甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶在肝胆疾病诊断中的价值

甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶（Slycylprolinedipeptidy laminopeptidase,GPDA），有色特异地水解肽链末端第2位为脯氨酸所形成的肽键（对其他肽键无作用）。用人工合成的X-脯氨酰对硝基苯胺作底物来检测此酶活性发现，以甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺为底物时酶活性最强，Km值最小，故称此酶为甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶或甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺酶（glycylproline—p—nitmanilidase）。又由于它也能水解甘氨酰脯氨酰-β-萘胺，故又称为甘氨酰脯氨酰-β萘胺酶（Slycylproly--β-naphthvlamidase）。。     

氨基肽酶的测定及临床意义

目的测定氨基肽酶中的一种酶(亮氨酸氨基肽酶,LAP)作为临床肝胆疾病的诊断指标并探讨氨基肽酶的临床意义,以便于系统探讨此类酶的临床应用价值。方法以亮氨酰对硝基苯胺为底物,在405 nm下进行连续监测并对健康体检者及患者标本进行测定。结果线性范围至少为0-180 U.L-1,批内不精密度为2.9%,批间不精密度为5.6%;适用于各种自动生化分析仪。测定亮氨酰氨基肽酶的最适条件:选用浓度为125 mmol.L-1的Tris-Hcl缓冲液,最适pH为7.2,温度取37℃,得出在此实验条件下的米氏常数Km为0.15 mmol.L-1,亮氨酰对硝基苯胺浓度取6.0 mmol.L-1,取健康体检者血清157例(男81例,女76例),测得x—±s为35.7 U.L-1+8.2 U.L-1,建立了适合于临床应用及自动生化分析仪的方法和参考值。结论本法是检测肝胆疾病的可靠、稳定、快速的方法之一,对肝胆疾病的早期诊断和治疗起一定的作用;氨基肽酶可以作为多种疾病的临床诊断和监测指标。     

血清γ—GT速率测定法的实验条件探讨

本文以γ-谷氨酰对硝基苯胺为底物终浓度为5.0mmol/L。用Tris-甘氨酰甘氨酸(双甘肽)缓冲液(pH8.2),其中双甘肽作γ-谷氨酰基的受体,终浓度为100mmol/L,生成的对硝基苯胺为黄色,在410nm波长处     

血清血管紧张肽-转换酶简易的酶法测定

本文作者介绍了一种简单的动力学酶法测定血管紧张肽-转换酶(ACE)活性的方法。首先,ACE与底物质马尿酰-甘氨酰-甘氨酸(Hip-Gly-Gly)反应释出Gly-Gly,接着在γ-谷胺酰转移酶(GGT)催化反应中,Gly-Gly作为受体底物从供体底物L-γ-谷胺酰-3-羧基-4-硝基替苯胺(GGCN)转移γ-谷胺酰基团。反应中释放的3-羧基-4-硝基替苯胺可于410nm测定。反应式如下:     

应用新合成的试剂作基质测定人血浆凝血酶、凝血酶原和抗凝血酶Ⅱ的一种敏感的比色法

测定血浆凝血酶原、凝血酶及抗凝血酶Ⅲ的方法(如免疫法和血凝固试验等)已有不少报导。最近报导用三肽作底物测定血浆凝血酶及抗凝血酶Ⅲ。所用三肽是H-D苯丙氨酰-L-哌可酰-L-精氨酸或Boc-L-缬氨酰-L-脯氨酰-L-精氨酸的衍生物对硝酰替苯胺(P-nitroanilide)或氨甲基香豆素酰胺(Aminomethylcoumarinamide)。作者曾报导,L-脯氨酰-L-苯丙氨酰-L-精氨酸-α-萘酯对激肽释放酶是一种高灵敏度的基质,并用对甲苯磺酰-赖氨酸萘酯(Tos-Lys-NE)作基质制备了血纤维蛋白溶酶原的酶谱。本文介绍了用苯甲酰-L-亮氨酰-L-丙氨酰-L-精氨酸-α-萘酯(Bz-Leu-Ala-Arg-NE)作基质测定血浆凝血酶原和抗凝血酶Ⅲ,并且制备了血浆凝血酶原和凝血酶的酶谱。     

血清GPDA活力测定对若干癌肿诊断的临床观察

用甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺作底物，２％的Ｔｗｅｅｎ－２０作ＧＰＡ的表面活性剂，对４６例肝癌，４２例胃癌和５２例白血病患者血清甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶活力进行测定，发现６９．６％的肝癌患乾血清ＧＰＤＡ活力高于正常参考价值＋２个标准差，７８．５７％的胃癌和７０．５９％的白血病患者血精ＧＰＤＡ活力低于正常参考值均值－２个标准差。     

L-吡咯烷酮酰-4-硝基苯胺的合成及其临床应用

[目的]制备L-吡咯烷酮酰-4-硝基苯胺，用吡咯烷酮芳胺酶（PYRase）法快速检出链球菌等病原菌。[方法]采用L-谷氨酸与水加热生成焦谷氨酸，再与对硝基苯胺反应制得L-吡咯烷酮酰-4-硝基苯胺；将其制成酶底物纸片，对底物浓度、最适pH、反应温度及时间进行了探讨，确定了实验的最佳条件。[结果]本法底物最佳浓度为2mg／ml，最适pH7．2，反应温度37℃，反应时间10min。以此条件用自制底物与进口品进行比较其效果完全一致。鉴定了标准菌株9株，临床分离菌株154株。正确率达100％。[结论]本法可代替常规检验方法提前2～3d报告结果，为链球菌等鉴定提供了一种快速、简便、准确的新方法。     

甘氨酰脯氨酰-对-硝基苯胺酶与肝胆疾病

甘氨(酰)脯氨酰-对-硝基苯胺酶(GPN)是一种肽酶.根据以往有关肝硬变、肝癌时血中GPN活性升高的报告,作者测定了健康对照、肝胆疾病、心肌梗塞和肠道慢性炎症患者血清     

甘氨酰脯氨酰二肽氨基肽酶动力学测定方法探讨及初步临床应用

目的建立甘氨酰脯氨酰二肽氨基肽酶(GPDA)自动化分析方法。方法用甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸盐为底物,在Tris-HCl-双甘肽缓冲系统下,在405nm处测定产物吸光度的变化,得出GPDA活性。结果最适pH值为8.6,基质浓度为2.0mmol/L。批内、批间平均变异系数分别为3.01%、5.04%。米氏常数(Km)为1.89mmol/L。标本存于4℃冰箱10d内稳定性良好。参考值为(102.8±26.0)U/L。肝癌组该酶范围为(139.9±71.8)U/L,与正常组比较差异有显著性(P<0.05)。胃癌组和慢性胃炎组该酶范围分别为(58.83±18.18)U/L和(61.5±15.8)U/L,与正常组比较差异均有显著性(P<0.001、P<0.005)。结论该法简便、快捷、精确,可用于自动化分析,并可作为评价肝癌、胃癌及慢性胃炎的血清学指标。     

甘氨酰脯氨酰二肽氨基肽酶动力学测定方法探讨及初步临床应用

目的建立甘氨酰脯氨酰二肽氨基肽酶(GPDA)自动化分析方法.方法用甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸盐为底物,在Tris-HCl-双甘肽缓冲系统下,在405 nm处测定产物吸光度的变化,得出GPDA活性.结果最适pH值为8.6,基质浓度为2.0 mmol/L.批内、批间平均变异系数分别为3.01%、5.04%.米氏常数(Km)为1.89 mmol/L.标本存于4 ℃冰箱10 d内稳定性良好.参考值为(102.8±26.0) U/L.肝癌组该酶范围为(139.9±71.8) U/L,与正常组比较差异有显著性(P<0.05).胃癌组和慢性胃炎组该酶范围分别为(58.83±18.18) U/L和(61.5±15.8) U/L,与正常组比较差异均有显著性(P<0.001、P<0.005).结论该法简便、快捷、精确,可用于自动化分析,并可作为评价肝癌、胃癌及慢性胃炎的血清学指标.     

甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶的方法学研究

本文研究了甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(GPDA)的最佳测定条件。最适pH8.6,Km 值为1.91±0.08mmol/L,选用158mmol/L Tris、64mmol/L 双甘氨肽、10 mmol/L 底物。酶促反应速度在70分钟内呈线性,酶活力在600U/L 内呈线性。高、中,低活力标本批内变异1.7～3.1%,批问变异3.8～6.7%,标本置4℃一周,结果无明显变化。168例健康者GPDA 为150.1±49.8(2SD)U/L,同时研究了测定管、底物空白、对硝基苯胺的光学吸收特性,观察了GPA 试剂在不同pH 和不同时间的变化规律。     

重氮法测定γ-GT基质重组和影响因素分析

血清γ-GT测定以γ-谷氨酰对硝基苯胺为底物时，释出的对硝基苯胺含量低、色浅、吸光度低，对结果影响较大。国内目前仍常用重氮显色法，为缩短该法的反应时间，较好的控制实验条件，本文将其基质重组和对影响因素作了初步分析。现报道如下。     

肾病患者尿中二肽基-氨基肽酶Ⅳ的变化

二肽基-氨基肽酶IV(DAP-IV)能使X-脯氨酰-Y-肽分解,产生X-脯氨酸,对氨基端第二位的脯氨酸有高度特异性。作者以7-甘氨酰脯氨酸-4-甲基香豆素酰胺(甘氨酰-脯氨酸-MCA)为底物,用荧光法测定尿中DAP-IV的活性。取试管1支加入pH 8.7的0.15mol/L甘氨酸/氢氧化钠缓冲液40μl,2mmol/L甘氨酰-脯氨酸-MCA水溶液25μl及人尿35μl。另取试管1支以35μl蒸馏水代替人尿作为对照管。将各管置于37℃水浴中保温30分钟,加入1mol/L醋酸盐缓冲液1.0ml     

尿液甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定及临床应用

目的　探讨尿液甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶 (GPDA)测定及临床应用价值。方法　用连续监测法以甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺为底物检测尿液GPDA ,并对检测条件及干扰因素进行试验探讨 ,同时对 334名正常人 ,5 5例糖尿病和 36例高血压患者尿液GPDA进行检测分析。结果　尿GPDA在 35 0U/L以下线性良好 ,低、高值尿液标本的批内变异系数 (CV)分别为 1 2 7%、0 6 1% ,批间CV为 1 33% ,尿液标本 4℃存放 7dGPDA活性没有变化 ,胆红素、葡萄糖、维生素C及糖尿病治疗药物二甲双胍、格列苯脲对GPDA测定无干扰 ,血红蛋白在 5 0 0mg/L以下时对GPDA测定无干扰 ,>5 0 0mg/L产生负干扰 ,334名正常人尿GPDA活性为 (12 9± 4 1)U/g·Cr,参考值范围 4 9～ 2 0 9U/g·Cr;糖尿病、高血压病合并肾损害组尿GPDA明显高于正常对照组和未发生肾损害组 ,差异有非常显著意义 (P <0 0 0 1)。结论　甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶操作简单、快速、稳定性好 ,干扰因素少 ,结果准确 ,是诊断早期肾小管损伤的敏感而特异的检验项目。     

测定尿γ-GT与肌酐的比值监测氨基糖苷类抗生素对肾的毒性

尿γ-GT 检测的临床价值,特别对肾病的诊断,已引起重视.我们观察了临床使用氨基糖苷类抗生素(庆大霉素、丁胺卡那霉素等)尿中γ-GT 的变化,以了解药物对肾的影响.一、材料与方法1.仪器IL Monarch-2000生化自动分析仪.2.γ-GT 试剂盒中生公司速率法试剂盒,其成份:γ-谷氨酰对硝基苯胺4.0mmol/L,甘氨酰甘氨酸90.0mmol/L,Tris 缓冲液100.0mmol/L.3.尿肌酐测定碱性苦味酸终点法.     

微粒体氨基肽酶同工酶琼脂糖凝胶电泳法分离测定的初步探讨

本文用二氨基二甲基1,3丙二醇不连续缓冲系统分离微粒体氨基肚酶(m—AP,原名芳香基酰胺酶)同工酶。以亮氨酰—β—萘胺盐酸盐为底物,重氮盐固蓝B 呈色.并对试验条件做了摸索和探讨。提高了m—AP 同工酶的分辨力和呈色灵敏度.本法以琼脂糖为载体,操作简便、省时,试剂成本低.不同的疾病时,其同工酶区带出现的位置、条数和呈色强度均有不同,对于疾病鉴别诊断有一定参考价值.     

重氮法测定γ-GT基质重组和影响因素分析

血清y-GT测定以y-谷氨酰对硝基苯胺为底物时,释出的对硝基苯胺含量低、色浅、吸光度低,对结果影响较大.国内目前仍常用重氮显色法,为缩短该法的反应时间,较好地控制实验条件,本文将其基质重组和对影响因素作了初步分析.现报告如下.     

用国产Glucana测定GGT活性的中止比色法

本文介绍用国产γ-L-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺(Glucana)作底物测定GGT 活性的中止比色法.以国外文献推荐的连续监测常规法为基础,但改为37℃反应10分钟用1mol/L 盐酸中止反应,410nm 比色,以3-羧基-4-硝基苯胺(Cana)为标准,按U/L 计算结果.Glucana 的Km=0.64mmol/L,最适pH=7.9,10分钟内成零级反应,300U/L 内成线性,批内CV0.26%,天间CV1.9%,平均回收率98.5%,参考范围10～36U/L。用国产底物和进口试剂,用本法和动力学法进行对比试验。实验结果证明:国产Glucana 性能良好;本法快速、简便、精密度及准确度符合临床要求,可在无自动生化分析仪或基层实验室推广。     

连续监测法测定血清丙氨酸氨基肽酶

目的　建立血清丙氨酸氨基肽酶 (AAP)连续监测法。方法　以丙氨酰对硝基苯胺 (Ala pNA)为底物 ,研究AAP作用于此底物的动力学特征 ,选择最适反应条件 ,建立血清AAP测定速率法及参考值 ,同时观测肝胆疾病患者血清AAP作用于此底物的动力学特征 ,选择最适反应条件 ,建立血清AAP测定速率法及参考值 ,同时观测肝胆疾病患者血清AAP水平。结果　酶反应最适pH8 0 ,Tris HCl缓冲液的最佳浓度 15 0mmol/L ,Ala pNa浓度以 3mmol/L为宜 ,米氏常数 (Km) 0 74mmol/L ,在 8min观测时间内吸光度变化与时间成比例 ,线性范围可达 180 0U/L ,平均批内、批间CV分别为 1 0 4%和 2 0 2 %。 2 0mmol/L甘油三酯、2g/L血红蛋白、340 μmol/L胆红素对酶活力测定无干扰 ,正常成年人群参考范围 ( x± 2s) 4 1～ 77U/L。肝胆疾病组血清AAP明显高于健康对照组。结论　血清AAP活力是鉴别诊断肝胆疾病的一项特异、灵敏的指标 ;连续监测法适用于各种类型的自动化分析仪 ,便于临床推广     

猪肾“轻型”GGT的提纯及动力学研究

为了制备ＧＧＴ测定的标准品，研究了猪肾“轻型”γ－谷氨酰移换酶（ＧＧＴ）的提取方法及动力学特性。这种“轻型”酶的比活性达３２０ｋＵ／ｇ蛋白，几乎不含其它杂酶类，每１００ＵＧＧＴ中仅含０．２６Ｕ的乳酸脱氢酶。聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳显示一条ＧＧＴ活性区带。其催化特性和人血清ＧＧＴ非常相似，最适ｐＨ为７．８，对供体底物Ｌ－γ－谷氨酰－３－羧基－４－硝基苯胺的米氏常数（ＫＤｍ）为０．９６ｍｍｏｌ／Ｌ，对受体底物甘氨酰甘氨酸的米氏常数（ＫＡｍ）为１２．７ｍｍｏｌ／Ｌ。