去整合素Echistatin抑制糖尿病兔远期后发性白内障

目的 观察并探讨不同浓度去整合素(Echistatin,Ecs)对糖尿病兔远期后发性白内障(posteriorcapsularopacification,PCO)发生过程中晶状体上皮细胞(lensepithelialcells,LEC)增殖的抑制作用,以及其在眼内的安全性。方法 建立糖尿病兔模型,随机分为对照组(A组,术毕前房注入蒸馏水0.2mL);实验组:B组、C组、D组(术毕前房分别注入5.0×10-3μgL-1、7.5×10-3μgL-1、10.0×10-3μgL-1Ecs),术后裂隙灯下观察角膜、前房及PCO情况。术后6周取材,常规石蜡切片,HE染色。用免疫组织化学法检测PCO发生过程中LEC增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)的表达,TUNEL法检测角膜内皮细胞、视网膜神经节细胞层及内核层细胞的凋亡情况。 结果 HE染色结果显示,术后6周各组角膜内皮细胞排列整齐、未见水肿,视网膜内界膜与各层组织结构完整,未见药物引起明显的组织损伤反应。各组间PCO分级差异有统计学意义(P=0.011)。免疫组织化学法检测各组后囊膜PCNA表达结果显示,A组、B组、C组、D组的平均光密度值分别为0.499±0043、0.484±0.055、0.422±0.012、0.340±0.031,B组后囊膜上PCNA表达与A组差异无统计学意义(P>0.05),余组间两两比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。TUNEL法检测各组角膜内皮细胞、视网膜神经节细胞层及内核层细胞凋亡发现,各组间细胞凋亡比较均未见明显差异(均为P>0.05)。结论 10.0×10-3μgL-1Ecs对糖尿病兔远期PCO具有明显抑制作用,且对眼内相邻及重要组织无明显毒性作用,因此可选用此浓度进行后续研究。     

去整合素Echistatin对糖尿病兔早期后发性白内障的抑制作用及眼内安全性

背景 后囊膜混浊（PCO）是影响白内障术后视力的主要原因,糖尿病患者白内障术后更容易发生PCO.研究证实,去整合素Echistatin（Ecs）能抑制体外晶状体上皮细胞（LECs）的增生,从而抑制PCO的形成,但其机制和安全剂量有待证实.目的 研究不同质量浓度Ecs对糖尿病兔早期PCO发生过程中LECs增生的抑制作用及Ecs在眼内应用的安全剂量.方法 用随机数字表法将15只新西兰大白兔分为5个组,用四氧嘧啶兔耳缘静脉注射法建立兔糖尿病模型,然后兔右眼行常规晶状体囊外摘出术,术后单纯糖尿病兔前房注入蒸馏水0.2 ml作为对照组,术后按照分组前房内分别注入5.0、7.5、10.0和15.0 μg/ml的Ecs0.2 ml.术后裂隙灯生物显微镜下观察眼前段炎症反应及PCO形成和分级情况.术后10d取出兔右眼,制备常规石蜡切片,采用免疫组织化学法检测PCO发生过程中LECs中增生细胞核抗原（PCNA）的表达以确定Ecs对PCO抑制的有效剂量;采用常规组织病理学方法检查角膜和视网膜结构的形态学改变,并采用TUNEL法检测角膜内皮细胞及视网膜内核层细胞的凋亡情况,以确定Ecs对眼内组织的安全剂量.结果 各组兔实验眼晶状体囊外摘出术后出现不同程度的角膜水肿及前房渗出,对照组和5.0 μg/ml Ecs组术后3～5 d炎症反应消失,≥7.5 μg/ml Ecs组术眼均于术后7d恢复正常.术后对照组和5.0 μg/ml Ecs组PCO均为1～2级,≥7.5 μg/ml Ecs组术眼PCO均为0级.对照组、5.0 μg/ml Ecs组、7.5 μg/ml Ecs组和10.0 μg/ml Ecs组LECs中PCNA阳性细胞表达值（A值）的总体比较差异有统计学意义（F=18.006,P=0.001）,与对照组比较,7.5和10.0 μg/ml Ecs组LECs中PCNA阳性细胞表达值明显下降,差异均有统计学意义（P=0.010、0.001）.各组兔眼角膜内皮细胞排列整齐,视网膜内界膜与各层组织结构完整.TUNEL法检测可见≤10.0 μg/ml Ecs各组与对照组间角膜内皮细胞及视网膜内核层?     

糖尿病兔后囊膜混浊发生过程中血清及房水中AGE和IGF1的变化及去整合素echistatin对二者的影响

目的 观察糖尿病兔后囊膜混浊(posteriorcapsuleopacification,PCO)发生过程中血清及房水中晚期糖基化终末产物(advancedglycationendproducts,AGE)和胰岛素样生长因子1(insulinlikegrowthfactor1,IGF1)的含量变化,同时观察去整合素echistatin(Ecs)对二者的干预作用。方法 将24只兔随机分为对照组、糖尿病组及Ecs组,后2组应用四氧嘧啶建立糖尿病模型,所有兔行晶状体摘出术,Ecs组术中晶状体囊袋内注入10mgL-1Ecs,其余2组注入等量高压灭菌蒸馏水。分别于术后10d、6周提取3组血清及房水,应用ELISA法检测AGE和IGF1含量。结果 术后10d房水中AGE浓度在三组中分别为(0189±0.200)μgL-1、(0.467±0.190)μgL-1、(0.527±0.130)μgL-1;6周为(0.255±0.640)μgL-1、(0.716±0340)μgL-1、(0.830±0.330)μgL-1。术后10d血清中AGE浓度在对照组、糖尿病组和Ecs组中分别为(0.074±0.013)μgL-1、(0.270±0.120)μgL-1、(0.213±0.690)μgL-1;6周为(0.054±0.010)μgL-1、(0.166±0.460)μgL-1、(0149±0.200)μgL-1。术后10d房水中IGF1浓度在3组中分别为(0.279±0.080)μgL-1、(0.914±0.130)μgL-1、(0.556±0.290)μgL-1;6周为(0.176±0.030)μgL-1、(0.508±0.040)μgL-1、(0.367±0.090)μgL-1。术后10d血清中IGF1浓度在对照组、糖尿病组和Ecs组中分别为(0.075±0.030)μgL-1、(0.293±0.160)μgL-1、(0.305±0.160)μgL-1;6周为(0.032±0.020)μgL-1、(0.833±0.570)μgL-1、(0.788±0.530)μgL-1。术后10d及6周对照组血清及房水中AGE和IGF1含量均低于糖尿病组及Ecs组(均为P<0.05)。糖尿病组及Ecs组中AGE含量比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05),糖尿病组及Ecs组中IGF1含量在血清中差异均无统计学意义(均为P>0.05),但在房水中     

去整合素抑制兔晶状体上皮细胞增殖的实验研究

目的 探讨去整合素(Kistrin)对兔眼后发性白内障发生过程中晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)增殖的抑制作用.方法 雄性新西兰大白兔36只,随机分为对照组:A组,实验组:B、C、D组,每组各9只兔9眼(右眼).4组均行透明晶状体囊外摘出术,术毕A组兔眼前房注入林格液0.2 mL,B、C、D组分别注入40 μg·L-1、80μg·L-1和160 μg·L-1 Kistrin溶液0.2 mL.术后第14天采用免疫组织化学法对4组兔后发性白内障发生过程中LEC增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达进行检测,计算增殖指数(proliferative index,P1)值,PI=PCNA阳性细胞数/50×100%;通过HE染色及透射电镜观察角膜改变情况.结果 (1)术后第14天PI值A组:0.320±0.020、B组:0.175±0.030、C组:0.065±0.020、D组:0.190±0.050,B、C、D组较A组PI值均明显降低(均为P＜0.01);C组较B、D组PI值均明显降低(均为P＜0.01),B组与D组PI值比较差异无统计学意义(P＞0.05);(2)术后第14天赤道部PI值A组:0.390±0.060、B组:0.230±0.040、C组:0.110±0.030、D组:0.240±0.080;中央部PI值A组:0.250±0.050、B组:0.120±0.030、C组:0.060±0.020、D组:0.140±0.040,4组赤道部较中央部PCNA阳性表达均明显升高(均为P＜0.01).(3)实验组C组与A组比较:角膜内皮细胞超微结构无明显改变.结论 40～160μg·L-1的Kistrin灌注液可有效地抑制制兔眼后发性白内障的发生;赤道部LEC增殖能力强于中央部;80μg·L-1可作为进一步研究Kistrin抑制后发性白内障形成的较适宜浓度.     

糖尿病兔后发性白内障发生过程中晶状体上皮细胞增殖的变化

目的观察糖尿病兔后囊膜混浊(posterior capsular opacification,PCO)发生过程中晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)的增殖情况,以探讨高血糖下LEC增殖的变化规律。方法 24只12～16周龄雄性新西兰大白兔建立1型糖尿病模型后行右眼晶状体囊外摘出术,术后选取1d、7d、10d、12d及2周、4周、6周、8周8个时间点在裂隙灯显微镜下观察PCO程度,并用Odrich法对PCO进行分级,每个时间点取3只兔眼,检测增殖细胞核抗原在后囊膜LEC中的表达,并换算成增殖指数(proliferative index,PI)值。结果糖尿病兔术后10d时可观察到部分标本出现后囊膜轻度混浊;6周时可观察到完全PCO,差异有统计学意义(P<0.05)。术后1d、7d PI值均为0,10d、12d及2周、4周、6周、8周时的PI值分别为0.320±0.020、0.520±0.020、0.753±0.306、0.907±0.012、1.000±0.000、0.947±0.012,术后10d到6周每个时间点PI值与上一时间点比较差异均有统计学意义(均为P<0.05),术后6周PI值达到高峰,8周时开始下降。结论糖尿病兔晶状体摘出术后随着时间的推移PCO形成逐渐加重,术后10d LEC开始发生增殖,6周时达到高峰。     

去整合素kistrin对兔眼晶状体后囊Ⅳ型胶原表达的影响

背景 白内障囊外摘出术后残留的晶状体上皮细胞(LECs)增生是后囊膜胶原产生进而形成后发性白内障的生物学基础,去整合素可与细胞外基质(ECM)竞争结合整合素分子,理论上可以防治后发性白内障的形成,但其具体的作用机制有待进一步研究. 目的 研究去整合素kistrin对兔眼晶状体后囊Ⅳ型胶原表达的影响.方法24只新西兰大白兔按照随机数字表法分为kistrin注射组及生理盐水对照组,每组12只.两组兔均行右眼透明晶状体囊外摘出术,建立兔晶状体后囊膜混浊(PCO)模型,术毕kistrin注射组囊袋内注入80 mg/L kistrin 0.2 ml,生理盐水对照组注入等量生理盐水.术后1、3、5、7、14 d,在裂隙灯下观察实验动物晶状体PCO情况,并按照Odrich法进行分级.术后14d及3个月分别处死两组兔各6只,取出晶状体进行常规石蜡切片,行苏木精-伊红染色,光学显微镜下观察晶状体病理改变;行Masson染色观察晶状体囊袋内胶原纤维增生情况,免疫组织化学法检测兔晶状体后囊Ⅳ型胶原的表达. 结果 术后14 d,生理盐水对照组与kistrin注射组各级PCO的眼数差异无统计学意义(P=0.093),术后1、2、3个月,生理盐水对照组形成2～3级PCO的眼数明显多于kistrin注射组,差异均有统计学意义(P=0.041、0.014、0.022).晶状体组织学检查表明,术后14 d生理盐水对照组LECs层数明显多于kistrin注射组,瞳孔区后囊膜可见单层细胞黏附,kistrin注射组后囊则保持光滑,术后3个月可见生理盐水对照组晶状体后囊的LECs转化为纤维细胞,kistrin注射组较少见.Masson染色显示术后3个月生理盐水对照组晶状体前囊膜撕囊口处与后囊膜之间胶原纤维的蓝绿色染色明显多于kistrin注射组.免疫组织化学染色表明,术后14 d及30 d,生理盐水对照组晶状体后囊膜Ⅳ型胶原的灰度值均明显低于kistrin注射组,差异均有统计学意义(P=0.000、0.001). 结论 去整合素kistrin能够抑制兔眼晶状体囊外摘出术术后晶状体后囊LECs和Ⅳ型胶原增生.     

整合素与去整合素在后发性白内障方面的研究现状

晶状体摘除术后晶状体上皮细胞的增殖、黏附和迁移是后发性白内障的主要原因,整合素是一类介导C-C间以及C-ECM间的相互作用的黏附分子,在晶状体上皮细胞的增殖、黏附和迁移过程中发挥重要的作用,去整合素是一种小分子多肽,它可以特异性的被整合素识别并黏附,从而抑制整合素的生物学作用,本文就整合素的功能,整合素在晶状体上皮细胞上的分布及功能,晶状体上皮细胞与后发性白内障之间的关系以及去整合素在后发性白内障防治方面的研究进展做一综述。     

糖尿病兔晶状体后囊膜混浊模型的建立

背景实验性糖尿病动物模型的制作是对糖尿病性眼病进行实验研究的关键环节,目前国内普遍应用的方法是链脲佐菌素和四氧嘧啶（ALX）注射,但前者价格昂贵,后者造模过程中动物的死亡率较高。目的探讨ALX注射制作糖尿病兔晶状体后囊膜混浊（PCO）模型并降低死亡率的方法,并观察高血糖对晶状体PCO形成的早期影响。方法将清洁级健康新西兰雄性大白兔40只随机分为2组;其中20只兔经耳缘静脉一次性注射ALX90mg／kg建立糖尿病模型作为高血糖组,另20只兔以同样的方法注射等量生理盐水作为正常血糖组。药物注射后2周时高血糖组兔血糖升高到12．0mmol／L以上可判断为建模成功,2组分别行兔右眼透明晶状体囊外摘出术并对晶状体PCO进行分级。于术后第6、10、14天取眼球,应用免疫组织化学法观察增生细胞核抗原（PCNA）在后囊膜晶状体上皮细胞（LECs）中的表达情况。结果ALX注射后糖尿病兔的成模率为70％。术后第6、10、14天时,高血糖组兔体质量均明显低于正常血糖组,但血糖明显高于正常血糖组,差异均有统计学意义（P〈0．05）。高血糖组术后14d时观察的3只兔中,2只兔出现后囊膜2级混浊,另1只兔出现1级混浊。正常血糖组术后14d时观察的3只兔后囊膜均出现1级混浊。免疫组织化学染色显示,术后第10天高血糖组可见PCNA在LECs的细胞核中表达,但正常血糖组未见PCNA的表达。术后第14天时高血糖组PCNA增生指数为0．86±0．04,明显高于正常血糖组的0．25±0．03,差异有统计学意义（t=-16．171,P=0．000）。结论90mg／kg的ALX静脉注射能形成稳定的糖尿病兔PCO模型;高血糖是促进PCO发生发展的重要因素之一。     

糖尿病性白内障晶状体上皮细胞凋亡与增殖特性的实验研究

目的观察糖尿病性白内障晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LECs)凋亡、增殖特性的变化,探讨糖尿病性白内障发生的相关机制.方法采用四氧嘧啶诱发兔糖尿病性白内障模型,定期监测血糖和观察晶状体的变化.TUNEL技术标记凋亡的LECs,测定凋亡百分率和晶状体上皮细胞密度,并用免疫组化SABC法检测LECs中增殖细胞核抗原的表达及积分光密度(A)值.结果TUNEL染色显示模型组兔晶状体上皮细胞中有凋亡阳性细胞,糖尿病性白内障模型组与同期正常对照组比较,其LECs凋亡百分率显著升高(P＜0.01),且随观察期内时间推移和晶状体混浊程度的加重呈明显上升趋势;早期2组晶状体上皮细胞密度和增殖细胞核抗原积分光密度(A)值的变化无显著性,但随着观察期内高血糖持续时间的延长(8周后),2组间差异日趋显著(P＜0.01).结论糖尿病性白内障的发生与晶状体上皮细胞凋亡及增殖特性的改变有关.     

核心蛋白多糖对兔晶状体上皮细胞增生的抑制作用

目的探讨核心蛋白多糖(Decorin)对兔晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)增生的抑制作用及其剂量-效应与时间-效应的关系,为药物防治后发性白内障提供新的选择。方法 MTT比色法分别测定不同浓度的Decorin(0.1mg·L-1、1.0mg·L-1、10.0mg·L-1)作用于LEC不同时间后的细胞生长抑制率;采用流式细胞技术测定细胞周期,用ELISA法检测各组培养液上清中TGF-β的水平,RT-PCR测定TGF-βmRNA的表达,免疫细胞化学观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)。结果 ELISA示每100万个细胞中对照组TGF-β含量为(427.24±41.34)ng,0.1mg·L-1、1.0mg·L-1和10.0mg·L-1Decorin组TGF-β的含量分别为(236.01±28.63)ng、(117.86±18.14)ng、(111.72±26.72)ng,与对照组比较差异均有显著统计学意义(均为P<0.01)。MTT比色法实验结果显示,作用24h对照组抑制率为(3.62±1.34)%,0.1mg·L-1、1.0mg·L-1和10.0mg·L-1Decorin组抑制率分别为(4.14±2.08)%、(12.93±2.47)%、(23.47±1.78)%,LEC生长抑制率增加,差异均有统计学意义(均为P<0.05);随着Decorin作用时间延长,生长抑制率增加,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。随药物浓度及作用时间延长,LEC出现明显的G0/G1期阻滞,G0/G1期细胞所占比例明显升高(P<0.05)。RT-PCR示Decorin组TGF-βmRNA表达明显减少,与MTT法检测结果呈现大致相同的趋势,免疫细胞化学观察,对照组α-SMA表达较多,细胞肥大,细胞质呈棕色,Decorin组α-SMA较少表达。Decorin表现出明显的抑制作用。结论 Decorin对LEC有抑制增生和诱导凋亡作用,且呈明显的剂量-效应与时间-效应关系,可望成为后发性白内障的防治药物。     

不同年龄组白内障晶状体上皮细胞形态学观察及增殖细胞核抗原检测

目的:观察不同年龄组白内障时晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LECs)密度及形态学差异,检测LECs增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达,探讨白内障术后残留LECs增殖与后囊混浊(posterior capsular opacification,PCO)的关系及儿童后发性白内障高发的原因.方法:按年龄段分为儿童组(＜12岁)及老年组(51～80岁)各20眼,在白内障手术时环形撕囊后获取晶状体中央区前囊膜,一分为二,一半HE染色后用光学显微镜(×40)对两组每张LECs铺片其细胞形态,胞质及细胞核染色情况观察并照像.应用计算机图像分析仪观察两组LECs铺片的细胞密度.另一半用免疫组化染色及真彩色医学图像分析系统检测PCNA的表达及积分光密度值,取均值进行统计学分析.结果:儿童组细胞分布比较均匀,核染色较深,有细胞重叠区.老年组LECs分布不均匀,形态不规则,明显可见细胞核大小不等,淡染扩大的上皮细胞多见.染色质呈深染的粗颗粒状,胞质内有大量的空泡,呈泡沫状.LECs密度在儿童组为5 020.25±246.01个/mm2,老年组为4 340.00±240.95个/mm2,t=3.405,P＜0.05.PCNA表达定量检测(积分光密度值).儿童组为2.89±0.57,老年组为2.13±0.63,t=2.933,P＜0.05.结论:本研究中儿童组LECs细胞分布均匀,核染色深,前囊膜中央细胞重叠区较老年组多见,且LECs密度,PCNA的表达明显高于老年组,提示可能为儿童后发性白内障高发的重要因素,通过PCNA表达的检测可能为判断PCO高危眼提供依据.同时抑制PCNA对预防儿童后发性白内障的发生可能具有一定的临床意义.     

LY294002联合奥曲肽对bFGF诱导的兔晶状体上皮细胞增殖的影响

目的　探讨ＬＹ２９４００２联合奥曲肽对碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦ）诱导的兔晶状体上皮细胞（ｌｅｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ,ＬＥＣｓ）增殖的影响。方法　兔眼ＬＥＣｓ经原代和传代培养后,共分为４组:空白对照组、增殖对照组、实验药物组、增殖药物组。空白对照组使用仅含无血清ＤＭＥＭ培养;增殖对照组使用加ｂＦＧＦ（１０ｍｇ·Ｌ－１）的无血清ＤＭＥＭ;实验药物组培养时在不加ｂＦＧＦ增殖的情况下分别单独应用１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１ＬＹ２９４００２、单独应用１０－９ｍｏｌ·Ｌ－１奥曲肽和联合应用１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１ＬＹ２９４００２与１０－９ｍｏｌ·Ｌ－１奥曲肽来培养;增殖药物组在加ｂＦＧＦ增殖的情况下分别单独应用１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１ＬＹ２９４００２、单独应用１０－９ｍｏｌ·Ｌ－１奥曲肽和联合应用１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１ＬＹ２９４００２和１０－９ｍｏｌ·Ｌ－１奥曲肽进行细胞培养,每组重复５次。各组分别培养４８ｈ。ＭＴＴ比色法测定吸光度（Ａ值）分析各组细胞的生长抑制率,流式细胞仪检测各周期细胞的百分率。结果　增殖对照组与空白对照组相比,吸光度Ａ值升高（Ｐ＜０．０５）;实验药物组中各组分别与空白对照组相比,吸光度Ａ值均有不同程度下降（均为Ｐ＜０．０５）;增殖药物组中各组分别与增殖对照组相比,吸光度Ａ值明显下降（均为Ｐ＜０．０５）;生长抑制率与吸光度Ａ值趋势相同。经流式细胞仪分析,实验药物组中联合用药组与两个单独用药组相比Ｇ０／Ｇ１期细胞比例增高,Ｓ期细胞比例降低（均为Ｐ＜０．０５）;增殖药物组中,联合用药组与两个单独用药组相比也出现Ｇ０／Ｇ１期细胞比例增高,Ｓ期细胞比例降低（均为Ｐ＜０．０５）。结论　ＬＹ２９４００２联合奥曲肽较单独用药对ＬＥＣｓ的增殖抑制作用更强。这为临床筛选药物防治后发性白内障提供依据。     

人工晶状体袢的角度与后发性白内障相关性研究

目的　探讨后发性白内障与人工晶状体袢角度之间的关系。方法　 9只科研兔随机分为 3组 ,每组 6眼。麻醉后 ,行透明晶状体囊外摘出术 ,并分别植入袢角度不同的PMMA人工晶状体 ,第 1组植入 0°袢人工晶状体 ,第 2组植入 5°袢人工晶状体 ,第 3组植入 10°袢人工晶状体。术后 6个月 ,裂隙灯下观察晶状体后囊混浊情况并分级 ,取出晶状体后囊 ,行光镜及透射电镜检查 ,并采用免疫组化法对晶状体后囊染色 ,然后采用医用多功能图像分析软件对晶状体后囊表面及赤道部的增殖细胞核抗原 (proliferatingcellnucle arantigen ,PCNA)进行定量检测 ,用SPSS统计软件分析结果。结果　裂隙灯下可见术后随着人工晶状体袢角度的增加 ,发生后发性白内障的例数及等级均呈下降趋势。光镜及透射电镜扫描可见发生后发性白内障的晶状体后囊表面有一层或多层晶状体上皮细胞生长 ,未发生后发性白内障的晶状体后囊表面无晶状体上皮细胞生长 ,赤道部均可见多层晶状体上皮细胞生长。PCNA定量结果 :植入 0°袢人工晶状体组与植入 5°袢人工晶状体组之间后囊表面及赤道部PCNA阳性率 (分别为 10 .5 0 0±2 2 5 8,9.16 7± 2 .2 2 9)无明显差异 (P >0 .0 5 ) ,而植入 10°袢人工晶状体组 (4.5 0 0± 1.871)与植入 0°袢人工晶状体组及植入     

TGF-β2对晶状体上皮细胞增生和上皮间质转分化的实验研究

目的探讨转化生长因子β2(TGF-β2)对晶状体上皮细胞(LECs)增生和上皮间质转分化的影响。方法体外培养的人LECs株HLE-B3,加入不同质量浓度的TGF-β2进行处理,分别采用MTT法测定其对细胞增生的影响;采用PI细胞周期染色分析检测细胞周期的改变;应用Western blot及免疫荧光分别检测connexin43、fibronectin及integrinβ1等转分化相关蛋白表达的变化。结果经TGF-β2处理后的细胞增生受到抑制,呈TGF-β2质量浓度和时间依赖性;细胞周期中S期细胞的比例明显降低;connexin43表达随TGF-β2处理时间的增加而逐渐降低,fibronectin及integrinβ1的表达则随TGF-β2处理时间的增加而逐渐上升。结论TGF-β2抑制了LECs的增生,显著下调LECs connexin43的表达,促进了细胞外基质的过度沉积,对后发性白内障的防治具有一定的应用前景。     

Inhibitory effect of propylene glycol mannate sulfate on growth of rabbit lens epithelial cells in vitro

AIM: To investigate the inhibitory effect of rabbit lens epithelial cell (RLEC) survival and growth by propylene glycol mannate sulfate (PGMS) on the rabbit capsular bag in vitro. · METHODS: Capsular bags were prepared from rabbit eyes after extracapsular cataract extraction (ECCE) and incubated in 0.2, 0.4, 0.8g/L PGMS in 2, 5, 10 minutes incubation periods. After treatment, the capsular bags were cultured for 7 days in Dulbecco minimum essential medium (DMEM) supplemented with 50mL/L fetal calf serum (FCS). The specimens were examined with light microscopy and transmission electron microscopy (TEM). Capsular bags without receiving PGMS only served as controls. · RESULTS: PGMS inhibited the proliferation of RLEC in the manner of concentration and time dependent. At the threshold protocol of incubation in PGMS at 0.8g/L for 5 or 10 minutes, proliferative activity of cells were largely arrested and nearly no RLEC was seen on the posterior capsule (P < 0.05). Control group had no effect on structure and proliferative activity of RLEC, and the growth proceeded rapidly so that the posterior capsule were totally covered by a confluent monolayer of cell by the end of 7 days. Under TEM, the cells in the control group were tightly arrayed with clearly defined cellular boundary and structure; while cellular deformity and undefined intracellular structure could be seen in the 0.4g/L and 0.8g/L experimental groups. · CONCLUSION: PGMS can effectively inhibit the proliferation of RLEC.     

去整合素echistatin对糖尿病兔后发性白内障形成中信号通路PI3-K/Akt和ERK1/2的影响

目的　观察去整合素ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ对糖尿病兔后发性白内障形成中信号通路ＰＩ３-Ｋ／Ａｋｔ和ＥＲＫ１／２的影响,从分子水平上探讨ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ的作用。方法　建立糖尿病兔模型（ｎ＝２４）,随机分组并行透明晶状体囊外摘出术,术毕前房分别注入０．２ｍＬ灭菌蒸馏水（对照组,ｎ＝１２）或０．２ｍＬ１０．０ｍｇ·Ｌ－１ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ溶液（ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ干预组,ｎ＝１２）。术后１０ｄ及６周（每个时间点６眼）,裂隙灯显微镜观察两组术眼ＰＣＯ分级情况,同时摘取术眼应用ＲＴ-ＰＣＲ法检测后囊膜上信号因子Ａｋｔ和ＥＲＫ１／２ｍＲＮＡ表达情况。结果　术后１０ｄ对照组和ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ干预组ＰＣＯ分级比较差异无统计学意义（Ｐ＝０．０９３）,但ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ干预组ＰＣＯ１级眼数少于对照组;术后６周ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ干预组ＰＣＯ级别明显低于对照组（Ｐ＝０．００６）。对照组和ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ干预组ＡｋｔｍＲＮＡ相对表达量术后１０ｄ分别为０．９８１７±０．３８０４、０．４８１７±０．１６６５,术后６周分别为０．６５１７±０．２０４７、０．４０１７±０．１５１３,ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ干预组均明显低于对照组（Ｐ＝０．０１５,０．０３７）。对照组和ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ干预组ＥＲＫ１／２ｍＲＮＡ相对表达量术后１０ｄ分别为０．９４８３±０．２２７５、０．６１００±０．２８０６,术后６周分别为０．９２１７±０．２９９４、０．４６５０±０．１８００,ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ干预组均明显低于对照组（Ｐ＝０．０４５,０．００９）。结论　去整合素ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ对糖尿病兔后发性白内障的发生和发展有一定的抑制作用,其发生的机制可能与抑制信号因子Ａｋｔ和ＥＲＫ１／２表达,进而阻断信号通路ＰＩ３-Ｋ／Ａｋｔ和ＥＲＫ１／２的转导有关。