甘氨酸受体激动剂对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

目的 观察5种甘氨酸受体激动剂对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的神经保护作用,从中筛选出作用最佳的氨基酸.方法 大鼠70只,随机分为假手术组、对照组、牛磺酸组、L-丝氨酸组、甘氨酸组、β-丙氨酸组、L-α-丙氨酸组,每组10只.用大脑中动脉线栓法制作大鼠缺血再灌注模型,再灌注时各组分别腹腔注射相应的药物,对照组注射等剂量生理盐水,12 h后各组重复注射1次.所有动物于再灌注后24 h进行神经行为学评分,各组中6只采用TTC法测量脑梗死体积,剩余4只用尼氏染色观察脑组织病理学改变.结果 5种甘氨酸受体激动剂中,牛磺酸组、L-丝氨酸组与对照组相比,可明显改善大鼠神经功能缺损(均P＜0.01),减少脑梗死体积(均P＜0.05),同时逆转脑缺血损伤侧顶叶皮质神经元的变性坏死与丢失;而其余氨基酸的神经保护作用不明显.结论 5种甘氨酸受体激动剂中,L-丝氨酸、牛磺酸的抗脑缺血损伤效果最佳.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后p-CREB、c-fos表达与神经保护

目的研究p-CREB、c-fos在大鼠局灶性脑缺血再灌注中的表达、尼莫地平的神经保护作用及治疗时间窗。方法颈内动脉尼龙线线栓法MCAO 90 min造模,12只S-D雄性大鼠均分为4组:A组:MCAO 90 min组;B组:MCAO加双侧颈总动脉结扎(BCCAL)30 min组;C组:MCAO加BCCAL 60 min组;D组:MCAO加BCCAL 90 min组。另12只大鼠同上造模并分组,尼莫地平颈内动脉给药。再灌注后24 h脑功能障碍评分,再灌注72 h处死测量脑组织梗死体积,并行HE染色,p-CREB、C-fos免疫组化染色。再选16只动物,同A组造模,并均分为缺血(I-R)组和尼莫地平(Nim)组,两组均在再灌注后2 h,24 h,48 h,72 h分别处死2只动物,行HE染色,p-CREB、C-fos免疫组化染色。结果 HE染色示尼莫地平干预后半暗区神经元损伤明显减轻;再灌注24 h后A^D组神经功能障碍依次加重;与I-R组相比,除D组外,Nim组均较I-R相应组梗死体积小,缺血半暗带边缘区p-CREB表达增强(P<0.05);Nim组半暗带边缘区c-fos表达与I-R组比较无统计学差异。再灌注2 h后p-CREB大量表达,24 h达高峰,后缓慢下降;c-fos 2 h升高,24 h达高峰,72 h明显下降。结论早期尼莫地平动脉给药对轻度/中度脑缺血再灌注损伤治疗效果较好;CREB磷酸化后在脑缺血损伤中的神经元存活起着重要作用;c-fos基因参与了脑缺血的信号转导。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后BDNF mRNA及其蛋白的表达变化

目的 观察大鼠脑缺血再灌注后缺血半暗带皮质脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA和蛋白的表达变化.方法 采用线栓法制作局灶性脑缺血大鼠(MCAO)模型,用原位杂交法和免疫组化法观察脑缺血后3、6、12h及1、3、7d共6个时间点BDNF mRNA及其蛋白的表达变化.结果 缺血半暗带BDNF mRNA及其蛋白的表达均于缺血再灌注后3h开始明显上升,6h表达继续增强,12h达高峰,3d后表达开始减弱(P＜0.05或0.01),7d后降至基础水平.结论 脑缺血再灌注后缺血半暗带BDNFmRNA及蛋白表达均明显增加,提示其可能参与了脑缺血后神经保护.     

腺苷预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠脑内Wnt1表达的影响

目的探讨腺苷预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠内源性神经干细胞增殖的机制。方法制作大鼠脑缺血再灌注损伤模型。224只SD大鼠随机分为4组:假手术组(F组)、腺苷预处理后假手术组(AF组)、缺血再灌注组(IR组)、腺苷预处理组(AP组),根据再灌注时间随机又分为1 d、3 d、7 d、14 d、21 d 5个亚组。对各组不同再灌注时间点大鼠进行神经功能缺失行为学评分,利用Western blotting检测海马Wnt1蛋白的表达情况及腺苷预处理对其的干预。结果 (1)神经缺损症状及功能评分:F、AF组大鼠均无神经功能缺损症状,IR、AP组大鼠均有不同程度神经功能缺失症状,AP组大鼠相应时间点的神经功能评分均较IR组低(P<0.05);(2)Western blotting:F、AF组Wnt1的表达几乎检测不到;IR、AP组Wnt1随着缺血再灌注时间的延长,表达均逐渐增加,7 d时达到最高峰。AP组比IR组表达增强(P<0.05)。结论 (1)腺苷预处理能显著效改善再灌注损伤引起的神经功能缺损症状;(2)腺苷可能通过激活Wnt信号通路从而促进内源性神经干细胞增殖。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注时c-fos、bcl-2蛋白的表达

目的：为探讨细胞凋亡在脑缺血再灌注时脑损伤过程中的作用。方法：采用免疫组化法检测大鼠脑缺血再液注不同时间内ｃ－ｆｏｓ、ｂｃｌ－２蛋白表达的水平。结果：①脑缺血再灌注时在缺血侧皮层和基底节区可见ｃ－ｆｏｓ阳性表达,并于缺血 ３０ｍｉｎ再灌注１ｈ时阳性表达达高峰;②脑缺血再灌注时缺血侧皮层和基底节区均有ｂｃｌ－２阳性表达,于缺血２ｈ再灌注３ｈ时阳性表达达高峰。结论：ｃ－ｆｏｓ和ｂｃｌ－２参与大鼠脑缺血再灌注时缺血性细胞损伤的发生。     

胰岛素对局灶性脑缺血再灌注大鼠HSP70表达的影响

目的 :探讨胰岛素对脑缺血再灌注损伤的中枢保护机制。方法 :参照ZeaLonga线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型 ,采用免疫组化法检测同一剂量胰岛素 ( 2IU·kg-1)对缺血再灌注不同时限点脑组织HSP70 蛋白的表达情况。结果 :与对照组相比 ,胰岛素能显著上调缺血侧大脑皮质及基底节区HSP70 蛋白的表达 ( χ2 检验 ,P <0 0 0 1) ,表达高峰主要在再灌注后 2 4h。结论 :胰岛素能上调缺血再灌注脑组织HSP70 蛋白的表达 ,这可能是其发挥中枢保护作用的机制之一     

巴曲酶对局灶性脑缺血及缺血再灌注的神经保护作用：光镜…

本实验采用大鼠大脑中动脉线检法，观察巴曲酶对缺血再灌注的影响。共１５只。６只缺血９０ｍｉｎ，再灌注９０ｍｉｎ；６只连续缺血１８０ｍｉｎ。该行组６只大鼠又分为巴曲酶组，术前３０ｍｉｎ给予巴曲酶（８ＢＵ／ｋｇ，ＩＰ），另一组为盐水组，给予等容生理盐水。３只为假手术组，也仅予术前给等容盐水。各组均手术后１８０ｍｉｎ，断头取脑，用光镜（定性及定量）及电镜观察了大脑皮层及ＣＡ１区的病理变化。结果：巴曲酶组较     

人尿激肽原酶对局灶性脑缺血再灌注大鼠VEGF表达影响的研究

目的 探讨人尿激肽原酶对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 采用随机数字表法将56只雄性SD大鼠分为假手术组(8只)、生理盐水组(24只)、人尿激肽原酶组(24只),其中生理盐水组、人尿激肽原酶组依据再灌注后不同取材时间又分为6 h,12 h,24 h,72 h,7 d五个亚组.采用线拴法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,采用神经功能评分、TTC染色、脑梗死体积测定、光镜检测等方法对不同组大鼠予以评价.采用免疫组化技术观察缺血再灌注不同时间点大鼠脑组织梗死中心区及半影区VEGF表达变化情况.结果 人尿激肽原酶组大鼠神经功能评分低于生理盐水组大鼠(P<0.05);24 h脑梗死体积测定,人尿激肽原酶组平均值为(53 261.96±7 326.75)μm3,生理盐水组平均值为(92 715.84±13 755.44)μm3,差异有统计学意义(P<0.05);人尿激肽原酶组VEGF表达在不同时间点均明显强于生理盐水组(P<0.05).结论 人尿激肽原酶能减轻脑缺血再灌注模型大鼠的神经功能损伤程度,减少脑梗死体积,促进VEGF的表达,具有脑缺血后神经保护作用.     

高热对局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血灶5-LO表达的影响

目的观察高热对局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血灶5-脂氧酶（5-Lipoxygenase,5-LO）表达的影响,探讨高热对脑缺血再灌注后的影响及机制。方法通过线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,缺血时间为2 h。动物随机分为假手术组（Sham）、缺血再灌注（cerebral ischemic reperfusion,CIR）后正常体温组（normathermia,NT）、缺血再灌注后高热组（hyperthermia,HT）。对大鼠进行神经功能缺损评分和计算梗死体积;使用免疫组化法检测5-LO的表达。结果 （1）大鼠CIR HT组12 h2、4 h、48 h后神经功能缺损评分、梗死体积和缺血灶周边5-LO免疫阳性神经元细胞分别较NT组相应时间点明显增加（P〈0.05）;（2）大鼠CIR后梗死体积与缺血灶周边5-LO免疫阳性神经元细胞数明显相关（r=0.694,P〈0.05）。结论大鼠CIR后48h内高热可加重脑损伤,其机制可能与高热诱发5-LO在缺血灶周边过度表达有关。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后皮层ICAM-1表达增加

目的：研究大鼠局灶性脑缺血再灌注不同时相皮层 ＩＣＡＭ－１变化规律。方法：改良 Ｋｏｉｚｕｍｉ法建立 ＬＭＣＡＯ局灶性脑缺血再灌注模型;ＲＴ－ＰＣＲ和 Ｄｏｔ ｂｌｏｔｔｉｎｇ法分别检测 ＩＣＡＭ－１的转录和翻译水平变化。结果：缺血皮层 ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ和 Ｉ－ＣＡＭ－１分别于缺血 ２ｈ和再灌注 ２ｈ显著升高,再灌注 １０和 ４６ｈ达高峰,持续 １周仍维持在较高水平。结论：ＩＣＡＭ－１在脑缺血再灌注时表达明显上调,介导白细胞和脑血管内皮细胞的粘附。ＩＣＡＭ－１ 将成为缺血性脑卒中治疗的新突破点。     

形觉剥夺性弱视成年大鼠视皮质c-fos表达的研究

目的研究双眼形觉剥夺性弱视成年大鼠光刺激诱导视皮质神经元c-fos表达情况。方法缝合14日龄SD大鼠双侧眼睑建立双眼形觉剥夺性弱视模型9只．正常对照组5只。饲养至100日龄两组成年大鼠均暴露于外界自然光线中0．5h后取材．对两组视皮质组织进行Nissl染色和c-fos蛋白免疫组化染色，并对染色结果进行计算机图像分析。结果弱视组大鼠视皮质表达c—fos蛋白阳性神经元较正常对照组多，两组差异有显著性（P〈0．05）。结论双眼形觉剥夺性弱视成年大鼠视皮质经光刺激诱导c-fos表达增加，提示已过视觉发育敏感期成年大鼠的视皮质仍存留一定程度的视觉可塑性。     

亚低温对局灶性脑缺血大鼠模型C3表达的影响

目的观察亚低温（32～35℃）对局灶性脑缺血后大鼠脑组织C3表达的影响。方法 100只大鼠随机分成假手术组、常温组和亚低温组,各组根据观察时间点分为术后6h、1d、2d、3d、7d五个亚组。建立大鼠左侧大脑中动脉闭塞（MCAO）模型,应用冰袋降温的方法使亚低温组大鼠肛温10min内降至（33℃±1℃）,维持低温6h后复温。假手术组和常温组大鼠保持肛温（37℃±0.5℃）。在各时间点采用神经缺陷评分对各大鼠进行神经功能评分后断头取脑,行苏木素伊红染色观察脑缺血病理学改变,免疫组织化学染色观察不同时间点C3表达情况。结果假手术组大鼠清醒后无神经功能障碍,常温组及亚低温组大鼠清醒后均出现左侧Horner征及不同程度右侧前肢为重的偏瘫,两组大鼠神经功能缺损3d时最明显,7d时均有所减轻。除6h外各时间点亚低温组大鼠神经功能缺损评分均较常温组低（P〈0.05）,各时间点亚低温组大鼠脑组织病理学损伤较常温组轻。在各时间点假手术组大鼠脑组织中C3可见少许表达,各组间比较差异无统计学意义（P〉0.05）。常温组和亚低温组大鼠缺血侧脑组织于缺血后6h补体C3阳性细胞数均开始增加,至3d均达到高峰,到7d时C3阳性细胞数明显减少,与常温组相比,亚低温组各时间点缺血侧脑组织C3表达明显减少（P〈0.05）。结论脑缺血时,缺血侧脑组织C3有表达,亚低温可使C3表达减少。亚低温可能通过降低C3的表达减轻补体级联反应起脑保护作用。     

微压香氧预处理对MCAO大鼠Apaf-1表达的影响

目的探讨微压香氧(Micro-Hyperbaric Oxygen Aromatherapy,MHBO-AT)预处理对MCAO大鼠脑梨形皮质Apaf-1表达的影响。方法将雄性成年SD大鼠85只随机分为假手术组15只、模型组35只、微压香氧预处理组35只。除假手术组外其余各组根据再灌注后时间点不同又分为6 h、12 h、24 h 3个亚组,6 h、12 h每组10只,24 h组15只。观察24 h脑组织TTC染色,各时间点免疫组织化学法和Western blot检测大鼠脑梨形皮质凋亡酶激活因子(Apaf-1)的表达。结果 24 h TTC染色显示与模型组比较,微压香氧预处理组梗死体积明显缩小,差异有显著性(P 0. 05)。免疫组织化学法和Western blot显示与模型组相比,微压香氧预处理组各时点Apaf-1蛋白表达均降低(P 0. 05)。结论 MHBO-AT预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤产生神经保护作用,通过抑制脑梨形皮质中Apaf-1蛋白的表达可能是其作用机制。     

亚低温对大鼠局灶性脑缺血ICAM-1和TNF-α表达的影响

目的:脑缺血后ICAM-1和TNF-α的表达增加。降低ICAM-1和TNF-α的表达和亚低温对缺血性脑卒中具有神经保护作用。本研究的目的在于观察亚低温对大鼠局灶性脑缺血ICAM-1和TNF-α表达的影响,并探讨亚低温对脑缺血性损害的神经保护作用机制。方法:采用栓线法阻断大鼠一侧大脑中动脉制作局灶性脑缺血动物模型,设实验组和对照组,分别置于冰毯机上和常温操作台上,使其肛温分别保持在34℃±0.5℃和37℃±0.5℃。12h后断头取脑,采用免疫组化方法检测缺血区ICAM-1阳性血管数目和采用双抗夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清TNF-α水平。结果:实验组ICAM-1和TNF-α的表达较对照组下降。结论:亚低温可降低大鼠局灶性脑缺血的ICAM-1和TNF-α的表达,推测亚低温降低ICAM-1和TNF-α的表达为亚低温减轻脑缺血性损害的神经保护作用机制之一。     

脑心通对实验性脑梗死大鼠脑组织IL-6的影响

目的:探讨脑心通对实验性脑梗死大鼠脑组织中IL一6水平的影响。方法:参照Longa等方法制成大脑中动脉梗死(MCAO)模型,应用干一湿重法观察脑含水量变化、HE染色观察梗死周围炎性细胞浸润、免疫组化方法观察脑组织中lL一6的表达。研究不同剂量脑心通对脑梗死后大鼠行为学评分.脑含水量及脑组织中炎性细胞因子lL一6表达的影响。结果:脑梗死组织周围炎细胞浸润和IL一6阳性细胞表达于梗死后6h开始增多,48h达高峰,并持续到7d。脑心通治疗组大鼠脑梗死后脑水肿减轻,行为学评分降低,脑组织中IL一6阳性细胞减少,大、中剂量脑心通治疗组效果较为显著。结论:脑心通有抑制炎性细胞因子IL_6的过度表达,保护神经元,减轻脑水肿的作用。     

间断低压缺氧预处理对MCAO大鼠脑保护作用及对TLR4表达影响

目的探讨间断低压缺氧预处理对MCAO大鼠的神经保护作用及对脑组织TLR4、NF-κB表达的影响。方法实验大鼠分为:正常对照(C)组30只、假手术(S)组26只、单纯低氧处理(H)组35只,低压氧仓内间断低压处理、单纯大脑中动脉缺血(M)组43只,行单侧大脑中动脉栓塞处理、预处理后脑梗死(HM)组37只;Longa评分,TTC染色及尼氏染色观察神经损伤程度,免疫组织化学法观察TLR4的细胞表达情况,Western blot法测定TLR4表达量,ELISA法测定TLR4及NF-κB表达变化。结果 HM组大鼠神经功能评分及梗死体积低于M组(P<0.05),残存神经元增多,TLR4表达下调(P<0.05),NF-κB表达下调(P<0.05)。结论低压缺氧预处理可有效减轻神经损伤,降低TLR4及NF-κB的表达。     

生物波调控因子对实验性脑梗死大鼠脑组织IL-6表达的影响

目的:探讨生物波调控因子(BRF)对实验性脑梗死大鼠脑组织IL-6表达的影响。方法:成年健康雄性SD大鼠90只随机分为BRF组、生理盐水组和假手术组。制备大脑中动脉梗死(MCAO)模型,术后1h以1ml/100g的剂量分别腹腔注射1.25%BRF溶液和生理盐水,此后1次/d。进行行为学评分、测定脑组织含水量、HE染色观察组织病理学改变、免疫组织化学方法测定脑组织IL-6的动态变化。结果:生理盐水组及BRF治疗组脑梗死组织周围组织含水量于24h开始明显升高,48h达高峰,持续至72h,7d时明显下降,在各个时间点与假手术组比较均有统计学意义。除假手术组外,其余各组梗死区炎细胞浸润和IL-6阳性细胞表达于梗死后6h开始增多,48h达高峰,并持续至7d;假手术组未见明显炎细胞浸润,可见少量IL-6阳性细胞。BRF治疗组大鼠行为学评分降低,脑组织水肿程度减轻,术后48h最显著,病理损伤减轻,脑组织IL-6阳性细胞减少,术后48h、72h最显著。结论:生物波调控因子可以通过减轻梗死后脑水肿,降低脑内IL-6的表达,从而对大鼠缺血性脑组织损伤产生保护作用。     

大鼠脑缺血后PEDF表达及替米沙坦调控作用的研究

目的动态观察大鼠脑缺血后色素上皮源性生长因子(PEDF)的表达变化,并探讨替米沙坦的调控机制。方法线栓法建立大脑中动脉闭塞(MCAO)大鼠模型。实验1,动态观察PEDF蛋白和基因表达;实验2,替米沙坦干预,采用Western blot和qR-T PCR观察PEDF基因和蛋白变化,比较各组脑梗死体积、患侧脑水肿和神经功能。结果 MCAO后24h开始,PEDF表达明显减少。替米沙坦通过激活过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)上调PEDF,明显改善神经功能缺失,减轻脑水肿,减小梗死体积。结论调控内生性PEDF表达可能是治疗脑缺血的新靶点。     

Daily methylphenidate administration attenuates c-fos expression in the striatum of prepubertal rats

Methylphenidate (Ritalin) is a psychostimulant drug used to treat children with attention deficit hyperactivity disorder. Despite its widespread and increasing clinical use, little is known about the long-term consequences of drug treatment. We compared the effects of a single injection of methylphenidate with that of long-term methylphenidate injections (one/day; 14 days) on immediate-early gene expression (c-fos) in the striatum of prepubertal male rats. Rats (25 days old) were injected once daily for 14 days with either saline or methylphenidate (1, 2 or 10 mg/kg), or for 13 days with saline followed by one injection of methylphenidate (1, 2 or 10 mg/kg) on day 14, and were sacrificed 2 h post-injection. Methylphenidate dose-dependently increased FOS immunoreactivity in the striatum. A single injection of methylphenidate (2 or 10 mg/kg) on day 14, following saline treatment for 13 days, caused a dramatic elevation in c-fos expression. This effect was significantly attenuated in animals treated chronically with methylphenidate (2 or 10 mg/kg) for the entire 14 days. Our data suggest that repeated methylphenidate treatment, at a clinically relevant dose (2 mg/kg), markedly inhibits immediate-early gene expression in the brain. This is the first demonstration of methylphenidate-induced modification of gene expression in developing rat striatum and may have implications for chronic methylphenidate use in children.     

IGF-1对大鼠局灶性脑损伤c-fos表达的影响

目的研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对大鼠局灶性脑缺血再灌注后c-fos表达的影响及与缺血时间关系,探讨IGF-1对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法制作SD大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。将55只SD雄性大鼠随机分为假手术组(n=5)、对照组(n=25)、IGF-1治疗组(n=25),其中后2组按缺血再灌时间(6h、12h、1d、3d、7d)不同可分为5个亚组,每组5只,治疗组于缺血2h再灌注1h后经腹腔注入40μg/kg稀释为1 ml的IGF-1,假手术组及对照组同时腹腔注入生理盐水1 ml。以上动物均在再灌注后规定时间点用4%多聚甲醛经心脏灌注固定,取大鼠脑组织,应用免疫组化S-P法和HE染色检测c-fos蛋白表达及脑组织结构病理变化。结果与对照组相比,治疗组大鼠脑组织c-fos表达明显减少,神经细胞坏死程度明显减轻。结论IGF-1在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中起保护作用,其作用机制包括降低c-fos的表达,发挥神经保护作用。