Inhibition of lymphangiogenesis,nodal and lung metastasis by dihydroartemisinin in mice bearing Lewis lung carcinoma

Objective：To investigate the activity of anti-malarial dihydroartemisinin （DHA） on tumor growth, lymphangiogenesis, nodal and lung metastasis and survival in mice bearing Lewis lung carcimoma （LLC）. Methods： The models of C57BL/6 mice transplantation tumors were established via subcutaneous injection of LLC cells and divided into 4 groups： control group, DHA group, DHA＋ferrous sulfate （FS） group and FS group, with 25 mice in each group. Tumor volumes and weights, nodal and lung metastasis, and survival were monitored. Tumor lymphatic microvessel density （LMVD） was determined by lymphatic vessel endothelial hyaluronan receptor-1 （LYVE-1） immnohistochemistry. After LLC cells were treated with DHA or DHA＋FS, protein and mRNA levels of vascular endothelial growth factor （VEGF） -C were evaluated by Western blotting and real time quantitative RT-PCR, respectively. Results： Oral administration of DHA or DHA＋FS inhibited lymph node and lung metastasis, and prolonged survival. However, no significant tumor growth retardation effect was observed when mice were treated with DHA alone. The inhibited tumor metastasis was related to the decreased LMVD in the peritumoral regions, but not in the intratumoral regions. DHA significantly down-regulated the expression of VEGF-C protein and mRNA in LLC cells. Conclusion： DHA effectively inhibits LLC transplantation tumor lymphangiogenesis, nodal and lung metastasis, and may be a promising chemotherapeutic agent for controlling lung cancer metastasis by decreasing VEGF-C expression.     

Anti-tumor effect of bufalin on the orthotopic transplantation tumor model of human hepatocellular carcinoma in nude mice

Objective: To investigate anti-tumor effect of bufalin on the orthotopic transplantation tumor model of human hepatocellular carcinoma in nude mice. Methods: BEL-7402 cells of human hepatocellular carcinoma were inoculated to form subcutaneous tumors in nude mice by subcutaneous injection. Then the subcutaneous tumors were implanted into the liver of nude mice, and the orthotopic transplantation tumor models of human hepatocellular carcinoma were established. Seventy-five models were randomized into 5 groups ( n = 15) . Bufalin was injected intraperitoneally into the 3 groups at dose of 1.5,1 and 0.5 mg/kg for day 15 - 24, respectively. NS group were injected equal volume saline as above and adriamycin were injected intraperitoneally into ADM group at dose of 8.0 mg/kg for day 15. Ten mice in each group were killed at day 25 and detected on morphological and ultrastructural changes in myocardium, brain, liver, kidney and tumor tissues by pathology and electron microscope. The survival time in each group     

Expression of Beclin1 in non small cell lung cancer and its clinical significance

Objective:To investigate the expression of autophagy related gene;Beclin1 in human non-small cell lung cancer(NSCLC)tissues.Methods:Protein expression of Beclin1 was determined by immunofluorescence staining and Western Blot,mRNA expression was analyzed by RT-PCR.Results:Immunofluorescence staining revealed that the level of Beclin1 expression in lung cancer was significantly lower than that in adjacent noncancerous tissues and normal tissues(expression rate 8.3%,P=0.000).The Beclin1 mRNA expression in lung cancer,adjacent noncancerous tissues and normal tissues was 1.372(±0.475)1.721(±0.521)and 1.553(±0.554)when F = 15.0,P < 0.01.Beclin1 protein expression in lung cancer,adjacent noncancerous tissues and normal tissues was 3.453(±0.852)5.423(±1.351)and 6.878(±0.997)F = 11.2,P < 0.01.Conclusion:The protein and mRNA expression of Beclin1 in lung cancer was much lower than those in and around cancer tissues and normal tissues,those differences having statistical significance.However in adjacent noncancerous tissues and normal tissues,the expression showed no difference.     

Change of IL-2, IFN-γ， CRP in peripheral blood of acute cerebral infarction and its clinical significance.

目的 观察脑梗死患者血清中IL-2、IFN-γ、CRP的水平变化,探讨其与脑梗死体积大小以及神经功能恢复的相关性.方法 选取我科42例急性脑梗死患者作为病例组,并随访3个月.观察其发病第3天、第7天、第14天血清中IL-2、IFN-γ、CRP水平变化,并比较病例组中不同梗死体积患者之间的差别.对病例组患者入院时进行NIHSS评分以及随访3个月后进行改良Rankin评分.分析病例组发病第3天IL-2、IFN-γ、CRP的水平与NIHSS评分和改良Rankin评分的相关性.同时选取我院健康体检者24名作为对照组,检测其血清中IL-2、IFN-γ、CRP水平.结果 第3天、第7天、第14天病例组患者血清中IL-2、IFN-γ、CRP的水平均升高,且高于对照组(P＜0.05).随着时间的延长,病例组患者血清中IL-2、IFN-γ、CRP的水平逐渐降低.大体积脑梗死患者第3天IL-2、IFN-γ、CRP含量明显高于中小体积梗死患者(P＜0.05).第3天病例组血清IL-2、IFN-γ、CRP含量与入院时NIHSS评分、改良Rankin评分呈正相关(P＜0.05).结论 急性脑梗死患者血清IL-2、IFN-γ、CRP含量高低可反映患者严重程度,并评估预后.     

Combined detections of interleukin 27, interferon-γ, and adenosine deaminase in pleural effusion for diagnosis of tuberculous pleurisy

Background Previous studies reported interleukin-27 (IL-27),interferon-γ (IFN-γ),or adenosine deaminase (ADA) alone plays a helpful role in diagnosing tuberculous pleural effusion (TPE).The present stu...     

小鼠Lewis肺癌胸腔移植模型的建立

目的:通过胸腔移植的方法建立晚期肺癌的动物模型。方法:经C57BL/6小鼠的腋后线第6肋间胸腔(胸腔模型组)或小鼠腋部皮下(皮下模型组)分别移植鼠源性Lewis肺癌细胞0.2 ml(5×106ml-1),观察小鼠的生存时间、小鼠体重、饲料消耗量、游泳试验、常压耐缺氧试验,大体观察胸腔、纵隔、胸水等肺癌细胞浸润和转移情况。结果:胸腔模型组小鼠中位数生存时间13.5(8~18)d,皮下模型组小鼠中位数生存时间45(25~71)d,胸腔模型组的生存期范围离散程度较皮下模型组小(P<0.05)。病程中胸腔模型组小鼠体重下降、摄食减少等恶病质体征较皮下模型组明显(P<0.01),胸腔模型组小鼠活动减少、睡眠时间缩短、蜷曲、毛发脱落等现象较皮下模型组多见,胸腔模型组小鼠游泳实验及耐缺氧实验时间较皮下模型组明显缩短(P<0.01),胸腔模型组小鼠早期可出现胸水和肿瘤转移,而皮下模型组小鼠早期未见胸水和肿瘤转移。结论:胸腔移植模型可作为晚期肺癌动物模型。     

克拉霉素治疗小鼠Lewis肺癌的实验研究

目的　研究克拉霉素对小鼠Lewis肺癌的治疗效果和作用机制 ,为临床应用提供实验依据。方法　C5 7BL/6小鼠右肋处皮下接种Lewis肺癌 ,6h后随机分为 2组 ,每组 15只 ,分别接受克拉霉素 5 0mg·kg-1·day-1(实验组 )或等体积 5 %葡萄糖 (对照组 )腹腔内注射 ,每日 1次 ,连用 2 1d。观察比较实验组与对照组小鼠存活时间、移植瘤体积、肿瘤组织内微血管度和肺脏转移瘤数目。结果　实验组小鼠的平均存活时间为 (2 7 0± 2 6)d ,肿瘤组织内微血管密度为 18 7± 11 4,肺脏表面的转移瘤数目为 12 0±2 9,对照组小鼠的上述参数分别为 (19 1± 2 0 )d、2 4 5± 13 7和 18 6± 5 4,两组差异非常显著 (P <0 0 5 )。结论　克拉霉素具有抗肿瘤血管生成和抗肿瘤转移的作用 ,在肿瘤的综合治疗中具有一定的应用价值     

短双歧杆菌携带内皮抑素和干扰素γ的特性及其抗小鼠肺癌的作用

目的：以短双歧杆菌为载体,以内皮抑素（ES）和干扰素γ（IFNγ）为目的基因,探讨携带目的基因的短双歧杆菌在小鼠体内的分布特性及其抗小鼠肺癌的效果。方法：构建原核表达载体pNZ44-IFNγ及pNZ44-ssEndostatin,电穿孔法将质粒转入用3H-TdR标记的短双歧杆菌,筛选鉴定。制备荷瘤小鼠,实验分为对照组(Control)、双歧杆菌无质粒组（B-b）、双歧杆菌空质粒组（B-b-pNZ44）、双歧杆菌内皮抑素组（B-b-pNZ44-ssEndostatin）、双歧杆菌干扰素组（B-b-pNZ44-IFNγ）和双歧杆菌联合组（B-b-pNZ44-ssEndostatin + B-b-pNZ44-IFNγ）,通过尾静脉注射和灌胃给予携带目的基因的短双歧杆菌。观察短双歧杆菌在小鼠体内的分布情况,以及移植瘤体积、小鼠免疫学指标和肿瘤间质微血管密度(IMVD)的变化。结果：成功构建了携带目的基因的短双歧杆菌。经尾静脉注射后,实验动物的心脏、肝脏、肺脏和肾脏中双歧杆菌逐步被清除,从第3天开始,各器官中放射活性较第1天明显降低（P<0.05）;肿瘤组织的放射活性随时间延长逐渐增加,从第3 天开始放射活性与第1天比较差异有统计学意义（P<0.05）。通过灌胃和尾静脉注射携带目的基因的短双歧杆菌,能抑制小鼠肺癌移植瘤的生长,并且增加CTL细胞活性、NK细胞活性和TNFα分泌活性,降低IMVD。结论：携带ES和IFNγ的短双歧杆菌能够靶向性地在肿瘤组织中定植,并通过免疫增强和抑制血管生成等机制起到抗肿瘤作用。     

载内皮抑素壳聚糖纳米粒联合顺铂对小鼠Lewis肺癌移植瘤的治疗作用

目的 制备载内皮抑素(endostain,ES)壳聚糖纳米粒(endostatin-loaded chitosan nanoparticles,ES-NPs),并探讨其联合顺铂(cisplatin,DDP)对小鼠Lewis肺癌模型的治疗作用.方法 采用离子凝胶法制备ES-NPs,并对其形态及基本性质进行研究.建立小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤模型,按随机数字表法分为对照组、ES组、DDP组、ES-NPs组、ES+DDP组、ES-NPs+ DDP组.各组给药后,动态测量小鼠移植瘤体积,免疫组化检测移植瘤组织中微血管密度(microvessel density,MVD),ELISA检测小鼠血清中内皮抑素和VEGF水平.结果 制备的ES-NPs具有合适的粒径和较高的包封率,在体外具有明显缓释性,7d累积释放量达(60.22±2.58)％.当ES-NPs与DDP联合时,能明显抑制肺癌移植瘤生长,观察结束时,ES-NPs+ DDP组的抑瘤率为76.47％,明显高于ES+ DDP组及其余各组(P＜0.05).同时,免疫组化和ELISA检测结果证实了ES-NPs与DDP联合对肿瘤血管具有较强的抑制作用.结论 内皮抑素纳米粒联用DDP可增强对小鼠Lewis肺癌移植瘤的抗瘤效果.     

芪加合剂对小鼠Lewis肺癌的抑制作用

目的　研究芪加合剂对小鼠 Ｌｅｗｉｓ 肺癌的影响。方法　观察 Ｌｅｗｉｓ 肺癌小鼠的生存时间和瘤重。结果　芪加合剂（１３７５ ～２７５０ ｇ·ｋｇ － １） 治疗或预防给药均能延长 Ｌｅｗｉｓ肺癌小鼠平均生存时间；对小鼠 Ｌｅｗｉｓ 肺癌瘤重增长有明显抑制作用，并可抑制其自发性肺转移。结论　芪加合剂对肺癌可能具有明显抑制作用。     

青蒿素对小鼠Lewis肺癌移植瘤生长和淋巴管生成的影响

目的:探讨抗疟药青蒿素对Lewis肺癌生长和淋巴管生成的作用.方法:通过接种(sc)Lewis肺癌细胞建立C57BL/6小鼠Lewis肺癌移植瘤模型,灌胃给予50 mg/kg的青蒿素,1次/2 d,连续给药2 wk;游标卡尺观察给药后肿瘤体积变化. 接种后第30 d处死动物,收集肿瘤组织和双肺组织,并称质量. 免疫组化检测瘤内和瘤周VEGFR-3和LYVE-1表达,计数LYVE-1阳性淋巴管并计算微淋巴管密度,HE染色肺组织计数肺转移结节数,观察荷瘤小鼠的存活率.结果:与对照组比较,青蒿素组瘤内LMVD,肺湿重,肺转移发生率和肺转移结节数均较低(P＜0.05);青蒿素治疗组与对照组移植瘤生长没有明显差异(P＞0.05);青蒿素治疗组小鼠存活率与对照组比较明显增加(P＜0.01).结论:青蒿素可有效抑制Lewis肺癌淋巴管生成和肺转移,并提高小鼠存活率.     

内皮抑素基因腺病毒联合化疗治疗小鼠Lewis肺癌

目的:研究腺病毒介导的小鼠内皮抑素基因联合化疗对肺癌的综合治疗作用.方法:利用病毒重组技术将内皮抑素基因克隆入增殖缺陷型腺病毒基因组中,构建携带内皮抑素基因的重组腺病毒Ad-mES,复制小鼠Lewis肺癌的动物模型,随机分成4组,每组10只:化疗组,皮下隔日注射环磷酰胺150 mg/kg,共3次;基因治疗组,一次性瘤内多点注射6×1010 pfu/ml的Ad-mES病毒纯化液100 μl;基因联合化疗组,Ad-mES病毒纯化液联合环磷酰胺,剂量同上;对照组,以0.9%生理盐水100 μl替代环磷酰胺.定期测量各组肿瘤体积,采用Western印迹分析检测基因转导后肿瘤组织中内皮抑素的表达,应用免疫组化法检测肿瘤微血管密度(MVD),观察内皮抑素基因对肿瘤血管生长的抑制作用.结果:构建了表达内皮抑素的重组腺病毒载体Ad-mES;各治疗组荷瘤C57BL/6小鼠肿瘤生长抑制明显,以基因联合化疗组尤为显著(P＜0.01);基因治疗组和基因联合化疗组MVD与对照组和化疗组相比差异显著(P＜0.05).基因治疗过程中未见明显不良反应,且荷瘤鼠生存期明显延长,以联合治疗组为著(P＜0.05).结论:所构建的Ad-mES重组腺病毒载体可有效表达具有生物学活性的内皮抑素;并能减少肿瘤内微血管生成、减慢肿瘤增殖、延长生存期.     

endostatin基因重组腺病毒的构建及在人肺腺癌细胞的表达

目的 利用AdEasy系统构建鼠内皮抑素(ES)基因重组腺病毒Ad.ES,并观察其在人肺腺癌细胞SPCA-1的表达.方法 采用酶切、连接和转化等方法,将质粒pcDNA3.ES中的ES片段插入腺病毒穿梭质粒载体pAdTrack.CMV,构建重组腺病毒穿梭质粒载体pAdTrack.CMV.ES,经Pme Ⅰ酶切线性化后与含腺病毒基因骨架的质粒载体pAdEasy-1在细菌BJ5183内进行同源重组得到腺病毒质粒pAd.ES,重组腺病毒质粒经PacⅠ酶切后,转染人胚肾293细胞包装成腺病毒颗粒Ad.ES,将病毒上清反复感染293细胞获得高滴度病毒,应用氯化铯(CsCl)梯度离心的方法纯化病毒,利用AdEasy系统上的绿色荧光蛋白(GFP)标签测定重组腺病毒的功能滴度.用2 MOI重组腺病毒Ad.ES体外转导SPCA-1细胞48h,流式细胞仪检测GFP表达阳性率,ELISA法测定细胞培养上清液中ES的含量.结果 双酶切证实重组腺病毒穿梭载体pAdTrack.CMV.ES质粒构建正确,卡那霉素抗性筛选和Pac Ⅰ酶切鉴定证实腺病毒重组质粒构建成功.Pac Ⅰ酶切线性化的重组质粒导入293细胞3d,约20%的细胞表达GEP,回收病毒重复感染293细胞,CsCl梯度离心纯化最终获得约5.6×1010TU/mL滴度的重组病毒.Ad.ES体外转导SPCA-1细胞48h后,细胞GFP阳性率为93%,细胞培养上清液中ES的含量较Ad.GFP感染组和阴性对照组明显增加(P＜0.05).结论 应用新型腺病毒载体AdEasy系统可在短期内制备同时表达GFP和ES的重组腺病毒,Ad.ES体外感染人肺腺癌细胞SPCA-1可显著提高ES表达,为进一步研究抗血管生成治疗肺癌奠定了基础.     

荷瘤鼠连续传代过程中肿瘤转移能力的演变及机制

目的观察荷Lewis肺癌（LLC）的C57BL／6小鼠连续传代过程中肿瘤转移能力的演变及瘤组织中炎性因素的变化,探讨肿瘤在活体内的转移能力、演变及其与炎症的关系。方法LLC荷瘤小鼠连续传代,于第2、8、15代各传15只小鼠为早期组、中期组、晚期组,观察三组小鼠的肺转移情况,检测各组小鼠肿瘤组织中的微血管密度（MVD）及巨噬细胞、基质来源趋化因子-1（SDF-1）的表达情况。结果随着荷瘤鼠传代次数的增加,肿瘤的肺转移能力明显增强,肿瘤组织中巨噬细胞明显增多（P〈0．05）;肿瘤组织中的MVD、SDF-1的表达明显增加,且二者表达的增强与巨噬细胞的增多呈正相关（P〈0．05）。结论Lewis肺癌在小鼠体内连续传代过程中其转移能力逐渐增强,且这种演变与肿瘤的炎症浸润有重要的关系