rhBMP-2珊瑚复合人工骨诱导骨形成的动物实验研究

[目的]研究rhBMP-2珊瑚复合人工骨在兔体内诱导异位成骨的活性.[方法]将大肠杆菌表达的重组人骨成形蛋白-2(rhBMP-2)与珊瑚复合,制成rhBMP-2珊瑚复合人工骨,将其植入兔股部肌肉,各10例,以单纯珊瑚植入作对照,通过大体和组织学测量等方法,观察新骨形成的特点和珊瑚降解的过程.[结果]组织学显示在植入5周后rhBMP-2珊瑚复合人工骨在植入部位可见散在的编织骨形成,新生骨融合生长,成为含骨髓的板层骨,珊瑚体积明显减少;而对照组未见软骨和骨组织的形成.[结论]rhBMP-2珊瑚复合人工骨具有良好的异位诱导成骨能力.     

rhBMP-2/SH复合物对微种植体支抗稳定性作用的实验研究

[摘要] 目的：评价 rhBMP-2/SH复合物对微种植体支抗稳定性的作用。方法：实验选用新西兰大白兔12只,分为2、4、8周组,每组4只。每只动物每侧胫骨植入rhBMP－2/SH/微种植体、微种植体各1枚;术后2、4、8周处死动物进行：（1）微种植体周围骨组织形态学观察。（2）微种植体-骨界面剪切力的测量。结果：在2、4、8周时, rhBMP－2/SH/微种植体周围胫骨表面周围有新骨生成,4周、8周时 rhBMP－2/SH/微种植体骨质附着量多于单纯微种植体。rhBMP－2/SH/微种植体组的剪切力分别为：(121.52±20.32) N、(213.78±25.30) N 和 (252.15±36.96) N;微种植体组的剪切力分别为：(124.32±18.25) N、(175.63±23.45) N 和 (201.07 ±33.49) N;术后4和8周时rhBMP－2/SH/微种植体组的剪切力要明显大于微种植体组,两者间差异有统计学意义（P<0.05）。 结论： rhBMP－2/SH复合物可以促进微种植体周围新骨形成,增加骨皮质厚度、骨结合率,从而增加微种植体的稳定性。     

rhBMP-2复合透明质酸钠凝胶诱导成骨的实验研究

目的 为重组人骨形态发生蛋白－２（ｒｈＢＭＰ－２）在种植牙中的应用寻找一种新型、有效的复合材料。方法 将２０～３０ｍｇ雄性小白鼠１６只随机分为２组,每组４只。其中一组为空白对照组,其余各组小鼠肌囊内分别植入透明质酸钠凝胶（Ｈｅａｌｏｎ ＧＶ）、ｒｈＢＭＰ－２、ｒｈＢＭＰ－２与ＨｅａｌｏｎＧＶ复合物,２１ｄ后进行Ｘ线片观察、组织学观察及ＢＭＰ定量测定。结果 空白对照、Ｈｅａｌｏｎ ＧＶ组无骨组织生长     

兔下颌牵引成骨区应用rhBMP-2对BMP-7表达的影响

目的:研究不同剂量外源性rh BMP-2对兔下颌骨牵引成骨区新骨BMP-7表达的影响。方法:选取成年日本大耳白兔45只,雌雄不限,适应性饲养1周,随机分为对照组、实验1组和实验2组,每组各15只。在兔下颌骨磨牙前行截骨术,分别将空白胶原载体、rhBMP-2胶原复合物1.5 mg和rh BMP-2胶原复合物3 mg植入其下颌骨切开处。观察稳定期的第1、3、7、14、28 d的兔的新骨生成,并用免疫组织化学染色法观察BMP-7的表达。结果:成骨细胞(OB)和骨髓基质细胞(SC)的细胞质免疫组织化学法BMP-7阳性表达呈棕色或棕褐色颗粒状着色,结果显示BMP-7的表达与rh BMP-2有剂量依赖性。在同一稳定期内实验组兔成骨细胞和骨髓基质细胞与对照组有显著性差异(P<0.05),且实验2组与实验1组也有显著性差异(P<0.05),在同一剂量下,稳定期1 d BMP-7表达达到高峰,主要集中在间充质细胞的细胞质中,随着稳定期的延长其表达逐渐下降,但稳定期3 d和7 d BMP-7仍为强阳性表达,稳定期14 d进一步减弱,到稳定期28 d表达的很少,达到正常水平。结论:BMP-7在兔牵引成骨过程的不同稳定期的成骨细胞和骨髓基质细胞有不同的表达,说明其对牵引成骨的新骨形成有一定的调节作用。     

不同降解率β-TCP/rhBMP-2 复合人工骨的研制及骨诱导活性检测

骨缺损修复是骨科领域的重要课题,除使用生物材料外,人工材料也被广泛应用.但目前尚无理想的人工骨材料.为适应临床上不同植骨的需求,我们研制出了不同降解率的β-磷酸三钙(β-TCP),将其与基因重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)复合制备成不同降解率的β-TCP/rhBMP-2复合人工骨并对其异位诱导成骨活性进行评价.     

重组人骨形成蛋白-2促进兔下颌牵张成骨的实验研究

目的：研究重组人骨形成蛋白-2（recombinant human bone morphogenetic protein-2,rhBMP-2）对兔下颌牵张成骨的作用。方法：建立兔下颌双侧牵张成骨动物模型．于下颌右侧骨断端间植入含有rhBMP-2的可吸收胶原海绵（absorbable collagen sponge,ACS）,左侧单纯应用ACS作为对照。分别于固定期第3、5周末处死动物。取标本行X线及组织学观察。结果：应用rhBMP-2侧新骨形成的速度以及骨小梁的密度均高于对照。结论：局部应用rhBMP-2能够提高牵张区新骨形成的速度和质量．对下颌牵张成骨具有促进作用。     

重组人骨形成蛋白-2和珊瑚复合移植的动物实验研究

目的 :评价重组人骨形成蛋白 - 2 ( rh BMP- 2 ) /珊瑚复合人工骨的骨诱导活性和骨修复能力。　 方法 :rh BMP- 2和珊瑚以一定的方式复合后 ,植入小鼠股部肌袋和兔颅骨标准大小缺损 ,以单纯珊瑚植入作对照。术后不同时间取材 ,通过组织学方法检测其骨诱导活性和骨修复能力。　结果 :复合人工骨植入小鼠肌袋 1周诱导软骨形成 ;3周形成编织骨 ;6周形成含骨髓的板层骨 ,同时珊瑚被部分降解吸收 ;复合人工骨植入兔颅骨缺损后 ,以引导成骨和诱导成骨双重机理完成骨修复过程。术后 12周 ,植入物完全被成熟的骨组织取代 ,其骨修复效果明显优于单纯的珊瑚。　 结论 :此复合人工骨具有骨传导和骨诱导活性 ,骨修复能力较强 ,是一种比较理想的新型生物性植骨材料     

rhBMP-2 cDNA转染的NIH-3T3细胞和rhBMP-2m对小鼠急性放射损伤的治疗作用

0 引言我们曾报道[1,2]重组人骨形成蛋白-2成熟肽(rhBMP-2m)和rhBMP-2 cDNA转染的NIH-3T3细胞对小鼠急性放射损伤有治疗作用,其机制与它促进放射损伤后骨髓细胞造血功能的恢复有关.     

应用外源性的rhBMP-2后牵引成骨区生长因子TGF-β1的表达

目的通过动物实验,研究应用外源性的rhBMP-2后牵引成骨区生长因子TGF-β1的表达。方法在32只成年大耳白兔的一侧下颌骨前部行骨切开术,分别将空白胶原、rhBMP-2胶原复合物植入下颌骨切开处,用牵引器延长一侧下颌骨4 mm,分别于牵张完成后的第1、3、7、14 d处死一组动物,取牵引区新生骨痂行组织学及TGF-β1免疫组化染色,通过细胞图像分析仪测量牵引区新骨生成的平均灰度值,利用SPSS软件采用方差分析方法进行统计分析。结果牵引区周围组织均愈合良好,牵引间隙新骨逐渐形成,应用rhBMP-2组中的新骨组织周围TGF-β1的表达比空白胶原组中的多。结论动物实验表明,应用外源性的rhBMP-2后牵引成骨区生长因子TGF-β1的表达明显增强。     

重组人骨形态发生蛋白2缓释体对铬磨损颗粒诱导的溶骨效应的影响

目的建立大鼠植骨气囊模型,观察在不同浓度重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)缓释体干预下气囊内组织的破骨细胞分化因子(RANKL)、骨破坏素(OPG)表达情况。方法在大鼠背部注入空气形成气囊,取同源大鼠的颅骨植入气囊内。将已制成的植骨气囊模型大鼠分成5组:空白组、铬颗粒组、50μg/L rhBMP-2缓释体+铬颗粒组、100μg/L rhBMP-2缓释体+铬颗粒组和200μg/L rhBMP-2缓释体+铬颗粒组。各组分别用药处理,2周后取出囊腔内组织进行RANKL、OPG的Wester-blot、Rt-PCR检测,并对囊腔内骨片行TRAP染色,用计算机图像分析技术测定骨片破骨细胞染色面积,进行药效评价。结果 RANKL、OPG在各组囊腔组织中均有表达。骨片破骨细胞染色面积、RANKL、OPG的Wester-blot和RT-PCR结果及RANKL/OPG值,在铬颗粒组中明显高于其他4组(P<0.05);在3个rhBMP-2缓释体干预组内,随着rhBMP-2缓释体浓度增高呈递减趋势,组间差异均有统计学意义(P<0.05);在空白组和200μg/L rhBMP-2缓释体+铬颗粒组间未见明显差异(P>0.05)。结论大鼠植骨气囊模型成功的模拟了人工关节无菌性松动的生物学和组织学特征。铬颗粒可以引起RANKL/OPG值升高,促进溶骨;rhBMP-2缓释体通过降低RANKL/OPG值,从而促进成骨、抑制骨吸收效益。     

rhBMP-2m在高浓度条件下的复性

目的:优化高浓度的人骨形成蛋白2成熟肽(rh-BMP-2m)的复性条件.方法: 将工程菌株进行高密度发酵、温度诱导表达,裂菌收集包涵体后经离子交换色谱分离纯化.纯化后的蛋白在不同的温度、复性液pH,氧化交换系统浓度、盐浓度等条件下进行透析复性.透析复性后进行非还原的SDS-PAGE,检测rhBMP-2m活性形式二聚体的含量,同时找出相对较优的复性方法对复性产物进行0.22 μm微孔滤膜除菌并计算其损失率.结果: 经透析复性后rhBMP-2m完全可溶,而且其活性形式二聚体的含量达到30%左右,即复性后二聚体的rhBMP-2m可以达到每升发酵液800 mg,并且经微孔滤膜除菌后rhBMP-2m活性形式二聚体的含量基本没有损失,同时蛋白定量也表明过滤除菌后蛋白损失不超过10%.结论: 高pH有利于rhBMP-2m的复性,除变性剂尿素时采用低pH可以保持高浓度rhBMP-2m复性后仍保持可溶.蛋白质的浓度、pH和温度对蛋白复性的结果影响很大,但盐浓度、氧化交换系统的浓度和透析外液体积对蛋白复性影响不是很大.     

基因重组人骨形成蛋白-2对培养骨髓细胞的生物学效应

目的 骨髓是机体重要的造血器官,其中的单个核细胞主要是单核细胞和巨噬细胞,骨髓组织在骨损伤修复过程中也发挥重要的作用,为提高骨形成蛋白（ＢＭＰ）修复骨缺损的能力。方法 本实验观察了基因重组人骨形成蛋白－２（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎＢｏｎｅＭｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃＰｒｏｔｅｉｎ－２,ｒｈＢＭＰ２）对培养骨髓细胞生物学活性的影响。结果 低浓度的ｒｈＭＢＰ２）对培养骨髓细胞生物学活性的影响。结     

重组人骨形态发生蛋白-2原核表达及单克隆抗体制备

目的 利用原核表达系统(E.coli)表达纯化重组人骨形态发生蛋白-2成熟肽(rhBMP-2m),并制备rh-BMP-2m的单克隆抗体.方法 将工程菌株进行常规发酵,自诱导表达,裂菌离心分离包涵体,包涵体变性后经阳离子交换色谱分离纯化.纯化后的变性rhBMP-2m经稀释复性,获得具有生物学活性的rhBMP-2m.并以此作为抗原,免疫Balb/c小鼠制备单克隆抗体.结果 获得还原SDS-PAGE下95％以上纯度的rhBMP-2m.细胞活性结果分析显示,所获得的rhBMP-2m具有较强的生物学活性.免疫小鼠最终获得两株稳定分泌抗rhBMP-2m抗体的杂交瘤细胞株.结论 成功制备了具有生物学活性的rhBMP-2m及其单克隆抗体,为rhBMP-2未来的研究和制备奠定良好的基础.     

人骨形成蛋白-2基因的克隆及其重组腺病毒载体的构建

目的：克隆人骨形成蛋白-2（BMP-2）基因cDNA，构建含BMP-2基因的重组腺病毒载体。方法：采用RT-PCR方法克隆BMP-2基因cDNA，并插入克隆载体pGEM-T中进行全序列分析。将BMP-2基因cDNA克隆到穿梭载体pShuttle-CMV中，构建pShuttle-BMP2重组质粒，再将其中的表达盒克隆入Adeno-X腺病毒DNA中，获得重组腺病毒DNA-pAd-BMP。 结果：成功地克隆长约1 200 bp的BMP-2 cDNA，并成功地构建其腺病毒载体，经线性化的pAd-BMP2 DNA转染HEK293细胞，包装、扩增后得到人骨形成蛋白-2重组腺病毒，其滴度约为1×10¹¹nfu•L^-1，该滴度可满足进一步的BMP-2成骨作用的研究。结论:成功地构建BMP-2腺病毒载体。     

The effect of estrogen on the Restoration of bone mass and bone quality in ovariectomized rats

Thereareabundantlyevidencesboneexperiencesarapidlossaftermenopause.Althoughthisbonelosswasconsideredduetoseveralfactors,estrogendefi-ciencywasregardedwithmainresponsibility['j.Studiesshowedthatestrogendeficiencyaffectedtheskeletalsiteswithmainlycancellousbone,suchasvertebra,hip,theendsoflOngbonesetcL!],resultingofthehighriskfractureinoftheseparts.Withthedevelopmentofthestudyonthepathogenesisofos-teoporosis,itwasobservedthatbonemateriaIquali-ty,usua1lyconsideredinvariant,probablycontributesmor…     

Implantation of xenogeneic bone combined with recombinant human bone morphogenetic protein-2 into bone defect—An scanning electron microscopic study

Xenogeneicbonehasagreatpotentialforgraftingowingtoitsunlimitedsourcesandsimple,economicalcharacters'However,theimmunere-jectionevokedbyxenograftrestrictsitsclinicalap-plication.Howtoeliminatetheantigenicityofthegraftwhilepreserveitsosteoinductivepropertiesisthekeytosuccessfulgraftingandisalsothepur-poseofthisstudy.Thechemicallytreatedsheepcancellousbonehasasuitableframeworkformechanicalsupportandisagoodcarrierofbonemorphogeneticprotein(BMP)withattenuatedantigenicity,butitlacksosteoinductivefa…     

BMP-7防治实验性肝纤维化的研究

目的观察骨形态发生蛋白-7（bone morphogenefic protein-7,BMP-7）对实验性肝纤维化的影响。方法运用猪血清腹腔注射法．诱导免疫性大鼠肝纤维化模型。实验动物分为5组：肝纤维化模型组、早期治疗组、后期治疗组、预防组、对照组。预防组从实验开始、早期治疗组从实验第2周、晚期治疗组从实验第4周腹腔注射外源性BMP一7．每周3次：对照组注射等剂量生理盐水。采用免疫组化和Western印迹法检测BMP-7对实验性肝纤维化大鼠肝组织中转移生长因子β1（transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1）表达的影响。结果实验性肝纤维化大鼠的早期治疗组、后期治疗组和预防组的肝纤维化级别与模型组之间的差异均有统计学意义（P〈0．05）;预防组和治疗组中BMP-7可以抑制纤维化肝组织中TGF-β1的表达,治疗组中的TGF-β1的表达较模型组中明显减少（P〈0．05）。结论BMP-7有效预防和治疗实验性肝纤维化,其机制可能与抑制纤维化肝组织中的TGF-β1的表达有关。     

EGCG对去势雌性大鼠骨量丢失的预防作用

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG]早期预防雌性去势大鼠骨量丢失的作用?方法:12周龄雌性Sprague-Dawley大鼠分为3组:A组,双侧卵巢切除去势术后第3天开始连续12周以10 mg/(kg?d) EGCG腹腔内注射;B组,仅接受双侧卵巢切除去势术,不接受EGCG干预;C组,假手术组,不接受EGCG干预?在实验终点时刻(24周龄)制作大鼠胫骨和股骨的离体标本用于micro-CT扫描,测量骨密度(BMD)和相关骨形态学参数:松质骨骨组织总量(total bone volume,TV)?骨量(bone volume,BV)?骨体积分数?平均骨小梁厚度?平均骨小梁数量和骨小梁分离度?皮质骨厚度和皮质骨骨体积分数;并对大鼠股骨远端骨组织进行HE染色?结果:根据micro-CT分析,A组大鼠的BMD和骨体积分数显著高于B组(P < 0.05)?A组松质骨分离度显著低于B组(P < 0.05)?其余骨形态学参数3组之间无统计学差异(P > 0.05)?骨组织学研究显示C组松质骨密度较A组和B组更加致密,A组松质骨密度则介于B组和C组之间?结论:EGCG在延缓雌性大鼠骨量丢失方面有积极作用,但是在年轻的雌性大鼠卵巢切除去势后以10 mg/(kg?d)的剂量预防性腹腔注射EGCG并不能完全恢复丢失的骨量?     

雌激素及人重组生长激素对去势大鼠颌骨及股骨骨密度的影响

目的 观察雌激素及人重组生长激素对去势大鼠剩余牙槽骨骨密度的影响. 方法 4月龄未交配雌性SPF级大鼠65只,随机分为2组:去势组(ovariectomized,OVX)48只、假手术组(sham-ovariectomized rats,sham-OVX)17只.OVX组切除卵巢建立绝经后骨质疏松模型;sham-OVX组切除卵巢周围脂肪组织;饲养8周后,拔除左侧上颌磨牙建立剩余牙槽骨模型.根据治疗方案将OVX大鼠分为4组:OVX组、雌激素治疗组(estrogen replacement therapy,ERT)、生长激素治疗组(rhGH therapy,rhGHT)、联合治疗组(estrogen and rhGH therapy,ErhGHT).拔牙术后3d,背部皮下注射给药.组织学观察各组大鼠骨组织计量学变化;双能X线法测定大鼠剩余牙槽骨和四肢骨骨密度(bone mineral density,BMD). 结果 给药4周时,rhGHT 组、ERT组和ErhGHT组BMD升高,与OVX组相比差异存在显著性;但其均低于sham-OVX组.而给药8周时,rhGHT组、ERT组、ErbGHT组与sham-OVX组BMD相似,差异均无显著性.相关性分析显示剩余牙槽骨与股骨和腰椎的骨量变化呈正相关. 结论 剩余牙槽骨骨质丧失、上颌骨骨质丧失与全身骨骼骨质丢失之间有相关性.rhGHT、ERT和ErhGHT都能有效提高上颌剩余牙槽骨、上颌骨、腰椎和股骨骨量至正常水平,骨量的提高受治疗时间的影响,疗程不应少于8周.