环境类雌激素双酚A通过上调Snail蛋白表达促进MCF-7乳腺癌细胞迁移

目的:探讨外源性双酚A(BPA)调控MCF-7乳腺癌细胞迁移的分子机制?方法:通过划痕实验和Transwell实验检测MCF-7乳腺癌细胞迁移能力,并以黏附实验反向辅助验证;通过质粒转染干扰Snail蛋白表达水平,进一步研究外源性BPA调控MCF-7乳腺癌细胞迁移的分子机制?结果:外源性BPA能上调细胞中Snail的表达水平,从而下调E-cadherin的表达并促进MCF-7乳腺癌细胞迁移;siRNA干扰Snail表达后MCF-7乳腺癌细胞迁移减慢?此外,BPA刺激能降低MCF-7乳腺癌细胞黏附能力?结论:外源性BPA可通过上调Snail表达水平,促进MCF-7乳腺癌细胞的迁移,为进一步阐明乳腺癌细胞侵袭与转移的分子调控机制提供了新线索?     

SIRPα1转染对乳腺癌细胞株MCF-7增殖和凋亡的影响

目的:探讨外源性SIRPα1基因对乳腺癌细胞株MCF-7增殖和凋亡的影响及相关的分子生物学机制?方法:乳腺癌细胞株MCF-7本身不表达SIRPα1,将SIRPα1基因转染入MCF-7,用EGF刺激,Western blot法检测JNK蛋白及磷酸化的JNK蛋白表达水平的变化,MTT法检测细胞的增殖活性,TUNEL法检测细胞凋亡水平?结果:转染SIRPα1基因后,JNK蛋白的总量没有发生变化,而磷酸化的JNK减少,同时细胞增殖受抑,凋亡增加?SIRPα1胞内段的酪氨酸残基可被多种有丝分裂原活化而发生磷酸化?用EGF刺激转染SIRPα1质粒的MCF-7细胞,与未加刺激的相比,细胞凋亡无明显变化?结论:SIRPα1能促进乳腺癌细胞凋亡,抑制细胞增殖,是一种候选的抑癌基因?     

炎性相关刺激因子诱导乳腺癌上皮间质转分化的机制

目的乳腺癌的高转移率是威胁患者预后的主要因素。文中探讨炎性相关刺激因子肿瘤坏死因子α．（tumorneerosis factor-α,TNF—α）和活性氧（reactive oxygen species,ROS）诱导乳腺癌细胞MCF-7发生上皮间质转分化（epithelial—mesenchymal transition,EMT）的分子机制,为预防乳腺癌转移提供新思路。方法检测乳腺癌细胞MCF-7在TNF-α和过氧化氢（H2O2）作用下侵袭能力发生的改变。根据不同的处理方法将细胞分成对照组、TNF组、H2O2组、TNF＋氮-乙酰半胱氨酸（N—acety—L—cysteine,NAC）组、H2O2＋阿司匹林组和TNF＋阿司匹林组。用RT—PCR以及Westernblot方法,检测EMT相关因子Snail和上皮细胞E-钙黏蛋白（E—cadherin）在不同处理下的活性变化。结果TNF-α可促进MCF-7细胞发生EMT。在MCF-7细胞中,TNF-α可通过核因子-κB（nuclear factor—κB,NF—κB）依赖通路增加转录因子Snail的表达上调,促进细胞发生EMT。而ROS引起的E-钙黏蛋白减少以及细胞发生的EMT,仅被NF-κB抑制剂轻度抑制。结论炎性相关刺激因子TNF-α和ROS在诱导EMT时存在不同机制,TNF-α在促进肿瘤细胞发生转移中是通过NF—κB的作用上调转录因子Snail,进而降低E-钙黏蛋白的表达实现。ROS在促进细胞转移时NF—κB仅有次要作用。     

骨唾液酸蛋白对乳腺癌细胞MCF-7侵袭转移能力的影响

目的研究骨唾液酸蛋白（BSP）对乳腺癌细胞MCF-7侵袭转移能力的影响及机制。方法通过划痕试验、Transwell侵袭实验、细胞黏附实验和反转录-聚合酶链反应等观察BSP对乳腺癌细胞MCF-7侵袭转移能力的影响。结果BSP稳定高表达可使MCF-7细胞的侵袭能力明显增加。稳定高表达BSP的MCF-7-BSP细胞与胶原和纤维连接蛋白的黏附性增加,其基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9表达也增强。结论BSP可以促进MCF-7细胞侵袭转移能力,其可能的机制是通过增加细胞的黏附性、促进MMP-2和uPA表达等。     

趋化因子CCL5促进乳腺癌细胞转移机制初探

目的:探讨趋化因子CCL5在人乳腺癌细胞MCF-7转移中的作用及其机制。方法:RT-PCR法测定MCF-7细胞中趋化因子CCL5的受体CCR5的表达;趋化小室检测不同浓度CCL5的作用下MCF-7细胞的侵袭活性;Western blot检测MCF-7细胞中Ezrin蛋白表达随CCL5趋化时间的变化。结果:人乳腺癌细胞MCF-7表达CCR5 mRNA,不同浓度(0.1-100μg/L)CCL5促进MCF-7细胞侵袭能力不同,Ezrin蛋白表达随CCL5促进乳腺癌细胞侵袭时间的延长明显增加。结论:趋化因子CCL5促进人乳腺癌细胞的趋化与侵袭,Ezrin蛋白在此过程中可能起着重要作用。     

SHP-1对人乳腺癌MCF-7细胞侵袭的影响及机制初步探讨

目的探讨SHP-1对人乳腺癌细胞株MCF-7侵袭能力的影响。方法 MCF-7细胞株分别瞬时转染SHP-1的特异性siRNA干扰序列;然后分别通过RT-PCR和Western-blot检测MCF-7细胞干扰前后SHP-1基因和蛋白表达变化,并通过RT-PCR检测干扰前后MMP-9基因变化;通过Transwell小室实验检测干扰SHP-1对细胞侵袭能力的影响。结果 RT-PCR和Western-blot证实SHP-1在人乳腺癌细胞株MCF-7中有表达以及SHP-1SiRNA的干扰效率;干扰SHP-1后,MMP-9的表达量上调;Transwell小室实验证实,与MCF-7阴性干扰对照及空白对照细胞相比,siRNA组的侵袭能力显著增强(P<0.001)。结论乳腺癌MCF-7中SHP-1的表达水平高低和该细胞侵袭能力高低呈负相关,其侵袭可能和MMP-9的表达呈正相关。     

Noggin蛋白对MCF-7细胞增殖、侵袭能力的影响

目的观察Noggin蛋白对乳腺癌细胞MCF-7增殖、侵袭能力的影响。方法以Noggin重组腺病毒感染乳腺癌细胞株MCF-7,MTT法检测Noggin对MCF-7细胞增殖能力的影响,划痕修复实验及Transwell细胞侵袭实验检测其运动和侵袭能力的改变,Real-time PCR和Western blot检测CXCR4和MMP1基因的表达改变。结果过表达Noggin蛋白的MCF-7细胞增殖能力增强(P<0.05);划痕修复实验提示过表达Noggin蛋白的MCF-7细胞划痕愈合延迟;Transwell细胞侵袭实验提示与空病毒组相比,Noggin组穿膜细胞数显著降低(55±4 vs 25±3,P<0.05)。RT-PCR和Western blot结果:过表达Noggin后,MCF-7细胞中CXCR4和MMP1基因表达下调。结论 Noggin蛋白可抑制乳腺癌细胞MCF-7的运动和迁移,可能与下调CXCR4和MMP1基因的表达相关。     

CpG寡核苷酸促进Toll样受体9的表达增强乳腺癌细胞侵袭

目的:探讨Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR9)在乳腺癌细胞中的表达对其侵袭能力的影响。方法:应用West-ern blot检测乳腺癌细胞系TLR9的表达状况,以CpG寡核苷酸刺激不同乳腺癌细胞株后,检测TLR9表达的变化、体外侵袭能力的变化以及细胞活性的影响。结果:人乳腺癌细胞株MDA-MB-231表达TLR9而MCF-7不表达。CpG寡核苷酸处理后MDA-MB-231的TLR9表达增高,且侵袭能力进一步增强;MCF-7的该受体表达情况和侵袭能力均无明显变化。侵袭能力的增加不是源自于细胞活性的增强。结论:TLR9在高侵袭的乳腺癌细胞系中表达,其表达的增加可以促进乳腺癌细胞的侵袭能力。     

miR-29a促进人乳腺癌MCF-7细胞体外迁移和侵袭的机制

探讨微小核酸miRNA-29a对人乳腺癌细胞MCF-7体外迁移和侵袭的促进作用及其机制。采用miR-29a模拟物及miR-29a抑制剂分别上调和下调miR-29a的表达;采用细胞划痕法和Transwell小室法检测miR-29a对细胞迁移和侵袭能力的影响;采用Targetscan7.1数据库预测miR-29a的靶基因;荧光素酶报告法验证miR-29a的靶基因;Western blot和实时荧光定量PCR验证其表达结果。结果表明:miR-29a可显著促进MCF-7细胞的迁移和侵袭能力。Targetscan软件预测HBP1可能为miR-29a的靶基因,荧光素酶报告实验显示miR-29a靶向HBP1基因的3′-UTR区。Western blot和实时荧光定量PCR结果显示,miR-29a下调了HBP1蛋白水平的表达,而mRNA水平则无明显变化。研究结果揭示在乳腺癌中高表达的miR-29a通过下调HBP1,从而使乳腺癌细胞获得高的迁移和侵袭能力,促进乳腺癌的转移。     

MiR-671-3p靶向DEPTOR而抑制乳腺癌细胞的增殖与侵袭

目的 研究miR-671-3p对乳腺癌细胞增殖、侵袭生物学功能的影响及其可能的作用机制。方法 以实时荧光定量PCR方法检测正常乳腺上皮细胞（MCF-10A）与乳腺癌细胞（MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR3）中miR-671-3p表达情况;检测miR-671-3p 在MCF-7细胞中的转染效率;通过CCK-8法检测miR-671-3p对MCF-7细胞增殖的影响;通过Transwell实验、划痕实验检测miR-671-3p对MCF-7细胞侵袭迁移能力的影响;Targetscan预测miR-671-3p的靶基因,并通过双荧光素酶法和Western blot法对靶基因DEPTOR进行验证,并检测DEPTOR的表达。结果 miR-671-3p在乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR3的表达量低于乳腺正常上皮细胞MCF-10A的表达。通过mimics、inhibitor分别促进、抑制miR-671-3p在MCF-7细胞中的表达后,结果显示miR-671-3p对乳腺癌细胞的增殖有抑制作用（P<0.05）,对肿瘤细胞的侵袭和迁移有抑制作用（P<0.05）。双荧光素酶结果 显示DEPTOR蛋白为miR-671-3p的直接作用靶点,过表达miR-671-3p可直接抑制DEPTOR蛋白的表达。结论 miR-671-3p直接靶向作用于DEPTOR蛋白从而抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭。     

BCAR3诱导乳腺癌上皮间质转化及与癌细胞迁移、侵袭的关系

目的:观察他莫昔芬耐药乳腺癌细胞BCAR3的表达与上皮间质转化(EMT)现象和乳腺癌的迁移侵袭的关系。探讨他莫昔芬耐药和乳腺癌细胞EMT现象的相关性。方法:以实时定量PCR和Western blot检测乳腺癌上皮样和间质样细胞系中BCAR3的表达;Western blot检测乳腺癌MCF-7、MCF-BCAR3和BT-549中介导EMT发生的转录因子Twist、上皮性标记基因E-钙黏素(E-cadherin)和间质性标记基因N-钙黏素(N-cadherin)表达的改变情况。Transwell侵袭实验检测乳腺癌MCF-7、MCF-BCAR3和BT-549侵袭转移能力。结果:BCAR3在乳腺癌上皮样细胞系中的表达明显低于间质样细胞系;E-cadherin蛋白在MCF-7细胞中的表达为阳性,Twist和N-cadherin表达为阴性;他莫昔芬耐药的细胞MCF-BCAR3 E-cadherin蛋白表达缺失,而Twist和N-cadherin表达阳性。BCAR3过度表达导致乳腺癌细胞MCF-7迁移和侵袭能力增强。结论:过度表达BCAR3增强乳腺癌细胞迁移和侵袭能力,并对他莫昔芬治疗产生耐药,可能与BCAR3诱导乳腺癌上皮间质转化有关。     

α- 倒捻子素对MCF-7 乳腺癌增殖、生长和侵袭的影响及其作用机制

目的 探讨α- 倒捻子素对MCF-7 乳腺癌增殖、生长和侵袭的影响及其作用机制。方法 采用细胞增殖实验（MTS 法）研究α- 倒捻子素对MCF-7 乳腺癌细胞体外增殖的影响;采用裸鼠皮下移植瘤模型研究α- 倒捻子素对MCF-7 乳腺癌体内生长的影响;采用Transwell 实验研究α- 倒捻子素对MCF-7乳腺癌细胞侵袭的影响;采用免疫组织化学法研究α- 倒捻子素对MCF-7 乳腺癌皮下移植瘤组织中翻译控制肿瘤蛋白（TCTP）、基质金属蛋白酶MMP-2 及MMP-9 蛋白表达的情况;采用Western blot 研究α- 倒捻子素对MCF-7 细胞中Erk、P38、MMP-2 及MMP-9 蛋白表达的影响。结果 体外增殖实验结果显示,α- 倒捻子素能够抑制MCF-7 乳腺癌细胞的增殖,且具有浓度和时间依赖性;α- 倒捻子素能够剂量依赖性地抑制MCF-7 乳腺癌的体内生长;α- 倒捻子素能够抑制MCF-7 乳腺癌细胞的侵袭;免疫组织化学结果显示,α- 倒捻子素能够下调TCTP、MMP-2 及MMP-9 的蛋白表达;Western blot 结果显示,α- 倒捻子素能够抑制调控肿瘤细胞增殖及侵袭相关蛋白的表达,如磷酸化的Erk、磷酸化的P38、MMP-2 及MMP-9。结论 α- 倒捻子素能够抑制MCF-7 乳腺癌增殖、生长及侵袭,其机制可能与抑制调控肿瘤细胞增殖及侵袭相关蛋白的表达有关。     

Pokemon对乳腺癌MCF-7细胞侵袭迁移能力的影响

目的 建立稳定表达pokemon乳腺癌细胞系,并观察pokemon对乳腺癌细胞系MCF-7侵袭转移能力的影响. 方法 构建表达pokemon慢病毒载体,将Pokemon表达慢病毒载体转染MCF-7细胞,通过Westernblot方法检测稳定性表达pokemon MCF-7细胞中Pokemon-GFP融合蛋白的表达情况,应用Transwell试验及划痕实验观察pokemon的高表达对MCF-7细胞侵袭迁移能力的影响. 结果 成功建立稳定表达pokemon的MCF-7细胞系,pokemon可抑制MCF-7细胞侵袭能力. 结论 Pokemon可抑制MCF-7细胞侵袭能力.     

Nanog表达上调促进乳腺癌细胞MCF-7的增殖和侵袭

目的：观察Nanog高表达对乳腺癌细胞MCF-7生物学特性的影响。方法：构建重组质粒pcDNA3.1（-）-Nanog,利用免疫荧光观察Nanog高表达后,乳腺癌细胞MCF-7中Nanog的定位。利用平皿克隆分离法获得Nanog高表达的乳腺癌细胞系MCF-7。应用克隆形成实验、Transwell迁移和侵袭实验观察Nanog高表达对乳腺癌细胞MCF-7生物学特性的影响。结果：Nanog在MCF-7细胞中定位于核,Nanog高表达后,乳腺癌细胞MCF-7的增殖、迁移和侵袭能力显著增强。结论：Nanog能够促进乳腺癌细胞MCF-7的增殖、迁移和侵袭能力。     

赖氨酰氧化酶与乳腺癌侵袭转移相关因子的研究

目的探讨赖氨酰氧化酶(LOX)与乳腺癌侵袭转移相关因子基质金属蛋白酶(MMPs)及低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的相关性以及LOX在乳腺癌侵袭转移中的可能机制。方法构建LOX基因的特异性慢病毒干扰载体(LOX-RNAi-LV),稳定转染至乳腺癌细胞MDA-MB-231,实验设空白组、干扰组和阴性对照组,实时定量荧光PCR检测3组细胞中LOX、MMP-2、MMP-9和HIF-1α的表达,Western blot检测各组LOX蛋白的表达;构建乳腺癌细胞MDA-MB-231,MCF-7和LOX基因干扰的MDA-MB-231裸鼠移植瘤模型,6周后测定移植肿瘤的生长及转移情况,SP免疫组织化学技术检测移植瘤中LOX、MMP-2、MMP-9及HIF-1α蛋白的表达情况。结果转染LOX-RNAi-LV后乳腺癌细胞MDA-MB-231中的LOX mRNA和蛋白被明显抑制,抑制率为89.20%和82.97%,差异有统计学意义(P<0.05);干扰组的MMP-2、MMP-9及HIF-1α表达与阴性对照组及空白组比较差异有统计学意义(P<0.05);6周后裸鼠的MDA-MB-231组LOX、MMP-2、MMP-9及HIF-1α蛋白表达水平明显高于LOX基因干扰组及MCF-7组,相关分析显示,LOX蛋白与MMP-2(r=0.696,P=0.000)、MMP-9(r=0.735,P=0.000)、HIF-1α(r=0.737,P=0.000)蛋白呈显著正相关。结论 LOX-RNAi-LV可有效下调乳腺癌细胞MDA-MB-231中LOX mRNA和蛋白表达水平;LOX促进乳腺癌侵袭转移的机制可能与MMP-2、MMP-9及HIF-1α的异常表达相关。     

转染CTGF基因对乳腺癌细胞MMP－2及TIMP－2表达的影响

目的: 通过研究结缔组织生长因子（CTGF）基因对人乳腺癌MCF-7细胞株基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶组织抑制因子-2（TIMP-2）表达的影响,深入探讨CTGF在乳腺癌侵袭和转移中的作用机制。方法: 采用脂质体介导法,将CTGF基因瞬时转染体外培养的人MCF-7细胞,并用免疫荧光、RT-PCR和蛋白质印迹法检测其转染成功与否;再采用蛋白质印迹法检测转基因MCF-7 MMP-2及TIMP-2表达改变。结果: 与对照组相比,转染CTGF基因的MCF-7,其CTGF mRNA和蛋白表达均显著增高,MMP-2蛋白表达水平显著增高,而TIMP-2蛋白表达水平显著降低。 结论: CTGF可能通过增加乳腺癌细胞MMP-2表达及抑制TIMP-2的生成而起到促进乳腺癌侵袭和转移的作用。     

CCR9对乳腺癌细胞MCF-7增殖和侵袭的影响

目的探讨人CCR9基因在乳腺癌细胞中的生物学功能。方法取扁桃体标本并逆转录为c DNA,扩增CCR9基因,连接至pE GFP-N2质粒,脂质体感染人MCF-7乳腺癌细胞。免疫印迹证实CCR9基因在MCF-7乳腺癌细胞表达。CCK-8方法检测MCF-7乳腺癌细胞增殖。结果免疫印迹证实构建pE GFP-N2-CCR9质粒及CCR9基因在MCF-7乳腺癌细胞中高效稳定表达,且CCR9基因能促进MCF-7乳腺癌细胞过度增殖和侵袭(P0.05或P0.01)。结论 CCR9基因促进MCF-7乳腺癌细胞增殖和侵袭。     

中链酰基辅酶A脱氢酶增强乳腺癌细胞的侵袭和转移能力

目的探讨中链酰基辅酶A脱氢酶（ACADM）对乳腺癌细胞侵袭和转移能力的影响及潜在作用机制。方法采用大型癌 症基因组数据库分析ACADM在乳腺癌组织及正常组织中表达量。上调及沉默乳腺癌细胞（MCF-7及T47D）中ACADM的表 达,进行体外功能实验（噻唑蓝增殖实验、EdU实验、Transwell小室实验、Boyden体外侵袭实验）,探究ACADM对乳腺癌细胞体 外增殖、迁移及侵袭能力的影响,通过Western blot检测相关信号通路蛋白表达量,建立裸鼠尾静脉转移模型验证ACADM功 能,利用苏木精-伊红染色法诊断肿瘤组织。结果Oncomine样本集提示ACADM的表达水平在乳腺癌组中显著高于正常乳腺 组（P<0.05）,过表达ACADM可提高乳腺癌细胞（MCF-7、T47D）的迁移和侵袭能力且促进了乳腺癌细胞上皮-间质转化过程,而 沉默ACADM后乳腺癌细胞迁移和侵袭能力下降,动物实验进一步验证了ACADM能促进乳腺癌细胞侵袭及迁移能力。结论 ACADM可促进乳腺癌细胞上皮-间质转化过程并提高其迁移、侵袭能力,在乳腺癌中扮演促癌基因的角色。     

去甲斑蝥素抑制蛋白激酶C影响乳腺癌细胞侵袭转移的研究

目的探讨去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)抑制乳腺癌细胞侵袭与转移的机制。方法应用迁移实验、趋化实验、transwell转移模型分别检测NCTD对不同侵袭力乳腺癌细胞株MCF-7、SKBR3和MDA-MB231的粘附、迁移和侵袭的影响;用Western blot检测NCTD作用前后乳腺癌细胞PKCζ表达的变化。结果 SKBR3和MDA-MB231的趋化、侵袭能力明显高于MCF-7;用NCTD处理后,三种乳腺癌细胞体外迁移、粘附和侵袭均受到不同程度抑制(P0.05);NCTD对SKBR3和MDA-MB 231细胞迁移、侵袭抑制作用明显高于MCF-7细胞株(P0.05),SKBR3和MDA-MB231细胞之间差异则无统计学意义(P0.05)。使用PKCζ抑制剂myristolated pseudosubstrate(PSζ)可促进NCTD抑制SKBR3和MDA-MB231的侵袭和迁移能力;经NCTD处理后,三种乳腺癌细胞PKCζ表达均降低。结论去甲斑蝥素可明显抑制人乳腺癌细胞株的细胞侵袭和迁移能力,其机制可能通过抑制PKCζ信号传导途径实现,与PKC抑制剂联用,可以增强治疗肿瘤的疗效。     

水飞蓟宾通过降低MEK/ERK途径依赖的MMP9蛋白表达抑制人乳腺癌细胞的侵袭转移

目的：探讨水飞蓟宾对人乳腺癌细胞生长和侵袭转移的影响及机制。方法：用不同浓度水飞蓟宾处理人乳腺癌细胞系MCF-7 24h,用MTT法和台盼蓝染色法检测水飞蓟宾对MCF-7细胞的抑制作用;用transwell技术检测水飞蓟宾对MCF-7细胞侵袭转移的影响;Western blot检测水飞蓟宾对MCF-7细胞MEK及ERK蛋白磷酸化水平及MMP9表达水平的影响。结果：水飞蓟宾可显著抑制MCF-7细胞的增殖并造成肿瘤细胞死亡;水飞蓟宾通过抑制MEK和ERK的磷酸化降低MMP9的表达并抑制MCF-7细胞侵袭转移的能力。结论：水飞蓟宾抑制人乳腺癌细胞的生长和侵袭转移。