当归、丹参和川芎嗪注射液对腹膜透析腹腔巨噬细胞功能的干预作用

目的：研究当归、丹参和川芎嗪注射液（简称中药）对腹膜透析（PD）腹腔巨噬细胞（MC）功能的影响。方法：（1）将MC置于含当归、丹参和川芎嗪的腹膜透析液（CDS）的培养液中培养24h，测定3个中药组、CDS组和对照组MC的一氧化氮（NO）含量和对四甲基偶氮唑盐（MTT）还原能力。（2）MC分别置于含2、10、100μg/ml的3个中药的CDS中培养24h，观察不同浓度中药对MC吞噬能力、NO含量和MTT还原能力的影响，对照组为等量培养液代替CDS。结果：CDS组MC的NO含量和MTT还原能力均明显低于对照组（P＜0．01）；与CDS组比较，川芎嗪组的MC NO含量和3个中药组MC MTT还原能力均有明显提高（P＜0．01），并随着培养液中的中药浓度的提高，3个中药组MC吞噬能力和NO含量均有显著增加。结论：在CDS中加中药能改善腹膜腔MC的防御功能，降低腹膜炎的发生率，对提高PD疗效有重要意义。     

喜炎平注射液对巨噬细胞分泌炎性因子的影响

目的：研究喜炎平注射液对LPS诱导的小鼠单核巨噬细释放炎性因子的抑制作用。方法：用LPS刺激体外培养的小鼠单核巨噬细胞RAW264．7释放TNF—α、IL-6、NO等前炎性因子，检测不同浓度的药物对巨噬细胞释放以上炎性细胞因子的抑制作用。通过ELISA的方法检测TNF—α、IL-6的含量，采用Griess法检测培养液上清中NO的含量，以MTT法评价细胞毒性。结果：喜炎平注射液在3—200μg／ml的浓度范围内可明显抑制LPS诱导的巨噬细胞RAW264．7释放炎性因子TNF—α、IL-6及NO，并呈现良好的剂量依赖关系。结论：喜炎平能明显抑制巨噬细胞释放炎性细胞因子TNF—α、IL-6和NO。     

川芎嗪对大鼠腹膜超滤功能影响的实验研究

目的：观察不同剂量的川芎嗪加入到４．２５％透析液中对腹膜超滤功能的影响。方法：４０只ＳＤ大鼠随机分为４组，除对照组外，其余３组每日分别腹腔注射２５ｍｌ ４．２５％透析液（ＨＧＣ），ＨＧＣ加低剂量（４０ｍｇ／Ｌ）川芎嗪（ＨＧＬ）和ＨＧＣ加高剂量（１６０ｍｇ／Ｌ）川芎嗪（ＨＧＨ）。至第４５天结束时，以＾１３１Ｉ标记的白蛋白溶于２５ｍｌ ４．２５％透析液注入腹腔，进行腹膜功能试验。结果：与对照组比较，各     

雷公藤内酯醇对小鼠腹腔激活巨噬细胞释放一氧化氮的影响

目的探讨雷公藤内酯醇(TP)抗炎及免疫抑制作用的机制。方法以 Criess 试剂检测 TP 对小鼠腹腔激活巨噬细胞在不同剂量和不同时间段一氧化氮(NO)分泌的影响。结果在1～10μg/ml 范围内,TP 对腹腔激活巨噬细胞 NO 产生具有明显抑制作用(P<0.01),呈剂量和时间依赖性,且无细胞毒性。结论 TP 能有效抑制小鼠腹腔液中激活巨噬细胞 NO 生成,提示 TP 的抗炎及免疫抑制作用与抑制 NO 的生成有关。     

枳椇子水提取液对小鼠腹腔巨噬细胞释放一氧化氮的影响

目的：研究枳具子水提取液对小鼠腹腔巨噬细胞释放一氧化氮的影响。方法：NO以Griess试剂测定。结果：浓度为42－667μg生药／ml的枳具子水提取液能显著抑制小鼠腹腔细胞一氧化氮的释放。结论：枳具子水提取液对小鼠腹腔巨细胞释放一氧化氮的调节可能是其保护肝作用机制之一。     

大蒜素对T细胞激活的影响

大蒜素在高浓度(50μg／ml)时对T细胞激活有抑制作用。但在适当浓度(3．125～12．5μg／ml)时则对T细胞激活有促进作用，这种促进作用与大蒜素抑制巨噬细胞产生NO的能力有关。大蒜素能够对抗S180细胞和艾氏暖水癌细胞产生的肿瘤免疫抑制因子对T细胞激活的抑制作用。提示大蒜素在肿瘤治疗中可能有较大的应用价值。     

川芎嗪对缺氧状态下视网膜血管舒缩因子表达影响的实验研究

目的:体外培养牛视网膜血管内皮细胞,观察不同浓度川芎嗪组对缺氧状态下细胞增殖及其舒缩因子表达的影响。方法:选取第6代牛视网膜血管内皮细胞进行培养。将正常培育的细胞加入100μmol/L的CoCl₂诱导缺氧12 h后,将细胞随机分为三组。缺氧对照组(不含药物、无生长因子及血清的培养液组)、含川芎嗪0.02μg/ml培养液组、含川芎嗪0.2μg/ml培养液组。培养24 h后用MTT比色法检测各组视网膜内皮细胞的吸光度值,观察川芎嗪对血管内皮细胞的增殖情况。Western blot法检测各组细胞eNOS及ET-1的表达。结果:川芎嗪0.02μg/ml组、0.2μg/ml组的吸光度值明显高于缺氧对照组,差异有统计学意义(P<0.01),并且随浓度的增高吸光度值也增高;0.02μg/ml组与0.2μg/ml组间比较,差异有统计学意义(P<0.01)。与缺氧对照组比较,川芎嗪各组eNOS蛋白表达升高(P<0.01),且药物浓度与蛋白表达呈正相关;川芎嗪各组ET-1的蛋白表达均降低(P<0.01),但药物组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结...     

磷酸川芎嗪葡萄糖注射液含量测定的研究

目的：研究制定磷酸川芎嗪葡萄糖注射液含量测定的方法。方法：利用高效液相色谱法测定磷酸川芎嗪含量，旋光度测定法测定葡萄糖含量。结果：磷酸川芎嗪含量测定线性浓度范围是20.166～201．66μg／ml，r=0．9999，平均回收率为100．0％，RSD=0.256％(n=6)，葡萄糖含量测定平均回收率为99.84％，RSD=0．307％(n=6)。结论：该方法可用于磷酸川芎嗪葡萄糖注射液含量测定。     

灵芝多糖对小鼠M1巨噬细胞活性的研究

目的研究灵芝多糖对小鼠M1巨噬细胞活化及对T细胞增殖的影响。方法吉姆沙染色巨噬细胞后,显微镜观察巨噬细胞吞噬现象;ELISA法检测小鼠腹腔巨噬细胞分泌IL-10、IL-12和TNF的水平;MTT法检测M1巨噬细胞诱导T细胞的增殖作用。结果灵芝多糖能促进小鼠M1巨噬细胞对金色葡萄球菌的吞噬作用;体外实验显示,100μg/ml灵芝多糖可以诱导小鼠巨噬细胞分泌IL-10和TNF-α;灵芝多糖介导的巨噬细胞和T细胞的联合培养与脾脏细胞混合培养有显著性差别。结论灵芝多糖能诱导小鼠巨噬细胞活化,产生M1型细胞因子,介导T细胞活化增殖。     

川芎嗪对1,3-丁二烯致PC12细胞损伤的保护作用

目的：研究川芎嗪对由1,3-丁二烯损伤的PC12细胞生物学特性的影响。方法：用MTT法测定川芎嗪对损伤后PC12细胞活力的影响;流式细胞仪检测川芎嗪对损伤后PC12细胞凋亡和增殖的影响。结果：20、30、50μg/ml川芎嗪均能够提高1,3-丁二烯损伤的细胞活力,能使凋亡细胞比例减少,S和G2/M期细胞比例增加,G0/G1期细胞比例减少,其中30μg/ml浓度的川芎嗪作用最强（F=88.14,P〈0.01）;90μg/ml川芎嗪无明显作用。结论：川芎嗪能抑制由1,3-丁二烯引起的PC12细胞损伤,促进PC12增殖。     

雷公藤多苷对小鼠腹腔激活巨噬细胞杀伤活性和NO分泌影响的实验研究

雷公藤多苷可以作为免疫抑制剂用于自身免疫性疾病的治疗，如子宫内膜异位症、哮喘、肝炎等，既可以抑制细胞免疫又可以抑制体液免疫。目的：探讨雷公藤多苷(TWP)对小鼠腹腔活化巨噬细胞杀伤活性和NO分泌的影响。方法：分离小鼠腹腔巨噬细胞，用脂多糖(LPS)激活，给予雷公藤多甙(TWP)进行共同孵育；分别以间接MTT法和Griess试剂检测巨噬细胞的杀伤活性和上清NO的含量变化。结果：雷公藤多苷能有效抑制小鼠腹腔激活巨噬细胞的杀伤活性以及NO的生成。     

脂多糖体外刺激小鼠腹腔巨噬细胞TLR2/4m RNA表达的影响

目的 探讨时间和剂量对脂多糖(LPS)刺激小鼠腹腔巨噬细胞TLR2/4mRNA表达的影响.方法 常规提取和培养小鼠腹腔巨噬细胞.时效实验,加入终浓度为1 μg/ml LPS,分别刺激1,3,6,12 h后取材;量效实验,分别加入终浓度为0.00,0.01,0.1,1,10 μg/ml LPS, 3 h后取材.小鼠腹腔巨噬细胞TLR2/4 mRNA的表达采用RT-PCR进行.结果 ①在LPS 1μg/ml 剂量下6 h内,随着时间的延长,TLR2/4mRNA的表达量逐渐上升,与空白对照组相比有显著性差异(P<0.05,P<0.01);但刺激时间达12 h时,细胞开始脱壁、死亡.②在LPS 0.01~1 μg/ml 剂量范围内,随着LPS浓度的增加,TLR2/4mRNA的表达量逐渐上升,呈一定剂量依赖关系,与空白对照组相比有显著性差异,(P<0.05或P<0.01);但当LPS浓度达10 μg/ml,TLR2/4 mRNA的表达量反而下降.结论 用LPS体外刺激小鼠腹腔巨噬细胞,在0.01~1 μg/ml浓度范围内,在1~6 h时间内,其TLR2/4 mRNA的表达呈现出一定的时效与量效关系,该研究可为今后的研究者提供有益的时间和剂量参考.     

知母皂苷对脂多糖引起巨噬细胞分泌TNF-α和NO的影响及机制

目的:观察知母皂苷是否能抑制脂多糖引起的小鼠腹腔巨噬细胞炎症因子TNF-α和NO释放并探讨PI3K/Akt/p70S6K信号转导通路的影响。方法:小鼠腹腔巨噬细胞培养24 h,加入不同浓度知母皂苷(1、10和100μmol/L)或加入不同的阻断剂(PI3K特异性阻断剂LY294002、Akt特异性阻断剂TCBN),之后加入脂多糖(10 mg/L)继续培养。ELISA法和Griess法分别测定巨噬细胞培养上清液中TNF-α和NO的含量;免疫化学荧光染色法观察巨噬细胞磷酸化p70S6K表达水平的改变。结果:加入脂多糖作用2 h巨噬细胞上清液中TNF-α开始含量明显增加,24 h达高峰。知母皂苷(1、10和100μmol/L)、LY294002(20μmol/L)和TCBN(10μmol/L)均可不同程度的抑制脂多糖引起的巨噬细胞TNF-和NO产生增加。知母皂苷(100μmol/L)可减少脂多糖引起的小鼠腹腔巨噬细胞磷酸化p70S6K表达增加。结论:知母皂苷显著抑制脂多糖引起的巨噬细胞炎症因子TNF-α和NO释放,其作用机制与知母皂苷下调PI3K/Akt/p70S6K信号转导通路表达有关。     

菟丝子金丝桃苷体内外对小鼠免疫细胞功能的影响

目的：应用菟丝子有效成分金丝桃苷对小鼠免疫功能的影响进行了体内外研究。方法：一定浓度的菟丝子金丝桃苷经体内和体外作用一定时间后,分别测定小鼠脾T、B淋巴细胞和腹腔巨噬细胞的功能变化。结果：金丝桃苷体内剂量在300mg/kg和150mg/kg时对小鼠胸腺指数及脾T、B淋巴细胞增殖和腹腔巨噬细胞吞噬功能具有明显的抑制作用。而浓度在50mg/kg时对小鼠脾脏T、B淋巴细胞的增殖和腹腔巨噬细胞的吞噬功能具有明显的增强作用。另外,金丝桃苷体外剂量在100－6.25μg/ml时能显著增强脾T、B淋巴细胞的增殖和促进T淋巴细胞产生IL－2的能力,同时也能增强腹腔巨噬细胞的吞噬功能和释放NO的能力。结论：一定浓度的菟丝子金丝桃苷在体内外具有增强免疫功能的作用。     

毒热平注射液对病毒感染巨噬细胞IRAK4表达的影响

目的 研究毒热平注射液对流感病毒感染的小鼠腹腔巨噬细胞株Ana-1 表达IRAK4(IL-1 receptor associated kinase 4, IRAK4)的影响.方法 用100 TCID50流感病毒亚甲型鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1)感染小鼠腹腔巨噬细胞株Ana-1后换用10 μg/ml浓度含药维持液继续培养,于12 h弃细胞上清液并收集细胞,提取细胞RNA和核蛋白,进行实时定量PCR反应(RT-PCR)和Western-blot实验,分别测定毒热平注射液对病毒感染前后巨噬细胞IRAK4 mRNA和NF-κB p65蛋白表达水平的影响.结果 毒热平注射液可下调病毒感染巨噬细胞IRAK4 mRNA和NF-κB p65蛋白的表达水平.结论 毒热平注射液的抗病毒作用可能与下调依赖MyD88的信号传导通路中IRAK4的表达有关.     

玉屏风散对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮生成的影响及机理

目的:研究玉屏风散对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮(NO)生成和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法:制备玉屏风散水煎液,分离健康昆明种小鼠原代腹腔巨噬细胞进行体外培养,培养基中分别加入不同剂量上述药液使终末浓度分别达到1.67、3.33、8.33、16.67 g/L(折合生药)进行细胞培养,并设空白对照组.培养24h后,分别用Griess法和免疫细胞化学法检测NO生成量和iNOS表达量.结果:与空白对照组相比,玉屏风散加药组NO生成量和iNOS表达量显著增加(P＜0.05).结论:玉屏风散可以刺激小鼠腹腔巨噬细胞NO的生成,且可能通过诱导巨噬细胞表达iNOS,继而产生NO.这可能是玉屏风散增强机体免疫功能、抑菌、抗病毒等作用的途径之一.     

阿魏侧耳多糖抗癌作用机理研究

目的：阿魏侧耳（阿魏菇）多糖（Pleurotus ferulae polysaccharide,PFP）抗宫颈癌作用的机理研究。方法：MTT法、中性红比色法和Gfiess法。结果：灌胃给药500mg·kg^-1的阿魏菇多糖可抑制小鼠宫颈癌U14移植瘤的生长,抑瘤率达到39％,临床抗宫颈癌药顺铂的抑瘤率为46．5％,阿魏菇多糖与顺铂共同作用时,抑瘤率达到65．1％;但是在体外实验中,不同浓度阿魏菇多糖分别作用于人宫颈癌HeLa和人乳腺癌MCF．7细胞不同时间后,却不能抑制两种细胞的生长;在5μg·mL^-1的脂多糖刺激下,阿魏菇多糖不能促进脾淋巴细胞的增殖;不同浓度的阿魏菇多糖作用于腹腔巨噬细胞24h,能使腹腔巨噬细胞的吞噬能力显著增强,并且呈现明显的剂量依赖性,与此同时阿魏菇多糖也促进了腹腔巨噬细胞的增殖,但是却不能刺激腹腔巨噬细胞释放NO。结论：阿魏菇的抗宫颈癌机制可能是通过促进小鼠机体免疫功能而实现的。     

青蒿琥酯对内毒素诱导的一氧化氮合成的抑制作用

目的 :探讨青蒿琥酯对内毒素诱导的巨噬细胞一氧化氮 (NO)合成的影响。方法 :①用内毒素 (LPS)或LPS合并γ 干扰素作为巨噬细胞 (RAW 264.7)的NO合成诱导剂 ,加入不同浓度的青蒿琥酯 ,培养后取上清液 ,用Griess试剂测定NO产生量。②Balb/c小鼠肌肉注射青蒿琥酯 5 0mg·kg^-1·d^-1×3d ,收集腹腔巨噬细胞 ,测定LPS对细胞的NO诱生能力。结果 :LPS 1.0 ,0.2μg·ml^-1或γ-干扰素 100u合并LPS 1.0 ,0.2 ,0.04μg·ml^-1作用于RAW 264.7细胞 ,均可诱导大量NO合成。青蒿琥酯对LPS或LPS合并干扰素诱导的NO合成均有明显的抑制作用 ,其抑制作用具有明显的量效关系。经青蒿琥酯治疗后的小鼠 ,其腹腔巨噬细胞对LPS的反应性降低 ,其受LPS刺激后产生的NO量明显降低。结论 :青蒿琥酯可降低LPS诱导的炎性因子的产生 ,减轻炎症反应。     

川芎嗪对腹膜间皮细胞CD40表达的影响

目的：探讨川芎嗪对腹膜间皮细胞CD40表达的影响。方法：分离、培养大鼠腹膜间皮细胞，分别用4．25％腹透液、4．25％腹透液加γ－干扰素（IFN－γ，100u/ml)、4．25％腹透液加川芎嗪40mg/L、4．25％腹透液加IFN－γ 100u/ml加川芎嗪40mg/L刺激细胞30min，以DMEM／F12培养基为对照组。通过逆转录－多聚酶链反应（RT－PCR）及流式细胞仪（FACS）检测间皮细胞CD40表达。结果：4．25％腹透液刺激后腹膜间皮细胞CD40mRNA及其蛋白的表达明显高于对照组（P＜0．01）；4．25％腹透液加IFN－γ联合刺激后，间皮细胞CD40mRNA及其蛋白的表达明显高于对照组及单纯4．25％腹透液组（P＜0．01）。加入川芎嗪后，可显著减低单纯4．25％腹透液及4．25％腹透液加IFN－γ引起的CD40mRNA及其蛋白的高表达（P＜0．01）。结论：单纯腹透液及腹透液加IFN－γ可显著增加腹膜间皮细胞CD40的表达，而川芎嗪对腹膜间皮细胞CD40的表达有显著的抑制作用。在长程腹膜透析（CAPD）过程中，加入川芎嗪可能有助于减轻透析液引起的慢性炎症反应，从而防止或延缓腹膜纤维化的发生、发展。     

雷公藤多苷对小鼠腹腔激活巨噬细胞杀伤活性和NO分泌影响的实验研究

雷公藤多苷可以作为免疫抑制剂用于自身免疫性疾病的治疗,如子宫内膜异位症、哮喘、肝炎等,既可以抑制细胞免疫又可以抑制体液免疫.目的:探讨雷公藤多苷(TWP)对小鼠腹腔活化巨噬细胞杀伤活性和NO分泌的影响.方法:分离小鼠腹腔巨噬细胞,用脂多糖(LPS)激活,给予雷公藤多甙(TWP)进行共同孵育;分别以间接MTT法和Griess试剂检测巨噬细胞的杀伤活性和上清NO的含量变化.结果:雷公藤多苷能有效抑制小鼠腹腔激活巨噬细胞的杀伤活性以及NO的生成.