糖尿病足部溃疡外科治疗的临床研究

目的：探讨外科治疗糖尿病足部溃疡以降低其高位截肢率的措施。方法：对87例糖尿病足部溃疡住院病人采用皮瓣移植为主的手术方法进行修复。结果：87例糖尿病足部溃疡应用皮瓣修复51例(58．62％)，皮片移植8例(9．20％)，单纯截趾10例(11．49％)，高位截肢18例(20．69%)，一期愈合率为90．80％。结论：采用皮瓣移植为主的外科治疗，可有效降低糖尿病足部溃疡高位截肢率。     

骨折局部引流液纤粘素改变与愈合关系的实验研究

本实验用犬10条,检测了股骨骨折后1～7天局部引流液和血浆纤粘素(FN)的变化。发现骨折后24 h至7天,引流液内FN逐日增加。与骨折后24 h相比,48 h增加0.79倍(p<0.01);7 2h增加1.76倍(p<0.01),5天增加3.07倍(p<0.001);7天增加4.82倍(p<0.001);并含有FN的降解片段。骨折后6～72h,血浆FN有不同程度降低。 本文首次报道了骨折后局部引流液FN的变化规律,并发现骨折后引流液内FN的增加与愈合密切相关(r=0.0086;p<0.001)。根据本研究结果和目前报道的文献,本文提出如下设想:创伤局部细胞外环境中FN的增加和细胞表面FN的丧失是启动、控制和调节组织修复的重要因素。     

MTLC基因在乳腺癌组织中的表达及其意义

目的研究MTLC基因在乳腺癌组织中的表达及其意义。方法利用RT—PCR检测35例乳腺癌厦其相对应的癌旁组织中MTLC mRNA的表达。结果35例乳腺癌组织中，31例MTLC mRNA表达下调，其下调与乳腺癌的分化程度无关。结论本结果提示MTLC基因在乳腺癌组织中表达下调，进一步说明MTLC表达降低可能与肿瘤发生发展关系密切。     

腹腔脂肪型丝氨酸蛋白酶抑制剂与脂联素mRNA在肥胖及糖尿病大鼠肝脏中的表达

目的了解腹腔脂肪型丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)与脂联素(Adiponectin,APN)mRNA在肥胖及糖尿病大鼠肝脏中的表达及意义。方法雄性Wistar大鼠100只,适应性饲养1周后,随机分为三组:基础对照组15只喂以基础饲料;肥胖组20只喂以高脂饲料;糖尿病组47只喂以高脂饲料,4周后一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病大鼠模型。三组大鼠共饲养28周,采用半定量RT-PCR法检测大鼠肝脏组织中Vaspin及APN mRNA的表达。结果肥胖与糖尿病组大鼠Vaspin mRNA表达水平高于对照组(P<0.05),APN mRNA表达水平低于对照组(P<0.05),肥胖组Vaspin和APN mRNA表达与糖尿病组相比无统计学意义(P>0.05);Vaspin与APN mRNA表达呈中度负相关(P<0.05)。结论 Vaspin与APN mRNA表达的改变可能是糖脂代谢紊乱的一种适应性改变。     

纤维粘连蛋白、组织蛋白酶D、nm23在乳腺癌中的表达

目的：研究乳腺癌中癌巢周围基底膜ＦＮ，Ｃａｔｈ－Ｄ及ｎｍ２３的表达和意义。方法：免疫组化ＳＰ法作ＦＮ，Ｃａｒｔｈ－Ｄ及ｎｍ２３染色，结果：癌巢周围基底膜ＦＮ的表达与癌细胞分化程度有关，与同侧腋下淋巴结转移与否，ｎｍ２３的表达呈正相关，而与癌细胞Ｃａｔｈ－Ｄ表达负相关。     

p53基因与糖尿病肾病大鼠肾组织细胞凋亡相关性研究

目的：研究糖尿病肾病（Diabetes nephropathy,DN）大鼠p53基因与肾组织细胞凋亡的关系。方法：Wistar大鼠随机分为正常对照组、DN模型组。采用RT-PCR检测肾组织p53基因mRNA表达,琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果：DN模型组大鼠肾脏p53基因表达明显上调,且肾组织凋亡细胞明显增加。结论：DN模型组大鼠肾组织细胞凋亡增加,与p53基因mRNA呈正相关。     

EB病毒基因在鼻咽癌组织转录表达的研究

本研究在转录水平上,利用转录载体PGEM-2与两种EB病毒基因片段(LMP和FBER-1)分别构建重组质粒,以SP~6和T~7RNA聚合酶合成含有~35标记的单链反义RNA(Anti-sense RNA或cRNA)和正义RNA(sense RNA),并分别与经病理确诊的鼻咽癌组织40例进行组织原位杂交,结果显示与40例鼻咽癌组织原位杂交后,LMP单链反义RNA有36例呈阳性,其阳性率为90％;EBER-1反义RNA40例均呈阳性,阳性率为100％;两种基因片段的单链正义RNA均为阴性。     

反义寡核苷酸对HL60细胞c-myc基因表达的抑制和诱导分化作用

目的研究ｃｍｙｃ反义寡核苷酸对ＨＬ６０细胞中ｃｍｙｃ基因的表达及ＨＬ６０细胞分化的影响。方法采用针对原癌基因ｃｍｙｃ的ｍＲＮＡ５’非翻译区的一个１８ｂｐ的反义寡核苷酸５’ｄ（ＣＴＴＣＴＣＧＡＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧ）３’与人早幼粒白血病细胞系ＨＬ６０细胞共培养５ｄ，检测ｃｍｙｃｍＲＮＡ量的变化及其对ＨＬ６０细胞分化的影响。结果用ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ检测出ＨＬ６０细胞ｃｍｙｃｍＲＮＡ的含量减少；细胞形态学变化以及非特异性酯酶（ＮＳＥ）染色、硝基四氮唑蓝（ＮＢＴ）还原试验均提示ＨＬ６０细胞出现了分化，部分细胞向粒细胞方向分化，部分细胞向单核细胞方向分化。结论ｃｍｙｃ反义寡核苷酸能够抑制ｃｍｙｃ基因的表达并能诱导ＨＬ６０细胞分化。     

胰腺癌中p16基因表达的研究

目的：研究p16基因在胰腺癌中的表达,探讨其与县腺癌发生、发展的关系。方法：采用免疫组织化学SABC法,检测p16基因蛋白在40例胰腺癌中的表达。结果：p16的阳性表达率为60％,高分化和中分化组阳性表达率明显高于低末分化组（P＜0．01）,临床分期也有相同的结果,临床I期和Ⅱ期高于临床Ⅲ－Ⅳ期（P＜0．05和P＜0．01）。结论：p16基因参与了胰腺癌的癌变过程,检测该基因在胰腺癌中的表达可以对胰腺癌的发生、发展及预后做出客观的评价,并对其治疗有理论性指导意义。     

胃良恶性病变组织及不同距离癌旁粘膜内癌胚抗原表达的研究

为了研究癌胚抗原（ＣＥＡ）表达与胃癌发生及癌细胞生物学行为的关系，作者采用ＡＢＣ免疫组织化学方法，检测了４１例胃癌及其不同距离癌旁粘膜和６７例胃良性病变组织的ＣＥＡ表达。结果表明：胃癌组织内 ＣＥＡ １００％表达阳性，癌旁 ２ ｃｍ及 ５ ｃｍ处粘膜、胃良性病变组织内 ＣＥＡ表达阳性者分别为４％、２６％和５６％。癌组织内 ＣＥＡ多以胞浆型和间质型分布为主，而良性病变多以腔缘型和膜型分布为主。ＣＥＡ表达的阳性程度与癌细胞生物学行为无关，而分布形式则与之有关。不同距离癌旁粘膜及胃良性病变组织内ＣＥＡ表达与细胞分化程度有关。但在癌变之前，ＣＥＡ尚保持着极性分布状态。作者认为：ＣＥＡ的表达状况与胃癌细胞发生及其生物学行为有关。     

Smac和Survivin基因在急性白血病中的表达及临床意义

目的 检测急性白血病(AL)患者Smac、Survivin基因mRNA的表达,以探讨其与AL的发生、发展、疗效及预后的关系.方法 采用RT-PCR技术检测74例AL患者Smac、Survivin基因mRNA的表达情况.10例健康人作为对照组.K562细胞株为阳性对照.结果 4组阳性率及Smac mRNA、Survivin mRNA表达水平比较均有统计学意义(P<0.01);初诊组、复发组高于对照组和完全缓解组(P<0.05);初诊组与复发组、对照组与完全缓解组之间则无统计学意义(P>0.05).治疗后,Smac、Survivin阴性表达者其完全缓解率明显高于阳性表达患者(P<0.05).2种基因mRNA表达水平呈正相关关系(r=0.828,P<0.01).结论 2基因的表达与AL发生、发展相关,是监测病情进展及判断预后的重要分子标志物;二者的表达与化疗药物的敏感性密切相关,可能是导致AL细胞对化疗药物不敏感的原因之一.     

糖尿病肾病病人醛糖还原酶基因多态性相关研究

目的探讨醛糖还原酶（AR）基因5’端（AC）n多态性与2型糖尿病肾病的关系。方法采用聚合酶链反应（PCR）、聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染色技术分析了139例2型糖尿病病人（早期糖尿病肾病组61例,非糖尿病肾病组78例）和63例正常对照者AR基因5’端（AC）n的多态性。结果早期糖尿病肾病组Z-2等位基因频率高于非糖尿病肾病组和正常对照组（x^2=6．88、10．51,P〈0．01）;含Z～2等位基因的基因型频率也高于非糖尿病肾病组和正常对照组（X^2=4．95、8．15,P〈0．05、0．01）。结论AR基因Z-2等位基因与青岛地区汉族2型糖尿病病人糖尿病肾病的发生发展有关。     

胃癌中E-cadherin基因甲基化状况及其表达的研究

目的:检测胃癌组织中E-cadherin基因启动子区域的甲基化状况,并探讨基因异常甲基化与蛋白表达及其临床病理指标的关系。方法:采用甲基化特异性PCR方法对胃黏膜中E-cadherin基因启动子区域甲基化状况进行检测,并采用免疫组织化学方法相应检测了E-cadherin蛋白表达。结果:胃癌中E-cadherin基因甲基化率为3 4.6% (2 8/81 ) ,显著高于正常胃黏膜该基因甲基化率(P =0 .0 2 8)。E-cadherin蛋白表达阳性率为64.2 % (5 2 /81 )。E-cadherin基因甲基化与其蛋白表达无相关性(P >0 .0 5 ) ,与肿瘤组织学类型、淋巴结转移及性别均无相关性,但与年龄有关,随着年龄增加病人甲基化率呈增高趋势。结论:E-cadherin基因甲基化与年龄有关,E-cadherin基因异常甲基化是常见的一种基因异常改变,可能参与了胃癌的发生发展过程。     

Survivin基因在不同胃黏膜中的表达的研究

目的:研究胃癌(gastric cancer,GC)及不同胃黏膜组织中生存素(Survivin)基因的表达关系,为临床应用以生存素为靶点的胃癌防治措施提供理论依据.方法:采用免疫组织化学染色(SP法)检测不同胃黏膜组织中Survivin.30例浅表性胃炎(chronic superficial gastritis,CSG);31例萎缩性胃炎(chronic Atrophic gastritis,CAG),15例异型增生(Dysplasia,Dys).胃癌组织32例.结果:从CSG→CAG→ Dys→GC过程中,Survivin表达均呈递增趋势.CSG灰度值(57.64±4.44)、CAG灰度值(55.05±6.97)、Dys灰度值(48.59±4.16);GC灰度值(32.25±4.13).Survivin表达在CSG、CAG、Dys、GC之间表达有统计学意义(P＜0.05).胃癌组织Survivin的表达与年龄,性别,肿瘤大小无关;在临床分期和组织分化程度方面Survivin阳性表达率明显不同,具有统计学意义(P＜0.05).结论:Survivin基因在胃癌的发生发展过程中可能起重要作用.     

川芎嗪等多种中药制剂对兔耳增生性瘢痕作用的对比研究

①目的　利用增生性瘢痕模型评价川芎嗪等药物对增生性瘢痕的疗效 ,为临床应用上述药物提供理论依据。②方法　建立兔耳增生性瘢痕模型 ,随机分组 ,各组分别应用生理盐水、复方丹参、川芎嗪、甘利欣、康瑞保、曲安奈德治疗。 4 0d后收集标本 ,分别从大体观察、组织形态学、生化指标等方面进行比较。③结果　治疗后对照组和康瑞保组瘢痕仍较明显 ,复方丹参、川芎嗪、甘利欣组瘢痕较用药前减轻 ,曲安奈德组瘢痕基本消失。复方丹参、川芎嗪、甘利欣以及曲安奈德组增生指数与对照组比较差异有显著意义 (t=3.6 5～ 7.4 6 ,P <0 .0 5 ) ;康瑞保组与对照组比较差异无显著意义 (t=1.33,P >0 .0 5 ) ;复方丹参、川芎嗪、甘利欣以及康瑞保组与曲安奈德组比较差异有显著意义 (t=2 .78～ 6 .4 2 ,P <0 .0 5 )。复方丹参、川芎嗪、甘利欣以及曲安奈德组羟脯氨酸含量与对照组比较差异有显著意义 (t=3.32～ 6 .4 8,P <0 .0 5 ) ;康瑞保组与对照组比较差异无显著意义 (t =0 .75 ,P >0 .0 5 ) ;复方丹参、川芎嗪、甘利欣以及康瑞保组与曲安奈德组比较差异有显著意义 (t =2 .5 1～ 5 .34,P <0 .0 5 )。④结论　川芎嗪等中药制剂对增生性瘢痕有治疗作用。     

A STUDY OF mRNA EXPRESSION OF GROWTH FACTORS IN FULL-THICKNESS BURNT RATS AFTER INTERMINGLED TRANSPLANTATION OF AUTO-ALLOGRAFT SKIN

ResumeObjeCtifPOurexaminerl'elletcicatrisantdeslacteursdecroissanceancoursdelacicatrisationdesratsbruldsettraitesparlambeaucutandbybrided'auto--allogref/es.MethodedAl'aidedetechniqueRT--PCR,l'expressionmRNA,deTGFL,TGFPI,PDGFetbFGF,desautoetallogreffes,chezdesratsbrulesettraitesparlambeaucutandhybrrided'auto--allogre/le,esttitrdequantitativement.Rad"ltat~(1)L'exprssionmRNAdetonsiesquatrefacteursdecroissancejutmaul/estdeaussibiendansdesautogrelfesquedesallogrefles,elleestplusviveche…     

Ⅳ型胶原酶在糖尿病大鼠肺组织表达及PKC活性变化的研究

目的：探讨Ⅳ型胶原酶(MMP2及MMP9)在糖尿病大鼠肺组织表达的变化及蛋白激酶C(PKC)的作用。方法：STZ腹腔注射制作糖尿病大鼠模型，4周后观察肺组织的病理改变，免疫组化方法检测MMP2及MMP9在糖尿病大鼠肺组织表达的变化，采用改良的Takay法测定PKC活性，蛋白质免疫印迹分析(Western—blot)及免疫组化方法检测TGF—β1表达含量的变化。结果：DM大鼠4周后肺泡间隔及毛细血管壁增厚，肺间质胶原成分增多，肺组织PKC活性增强，TGF—β1表达增多，MMP2及MMP9表达下降。结论：在糖尿病大鼠肺组织高糖环境下，PKC被激活导致TGF—β1表达增高，MMP2、MMP9表达下降，引起细胞外基质(ECM)合成降解失调，可能参与了糖尿病肺部并发症的发生及发展。     

羊布鲁氏菌omp25基因原核表达载体的构建与鉴定

目的:利用PCR反应从羊布鲁氏菌基因组DNA中克隆omp25基因,并将其构建到原核表达载体pET-32a中。方法:试剂盒法提取羊布鲁氏菌基因组DNA,设计合适的引物,通过PCR反应从基因组中扩增外膜蛋白OMP25的编码基因(omp25)。将得到的基因片段连接到克隆载体pMD19-T的多克隆位点(MCS)中,将连接体pMD19-T-omp25转化感受态大肠杆菌DH5(并进行筛选和克隆扩增,提取质粒并进行酶切分析与序列测定。利用酶切与连接反应将目的基因(omp25)插入载体pET-32a的多克隆位点中,将连接体pET-32a-omp25转化感受态大肠杆菌DH5(并进行筛选和克隆扩增,提取质粒并进行酶切分析。结果:PCR扩增得到的基因片段与GenBank中已公布的羊布鲁氏菌omp25基因同源性为99%。酶切分析结果表明,omp25基因成功地插入载体pET-32a中。结论:成功地扩增得到了羊布鲁氏菌omp25基因并构建了携带该基因的重组原核表达载体pET-32a-omp25,为后续的研究提供了可靠的基础。     

PTEN基因在人肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的:研究人原发性肝癌(HCC)PTEN基因的表达及其临床意义.方法:用RT-PCR和免疫组织化学方法分别检测人HCC组织、癌旁组织、正常组织中PTEN-mRNA和人HCC组织、癌旁组织中PTEN蛋白的表达情况.结果:PTEN mRNA在人的正常组织、癌旁组织、HCC组织中的表达依次降低,差异有统计学意义(P＜0.01);PTEN蛋白的表达在人HCC组织显著低于癌旁组织(P=0.038).PTEN基因的表达与临床分期、门脉癌栓、病理分级有密切的关系(P=0.031, P=0.001, P=0.025).临床分期为Ⅰ～Ⅱ期的,其表达较Ⅲ～Ⅳ期的高;无门脉癌栓的较有门脉癌栓的表达高;病理分级为Ⅰ～Ⅱ级的较Ⅲ～Ⅳ级的表达高.结论:HCC的发生中可能存在PTEN 基因的突变或缺失.PTEN基因的表达缺失可能与HCC的恶性程度、疾病的进程及HCC的侵袭转移有密切关系.PTEN基因低表达,HCC病人病程较晚、肝癌的恶性程度较高,较容易发生侵袭转移,预后较差.