and without test substances. Cell migration was assessed in Boyden chamber assays. For each test substance, trypan blue exclusion was used to determine noncytotoxic concentrations, and the effect of several concentrations were assessed on selected growth factors. The most effective, nontoxic concentration was then used for comparisons. Two cationic proteins, protamine and histone type II B, caused inhibition of RPE chemotaxis and 3H-thymidine incorporation induced by several growth factors, but a cationic polypeptide, polylysine, did not. Protamine and histone, were particularly effective inhibitors of acidic and basic fibroblast growth factors (FGF) but not if they were exposed to cells and then removed before growth factor addition. They had no effect on serum-stimulated chemotaxis or 3H-thymidine incorporation even when used in the presence of serum. Three anionic substances, heparin, pentosan polysulfate, and suramin, also inhibited RPE chemotaxis and 3H-thymidine incorporation induced by several different growth factors. They were less effective inhibitors of the FGFs than protamine and histone but were better inhibitors of serum-induced effects. Also unlike protamine and histone, the anionic substances maintained their inhibitory effect even when removed before growth factor addition. Since migration and proliferation of RPE cells are important processes in the pathogenesis of proliferative vitreoretinopathy, these agents and their mechanism of action deserve further study for potential therapeutic applications.