日本血吸虫门脉内童虫表膜抗原组分及其保护性免疫力研究

目的探讨日本血吸虫门脉内童虫表膜抗原(SjHmAg)的免疫特性,观察其抗日本血吸虫(Sj)的保护效果。方法用SDS-PAGE电泳技术分析SjHmAg蛋白组分,酶联免疫电转移印迹(EITB)分析感染兔血清(IRS)和正常兔血清(NRS)对SjHmAg的识别;用完整SjHmAg免疫昆明鼠3次,分别在0、2、4周进行,第6周每鼠经腹部感染40±1条Sj尾蚴,42天后剖杀,计数虫数及肝卵数。结果用SDS-PAGE电泳获得SjHmAg主带7条,IRS主要能识别SjHmAg23、33和63kDa等10个抗原组分;间接ELISA测其抗体滴度>1:6400,与对照组相比,SjHmAg免疫小鼠的减虫率为16.2％,减卵率为55.4％。结论用SDS-PAGE获得了不同分子量的SjHmAg蛋白,EITB鉴别出具有免疫活性的蛋白分子,且SjHmAg对Sj攻击感染及雌虫生植似有一定的抗性。     

日本血吸虫31kDa组织蛋白酶B DNA疫苗保护性免疫效果观察

目的观察日本血吸虫31kDa组织蛋白酶BDNA疫苗(Sj31B1N)在小鼠体内的保护性免疫效果.方法用Sj31B1N和Sj31B1N+pUCDNA疫苗肌注免疫BALB/C小鼠,用空白质粒载体VR1012做对照,在0、4、8周共免疫3次,每次免疫前及末次免疫后4周从尾静脉采血收集血清,经ELISA法检测小鼠血清抗体升高时,用日本血吸虫尾蚴攻击感染小鼠.结果Sj31B1N和Sj31B1N+pUC减虫率分别为24.2%和22.0%;肝卵减少率分别为34.9%和39.5%,每雌肝卵减少率分别为30.4%和35.3%.结论小鼠接种Sj31B1N后对日本血吸虫感染有减虫、减卵作用及抗雌虫生殖的作用.加质粒佐剂pUC未见有增强免疫效果的作用.     

编码完整膜蛋白Sj23质粒DNA核酸疫苗免疫小鼠及其保护力的研究

目的 探讨用编码完整膜蛋白(Sj23)核酸疫苗诱导BALB/c小鼠抗日本血吸虫病保护力的作用.方法 大量制备DNA疫苗,BALB/c小鼠被分成3组,肌肉内注射进行免疫.免疫小鼠3次,间隔2周,末次免疫后2周,用ELISA法和Western Blotting法检测免疫鼠血清特异性抗体效价.结果 编码Sj2-pcDNA质粒免疫的小鼠产生了针对Sj23的特异性IgG,而peDNA对照组免疫小鼠血清则无此作用.Sj23-pcDNA疫苗对日本血吸虫攻击感染有一定的保护力.结论 Sj23-pcDNA疫苗能够诱导小鼠产生抗日本血吸虫攻击感染的保护力.     

日本血吸虫组织蛋白酶B核酸疫菌血清抗体与抗生殖免疫关系的初步研究

目的 探讨日本血吸虫组织蛋白酶B DNA疫苗（Sj31B1N）抗生殖免疫的可能机理。方法 用Sj31B1N免疫小鼠,每2周1次,每次免疫前均尾静脉采血1次,作血清抗体动态变化分析,免疫4次后尾蚴攻击感染,感染后45天,计数成虫负荷和肝、肠组织内虫卵数。结果 用Sj312B1N免疫小鼠后第2周部分小鼠血清中出现了抗体,随时间延长,出现抗体阳性组小鼠数量增多,抗体滴度增加。抗体阳性组小鼠与阴性组小鼠对比,成虫减少率40.6%,肝组织减卵率为48.0%,肠组织减卵率为45.4%。结论 核酸疫苗Sj31B1N可有效地诱导小鼠产生抗体,并且具有免疫保护作用。核酸疫苗Sj31B1N所诱导的体液免疫可能是抗日本血吸虫生殖免疫的机理之一。     

东方田鼠血清被动转移抗日本血吸虫的保护力研究

目的　探讨被动转移东方田鼠血清抗日本血吸虫感染力及其作用机理。　方法　将东方田鼠血清通过尾静脉注射途径被动转移至小鼠 ,观察攻击感染日本血吸虫尾蚴后的减虫率、减卵率 ,并采用ELISA分别检测抗日本血吸虫童虫、成虫和虫卵的 8种抗体。　结果　与生理盐水对照组比较 ,东方田鼠血清受体小鼠获得的减虫率为 3 6.2 % ,减卵率为 5 4.0 % ;血清IgE、IgM、IgG及其亚类抗体均有升高 ,其中抗童虫抗原的IgG1抗体水平增幅最大。各试验组小鼠血清抗体水平差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。　结论　东方田鼠抗日本血吸虫感染的天然抵抗力可通过血清被动转移至小鼠 ,使之获得部分抗血吸虫感染的保护力 ,该保护力可能是通过同时诱导受体小鼠Th1和Th2型免疫应答发挥作用的     

重组日本血吸虫铁蛋白的表达纯化及诱导小鼠保护性免疫研究

目的　表达、纯化重组日本血吸虫铁蛋白 ,观察其免疫小鼠后抗日本血吸虫的免疫保护作用。方法　用基因重组技术 ,将日本血吸虫铁蛋白基因亚克隆至表达载体 pGMC上 ;在IPTG诱导下 ,重组日本血吸虫铁蛋白得到高效表达 ;用电泳层析法分离纯化日本血吸虫铁蛋白 ;用SDS -PAGE和Western -blot鉴定表达纯化产物 ;用纯化的重组铁蛋白免疫小鼠三次 ,分别在 0、2、4周进行。第 6周每鼠经腹部感染 4 0± 1条日本血吸虫尾蚴。 4 2天后剖杀冲虫 ,计数虫数及肝卵数。结果　纯化的重组铁蛋白分子量为 4 0kD ,具有较好的免疫原性 ,能被日本血吸虫感染兔血清识别。与对照组相比 ,纯化重组铁蛋白免疫小鼠组的减虫率为 2 4 5 % ,减卵率为 4 5 8%。结论　重组日本血吸虫铁蛋白不仅在大肠杆菌中得到高效表达 ,而且纯化的铁蛋白分子能诱导抗日本血吸虫病的保护性免疫。     

核酸疫苗VR1012/Sj31粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染的研究

目的　探讨日本血吸虫核酸疫苗VR10 12 /Sj3 1粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染的保护力。　方法　将实验小鼠随机分为 5组 ,每组 12只。A组为单磷脂 (MPL)组 ,B组为VR10 12组 ,C组VR10 12 MPL组 ,D组为VR10 12 /Sj3 1组 ,E组为VR10 12 /Sj 3 1 MPL组。滴鼻免疫。在第 3次免疫后 2周 ,每只鼠经腹部感染 40± 1条尾蚴 ,45d后宰杀 ,观察减虫率和减卵率。在初次免疫前和攻击感染前尾静脉采血并收集粪便 ,ELISA检测血清内特异性IgA、IgG及粪内sIgA水平。　 结果　与对照组相比 ,VR10 12 /Sj 3 1及VR10 12 /Sj 3 1加MPL滴鼻免疫均可引起小鼠血清IgG、IgA和粪内sIgA升高 ,且VR10 12 /Sj 3 1加佐剂滴鼻免疫组抗体的增幅 >不加佐剂组。VR10 12 /Sj3 1和VR10 12 /Sj3 1加MPL滴鼻免疫诱导小鼠产生的减虫率分别为 2 1.70 %和 2 8.82 % ,减卵率分别为 2 7.98%和 40 .72 %。二者的减虫率差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,但减卵率后者显著高于前者 (P <0 .0 5 )。　结论　VR10 12 /Sj3 1滴鼻免疫可引起小鼠产生全身和粘膜免疫应答及部分抗攻击感染的免疫保护力。     

日本血吸虫重组硫氧还蛋白小鼠保护性免疫研究

目的 观察日本血吸虫（大陆株）硫氧还蛋白重组抗原在小鼠诱导抗血吸虫感染的免疫保护作用。 方法 30只雌性C57BL/6小鼠随机分为3组，reSjcTrx免疫组：reSjcTrx（15mg/鼠）和ISA720佐剂乳化后采用小鼠相背部多点皮下注射，共免疫3次，间隔2周；ISA720佐剂对照组：小鼠仅注射ISA720佐剂和生理盐水；感染对照组不作任何处理。于末次免疫后3周，各组小鼠经腹部皮肤感染（30±1）条日本血吸虫尾蚴，感染后6周剖杀，门静脉灌注法收集成虫，计成虫数和每克肝组织虫卵数。在免疫前、攻击感染前和小鼠剖杀前分别采血并分离血清，用ELISA检测重组抗原特异性IgG抗体。并对reSjcTrx 进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹（Western blotting）分析。 结果 ELISA检测表明，reSjcTrx免疫组小鼠产生特异性IgG抗体应答，并诱导小鼠产生对攻击感染的减虫率和肝组织减卵率分别为22.8%和29.5%，与ISA720佐剂对照组和感染对照组相比，差异均有统计学意义（P﹤0.05）。SDS-PAGE和Western blotting的结果表明，该重组抗原相对分子质量（Mr）约14 000（含载体的6个氨基酸），可被日本血吸虫感染兔血清和reSjcTrx免疫小鼠血清所识别。 结论 reSjcTrx免疫小鼠可产生一定的抗血吸虫感染的保护作用。     

用日本血吸虫感染新模型兔血清筛选噬菌体随机肽库的初步研究

目的在建立一种有成虫寄生但无虫卵肉芽肿形成的日本血吸虫感染小鼠及家兔新模型,并观察其具有较高的抗攻击感染保护力的基础上,用新模型兔血清筛选噬菌体随机12肽库,并初步鉴定阳性噬菌体克隆诱导小鼠抗日本血吸虫感染的免疫保护作用.方法用大肠杆菌抗原吸收后的新模型兔血清,经抗体捕获法筛选噬菌体12肽库,经3轮亲和筛选、富集后获得阳性多克隆.用常规ELISA法检测阳性多克隆噬菌体的抗原性.用滴度为1×1014pfu的阳性多克隆噬菌体按0-2-4周方案皮下多点注射免疫小鼠,末次免疫4周后,用日本血吸虫尾蚴攻击感染,同时设立常规感染兔血清筛获的阳性克隆免疫组、原始肽库免疫组、攻击感染对照组.结果①新模型兔血清筛获的多克隆噬菌体(滴度为1×1014pfu)与新模型兔血清(稀释度为1:400)反应为强阳性,与常规感染兔血清(1:400)反应为弱阳性,与正常兔血清(1:400)反应为阴性.②用新模型兔血清筛获的多克隆噬菌体、常规感染兔血清筛获的多克隆噬菌体及原始肽库分别免疫小鼠后诱导抗攻击感染的减虫率及每克肝脏减卵率分别为27.2%和38.8%、17.8%和35.0%、4.5%和6.0%.结论与用日本血吸虫常规感染模型兔血清筛获的多克隆噬菌体比较,经新模型兔血清筛获的含有模拟日本血吸虫抗原表位的多克隆噬菌体能诱导小鼠更高的抗攻击感染减虫率(P＜0.05)及相似的减卵率(P＞0.05);与原噬菌体随机肽库相比较,能诱导小鼠较高的抗攻击感染减虫率(P＜0.01)及减卵率(P＜0.05).     

日本血吸虫保护性抗原模拟表位的筛选及其免疫保护作用的研究

目的在前期已建立日本血吸虫感染兔新模型的基础上,用该血清从噬菌体随机12肽库中筛选阳性单克隆噬菌体,并鉴定其诱导小鼠的免疫保护效果。方法通过给感染日本血吸虫家兔注射酚氧化酶抑制剂,抑制其体内日本血吸虫雌虫产卵,建立无虫卵肉芽肿的日本血吸虫感染动物新模型,用其血清筛选出阳性多克隆噬菌体,经与可溶性虫卵抗原(SEA)免疫兔血清充分吸附后,从中随机挑取14个单克隆分别纯化、扩增,用常规ELISA法检测阳性单克隆噬菌体的抗原性;挑选出与新模型兔血清呈强阳性反应,但与SEA免疫兔血清呈阴性或弱阳性反应的单克隆噬菌体,按1×1015pfu/次剂量,0-2-4周方案,皮下多点注射免疫小鼠。末次免疫4周后,每鼠经腹部皮肤攻击感染(40±1)条日本血吸虫尾蚴,感染42d后观察减虫率及减卵率。结果所选14个单克隆噬菌体均能与新模型兔血清和常规感染模型兔血清反应,尤其是第8号和第13号2个克隆与新模型兔血清呈强阳性反应,但与SEA免疫兔血清呈阴性反应;8号、13号单克隆噬菌体及原始噬菌体肽库免疫小鼠后诱导抗攻击感染的减虫率及每克肝脏减卵率分别为35.81%和63.32%、32.09%和52.02%、14.90%和30.64%。结论阳性多克隆噬菌体与SEA免疫兔血清免疫吸附后能去除大部分表达SEA抗原模拟表位的克隆,所选14个单克隆噬菌体均表达     

维族妇女子宫脱垂的临床特点及手术难点

目的探讨老年维吾尔族(以下简称维族)妇女子宫脱垂的临床特点及进行阴式子宫切除术的难点。方法对67例患有子宫脱垂行阴式子宫切除术的老年妇女按维、汉两族分组,回顾性分析比较两组在发病年龄、子宫脱垂程度、宫颈糜烂程度等临床特点上的差异及在手术时间、手术方式、术后恢复情况等方面的差异程度。结果维族组患者发病年龄明显比汉族组小,有显著性差异(P<0.01);维族组患者子宫脱垂程度、宫颈糜烂程度明显比汉族组患者严重,有极显著性差异(P<0.01);维族组患者手术时间明显比汉族组长,有显著性差异(P<0.05);维族组患者改变常规手术方式的例数极明显地比汉族组多,有极显著性差异(P<0.01);维族组患者手术中出血量和汉族组有极明显差异(P<0.01),维族组患者手术后下床活动明显比汉族组早,有极显著性差异(P<0.01);维族组术后发生并发症的例数明显少于汉族组,有显著性差异(P<0.05)。结论维族老年妇女子宫脱垂的患者具有发病年龄小、脱垂程度、宫颈糜烂程度严重等特点,对维族妇女进行阴式子宫切除术时需做好手术时间长、手术难度大、可能需改变常规手术方式的准备,维族妇女术后恢复快、并发症少。     

几种布鲁氏菌化学疫苗的提取及动物实验观察

本文所提取的几种化学疫苗对豚鼠都产生了不同程度的免疫学改造,但“PI”抗原的血清学效价很低。除了布氏菌核蛋白免疫的少数豚鼠对其本身抗原产生了弱的皮肤变态反应外,其余免疫制剂对布氏菌素和其自身抗原均不产生皮肤变态反应。在免疫高峰时,各种疫苗对豚鼠都产生了良好的保护力,同时在本次试验中和104M 活菌苗比较未出现差别。