高迁移率族蛋白B1对小鼠调节性T细胞抑制性相关分子表达的影响

目的观察高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对调节性T细胞（Treg）T淋巴细胞毒性相关抗原4（CTLA-4）及叉头翼状螺旋转录因子（Foxp3）表达的影响，并对其机制进行初步探讨。方法免疫磁珠法分离正常BALB／C小鼠脾脏CIM^＋CD25^＋ Treg。采用固相包被抗CD3及可溶性CD28辅助活化，观察HMGB1刺激与CTLA-4及Foxp3表达的时间-效应关系及剂量-效应关系。结果HMGB1刺激Treg时，CTLA-4表达在24～72h均有所下调（P〈0．05或P〈0．01），其中以作用48、72h表达下调尤为明显（P〈0．01）；而不同剂量HMGB1（10、100、1000μg/L）刺激均可诱导CTLA-4表达下调（P〈0．05或P〈0．01），其中HMGB1浓度在1000μg／L时其表达下调最明显。Foxp3表达与CTLA-4呈现出相同的趋势。结论HMGB1能诱导Treg CTLA-4表达减弱。HMGB1可能通过下调Foxp3表达进而影响Treg免疫调节活性。     

烫伤大鼠脾脏高迁移率族蛋白B1表达对调节性T淋巴细胞免疫功能的影响

目的 探讨严重烫伤大鼠延迟复苏后脾脏高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达对调节性T淋巴细胞(Treg)表型及其介导T淋巴细胞免疫功能的影响.方法 将104只Wistar大鼠按随机对照表法分为正常对照组8只、假烫组32只、烫伤组32只、丙酮酸乙酯(EP)治疗组32只.后2组大鼠造成30%TBSAⅢ度烫伤,伤后6 h腹腔注射林格液或EP液延迟抗休克,伤后12 h起每隔12 h给予4 mL林格液或EP液至伤后48 h;假烫组除于37℃模拟烫伤外其余处理同烫伤组.于伤后1、3、5、7 d处死各致伤组大鼠,另处死正常对照组大鼠,免疫磁珠法分离大鼠脾脏CD4~+CD25~+Treg,ELISA法检测脾脏HMGBI含量及T淋巴细胞上清液中IL-2水平,采用流式细胞仪检测Treg表面分子细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)表达,同时检测T淋巴细胞增殖活性(数据以吸光度值表示).对数据进行多组间方差分析和2组独立样本间的t检验.结果 (1)烫伤组大鼠脾脏HMGBI含量伤后1～7 d显著高于假烫组,其中第1天达峰值[(46.7±8.3)ng/mg蛋白];EP治疗组大鼠脾脏HMGBI含量伤后1～7 d明显低于烫伤组.(2)与假烫组比较,烫伤组大鼠伤后1～5 d CTLA-4表达明显增强(t值分别为10.459、12.051、4.029,P<0.05或P<0.01);EP治疗组伤后1～7 d CTLA-4表达较烫伤组显著降低(t值分别为2.796、9.913、9.581、10.022,P<0.05或P<0.01).(3)与假烫组比较,烫伤组大鼠伤后1～7 d脾脏T淋巴细胞增殖活性明显受抑,其中伤后1 d达低谷(0.167±0.059);IL-2水平伤后1～7 d显著下降,其中伤后5 d达低谷(44±24)pg/mL.与烫伤组比较,EP治疗组伤后各时相点脾脏T淋巴细胞增殖受抑状态明显缓解,且IL-2水平明显上升.结论 严重烫伤后HMGB1产生可诱导Treg向成熟发展,从而介导T淋巴细胞增殖反应低下,免疫功能抑制.EP通过抑制HMGB1的合成与释放,改善烫伤延迟复苏大鼠的细胞免疫功能紊乱.     

高迁移率族蛋白B1对小鼠调节性T细胞表达T淋巴细胞毒性相关抗原-4水平的影响及受体机制

目的 观察高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对小鼠调节性T细胞(Treg)表达细胞毒性T淋巴细胞相关抗原(CTLA)-4水平的影响及其受体机制.方法 免疫磁珠法分离正常C3H/HeN[(TOU样受体4(TLR4)野生型)]小鼠脾脏CD4+ CD25+Treg,接种于细胞培养板,各细胞培养孔均加入可溶性抗CD3和可溶性抗CD28作为辅助活化剂.应用/不应用抗TLR4抗体预封闭CD4+CD25+Treg表面TLR4,观察HMGBl刺激CD4+CD25+Treg表达CTLA-4的时间-效应关系和剂量-效应关系.结果 HMGBl(0.1 mg/L)刺激CD4+CD25+Treg,CTLA-4在24、48、72 h表达水平(47.56±5.49、35.83±4.96和31.94±4.65)较正常对照组水平(79.42±2.79)均显著下降(P<0.01),以48、72h组下降尤为明显;不同剂量HMGBI刺激CD4+CD25+Treg48h其CTLA-4表达水平显著下调(P<0.01),其中以0.1 mg/L和1 mg/L组表达水平(分别为33.34±4.00和29.90±4.30)降低幅度尤为明显.经封闭TLR4预处理后,给予HMGBl(0.1 mg/L)刺激24、48和72 h CD4+CD25+Treg表达CTLA-4的水平(90.39±8.80、93.13.4-4.80和80.29±4.31)均较对正常照组(71.03±4.34)显著增强(P<0.05或P<0.01);而不同剂量HMGBl刺激CD4+ CD25+Treg 48 h,仅以0.1 mg/L组能显著上调CTLA-4的表达水平(P<0.01).结论 HMGB1通过TLR4负向调节CIM+ CIY25+ Treg表达CTLA-4水平,从而影响Treg的免疫活性.     

Toll样受体4在高迁移率族蛋白B1影响小鼠调节性T细胞免疫功能中的作用

目的 探讨腹腔注射高迁移率族蛋白B1(HMGB1)后不同基因型小鼠天然调节性T细胞(CD4~+CD25~+Treg)免疫功能的改变及其受体作用机制.方法 分别给C3H/HeN和C3H/HeJ[分别为Toll样受体4(TLR4)野生型(TLR4~(+/+))和天然突变型(TLR4~(-/-)]小鼠腹腔注射不同剂量HMGB1(0、10、20μg/只),饲养48 h后采用免疫磁珠法分离小鼠脾脏CD4~+CD25~+Treg.体外培养12 h后采用流式细胞仪检测CD4~+CD25~+Treg表达细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)表达强度,并应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测CD4~+CD25~+Treg生成白细胞介素(IL)-10量.结果 与对照组比较,20 μg HMGB1攻击后C3H/HeN小鼠CD4~+CD25~+Treg表达CTLA-4水平显著下降(78.70±11.42与60.76±7.64,P<0.01),同时细胞牛成IL-10量也明显降低[(96.89±6.25)ng/L与(47.11±4.25)ng/L,P<0.01];但不同剂量HMGB1攻击可引起C3H/HeJ小鼠CD4~+CD25~+Treg表达CTLA-4明显上调和生成IL-10量不同程度地增加(P<0.01).结论 HMGB1攻击可显著影响CD4~+CD25~+Treg介导的免疫状态,TLR4在HMGB1诱导CD4~+CD25~+Treg免疫活性过程中发挥了重要负向调控作用.     

休克期切痂对烫伤大鼠肺高迁移率族蛋白B1表达的影响及其意义

目的　探讨休克期切痂对烫伤大鼠肺高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达的影响及其与急性肺损伤的关系。方法　将 3 0 %Ⅲ度烫伤Wistar大鼠随机分为 2 4和 72h切痂植皮组。RT PCR和免疫组织化学法检测肺HMGB1变化 ,肺髓过氧化物酶 (MPO)结合病理形态学观察肺损伤情况。结果　伤后 4d、2 4h切痂组肺HMGB1mRNA和Ⅱ型上皮细胞HMGB1蛋白表达较烫伤对照和72h切痂组均有明显下调 (P <0 .0 5 )。伤后大鼠肺MPO活性增强近 2倍 ,而 2 4h切痂大鼠 4d肺MPO活性明显降低。结论　休克期切痂可下调肺组织HMGB1表达 ,部分减轻烫伤后急性肺损伤。     

高迁移率族蛋白B1诱导的树突状细胞对T淋巴细胞增殖及功能性极化的影响

目的 观察高迁移率族蛋白B1(HMGB1)诱导的树突状细胞(DCs)对大鼠脾T淋巴细胞增殖反应及功能性极化的影响,并探讨其作用机制.方法 分离正常Wistar大鼠脾脏DC后置于24孔培养板(1×106/孔),采用1 ms/L的HMGB1刺激48 h,DC与脾T淋巴细胞的细胞比例分别为1:50、1:100、1:150、1:200混合,于共同作用后3、5 d观察脾T淋巴细胞增殖及功能性极化的情况.结果 DC与T淋巴细胞以1:50、1:100、1:150、1:200的比例相互作用,脾T淋巴细胞对丝裂原刺激的增殖反应均明显增强、上清液中干扰素(IFN)-γ含量显著升高和白细胞介素(IL)-4含量明显降低(P《0.01),其中细胞比例1:150组最为明显.脾T淋巴细胞对丝裂原刺激的增殖反应增强、IFN-γ含量增加和IL-4含量降低均以第3天最为显著[分别为(0.646±0.028)、(268.08±14.07)、(6.16±0.59)ng/L,P值均《0.01].结论 HMGB1诱导的DC使脾T淋巴细胞对丝裂原刺激的增殖反应明显增强,并促进T淋巴细胞向Th1功能性极化.     

高迁移率族蛋白B1对人外周血T淋巴细胞增殖反应的影响

目的：观察高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对健康人外周血T淋巴细胞增殖反应的影响,并对其机制进行初步探讨。方法：分离8例健康人外周血单个核细胞后接种于96孔培养板（2×10~6/ml）,以植物血凝素诱导细胞体外增殖后,采用不同剂量（0、1、10、100、1000 ng/ml）重组人HMGB1（rhHMGB1）刺激12～48 h。用噻唑蓝（MTT法检测T淋巴细胞增殖,观察HMGB1对T淋巴细胞增殖反应的影响。结果：12、24 h不同rhHMGB1剂量组间淋巴细胞增殖反应无明显差异;rhHMGB1刺激48h后不同剂量对淋巴细胞增殖影响差异有显著性（P =0.0453）,500、1000 ng/ml rhHMGB1组淋巴细胞增殖能力显著低于1、10 ng/ml组和对照组（P〈0.05～0.01）。结论：较高浓度HMGB1长时间刺激后体外T细胞增殖活力明显下降,HMGB1可能是诱导T细胞功能亚群从促炎免疫应答优势向抗炎优势转化的重要因素之一。     

高迁移率族蛋白B1及其生物学效应研究进展

高迁移率族蛋白B1 （ high mobility group protein, HMGB1 ）是一种高度保守的核蛋白，广泛分布于哺乳动物细胞。随着其晚期促炎作用的发现，HMGBl成为近年来危重医学研究的热点之一。本文就其家族分类、基因和蛋白结构、细胞生物学效应方究进展进行综述。     

丙酮酸乙酯对烫伤延迟复苏大鼠肾组织高迁移率族蛋白B1表达和急性肾损伤的影响

目的观察丙酮酸乙酯（EP）对烫伤延迟复苏大鼠肾组织高迁移率族蛋白B1（HMGB1）表达及急性肾损伤的影响。方法采用30％体表面积Ⅲ度烫伤延迟复苏大鼠模型,78只大鼠随机分为假伤组（n=18）、烫伤组（n=30）和EP治疗组（n=30）;采用逆转录聚合酶链反应检测各组大鼠肾组织HMGB1 mRNA表达,蛋白印迹法及免疫组化法检测。肾组织HMGB1蛋白表达;同时测定血尿素氮（BUN）含量并观察。肾组织病理变化。结果与假伤组比较,严重烫伤后。肾组织HMGBl基因／蛋白表达于伤后8～72h显著增强（P〈0．05）,BUN含量在伤后8h及24h显著升高（P〈0．05）。与烫伤组比较,EP治疗组肾组织8、24、72h时HMGBl表达均显著下调,BUN含量在8、24h时亦明显下降（P〈0．05）;光镜下观察烫伤组肾组织炎性细胞浸润,肾小管结构破坏出现浊肿、变性,而EP处理后。肾脏病理改变不同程度地减轻。结论HMGB1作为晚期炎性因子参与了烫伤后。肾组织炎症反应的病理过程,应用EP治疗可有效下凋。肾组织HMGB1表达,并显著减轻烫伤延迟复苏所致的急性肾损伤。     

高迁移率族蛋白B1与肝损伤研究进展

1973年,Goodwin等[1]首先从细胞核中发现了高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1).HMGB1作为一种与DNA结合的非组蛋白,长期以来,人们一直关注其在维持核稳定方面的功能,包括稳定核小体结构、调节基因转录、参与DNA复制与修复.     

高迁移率族蛋白B1 mRNA在脓毒症大鼠脾脏中的表达

目的：探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）mRNA在脓毒症大鼠外周免疫器官脾脏的表达规律及其与血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）的关系。方法：采用盲肠结扎穿孔（CLP）方法制备大鼠脓毒症模型。83只大鼠随机分为正常对照组（10只）、盲肠结扎穿孔组（38只）,盲肠结扎穿孔丙酮酸乙酯治疗组（35只）。分别于CLP术后4、12、24、48、72h或CLP术后丙酮酸乙酯治疗12、24、48、72h活杀动物,留取脾脏组织和血清标本,用半定量逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术检测脾脏组织HMGB1mRNA的表达规律,用放射性免疫方法检测血清TNF-α和IL-6的浓度。结果：HMGB1mRNA在正常大鼠脾脏组织有轻度表达,CLP术后表达显著增强（P〈0.05）。CLP术后24h和72h分别出现两个高峰。丙酮酸乙酯液治疗可显著降低CLP术后大鼠脾脏组织HMGB1mRNA的表达（P〈0.05）。CLP术后大鼠血清TNF-α和IL-6浓度显著增高（P〈0.05）,丙酮酸乙酯治疗可显著降低CLP术后大鼠TNF-α和IL-6的浓度（P〈0.05）。结论：HMGB1在脓毒症大鼠外周免疫器官脾脏的表达显著增高,并与血清TNF-α和IL-6等炎症因子的增高有重要关系;HMGB1参与了失控性炎症反应的发展过程。     

高迁移率蛋白族B1通过调控p53表达抑制T细胞增殖

目的:探讨高迁移率蛋白族B1 (HMGB1)对T细胞的增殖抑制作用及其分子机制.方法:将培养的Jurkat细胞分为对照组、HMGB1 (100 ng/ml) 12、24、48 h组,HMGB1组加入HMGB1培养相应时间;将细胞分为对照组、HMGB1 10、100、1 000 ng/ml组,予不同浓度HMGB1培养24 h;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组细胞增殖率,采用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测各组细胞中p53mRNA、磷酸化p53及p53总蛋白的表达水平.将载有p53 shRNA、p53 mRNA表达序列及空白质料的病毒转染入Jurkat细胞中,并选择100 ng/ml HMGB1刺激24 h,采用同样方法检测细胞增殖率.最后,将细胞分为正常组、HMGB1组、SB203580[p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂]+HMGB1组进行相应处理.收集各组细胞,RT-PCR和Western blot法检测p53 mRNA、磷酸化p53及p53总蛋白的表达水平.结果:HMGBl (100ng/ml)刺激细胞24、48 h后细胞增殖率降低,较正常组差异有显著性(P＜0.05);100、l 000 ng/ml HMGB1刺激细胞24 h后,增殖率明显下降,与正常组相比差异具有统计学意义(P＜0.05).HMGB1 (100 ng/ml)刺激细胞后,p53 mRNA、磷酸化及总蛋白表达水平在24、48 h逐步上升,且有明显统计学意义(P＜0.05);HMGB1刺激24 h,10、100 ng/ml HMGB1刺激组细胞p53 mRNA、p53磷酸化及总蛋白表达水平较正常组显著上升,但1 000 ng/mlHMGB1没有明显变化;在不同转染组中,予HMGB1刺激细胞,空载组增殖率降低,而p53 shRNA表达组细胞增殖趋于正常,p53 mRNA过表达组增殖率较空载组下降更为明显.Jurkat细胞在p38 MAPK阻断剂和HMGB1共同作用后,p53 mRNA、磷酸化及总蛋白表达水平比HMGB1刺激组明显下降(P＜0.05).结论:胞外HMGB1可通过诱导p38 MAPK信号通路激活p53蛋白,抑制T细胞增殖.     

利多卡因对脂多糖诱导的巨噬细胞高迁移率族蛋白B1 mRNA表达的影响

目的 观察利多卡因对脂多糖(LPS)诱导的大鼠腹腔巨噬细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1) mRNA表达的影响.方法 取雄性Wistar大鼠腹腔巨噬细胞,置6孔细胞培养板中培养3～5 d后,分为四组:脂多糖组(LPS组),LPS刺激浓度为100 ng/ml;LI组,于LPS刺激前30 min给予利多卡因(终浓度为20 μg/m1)预处理;L2组,于LPS刺激后30 min给予同等剂量的利多卡因处理;L3组分别于LPS刺激后30 min、6、12、18 h给予同等剂量的利多卡因处理.LPS刺激24 h后收取细胞,采用RT-PCR检测细胞HMGB1 mRNA的表达.结果 与LPS组比较,L1、L2、L3组HMGB1 mRNA表达均有不同程度下降(P<0.01).L3组HMGB1 mRNA表达下降程度最大,明显低于L1、L2组(P<0.01).结论 利多卡因能够抑制LPS诱导的体外培养大鼠腹腔巨噬细胞HMGB1 mRNA的表达.     

严重烧伤后细胞免疫改变及其与高迁移率族蛋白B1的相关性

目的 探讨严重烧伤患者T细胞免疫功能的变化规律及其与高迁移率组蛋白B1(HMGB1)的相关性.方法 采集35例烧伤体表总面积>30%的患者静脉血样,根据是否并发多器官功能障碍综合征(MODS)分组(MODS组13例、非MODS组22例),采集患者伤后第1、3、5、7、14、21、28大的外周静脉血,采用酶联免疫吸附试验检测血浆HMGB1水平;观察外周血T淋巴细胞增殖反应和白细胞介素2(IL-2)的产生能力,并通过流式细胞仪检测CD4+/CD8+T细胞的比值.结果 严重烧伤患者伤后第1天血浆HMGB1水平即明显升高,其中伤后第1、7、21、28天MODS组HMGB1显著高于非MODS组(P<0.05).两组间比较,外周血T淋巴细胞增殖反应和IL-2的产生能力、CIM4+/CD8+T淋巴细胞比值在伤后第1、14、21、28天MODS组显著低于非MODS组(P均<0.05).大面积烧伤患者伤后血浆HMGB1含量与细胞免疫功能指标包括T淋巴细胞增殖活性、IL-2含量、CD4+/CD8+T细胞比值呈显著负相关(P<0.05).结论 大面积烧伤后T淋巴细胞免疫功能紊乱与患者并发MODS密切相关,严重烧伤患者血浆HMGBI水平的持续升高对机体细胞免疫功能异常具有显著影响.     

休克期切痂对烫伤大鼠肝、肺组织高迁移率族蛋白B1表达及促炎/抗炎平衡的影响

目的 观察休克期切痂对烫伤大鼠组织早期和晚期炎症介质变化规律及相应器官功能的影响,探讨休克期切痂改善预后的分子机制。方法 Wistai大鼠30％Ⅲ度烫伤后随机分为24h切痂组和72h切痂组。分别检测肝、肺组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、白介素-10(IL-10)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。结果烫伤后2d,肝、肺组织HMGB1、TNF-α mRNA表达增强,而IL-10mRNA伤后8d增强;24h切痂大鼠伤后4d肝、肺组织HMGB1和TNF-α mRNA表达下调,伤后8d其IL-10 mRNA表达恢复正常;72h切痂大鼠伤后8d肝、肺IL-10mRNA仍维持较高水平。伤后2．8d肝组织内TNF-α蛋白水平呈双峰改变,4d时减少;24h和72h切痂组肝TNF-α维持在正常范围;伤后2、4d肝TNF-α／IL-10比例升高,24h切痂可降低TNF-α／IL-10。此外,24h切痂组4、8d血浆天冬氨酸氨基转移酶和丙氨酸氨基转移酶含量及肺组织髓过氧化物酶活性显著降低。结论休克期切痂可阻断严重烫伤大鼠肝、肺组织早期和晚期炎症介质过度表达,维持促炎／抗炎介质平衡,改善多脏器功能。     

甲状腺激素受体相互作用蛋白6和高迁移率族蛋白B1在乳腺癌组织的表达及其临床意义

目的:探讨甲状腺激素受体相互作用蛋白6(TRIP6)和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在乳腺癌中的表达及其生物学意义。方法:收集齐齐哈尔医学院第五附属医院(大庆市龙南医院)2015年7月至2021年7月乳腺癌组织和癌旁组织标本112例,应用免疫组织化学方法检测以上组织中TRIP6和HMGB1的表达,采用 χ...     

核因子-κB抑制剂对内毒素休克大鼠高迁移率族蛋白B1表达的影响及机制

目的观察核转录因子-κB(NF-κB)抑制剂--二硫氨基甲酸酞吡咯烷(PDTC)对内毒素休克大鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB1)mRNA表达的影响及机制.方法采用内毒素休克模型,47只大鼠随机分为正常对照组(n=8)、内毒素休克组(n=24)和PDTC拮抗组(n=15),留取肝、肺、肾组织检测HMGB1 mRNA表达及相应器官功能指标的变化.结果内毒素攻击可导致动物肝、肺、肾组织HMGB1 mRNA表达广泛上调,分别于2～6h显著增高(P<0.05),12h呈现进一步升高趋势.PDTC处理后12h,肝、肺、肾组织HMGB1 mRNA表达均显著下调,其中肾组织2～12h趋于伤前范围;同时,血清丙氨酸转移酶、天冬氨酸转移酶、尿素氮、肌酐水平6h明显降低(P<0.05),肺组织髓过氧化物酶活性各时相点均显著低于内毒素休克组(P<0.05).结论NF-κB抑制剂能显著抑制内毒素休克动物组织HMGB1 mRNA的表达,NF-κB信号转导通路参与了内毒素介导HMGB1基因表达的调控过程,并与脓毒症时多器官功能损害密切相关.     

高迁移率族蛋白B1在烧伤小鼠大脑中表达的研究

目的：检测烫伤小鼠高迁移率族蛋白B1（HMGB1）在大脑中的表达.方法：应用BALB/c小鼠15%TBSAⅢ度烫伤（95 ℃热水浸烫8 s）和假伤（室温水,8 s）模型,并以正常小鼠作为对照（6只）.在4、8、24和48h（每个时间点6只）处死动物.采用苏木精-伊红染色观察大脑形态学改变,免疫荧光方法检测caspase-3和HMGB1在大脑的表达,ELISA方法检测大脑组织HMGB1含量.结果：15%体表面积Ⅲ度烫伤8 h即导致大脑发生显著性病理改变,如炎性细胞浸润,烫伤24h大脑终纹出现caspase-3阳性细胞,而在假伤组未见特异性染色.免疫荧光染色发现,HMGB1位于假伤组小鼠神经细胞的胞核;而在烫伤后4h即释放至细胞浆.释放到脑组织中的细胞外HMGB1在烧伤后 24和48h,显著高于假伤组和对照组（P〈0.01）.结论：烫伤导致小鼠大脑HMGB1的分布和含量发生改变,可能参与了烧伤后脑损伤的病理过程.