肾病患者γ—谷氨酰转移酶测定的意义初探

γ-谷氨酰转移酶 ( GGT)在肾脏中含量最高 ,通常肾脏疾病中血液 GGT增高不明显 ,尿液 GGT排出增加 [1] ,作者对部分肾脏疾病患者 GGT进行检测 ,以了解其临床应用价值。现报道如下。材料和方法一、材料 :Beckman- Coulter CX7Delta全自动生化分析仪及配套试剂。二、方法 :GGT测定采用连续监测法 ,即在GGT催化作用下 ,γ-谷氨酰对硝基苯胺上的谷氨酰基转移到双甘肽上 ,生成对硝基苯胺 (黄色 )和谷氨酰双甘肽 ,40 5nm连续监测对硝基苯胺生成速率(吸光度变化 ) ,吸光率增高与 GGT活性成正比。三、检测对象 :正常对照组 30例 ,均为体…     

血清γ—谷氨酰移换酶连续监测法

本文参照IFCC推荐的GGT测定参考方法,用γ-L-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺(Glu CANA)作供体底物,对连续监测法的实验条件进行了探讨。Glu CANA 水溶性好,非酶水解程度小,试剂稳定,易保存.应用RSM 对GGT 的最适测定条件进行分析,确定Glu CANA(A)和双甘肽(B)的最适浓度分别为6mmol/L 和150mmol/L。最适pH7.90(30℃).K_m~A=0.73mmol/L.K_m~B=16.2mmol/L。5-氨基-2-硝基苯甲酸ε_(410nm)=791.66m~2·mol~(-1).实验表明,100mmol/L Tris 对GGT 活性有轻度抑制.OCV=1.72～3.1%,RCV=2.85～4.43%。酶活性在460U/L 内呈线性关系.132名健康成人血清GGT 结果(x±S,30℃)男性(n=70)为16.94±7.9U/L。女性(n=62)为11.57±6.88U/L。男女两组均值差异显著.     

用国产底物GCNA研究血清GGT的动力学

报道用国产P-L谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺（GCNA）作为供体底物，双甘肽作为受体废物研究人血清GGT的动力学特性。用国外文献推荐的常规法分析GGT的最适测定条件。不同温度时的大适pH不同，37℃，30℃，25℃的最适pH分别为7．72，7．90，8．01。GCNA（A）双甘肽（B）的浓度分别为4mmol／L，140mmol／L时GGT活性最高。两底物在不同浓度范围，Km值不同，K在0．61～1．32，K在9．84～15．86。金属离子，螯合剂及表面活性剂在实验所用的浓度下对血清GGT活性无影响。高浓度的甘氨酸、叠氮钠对血清GGT有抑制作用。     

稳定单一重氮试剂显色法测定GGT

γ－L-谷氨酰转肽酶（GGT）测定主要有γ-谷氨酰-α-萘胺法与γ－L-谷氨酰对硝基苯胺法两大类。前者应用比较普遍、历史悠久，但是，反应产物α萘胺的显色剂需临用新鲜配制，本文介绍一种改进的稳定单一重氮显色试剂，不必每次配制；简便实用。并调查了参考值及初步临床价值，将GGT列为肝功常规提供条件。1材料和方法1．1试剂1.1.1基质准：取0．15mol／L（1．829／dl）三羟甲基氨基甲烷及0．06mol／L（0．792g／dl）双甘肽溶液90ml。称取γ－L-谷氨酰-α-萘胺（无水，Mr272．3）217mg，加1mol／L盐酸4ml，使溶解后，与Tris-双甘肽溶液…     

测定尿γ-GT与肌酐的比值监测氨基糖苷类抗生素对肾的毒性

尿γ-GT 检测的临床价值,特别对肾病的诊断,已引起重视.我们观察了临床使用氨基糖苷类抗生素(庆大霉素、丁胺卡那霉素等)尿中γ-GT 的变化,以了解药物对肾的影响.一、材料与方法1.仪器IL Monarch-2000生化自动分析仪.2.γ-GT 试剂盒中生公司速率法试剂盒,其成份:γ-谷氨酰对硝基苯胺4.0mmol/L,甘氨酰甘氨酸90.0mmol/L,Tris 缓冲液100.0mmol/L.3.尿肌酐测定碱性苦味酸终点法.     

酶偶联法测定血清血管紧张素转换酶

目的 建立一种测定血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）的酶偶联法，方法 血清与底物马尿酸双甘肽（Ｈｉｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ）混合温育３０分钟，生成马尿酸（Ｈｉｐ）与双甘肽（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ）再加入Ｌ－γ－谷氨酰－３－羧基－４－硝基苯胺（ＧＧＣＮ）和γ－谷氨酰基转移酶（ＧＧＴ），催化ＧＧＣＮ与Ｇｌｙ－Ｇｌｙ偶联，产生的３－羧基－４－硝基苯胺于４１０ｎｍ波长测定其吸收度，结果 当底物ｐＨ８．０，ＧＧＣＮ１．０ｍｍｏｌ     

γ-谷氨酰氨基转移酶(GGT)临床测定966例分析

γ-谷氨酰氨基转移酶(GGT)来源于肝脏其后通过胆道排泄。另外,在肾小管细胞的嗜碱性外侧膜也含有GGT。因此GGT对肝、胆、肾小管病变有重要诊断意义。特将我院及五院2005元月至2008年6月间GGT升高966例病人进行临床分析如下:方法原理:连续监测法(MODULAR定量测定GGT活性)γ-谷氨酰-3-羧基-对硝基苯胺和双苷肽在GGT的作用下,生成对硝基苯胺及γ-谷氨酰双苷肽,所释放出的对硝基苯胺与GGT活性成正比,通过在405nM处测定对硝基苯胺的变化,可求出GGT活力。临床测定结果分析各组GGT升高的对比例数GGT单纯升高组ALT升高大于GGT升高组GGT升高是ALT升高的1-6倍组GGT升高是ALT升高6倍以上组病毒性肝炎257025700脂肪肝1427010134药物性肝病593401718酒精性肝病863803117原发性肝癌48402321转移性肝癌38170211阻塞性黄疸44230183胆囊炎胆石症29293011485讨论原发性亲肝病毒引起的急性病毒性肝炎在无并发症的情况下GGT中度升高约100~300U/L。在最初的2周内,黄疸或临床症状出现后,GGT/ALT比值是0.1~0.2,3~4...     

血清LDL—VLDL—GGT测定及其影响因素的实验探讨

本文报道了血清中与LDL、VLDL 结合的γ-谷氨酰转肽酶(LDL-VLDL-GGT)活力的测定方法.以磷钨酸钢—MgCl_2沉淀血清中LDL-VLDL-GGT,采用Tris-双甘肽缓冲系统.γ-谷氨酰对硝基苯胺作底物。测定血清总GGT 与上清液GGT 活力,两者之差值即为LDL-VLDL-GGT 活力.本法重复试验CV6.7～10%.线性范围达474.2U/L.正常参考范围<13.6U/L,男女差异不显著.初步临床应用提示本法结果对肝癌鉴别诊断有一定价值.     

甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶的方法学研究

本文研究了甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(GPDA)的最佳测定条件。最适pH8.6,Km 值为1.91±0.08mmol/L,选用158mmol/L Tris、64mmol/L 双甘氨肽、10 mmol/L 底物。酶促反应速度在70分钟内呈线性,酶活力在600U/L 内呈线性。高、中,低活力标本批内变异1.7～3.1%,批问变异3.8～6.7%,标本置4℃一周,结果无明显变化。168例健康者GPDA 为150.1±49.8(2SD)U/L,同时研究了测定管、底物空白、对硝基苯胺的光学吸收特性,观察了GPA 试剂在不同pH 和不同时间的变化规律。     

用国产Glucana测定GGT活性的中止比色法

本文介绍用国产γ-L-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺(Glucana)作底物测定GGT 活性的中止比色法.以国外文献推荐的连续监测常规法为基础,但改为37℃反应10分钟用1mol/L 盐酸中止反应,410nm 比色,以3-羧基-4-硝基苯胺(Cana)为标准,按U/L 计算结果.Glucana 的Km=0.64mmol/L,最适pH=7.9,10分钟内成零级反应,300U/L 内成线性,批内CV0.26%,天间CV1.9%,平均回收率98.5%,参考范围10～36U/L。用国产底物和进口试剂,用本法和动力学法进行对比试验。实验结果证明:国产Glucana 性能良好;本法快速、简便、精密度及准确度符合临床要求,可在无自动生化分析仪或基层实验室推广。     

苯酚显色法测定血清中转肽酶的实验报告

γ-GTP 国内常用α-萘胺重氮盐显色法,由于反应时间长,基质空白受游离的α-萘胺影响,显色不稳.近年来,采用γ-谷氨酰对硝基苯胺测定法,但直接测定时释放出的对硝基苯胺含量低,色浅.吸光度低,     

重氮法测定γ-GT基质重组和影响因素分析

血清γ-GT测定以γ-谷氨酰对硝基苯胺为底物时，释出的对硝基苯胺含量低、色浅、吸光度低，对结果影响较大。国内目前仍常用重氮显色法，为缩短该法的反应时间，较好的控制实验条件，本文将其基质重组和对影响因素作了初步分析。现报道如下。     

用谷氨酰羟基对硝基苯胺作基质测定GGT活力的探讨

测定γ-谷氨酰转肽酶活力(GGT)过去用γ-L-谷氨酰-α-萘胺或-β-萘胺,前者敏感度低,后者很难溶解,均不受欢迎。1963年Orlowski等合成了新基质γ-L-谷氨酰对硝基苯胺,敏感度明显提高,且可直接比色测定,具有快速简便,重复性好等优点,迄今国内外大多沿用该法。1975年Bernt介绍用     

血清r-谷氨酰移换酶速率测定法及其实验条件的探讨

我们通过实验,探讨了r—G T 速率测定法的条件.现报告如下.一、试剂1.250mmol/L 三羟甲基氨基甲烷(Tris).2.200mmol/L 双甘肽(冰箱保存)。3.Tris—双甘肽缓冲液:取试剂“1”1份加试剂“2”1.25份混合,此液pH 恰为8.2±0.1.冰箱保存可稳定三个月.     

组织液中粒细胞弹性蛋白酶的测定法

由中性粒细胞释放的粒细胞弹性蛋白酶(GE)在炎性反应中具有重要作用,由于受蛋白酶抑制剂的影响,难以从血中检测出GE 的活性。作者介绍一种测定GE 活性的新底物,并检测了支气管肺泡灌洗液(BALF)、水疱液(BF)和滑膜液(SF)中GE 的活性。BALF 与SF 标本离心去掉细胞、碎片和粘液,上液贮存在—70℃备用。BF 标本采取后立即冰冻,贮存在-70℃备用。试剂:L—焦性谷氨酰—脯氨酰—L—缬氮酸—对硝基苯胺(简称S—2482)底物溶液,用二甲亚砜溶解,并用蒸馏水稀释四倍,使浓度为2mmol/L。操作:取标本200μl,加缓冲液(0.1mol/LTris,0.96mol/L Nacl,pH8.3)200μl,混合后放37℃,加底物200μl 记录反应开始时间,此混合物中组成的最后浓度底物为0.67mmol/L,Tris 为0.33mol/L,Nacl为0.32mol/L。于37℃3小时后,分别加入5.8mmol/L 亚硝酸钠(用0.48nmol/L,Hcl 配制)500μl。     

血清血管紧张肽-转换酶简易的酶法测定

本文作者介绍了一种简单的动力学酶法测定血管紧张肽-转换酶(ACE)活性的方法。首先,ACE与底物质马尿酰-甘氨酰-甘氨酸(Hip-Gly-Gly)反应释出Gly-Gly,接着在γ-谷胺酰转移酶(GGT)催化反应中,Gly-Gly作为受体底物从供体底物L-γ-谷胺酰-3-羧基-4-硝基替苯胺(GGCN)转移γ-谷胺酰基团。反应中释放的3-羧基-4-硝基替苯胺可于410nm测定。反应式如下:     

同型半胱氨酸对谷胱甘肽合成的抑制作用

目的:探讨同型半胱氨酸对谷胱甘肽合成的影响及其发生的可能原因。方法:实验于2004-08/2005-02在新乡医学院生物化学与分子生物学实验室进行。选用健康家兔20只,取抗凝血,离心收集红细胞,制备含有γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶和谷胱甘肽合成酶体系的红细胞裂解液,设置对照组,高、低剂量同型半胱氨酸处理组,每组均设8个平行管。各组均加入100mmol/L的Tris-Hcl缓冲液(pH8.0)60μL,1mol/LMgCl28μL,10mmol/LATP40μL,50mmol/L谷氨酸(调pH为中性)40μL,红细胞裂解液40μL。低、高浓度同型半胱氨酸处理组再分别加入100mmol/L同型半胱氨酸20μL和60μL,其余实验条件相同。以反应中生成无机磷的mmol数表示γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶活性大小。分别用紫外分光光度法和荧光法检测各组无机磷和谷胱甘肽含量。结果:①无机磷的生成量:低浓度同型半胱氨酸组和高浓度同型半胱氨酸组明显低于对照组犤(1.476±0.240),(0.751±0.085),(3.279±0.470)mmol/L,P<0.01犦,高浓度同型半胱氨酸组明显低于低浓度同型半胱氨酸组(P<0.05)。②还原型谷胱甘肽含量:低同型半胱氨酸组和高同型半胱氨酸组明显低于对照组犤(3.058±0.264),(1.908±0.301),(4.476±0.462)μmol/L,P<0.01犦,高浓度同型半胱氨酸组明显低于低浓度同型半胱氨酸组(P<0.01)。结论:同型半胱氨酸有可能通过竞争性抑制γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶的活性,减少细胞内还原型谷胱甘肽的生成。     

miRNA-126调控自噬减轻高糖诱导血管内皮细胞损伤的作用机制

目的 探讨miRNA-126对高糖诱导的内皮细胞自噬与凋亡的影响及分子机制。方法 采用高糖(HG)诱导HUVECs模型,随机分为4组,即正常葡萄糖(5.5mmo/L)对照组,HG模型组,miRNA-126-5pmimics组(转染miRNA-126-5p mmics组),miRNA-126-5p inhibitor组(转染miRNA-126 inhibitor组)。HG模型组即终浓度为33.3 mmol/L的葡萄糖诱导24 h,miRNA-126-5p mimics组是miRNA-126-5p mimics转染至HUVECs细胞,48 h后在培养基中加入33.3 mmol/L (终浓度)葡萄糖,培养24 h。miRNA-126-5p inhibitor组是miRNA-126-5p inhibitor转染至HUVECs细胞,48 h后在培养基中加入33.3 mmol/L (终浓度)的葡萄糖,培养24 h。再利用miRNA-126-5p mimics组模型,分别予自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyl adennine,3-MA)5 mmol/L、ERK通路抑制剂(U-0126) 10...     

一氧化氮对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞内游离钙的影响

目的研究一氧化氮供体S-亚硝基-已酰青酶胺(SNAP)对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞内游离钙浓度的影响。方法培养20×5只SD大鼠(1~3)d的心肌细胞,随机分为5组:A组为正常对照组;B组为单纯缺氧/复氧组(A/R缺氧2 h复氧1 h);C组为NO预处理组加入SNAP使其终浓度分别为0.1 mmol/L,预处理20 min后行A/R;D组为NO预处理组加入SNAP使其终浓度为1 mmol/L,预处理20 min后行A/R;E组为NO预处理组加入SNAP使其终浓度为2 mmol/L,预处理20 min后行A/R。与复氧后应用特异性Ca2+荧光指示剂Fluo-3/AM负载细胞,激光共聚焦显微镜检测游离Ca2+浓度。结果与正常组相比,单纯缺氧/复氧组钙浓度明显升高(P<0.01);0.1 mmol/L和1 mmol/L SNAP能明显降低钙超载(与B组相比,P<0.01),2 mmol/L SNAP组加重钙超载(与B组相比,P>0.05)。结论一氧化氮通过降低细胞内钙超载而减轻缺氧/复氧对心肌细胞的损伤,其作用有浓度依赖性。     

肝星状细胞活化增殖和凋亡及奥曲肽的影响

背景:肝星状细胞的活化增殖在肝硬化的发生发展中起关键作用,临床广泛应用的生长抑素衍生物奥曲肽有多种生物学效应,但它对肝星状细胞的活化增殖及凋亡有何影响尚不清楚。目的:观察奥曲肽对大鼠肝星状细胞增殖和凋亡的影响。方法:实验选用肝星状细胞株HSC-T6的传代细胞。MTT法检测不同浓度(1×10-2,1×10-3,1×10-4,1×10-5,1×10-6,0mmol/L)奥曲肽干预24,48,72h对肝星状细胞增殖的影响;TUNEL凋亡检测试剂盒荧光显微镜方法检测不同浓度(0,1×10-5,1×10-2mmol/L)奥曲肽干预24h对肝星状细胞凋亡的影响。结果与结论:奥曲肽浓度越高、作用时间越长对培养的肝星状细胞增殖抑制越明显,呈现浓度和时间依赖性;奥曲肽对培养的肝星状细胞凋亡随奥曲肽浓度的增加而增加。结果可见奥曲肽对培养的肝星状细胞增殖抑制呈浓度(0～10-2mmol/L)和时间(24,48,72h)依赖性,并能诱发其凋亡。