多药耐药细胞系HL-60/Mx的建立

目的 探讨建立多药耐药（MDR）白血病细胞系的简便方法。方法 HL－60细胞反复暴露于浓度递增的米托蒽醌（Mx）培养液中，暴露间期维持低浓度培养；MTT法检测耐药性改变，并对其P糖蛋白（P－170）、多药耐药相关蛋白（MRP）表达进行免疫组化检测。结果 ①HL－60／Mx细胞系对多种化疗药物产生耐药。②MRP阳性表达率增高。结论 本方法为建立耐药HL－60细胞系的有效方法。     

阿霉素纳米粒对人白血病多药耐药细胞株HL-60／ADR多药耐药性的逆转作用

目的 研究阿霉素纳米粒对人白血病多药耐药细胞系HL-60／ADR耐药性的逆转作用。方法 采用MTT法测定药物的体外杀伤作用，应用流式细胞术测定细胞内药物浓度。结果 阿霉素纳米粒和阿霉素对HL-60细胞细胞毒作用相似，HL-60／ADR对阿霉素纳米粒较阿霉素敏感2．63倍，细胞内阿霉素浓度显著增加可能是关键因素。结论 阿霉素纳米粒通过增加耐药细胞内阿霉素浓度有效逆转多药耐药。     

多药耐药细胞系A549/ADM的建立及部分特性

目的建立多药耐药细胞系A549/ADM和初步探讨人肺腺癌细胞多药耐药的发生。方法对肺腺癌细胞A549采用持续低浓度和逐渐增加阿霉素浓度间歇诱导,建立多药耐药细胞系;使用流式细胞仪器分别检测敏感细胞系和耐药系的P-gp和MRP的表达;采用MTT法检测其对多种常用化疗药物的耐药程度。结果与母细胞系相比,耐药细胞系A549/ADM对ADM的耐药程度增加了14.29倍,对VCR、DDP、VP-16均有不同程度的耐药,对5-FU无耐药性;耐药细胞系A549/ADM表面P-GP、MRP表达分别为74.8%和61.2%(P<0.01)。结论A549/ADM对多种常用肿瘤化疗药物表现有不同程度的耐药,其耐药性可能与P-GR和MRP高表达有关。     

中药功劳木逆转K562/ADM,MCF7/ADM细胞的作用

目的 :研究中药功劳木 (gonglaomu ,GLM)提取物在体外对白血病耐药细胞K5 6 2 /ADM和乳腺癌耐药细胞MCF7/ADM逆转MDR1的作用 ,以便寻找和确定逆转肿瘤细胞多药耐药有效的中药新药 .方法 :应用MTT法、台盼蓝拒染试验法测定应用GLM提取物后ADM对K5 6 2 /ADM ,MCF7/ADM细胞的细胞毒作用 ,应用Rh1 2 3荧光技术检测应用GLM提取物后对耐药细胞内药物浓度的影响 .结果 :应用GLM提取物后MTT法显示ADM对K5 6 2 /ADM ,MCF7/ADM细胞的抑制率高于未用GLM组 ,且有显著性差异 (P <0 .0 1 ) .台盼蓝拒染试验测定显示应用GLM提取物后ADM对K5 6 2 /ADM ,MCF7/ADM活细胞率为 34.5 %和 38.5 % ,低于未用GLM组的 6 8.2 %和77.4 % ,且有显著性差异 (P <0 .0 1 ) .逆转倍数K5 6 2 /ADM ,MCF7/ADM细胞分别为 6 .2 8和 5 .78.Rh1 2 3荧光技术显示随着GLM提取物浓度的提高K5 6 2 /ADM细胞内药物浓度随之增高 .结论 :GLM提取物可提高了ADM对耐药细胞的细胞毒作用 ,增加了耐药细胞内药物浓度 ,且呈剂量依赖性     

蟾酥注射液逆转HL60/阿霉素细胞多药耐药性机制研究

探讨蟾酥注射液（CHS）对人类白细胞多药耐药细胞系HL60/阿霉素细胞的逆转作用机制。方法 MTT法测定CHS预作用后HL60/阿霉素细胞对阿霉素的敏感性;流式细胞术考察 CHS 对HL60/阿霉素细胞周期的影响;免疫组化考察CHS对HL60/阿霉素细胞 NF-κB、MRP、GST-π、iNOS 蛋白表达的调节作用。结果 CHS 可将阿霉素对 HL60/阿霉素细胞的 IC50值由34.1971 μmol/L降至17.4393 μmol/L,逆转倍数为1.9609倍;FCM显示CHS作用后HL60/阿霉素阻滞于G0/G1期、G2/M期,降低进入S期比例,并出现凋亡峰;免疫组化结果显示,CHS能下调HL60/阿霉素细胞中MRP、GST-π表达,上调NF-κB、iNOS的表达。结论 蟾蜍注射液逆转HL60/阿霉素细胞的多药耐药性可能是通过下调MRP、GST-π的表达,上调NF-κB、iNOS的表达,促进HL60/阿霉素细胞凋亡,从而增加HL60/阿霉素细胞对药物的敏感性。     

急性白血病多药耐药性检测分析

目的：探讨P170表达与临床特征及化疗疗效的关系。方法：用间接免疫荧光法检测175例急性白血病的P170表达，ANLL129例，ALL46例。分为3组：初治组120例，完全缓解组36例，复发难治组19例，结合预后及临床特征进行综合分析。结果：初治组、完全缓解组（CR）、复发难治组中P170的表达阳性率分别为11.7%、16.7%、57.8%，其中初治组与复发难治组、完全缓解组与复发难治组相比较差别均有显著性意义（P=0.0000和P=0.0016）。结论：P170表达与患者的性别、年龄及FAB分型等无关，与预后密切相关，是一个独立的预后不良因素。     

白血病K562/ADM细胞耐药性与白血病干细胞及耐药蛋白表达的关系

目的 观察白血病药物敏感和耐受细胞中白血病干细胞(ISC)、耐药蛋白表达和耐药性的关系.方法 以白血病多药耐药株K562/ADM细胞及其亲本K562细胞为模型,MTT比色法测定细胞的药物耐受性;流式细胞术检测细胞免疫标志、P-糖蛋白(P-gp)和乳腺癌耐药蛋白(BCRP)的表达;甲基纤维素集落形成法检测细胞的自我更新和增殖潜能.结果 K562/ADM细胞对阿霉素、柔红霉素和鬼臼乙叉苷高度耐受.K562/ADM细胞中CD34+、CD123+和CD34+CD38-细胞含量均显著高于K562细胞,LSC细胞相对含量是K562细胞的4.12倍;共表达P-gP和BCRP的K562/ADM细胞比K562细胞高11.25倍,其中CD34+ CD38- CD123+ BCRP+和CD34+ CD38- P-gp+ BCRP+细胞数量分别为K562细胞的3.66倍和11.37倍.K562/ADM细胞集落形成率是K562细胞的4.17倍,与LSC含量相当.结论 白血病K562/ADM耐药细胞中存在的高表达耐药蛋白的耐药性LSC是其多药物耐受性的根源.     

细胞调控因子SKP2的表达与 HL-60/A耐药的关系

 【目的】 观察细胞周期调控因子SKP2&#65380;P27kip1在白血病耐药细胞株HL-60/A和非耐药细胞株HL-60细胞中的表达及细胞周期比例,探讨细胞增殖与耐药的关系&#65377; 【方法】 RT-PCR&#65380;Western blot 检测SKP2&#65380;P27kip1&#65380;MRP mRNA及蛋白表达,流式细胞仪检测细胞周期,采用药物毒性分析方法检测细胞对化疗药物的敏感性&#65377; 【结果】 白血病耐药细胞株HL-60/A对阿霉素&#65380;柔红霉素&#65380;阿糖胞苷的耐药倍数分别为49.14倍&#65380;39.20倍和6.43倍;HL-60/A细胞MRP的表达高于HL-60; HL-60/A和HL-60细胞株G0/G1细胞期比例分别为(35.10 ± 0.81)%和(43.96 ± 1.12)%,两组比较P < 0.05;HL-60/A细胞中SKP2的表达高于HL-60细胞;P27kip1的表达低于HL-60细胞&#65377; 【结论】 HL-60/A细胞多药耐药机制产生与MRP的表达增高有关&#65377;耐药HL-60/A处于增殖期的细胞比例高,具有更高的增殖活性&#65377;     

细胞调控因子SKP2的表达与HL-60/A耐药的关系

【目的】观察细胞周期调控因子SKP2、P27kip1在白血病耐药细胞株HL-60/A和非耐药细胞株HL-60细胞中的表达及细胞周期比例,探讨细胞增殖与耐药的关系。【方法】RT-PCR、Western blot检测SKP2、P27kip1、MRP mRNA及蛋白表达,流式细胞仪检测细胞周期,采用药物毒性分析方法检测细胞对化疗药物的敏感性。【结果】白血病耐药细胞株HL-60/A对阿霉素、柔红霉素、阿糖胞苷的耐药倍数分别为49.14倍、39.20倍和6.43倍;HL-60/A细胞MRP的表达高于HL-60;HL-60/A和HL-60细胞株G0/G1细胞期比例分别为（35.10&#177;0.81）%和（43.96&#177;1.12）%,两组比较P〈0.05;HL-60/A细胞中SKP2的表达高于HL-60细胞;P27kip1的表达低于HL-60细胞。【结论】HL-60/A细胞多药耐药机制产生与MRP的表达增高有关。耐药HL-60/A处于增殖期的细胞比例高,具有更高的增殖活性。     

大黄素甲醚对白血病耐药细胞系K562/ADM耐药性的影响及机制研究

目的 评价大黄素甲醚对慢性粒细胞白血病（CML）耐药细胞系K562/ADM 多药耐药的逆转作 用及其机制。方法 CCK-8、克隆形成实验检测细胞的增殖变化,流式细胞仪、Hoechst 染色检测细胞的凋亡, 实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）、Western blot 检测各相关基因的表达,迁移实验检测细胞的侵袭 能力。结果 大黄素甲醚能增强K562/ADM 细胞对ADM 的敏感性,耐药逆转倍数在2 和5 μmol/L 的浓度下 分别为2.03 和5.30 倍。miRNA-146a 在K562 耐药细胞系中低于K562 细胞,而其在K562/ADM 细胞中过 表达能恢复细胞对ADM 的敏感性。大黄素甲醚可以通过诱导miRNA-146a 的表达抑制CXCL12/CXCR4 信 号通路从而能增强ADM 抗肿瘤细胞增殖的作用。结论 大黄素甲醚可以通过上调miRNA-146a 的表达抑制 CXCL12/CXCR4 信号从而逆转K562/ADM 细胞对ADM 的耐药性。     

苦参碱逆转人白血病K562/ADM细胞对阿霉素耐药性的研究

[目的] 探讨苦参碱对人白血病K562／ADM细胞对阿霉素耐药性的逆转作用。[方法] MTT法测定苦参碱的细胞毒性及其对K562／ADM细胞药敏性的影响,荧光分光光度法检测细胞内药物浓度的改变,流式细胞术检测耐药细胞凋亡百分率的变化。[结果] 苦参碱的非细胞毒性剂量为50μg／mL,低细胞毒性剂量为125μg／mL。50μg／mL苦参碱可增加K562／ADM细胞内阿霉素(ADM)浓度和K562／ADM细胞凋亡百分率,使K562／ADM细胞的IC50由原来的35．2μg／mL降低至15．8μg／mL,其逆转倍数为2．2倍。[结论] 苦参碱可部分逆转人白血病K562／ADM细胞对阿霉素的耐药性,其逆转机制与增加细胞内药物积累有关。     

肿瘤多药耐药(MDR)和抗凋亡之间的关系

 肿瘤多药耐药(multidrug resistance,MDR)是肿瘤放化疗治疗失败的重要原因。肿瘤MDR的产生主要与肿瘤细胞高表达ABC超家族外排泵与肿瘤细胞本身所表现的凋亡抑制有关。本文针对肿瘤细胞的MDR与抗凋亡相关信号通路、因子和酶的关系以及它们与ABC超家族转运体的关系作一综述。     

汉防己甲素逆转白血病细胞株K562/A02耐药的机制

目的:研究汉防己甲素（TTD）对白血病细胞株K562/A02多药耐药(MDR)逆转的机理。方法：以白血病细胞系K562及其耐药细胞系K562/A02为TTD作用的靶细胞。细胞水平检测实验分5组（K562组、K562/A02组、K562+ADM组、K562/A02+ADM组和K562/A02+TTD+ADM组）,采用MTT法检测TTD对K562和K562/A02细胞的非细胞毒性剂量,流式细胞术检测细胞内阿霉素(ADM)的浓度,基因、酶学、蛋白水平检测实验分3组（K562组、K562/A02组和K562/A02+TTD组）,采用RT-PCR法检测mdr1 mRNA的表达,免疫细胞化学方法检测谷胱甘肽S转移酶π（GST-π）和拓扑异构酶Ⅱ（Topo Ⅱ）的表达水平,Western-blotting法检测P-糖蛋白（P-gp）和bcl-2表达。结果：1.562 5 mg•L^-1的TTD处理K562/A02细胞后,细胞内ADM的浓度较单用ADM组明显提高（P<0.01）;与空白对照组比较,K562/A02细胞内mdr1 mRNA/P-gp的表达量减少（P<0.01）;GST-π和TopoⅡ表达无明显变化;凋亡抑制基因bcl-2的表达量减少（P<0.01）。结论:TTD主要通过增加细胞内ADM浓度,下调mdr1/P-gp和bcl-2表达逆转耐药。     

CEM／ADM多耐药细胞株的P170－糖蛋白的表达

本文利用免疫荧光法对肿瘤细胞ＣＥＭ，ＣＥＭ／ＡＤＭＰ１７０－糖蛋白进行了检测，结果显示：敏感细胞全部为阴性，而耐药细胞株Ｐ１７０－糖蛋白呈过度表达，其过度表达细胞数随肿瘤细胞对抗癌药物耐受性增强而增加，其中ＣＥＭ／ＡＤＭ多耐药细胞株的Ｐ１７０－糖蛋白过度表达细胞为９２％。     

急性白血病多药耐药基因表达及临床意义

目的研究多药耐药基因(MDR1)在急性白血病(AL)中的表达及与预后的关系.方法采用链亲和素-胶体金原位杂交(ISH-SAG)方法对59例不同病期的AL患者进行MDR1检测.结果(1)ANLLMDR1阳性表达率(50.0%)虽高于ALL阳性表达率(37.5%),但差异无显著意义(P＞0.05).(2)MDR1在复发难治组的阳性表达率明显高于缓解组(P＜0.05).(3)MDR1阳性表达与临床缓解密切相关,MDR1阳性表达者的完全缓解(CR)率(22.2%)明显低于MDR1阴性者的CR率(80.0%)(P＜0.05).(4)MDR1阳性表达作为耐药标准的评价,其敏感率、特异率、准确率分别为77.8%、80.0%、79.0%.结论MDR1阳性表达与临床耐药相关,是影响AL患者预后的一个重要的因素.且其敏感性、特异性均较高.     

巯嘌呤/维拉帕米-介孔氧化硅释药系统的构建及逆转耐药活性研究

目的制备巯嘌呤/维拉帕米-介孔氧化硅释药系统并评价其逆转耐药作用。方法采用共缩聚法合成介孔氧化硅纳米粒并载药,制备巯嘌呤/维拉帕米-介孔氧化硅释药系统;动态透析法研究该释药系统的体外释药特性;噻唑蓝比色法(MTT法)评价该释药系统的逆转耐药作用及可能机制。结果所制备释药系统的粒径在170~250 nm左右,Zeta电位在-30 m V~-40 m V,微观形态呈球形,均匀分布,具有规则介孔孔道。体外释放显示维拉帕米缓慢释放,6-巯嘌呤加入诱导剂之前无释放,加入诱导剂后释药过程呈现先突释后缓释。MTT法检测显示所制备释药系统与阳性药维拉帕米及同浓度物理混合物相比,具有显著逆转耐药作用。结论所制备的巯嘌呤/维拉帕米-介孔氧化硅释药系统有较好的抗肿瘤活性及逆转耐药作用。     

贝母素乙逆转SGC7901/VCR细胞株多药耐药的初步研究

目的研究贝母素乙对胃癌耐药细胞SGC7901/VCR的逆转及诱导凋亡作用。方法采用四甲基唑蓝法(MTT)检测贝母素乙的细胞毒性及耐药逆转效果;采用流式细胞仪检测细胞内阿霉素(ADR)蓄积以及细胞凋亡率的变化。结果贝母素乙可剂量依赖性的的抑制亲本细胞系SGC7901和耐药细胞系SGC7901/VCR的细胞增殖,20μg/mL贝母素乙能够显著提高SGC7901/VCR细胞对化疗药(长春新碱、阿霉素、顺铂和5-氟尿嘧啶)的敏感性及细胞内ADR的浓度,贝母素乙和5-氟尿嘧啶(5-Fu)联合用药后能诱导细胞凋亡,细胞凋亡率随着药物浓度的增加而逐渐增加,处理48h后的凋亡率最高达44.5%。结论贝母素乙能够作为胃癌多药耐药逆转剂逆转MDR,其机制可能与减少药物外排和诱导细胞凋亡相关。     

甲孕酮联合苦参碱对耐药细胞株K562/AO2多药耐药逆转作用的研究

目的应用甲孕酮(MPA)联合苦参碱(MAT)逆转人白血病细胞株K562/AO2对阿霉素的耐药性,观察联合用药逆转耐药的疗效。方法用MTT法检测MPA与MAT的细胞毒性,荧光分光光度法检测各组细胞内药物(ADM)浓度的改变,流式细胞仪测定细胞凋亡的情况,流式细胞术检测细胞的p-gp表达情况。结果(1)确定了甲孕酮及苦参碱对K562/AO2细胞的非细胞毒性剂量和低细胞毒性剂量,确定了非细胞毒性剂量的两药联合应用后未出现毒性叠加。(2)在与ADM合用时,K562/AO2+甲孕酮及K562/AO2+苦参碱组,细胞凋亡百分率均高于K562/AO2耐药组(P<0.05,P<0.01),但均低于K562/AO2+甲孕酮+苦参碱组(P<0.01,P<0.05)。(3)与K562比较,K562/AO2细胞中P-gP呈高表达;与K562/AO2耐药组比较,K562/AO2十苦参碱组及K562/AO2+甲孕酮组P-gp表达量降低(P<0.01),但当两者联合应用时作用大于两者单独作用。(4)与ADM组比较苦参碱、甲孕酮均能提高K562/AO2细胞内ADM浓度,P均<0.01,两者联合应用时作用大于两者单独作用。结论非细胞毒性剂量的...     

蝙蝠葛酚性碱诱导多药耐药细胞系K562/MDR1凋亡及逆转耐药性的研究

目的:探讨蝙蝠葛酚性碱(phenolic alkaloids from Menispermum dauricum,PAMD)诱导多药耐药(multidrug resistance,MDR)细胞系K562/MDR1凋亡及逆转耐药性的作用.方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测K562/S及K562/MDR1细胞对不同浓度PAMD的敏感性,并计算半数抑制浓度(IC50).膜联蛋白V (Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)+碘化丙啶(PI)双参数检测细胞凋亡百分率变化,分析在PAMD的作用下,两种细胞对伊马替尼(IM,STI571)敏感性的变化.结果:PAMD可诱导两种细胞凋亡,其低剂量72 h时对K562/S和K562/MDR1细胞的凋亡率分别为(10.92±1.03)%和(8.12±0.98)%,并可提高伊马替尼对K562/MDR1的凋亡率.PAMD可显著逆转K562/MDR1细胞对伊马替尼的耐药性,其逆转倍数为2.22.结论:PAMD对K562/S和K562/MDR1细胞具有诱导凋亡作用,同时具有逆转白血病细胞株K562/MDR1多药耐药性、回归靶位的作用.