Hedgehog信号通路分子Shh、Ptch和Smo在化学诱导小鼠肝癌模型过程中的动态表达

目的探讨C57BL／6J小鼠诱癌过程中Hedgehog信号通路成员Shh、Ptch和Smo在各阶段的动态表达。方法将95只正常C57BL／6J雄性小鼠随机分为诱癌组50只（化学诱癌处理）和对照组45只（正常喂养）,定期获取小鼠肝组织标本行免疫组织化学法、实时荧光定量RT—PCR法和蛋白质印迹法检测。结果免疫组织化学提示,诱癌组Shh、Ptch和Smo蛋白分别在第6周、第8周和第10周出现弱阳性,均在第16周出现中度阳性,第20周出现强阳性表达,而正常对照组中未检测出三者的表达。RT—PCR法提示,诱癌组小鼠肝组织中ShhmRNA、PtchmRNA和SmomRNA的表达量持续升高,第20周时j者的表达水平均达到最高（ShhmRNA15．986±1．784,PtchmRNA11．272±0．295,SmomRNA10．185±0．716）,明显高于同期正常对照组（P〈0．05）。蛋白质印迹法提示,诱癌组Shh、Ptch和Smo蛋白分别从第6周、第8周和第10周起出现弱表达,到第20周时显著增强,而正常对照组中未检测出3种蛋白的表达。结论Hedgehog信号通路分子Shh、Ptch和Smo伴随着小鼠诱发肝癌时间的延长其表达量逐步升高,认为Hedgehog信号通路与小鼠肝癌的发生、发展密切相关。     

Hedgehog信号通路与Snail在肝癌细胞系中的表达及意义

目的 探讨Hedgehog(Hh)信号通路在各种肝癌细胞系中的表达及其与Snail蛋白的关系.方法 用RT-PCR检测了Hh信号通路分子Shh、Ihh、Ptch-1、Smo、Gli-1、Gli-2、Gli-3 mRNA在4种肝癌细胞系HepG2、Hep3B、SMMC-7721、Huh-7和永生化肝细胞系L02中的表达情况,应用Western blot检测了Snail蛋白在SMMC-7721和L02细胞中的表达差异.结果 RT-PCR结果显示Hedgehog信号通路分子mRNA在肝癌细胞株中呈高表达,并以Shh信号为主;Gli-2在SMMC-7721细胞中表达最显著,而在正常肝细胞株L02中表达最弱,两者差异显著(P<0.01).Snail蛋白在SMMC-7721细胞中的表达显著高于L02细胞(P<0.05),且与Gli-2的表达呈正相关(P<0.05).结论 Hh信号通路可能通过Gli-2上调Snail的表达,增强肝癌细胞增殖力和侵袭力,促进肝细胞癌的发生和发展.     

Sufu的突变位点对Sonic Hedgehog信号通路调控机制的研究

目的：研究髓母细胞瘤患者中发现的Supressor of Fused（Sufu）的突变位点与Sonic Hedgehog（Shh）信号通路异常激活之间的联系,从而揭示其与肿瘤生长发展之间的关系。方法：构建Sufu突变位点的表达质粒,通过定量PCR、蛋白免疫印迹实验检测Sufu突变体对Sufu-/-细胞内源性Gli1表达水平的影响;通过免疫共沉淀检测Sufu突变体蛋白与Gli1的结合情况;通过MTT实验检测Sufu突变体对人髓母细胞瘤细胞（DAOY）生长增殖的影响。结果：定量PCR和蛋白免疫印迹实验发现,过表达Sufu的错义突变体（突变位点H87R）的Sufu-/-细胞中内源性Gli1表达水平接近于过表达野生型Sufu的Sufu-/-细胞,而过表达3个截短突变体（突变位点R146X、R299X、W430X）Sufu-/-细胞中内源性Gli1表达水平相比于野生型明显增高。正常情况下野生型Sufu可以和Gli1蛋白结合,免疫共沉淀实验发现Sufu的突变体都不同程度地破坏了与Gli1蛋白的结合;蛋白周转速率实验发现Sufu的突变体可以通过蛋白酶体途径降解;MTT实验发现Sufu突变体失去了抑制DAOY细胞生长增殖的能力。结论：髓母细胞瘤患者身上观测到的Sufu突变位点可以驱动肿瘤的形成和生长,并通过细胞功能实验证实了Sufu通过结合Gli蛋白从而抑制其功能。     

Sonic Hedgehog信号通路在大鼠牙髓炎中的作用

目的:观察Sonic Hedgehog(Shh)信号分子在大鼠牙髓炎中的免疫定位,探讨Shh信号通路在牙髓防御和修复中所起的作用。方法:将15只SD大鼠随机分成1d、3d和7d组,每组5只,用穿髓开放法建立大鼠牙髓炎模型,3组大鼠分别于术后1,3,7d处死,取出下颌磨牙,常规组织学处理,免疫组化方法检测Shh,Smo,Ptc,Gli1的表达,并对Shh信号通路在大鼠牙髓炎中的表达进行半定量分析,对照组为大鼠正常牙髓。结果:大鼠牙髓炎模型1,3,7dShh广泛表达于穿髓孔下方牙髓间充质细胞及远离穿髓孔的根髓细胞中,表达量随炎症的进展无显著性提高(P>0.05)。Ptc、Smo、Gli1在大鼠牙髓损伤后1d未见阳性表达,3d和7d均表达于穿髓孔下方牙髓间充质细胞中,且表达量均有显著性提高(P<0.05)。空白对照组中Shh信号通路阴性表达。结论:Shh信号通路在牙髓炎过程中表达,提示其可能被激活,参与牙髓炎症反应。     

Hedgehog信号通路调控肝癌上皮间质转化的研究进展

<正>肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,严重威胁着患者的生命和健康[1],危险因素主要包括乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)感染,酒精性肝炎等,HBV、HCV感染导致的肝硬化是肝细胞癌(HCC)的主要病因[2]。由于缺乏有效的治疗、早期诊断失败、预后不良,HCC患者的生存时间非常有限[3],不可切除的HCC的5年总生存率低于10%,这些患者的所有药物治疗都显示出非常差的疗效,因此对肝癌的有效治疗也存在一定挑战,     

骨肉瘤组织中 Hedgehog 信号通路的表达及意义

目的：研究Hedgehog信号通路在骨肉瘤组织中的表达情况及临床意义。方法采用免疫组化法分别检测31例骨肉瘤、21例骨良性肿瘤（13例骨软骨瘤、8例骨样骨瘤）组织中IHH、PTCH、SMO和Gli1蛋白的表达情况,分析此4种蛋白相关关系以及其表达水平与骨肉瘤临床特征的关系。结果骨肉瘤中IHH、PTCH、SMO和Gli1蛋白在骨肉瘤组织中的阳性率分别为70．97％、72．73％、70．97％、70．97％,与骨良性肿瘤（19．05％、14．28％、14．28％、9．5％）比较,差异均有统计学意义（ P＜0．001）。 IHH、PTCH、SMO和Gli1蛋白表达与患者年龄、性别、临床分期、肿瘤部位、肿瘤大小及是否肺转移无关;相关分析显示IHH和PTCH、SMO、Gli1蛋白在骨肉瘤组织中的表达呈正相关。结论 Hedgehog信号通路中的IHH、PTCH、SMO和Gli1蛋白异常高表达,提示Hedgehog信号通路可能在骨肉瘤的发生和发展中起重要作用。     

Hedgehog信号通路在食管癌中研究进展

Hedgehog信号通路在人类胚胎发育过程中发挥重要作用,可以调控细胞增殖和组织分化,大量研究表明,食管癌的发生、发展和异常激活的Hedgehog信号通路密切相关.本文从Hedgehog信号通路在食管癌的细胞增殖、血管形成、浸润转移等方面出发,将近年来Hedgehog信号通路和食管癌中发生、发展的研究进展进行报道.     

Hedgehog信号分子在视网膜母细胞瘤中的表达

【目的】探讨Hedgehog（HH）信号通路相关因子在视网膜母细胞瘤（Rb）发生发展过程中的作用，寻找治疗Rb的特异性的靶向治疗途径。【方法】选取2004年4月-2004年8月因视网膜母细胞瘤于我院行患眼摘除的8例含较多话性肿瘤组织的标本。男性5例，女性3例；双眼1例，单眼7例。用RT—PCR方法检测Hedgehog信号通路相关因子SHH、PTC、SMO、GL11蛋白基因在Rb组织中的表达情况。【结果】8份标本中4份表达SHH，3份表达PrC，5份表达SMO，4份表达GL11。表达产物分别为233、1,：14、140、412bp。Hedgehog信号分子阳性标本外观上均呈灰白色半透明胶状，几乎无钙化灶。病理上7例为眼内期，1例为眼外期。【结论】HH信号通路可能参与了Rb的发生，在抑制Rb细胞分化、维持Rb细胞话性、促进Rb发展中有一定的作用。     

Hedgehog信号通路与基底细胞癌的研究进展

基底细胞癌(basalcellcarcinoma,BCC)是皮肤科临床常见的非黑素瘤性皮肤癌,可侵犯深部组织,破坏邻近结构,易局部复发,较少发生远处转移。研究显示,Hedgehog信号通路的异常可导致BCC的发生。动物模型的建立进一步证实了该信号通路与BCC之间的密切联系,为研究疾病的治疗奠定了基础。Vismodegib等小分子抑制剂可阻断这一信号通路,抑制肿瘤生长。最近的基因组学研究指出,BCC的发展可能与额外的基因突变有关,这表明除了Hedgehog外,WNT、m TOR等其他信号通路在该肿瘤的发病机制中也具有重要意义。就Hedgehog信号通路对BCC发病的影响进行综述。     

Hedgehog和Notch信号通路与乳腺癌关系的研究进展

乳腺癌是一类高度异质性肿瘤,严重威胁女性的身心健康.目前统一使用2017年St.Gallen会议提出的4种乳腺癌分子分型.即luminal A型、luminal B型、HER2过表达型及三阴性型(triple negative breast cancer,TNBC)[1].针对不同分子分型乳腺癌进行针对性治疗取得了较好的疗效,但是对于乳腺癌尤其是三阴性乳腺癌的治疗,仍需要寻找新的治疗靶点,以提高疗效.近来,对信号通路的研究已经成为热点,目前所知Hedgehog信号通路、Notch信号通路、Wnt信号通路等与乳腺癌的发生发展关系密切;且各个信号通路之间存在交互对话,通过研究信号通路及信号通路之间的交互对话将为指导乳腺癌临床诊疗提供新思路.     

Sonic Hedgehog信号在小脑早期发育中的作用

目的:研究Sonic Hedgehog(Shh)信号在小脑发育早期对小脑外颗粒层的颗粒细胞前体(GCP)细胞增殖迁移的影响?方法:通过石蜡切片免疫荧光观察小脑外颗粒层GCP细胞增殖情况;建立体外培养小鼠脑片系统,检测小脑外颗粒层GCP细胞的增殖和动态迁移情况?结果:小鼠出生后7 d小脑外颗粒层增殖的GCP细胞最多;Shh信号通路促进小脑外颗粒层GCP细胞的增殖,用环巴胺(cyclopamine,CPA)抑制信号通路后小脑外颗粒层GCP细胞增殖受到抑制,但迁移不受影响?结论:Shh信号通路是促进小脑外颗粒层细胞增殖及有丝分裂必不可少的一部分,且它的作用只部分局限于外颗粒层?     

Hedgehog信号通路基因启动子区多态性与广西地区人群肝细胞癌易感性的关系

目的:探讨Hedgehog(Hh)信号通路基因启动子区多态性与广西地区人群肝细胞癌遗传易感性的关系?方法:采用以医院为基础的病例对照研究,以1 041例肝细胞癌患者和1 074例非肿瘤对照者为研究对象,应用Sequenom Mass Array基因分型技术检测Hh信号通路基因启动子区的9个潜在功能性多态性位点的基因型,并分析各多态性位点与肝细胞癌易感性的关系?结果:在调整年龄?性别?吸烟?饮酒以及HBV感染等因素后,携带STK36 基因rs34237608 AG基因型者罹患肝细胞癌的风险降低(OR=0.67,95%CI=0.47~0.95;P=0.025);GG基因型与肝细胞癌易感性之间的关系无统计学意义(P > 0.05);在显性模型下,rs34237608位点AG/GG基因型可降低罹患肝细胞癌的风险(OR=0.67,95%CI=0.48~0.95;P=0.025)?本研究未发现其他候选位点多态性与肝细胞癌易感性有统计学意义?结论:STK36 基因rs34237608位点多态性可能与广西人群肝细胞癌易感性有关联?     

转染LKB1基因乳腺癌细胞与胚胎发育信号通路及cAMP/PKA通路的关系

 目的 探讨抑癌基因LKB1与胚胎发育(Sonic Hedgehog,SHH)信号通路、cAMP/PKA信号通路之间的相互关系。方法 抑癌基因LKB1转染人乳腺癌细胞MDA MB 231,分MDA MB 231组(231组)和转染LKB1基因的MDA MB 231(LKB1组)两组,每组分别采用0、 5×10-6、1×10-5、2×10-5mol/L等4种浓度的SHH信号通路抑制剂环靶明(cyclopamine)作用于细胞,各小组细胞分别用RT PCR法和Western blot法检测SHH信号通路相关基因SHH、Smo的mRNA表达水平和蛋白表达水平,用cAMP、PKA试剂盒检测cAMP、PKA数值水平。 结果 LKB1组的细胞通过不同剂量环靶明抑制后,SHH信号通路相关基因SHH、Smo的mRNA和蛋白表达水平相应较231组明显抑制,且与环靶明剂量呈正相关,抑制效果在环靶明浓度为10×10-6mol/L时最明显,继续增加环靶明浓度到20×10-6mol/L,抑制效果保持不变。231组和LKB1组中细胞的PKA和cAMP数值均随环靶明浓度增加而增高,至10×10-6mol/L时达到最高,继续增加环靶明浓度到20×10-6mol/L,两组中的PKA和cAMP数值保持不变。在相同环靶明浓度下,LKB1组中PKA和cAMP数值高于231组中相应数值。结论 抑癌基因LKB1协同环靶明抑制乳腺癌MDA MB 231细胞的SHH信号通路的同时亦协同增加cAMP/PKA信号通路的表达,且在环靶明浓度为10×10-6mol/L时效果最明显;推测存在LKB1 SHH cAMP/PKA通路。     

Hedgehog信号通路在肝癌发生中的作用

Hedgehog信号通路对于哺乳动物胚胎的正常发育起着极为重要的作用,在人体组织中的异常激活可导致肿瘤的发生。研究表明Hedgehog信号通路的异常激活是肝癌发生的重要机制,尤其与肝癌的早期发生、恶性程度及转移关系密切,这为肝癌的早期诊断诊断与有效治疗提供了新的思路。     

Hedgehog信号通路在骨性关节炎中的研究进展

近来研究表明,骨性关节炎(OA)关节软骨中印度刺猬蛋白(Ihh)表达上调,而这种上调与OA的进展,软骨细胞的形态变化密切相关.小鼠的遗传研究进一步表明,在软骨细胞有条件缺失Ihh信号可以延缓OA的进展,表明阻断Ihh信号用来作为OA潜在治疗方法的可能,以防止软骨变性.因此,基于Hh在软骨内成骨和骨关节炎的发生发展中发挥的重要作用,本文就Hedgehog信号通路在OA软骨细胞中的作用以及作为潜在治疗靶点的研究作一综述.     

Shh信号通路在神经胶质瘤发生发展中的作用

Sonic hedgehog(Shh)信号转导通路是脊椎动物hedgehog信号通路家族成员之一,主要由分泌型糖蛋白Shh配体、跨膜蛋白受体Ptch和Smo以及下游转录因子Gli蛋白组成,在胚胎发育尤其是神经系统发育中起着重要的作用。近年研究发现Shh信号通路与多种肿瘤的形成有着密切的关系。神经胶质瘤是最常见的原发性脑肿瘤,生长迅速且多呈浸润性,易复发,是脑肿瘤中治疗效果最差的肿瘤之一,主要原因是多种信号通路的异常激活增强了胶质瘤细胞的增殖能力。此外,神经胶质瘤是由不同属性的肿瘤细胞混合构成,胶质瘤中的肿瘤干细胞具有无限增殖能力,这一特性也对胶质瘤的发生、发展和复发起着重要作用。有研究发现Shh信号通路与神经胶质瘤的发生、增殖及胶质瘤干细胞有密切关系。本文主要就Shh信号通路的组成和其在神经胶质瘤发生及胶质瘤干细胞中的相关作用作一综述。     

筛选调控Sonic Hedgehog信号转导的泛素连接酶

目的:发现调控Sonic Hedgehog(Shh)信号转导的泛素连接酶?方法:第一轮筛选,利用荧光素酶报告基因(8 × GliBS-Luc)检测系统,检测相应HECT家族E3泛素连接酶的siRNA对Shh信号通路活性的影响;第二轮筛选,利用细胞免疫荧光激光共聚焦检测系统,检测上述siRNA对Shh的受体Ptch1蛋白原纤毛定位的影响?综合2轮筛选结果,初步发现影响Shh信号通路活性的HECT家族 E3泛素连接酶?结果:通过2轮筛选,发现Smurf1?Smurf2?Ube3c?Wwp1?Wwp2共5个泛素连接酶,不仅能调节Ptch1蛋白的原纤毛定位,也可以增加通路下游转录因子Gli的活性?结论:建立了筛选调控Shh信号通路的泛素连接酶的平台?在初步筛选的27个HECT E3泛素连接酶中,有5个成员参与调控Shh信号通路?