Ad-ING4-IL-24双基因共表达腺病毒对前列腺癌细胞株PC3体内外抑癌增效作用

目的 观察肿瘤生长抑制因子4(ING4)和白细胞介素-24(IL-24)双基因共表达腺病毒载体对PC3人前列腺癌细胞体内外抑癌增效作用.方法 应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测ING4和IL-24在PC3细胞中的表达;噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术(FCM)检测双基因对PC3细胞的生长抑制和凋亡效应;半定量RT-PCR法和Western blot法检测双基因的表达对PC3细胞中的bcl-2、bax、p53和Caspase-3凋亡相关基因表达的影响.在前列腺癌的裸鼠移植瘤动物模型上,检测Ad-ING4-IL-24对移植瘤生长的抑制作用,并通过免疫组织化学法检测bcl-2、bax、Caspase-3、CD34等相关因子的表达.结果腺病毒介导的ING4和IL-24双基因在PC3细胞中成功表达,对PC3细胞增殖具有抑癌增效功能,可引起p53、bax、Caspase-3基因表达上调和bcl-2基因表达下凋,诱导细胞凋亡.Ad-ING4-IL-24能显著抑制PC3裸鼠前列腺癌移植瘤生长,瘤重的抑制率可达74%,免疫组织化学结果显示Ad-ING4-IL-24能明显上调bax和Caspase-3的表达和下调bcl-2和CD34基因表达.结论 Ad-ING4-IL-24在体内外均可明显抑制PC3细胞的生长,诱导其凋亡,具有抑癌增效功能.其机制可能是通过上凋p53、bax、Caspase-3基因和下凋bcl-2和CD34基因表达水平.     

Osteopontin RNAi对人乳腺癌细胞MDA-MB-231生物学行为的影响

目的 观察乳腺癌细胞MDA-MB-231 osteopontin (OPN) RNA靶向干扰效果.方法 采用OPN mRNA干扰质粒转染MDA-MB-231细胞,建立OPN基因沉默细胞株,采用RT-PCR、蛋白质印迹法从mRNA和蛋白水平检测乳腺癌细胞OPN表达量的变化,侵袭试验检测OPN下调对细胞侵袭能力的影响,MTT法测细胞增殖能力的改变,裸鼠成瘤后观察OPN RNA干扰对肿瘤细胞生长的影响及对移植瘤乏氧程度的影响.结果 与MDA-MB-231细胞相比,OPN沉默细胞在常氧和乏氧状态下OPN表达均显著下调(均P＜0.05),OPN稳定沉默细胞侵袭力和增殖能力下降(均P＜0.01),OPN RNAi能明显抑制裸鼠移植瘤的生长(P＜0.05),且移植瘤内乏氧程度降低(P＜0.05).结论 OPN RNA干扰可抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞侵袭力和增殖能力,降低移植瘤的乏氧程度.     

肿瘤抑制基因DBC2抑制乳腺癌MDA-MB-435S细胞增殖并诱导凋亡

目的 观察肿瘤抑癌基因DBC2(deletion in breast cancer 2)的过表达在乳腺癌MDA-MB-435S细胞中的功能.方法 野生型DBC2基因的真核表达载体pEBG-DBC2瞬时转染MDA-MB-435S细胞72 h,噻唑蓝(MTT)比色法绘制DBC2转染前后MDA-MB-435S细胞生长曲线;流式细胞术检测DBC2的瞬时过表达对MDA-MB-435S细胞周期的影响,TUNEL方法 原位检测DBC2的过表达诱导MDA-MB-435S细胞凋亡.结果 DBC2基因在MDA-MB-435S细胞中的过表达可显著抑制该细胞的增殖,同时DBC2基因的过表达可诱导该乳腺癌细胞周期的G_1期阻滞(64.05%比71.72%)和细胞凋亡(0.09%比5.29%).TUNEL实验证实DBC2诱导MDA-MB-435S细胞凋亡的百分比为8%.结论 DBC2基因体外抑制乳腺癌细胞生长的功能,可能通过细胞周期G_1期停滞,以及诱导细胞凋亡等机制实现.     

肼苯哒嗪与三苯氧胺协同抗雌激素受体α阴性乳腺癌的研究

目的观察肼苯哒嗪对雌激素受体(ER)α阴性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MDA-MB-435ERα基因诱导表达作用；肼苯哒嗪联合三苯氧胺(TAM)对ERα阴性乳腺癌细胞的体外抑制作用。方法肼苯哒嗪处理ERα阴性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MDA-MB-435，逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测ERα mRNA表达；肼苯哒嗪、TAM分别或联合作用于MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞，噻唑蓝(MTT)比色法分析细胞生长抑制作用，流式细胞仪测定细胞周期分布和凋亡率。透射电镜观察细胞超微结构。结果肼苯哒嗪能诱导MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞表达ERα mRNA。当肼苯哒嗪浓度≥10μmol／L可抑制MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞生长、阻滞细胞周期于G0／G1期，诱导这两种细胞凋亡，凋亡率分别为11．20％和8．71％；TAM对MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞生长、细胞周期无影响；联合用药组显著抑制细胞生长，诱导这两种细胞凋亡，凋亡率分别为48．8％和53．1％。对照组和TAM组细胞形态较好；肼苯哒嗪作用组细胞变性改变多见；联合用药组主要表现为细胞坏死，但未发现有凋亡小体的存在。结论肼苯哒嗪能诱导ERα阴性乳腺癌表达ERα mRNA，恢复ERα阴性乳腺癌细胞对TAM的敏感性，联合TAM能协同抑制ERα阴性乳腺癌细胞生长，诱导细胞凋亡，从而为ERα阴性乳腺癌开辟新的内分泌治疗途径提供实验依据。     

Bcl 2和Caspase 3调控他莫昔芬诱导的ER阴性乳腺癌细胞凋亡

目的研究Bcl-2和Caspase-3在他莫昔芬（TAM）诱导ER阴性乳腺癌细胞凋亡中的调控作用。方法在体外培养条件下，用浓度为10μmol／L的TAM作用于雌激素受体（ER）阴性的MDA-MB-231人乳腺癌细胞株12，24，36，48，60h；流式细胞仪检测细胞凋亡率及Bcl-2和Bax的蛋白表达，荧光分光光度仪检测Caspase-3活性，以及加入Caspase-3活性抑制剂Ac—DEVD—CHO后凋亡百分率的变化。结果TAM作用ER阴性乳腺癌细胞后，Bcl-2表达下调，Caspase-3活性增强，细胞凋亡率增加．且有时间依赖性，细胞凋亡在48h达高峰。Bcl-2表达水平与Caspase-3活性变化成负相关（r=-0．921，P〈0．05），但Bax蛋白在药物处理前后无明显变化。加入Ac—DEVD—CHO后，能阻断Caspase-3活化而抑制TAM诱导细胞凋亡。结论TAM通过下调Bcl-2表达而经线粒体途径诱导ER阴性乳腺癌细胞凋亡，Caspase-3的激活在此过程中发挥重要作用。     

雌激素受体β1上调p53基因表达促进乳腺癌细胞的凋亡

目的观察外源性雌激素受体β1(estrogen receptor β1,ERβ1)基因转染乳腺癌MDA-MB-231细胞后对p53基因表达和细胞凋亡的影响,探讨ERβ1在乳腺癌中的生物学作用。方法应用脂质体法将ERβ1真核表达质粒转染至乳腺癌MDA-MB-231细胞中,分别用荧光实时定量PCR法、Western blot法检测转染前、后细胞中ERβ1与p53 mRNA和蛋白表达的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率。细胞生长曲线显示转染前、后细胞增殖能力的改变。结果转染外源性ERβ1真核表达质粒后,MDA-MB-231细胞中ERβ1及p53 mRNA和蛋白表达明显增强(P0.01);细胞凋亡率明显增加(P0.01),增殖能力明显减弱(P0.01)。结论在乳腺癌中,ERβ1可以通过上调p53基因表达促进乳腺癌细胞凋亡,从而抑制乳腺癌细胞的增殖。     

紫杉醇诱导三阴性乳腺癌细胞自噬相关蛋白LC3的表达及其作用

目的:探讨紫杉醇对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞自噬相关蛋白LC3表达的影响及意义。方法:用CCK-8法测定紫杉醇对TNBC细胞MDA-MB-231增殖的抑制作用及25%抑制浓度(IC_(25));用IC_(25)浓度的紫杉醇作用MDA-MB-231细胞后,分别用免疫荧光化学法、Western blot、流式细胞术检测细胞LC3与凋亡相关蛋白的表达及细胞的凋亡率。结果:紫杉醇呈浓度依懒性抑制MDA-MB-231细胞的增殖(P0.05),其IC_(25)为3.11μg/m L。IC_(25)浓度的紫杉醇处理后,MDA-MB-231细胞后LC3的表达量以及LC3B/LC3A比例明显升高、凋亡蛋白Bax与caspase-3蛋白表达量明显降低、总凋亡率与早期调亡率均明降低(均P0.05)。结论:紫杉醇可诱导TNBC细胞自噬相关蛋白LC3表达升高,该作用可能降低细胞凋亡,从而导致TNBC细胞产生紫杉醇耐药。     

miR-204对TFAM的靶向调控作用及其对乳腺癌细胞生长与增殖的影响

目的:探讨乳腺癌细胞中miR-204对线粒体转录因子A(TFAM)的靶向调控作用及其与细胞生长、增殖的关系。方法:将人乳腺癌MDA-MB-231细胞分别转染mi R-204模拟物或miR-204抑制物,用real-time PCR和Western blot分别检测mi R-204与TFAM蛋白的表达;构建荧光酶报告基因质粒(mut-TFAM/wt-TFAM),将其与mi R-204模拟物或miR-204抑制物共转染MDA-MB-231细胞后检测荧光酶活性变化;构建pc DNA3.1/TFAM质粒,将其单独或与mi R-204模拟物共转染MDA-MB-231细胞后检测TFAM蛋白表达,并用MTT法和Brd U法检测细胞生长与增殖情况。结果:MDA-MB-231细胞转染mi R-204模拟物后mi R-204的表达明显升高,而TFAM蛋白表达明显降低,转染miR-204抑制物后则呈反向变化(均P0.05)。wt-TFAM与mi R-204模拟物共转染时荧光酶活性明显下降,与mi R-204抑制物共转染时荧光酶活性明显升高(均P0.05)。转染pc DNA3.1/TFAM后,MDA-MB-231细胞的TFAM m RNA及蛋白表达量明显上调,细胞生长与增殖能力明显升高(均P0.05);mi R-204模拟物后,MDA-MB-231细胞在TFAM表达降低的同时,细胞生长与增殖能力明显降低,而与pc DNA3.1/TFAM共转染后其上述作用均被部分抵消(均P0.05)。结论:mi R-204能靶向抑制乳腺癌细胞TFAM的表达,从而抑制乳腺癌细胞的生长与增殖。     

Ghrelin抑制多柔比星诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡的实验研究

目的:探讨Ghrelin抑制多柔比星诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡的机制。方法 :通过细胞培养、MTT、流式细胞检测、Tunnel法和Western blot观察酰基化Ghrelin对多柔比星诱导的人乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡和凋亡相关蛋白表达的影响。结果:MTT检测证实多柔比星能有效诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡。流式细胞检测及Tunnel法检测发现Ghrelin能有效抑制多柔比星诱导的人乳腺癌细胞MDA-MB-231的凋亡。Western blot检测发现Ghrelin抑制多柔比星诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡的同时伴有bcl-2表达增加、bax表达下降、bcl-2/bax值升高。结论:Ghrelin能有效抑制多柔比星诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡,推测其抑凋亡机制可能与抗线粒体凋亡因子释放有关。     

c-Met抑制剂SU11274对基底样乳腺癌MDA-MB-231细胞的影响

目的 研究c-Met抑制剂SU11274对c-Met阳性基底样乳腺癌细胞系MDA-MB-231凋亡和运动的影响.方法 荧光染料Hoechst33342、MitroTrackerRed和Yo-pro-1染色,观察SU 11274诱导细胞凋亡的形态学变化;流式细胞术检测不同处理组的细胞早期凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白的表达变化和c-Met及Akt磷酸化水平的改变;划痕试验及趋化试验观察SU 11274对细胞迁移、趋化能力的影响.结果 SU11274(10 μmol/L)处理MDA-MB-231细胞48 h后,与对照组比较,荧光染色可见处理组细胞核绿染,胞核碎裂;各加药组MDA-MB-231的早期凋亡率分别为(7.3±0.9)％、(14.1±0.6)％、(35.5±4.4)％、(48.2±5.3)％,与对照组相比明显升高(P＜0.05).同时,抗凋亡蛋白Bcl-XL表达减少,凋亡相关蛋白Caspase-3和PARP蛋白剪切增加,量效关系明显.SU11274可显著延长划痕愈合时间以及减少趋化穿膜细胞个数(P＜0.05),并有效抑制c-Met及Akt的磷酸化水平,呈剂量依赖性关系. 结论 SU11274可通过抑制c-Met/PI3 K/Akt的磷酸化水平而诱导c -Met阳性基底样乳腺癌细胞系MDA-MB-231凋亡,并抑制其运动.     

肝细胞癌经导管动脉化疗栓塞术后Survivin, Bax和Caspase-3的表达水平

目的探讨经导管动脉化疗栓塞术(TACE)对肝细胞癌(HCC)癌细胞凋亡的影响及意义。方法取经TACE治疗后手术切除的HCC组织标本24份(TACE组)和未经其他治疗直接手术切除的HCC组织标本30份(单纯手术组),采用免疫组化SP法检测癌组织中Survivin,Bax,Caspase-3的表达水平。结果 TACE组癌组织中Survivin表达阳性率为41.67%,低于单纯手术组(73.33%,P0.05);Bax,Caspase-3表达阳性率分别为54.17%、58.33%,高于单纯手术组(26.67%、30.00%,P均0.05)。TACE组癌组织中Survivin的表达与Bax,Caspase-3的表达分别呈负相关(r=-0.580、-0.829,P均0.05);Bax与Caspase-3的表达呈正相关(r=0.749,P0.05)。结论 TACE可通过抑制Sur-vivin表达,促进Bax,Caspase-3表达诱导癌细胞凋亡,这可能是TACE治疗肝癌的主要机制之一。     

AT9283对基底样乳腺癌细胞侵袭及转移的影响

目的研究Aurora激酶抑制剂AT9283对基底样乳腺癌细胞（BLBC）系MDA-MB-231细胞运动能力和凋亡的影响，探讨AT9283降低BLBC侵袭和转移的作用机制。 方法取不同浓度（0、0.01、0.1、1、10 μmol/L）AT9283处理MDA-MB-231细胞，MTT法检测细胞增殖抑制率；PI染色流式细胞术检测多倍体细胞形成，Annexin V/PI双染流式细胞术、荧光染料显色观察不同浓度下AT9283诱导MDA-MB-231细胞凋亡情况；Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达变化和Aurora激酶、Cofilin-1及磷酸化水平的改变；划痕试验及趋化试验观察AT9283对细胞迁移、趋化能力的影响。 结果AT9283（10 μmol/L）处理MDA-MB-231细胞24 h后，细胞增殖抑制率为（89.17±0.03）%，荧光染色可见AT9283处理的胞核绿染、碎裂；流式细胞术检测1 μmol/L AT9283作用于乳腺癌细胞48 h形成多倍体细胞，0.1、1、10 μmol/L AT9283作用下MDA-MB-231细胞凋亡率分别为（13.4±2.5）%、（29.5±3.4）%、（52.8±6.7）%，与对照组的（0.7±0.1）%相比，均明显升高（P<0.05）。同时，抗凋亡蛋白Bcl-XL表达减少，凋亡相关蛋白Caspase-3和PARP蛋白剪切增加。AT9283可显著延长划痕愈合时间，减少趋化穿膜细胞个数（P<0.05），并有效抑制Aurora激酶及Cofilin-1的磷酸化水平。 结论AT9283可通过抑制Aurora激酶的磷酸化及Cofilin-1磷酸化水平而诱导BLBC细胞系凋亡，并抑制其运动，从而抑制侵袭及转移。     

青蒿琥酯对MDA-MB-231细胞增殖抑制作用及其机制

目的 探讨青蒿琥酯(artesunate,ART)对乳腺癌雌激素受体阴性细胞MDA-MB-231抑制作用及其机制.方法 ART处理细胞3 d后,采用MTT比色法检测细胞增殖功能,观察细胞形态、结构的改变,免疫细胞化学检测Bax,nm23,Bcl-2,P21WAFl/CIPl蛋白的表达情况.结果 ART作用于乳腺癌细胞MDA-MB-231后,发现其对细胞的抑制作用呈明显浓度依赖性,可导致细胞形态、结构改变;免疫细胞化学结果显示2μmol/L青蒿琥酯作用细胞72 h后,药物组同细胞对照组比较,可上调Bax、nm23、P21WAF1/CIP1蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05),Bcl-2蛋白质表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 ART有抑制MDA-MB-231细胞增殖的作用,其机制可能与上调Bax、nm23、P21WAF1/CIP1蛋白表达有关.     

西乐葆和雷帕霉素联合作用对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的抗肿瘤效应

目的 观察西乐葆和雷帕霉素联合作用对于人乳腺癌MDA-MB-231细胞的抗肿瘤效应.方法 不同浓度的西乐葆(20、40、60、80 μmol/L)、雷帕霉素(1、10、100、1000 nmoVL)单独及60μmol/L西乐葆和100 nmol/L雷帕霉素两者联合作用对MDA-MB-231细胞生长的影响通过噻唑蓝(MTT)比色法检测.对细胞周期和凋亡的影响使用流式细胞仪进行分析.蛋白印迹实验检测HER2和HER3的表达情况及磷酸化Akt(473)水平.结果 西乐葆、雷帕霉素对于MDA-MB-231细胞生长抑制具有浓度和时间依赖性.60 μmol/L西乐葆和100 nmol/L雷帕霉素联合应用细胞生长抑制率及凋亡率为[(88.0±8.0)%,(32.5±3.0)%],与两者单独应用细胞生长抑制率及凋亡率[(52.0±5.0)%,(12.6±2.0)%;(54.0±6.0)%,(7.2±2.0)%]比较差异有统计学意义(P<0.01).联合应用对MDA-MB-231细胞抗肿瘤效应与降低细胞HER2和HER3的表达及磷酸化Akt(473)水平有关.结论 西乐葆和雷帕霉素联合能增强对人乳腺癌DA-MB-231细胞的抗肿瘤效应,对于HER2、HER3阳性乳腺癌具有潜在的临床应用价值.     

雌激素受体β1在MDA-MB-231人乳腺癌细胞中高表达对雷诺昔芬抗肿瘤作用的影响

目的探究雷诺昔芬（RAL）对乳腺癌中过表达雌激素受体（ER）β1的MDA-MB-231细胞的抑制作用。 方法用含ERβ1基因的HIV慢病毒转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,获得稳定表达ERβ1的乳腺癌细胞株。采用RT-PCR法检测转染细胞中ERβ1 mRNA的表达水平,Western blotting法检测细胞中ERβ1蛋白的表达水平;各细胞亚型分别于0、1、10 μmol/L的RAL共培养48 h,观察RAL对ERβ1高表达细胞株及对照细胞株治疗作用的差异。 结果HIV慢病毒转染后细胞绿色荧光表达效率达到90%以上;RT-PCR检测显示阳性转染组MDA-MB-231/ERβ1细胞中ERβ1 mRNA水平较阴性转染组提高了12.9倍（P<0.05）;阳性转染组细胞中ERβ1蛋白水平也相应提高;细胞实验表明高浓度（10 μmol/L）的RAL对MDA-MB-231细胞有明显的增殖抑制作用,特别是对ERβ1高表达细胞株的抑制作用更加明显（F=9.273,P=0.015）。 结论在乳腺癌MDA-MB-231细胞中,ERβ1高表达可以使细胞对RAL更加敏感。     

Aurora激酶抑制剂对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察Aurora激酶抑制剂VX-680对人乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖和凋亡的影响.方法 不同浓度的VX-680处理MDA-MB-231细胞,倒置显微镜下观察细胞形态变化,用噻唑监(MTT)比色法和克隆形成实验检测乳腺癌细胞增殖,碘化丙锭(PI)单染法检测细胞周期,免疫荧光观察核和纺锤体形态变化,免疫印迹法检测AuroraA/B蛋白、组蛋白和凋亡相关蛋白表达,Yo-Pro-1荧光染色观察细胞凋亡形态学变化.结果 VX-680显著抑制MDA-MB-231增殖,24、48 h半数抑制浓度( IC50)分别为(2.362±0.599)、(0.102±0.556) μmol/L;经药物作用24h后,贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落;克隆形成率南( 93.00 ±0.03)％降至(0.01±0.01)％,G0/G1期细胞由(51.27±0.75)％降至(5.87±0.49)％,G2/M期细胞由(17.67±1.25)％升高至(91.93±1.96)％,荧光染料法显示凋亡细胞数由(4.33±0.03)％增高至(44.00±0.04)％,实验组与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);细胞核与纺锤体结构紊乱;免疫印迹检测提示磷酸化AuroraA/B、磷酸化Histone H3表达水平降低,Caspase-3和PARP被剪切.结论 VX-680抑制乳腺癌细胞MDA-MB231增殖、诱导凋亡呈剂量依赖性.     

吗啡对胃癌细胞Survivin和Caspase-9表达的影响

目的 观察吗啡对人胃癌MGC-803细胞Survivin和Caspase-9基因表达的影响.方法 胃癌MGC-803细胞分为两组:对照组和吗啡组.对照组不加任何药物,吗啡组将吗啡加入细胞培养液中使吗啡终质量浓度为0.1 μmol/L.孵育24h后应用流式细胞仪检测细胞凋亡,并应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术检测胃癌MGC-803细胞中Survivin和Caspase-9基因mRNA和蛋白的表达.结果 吗啡组胃癌细胞凋亡率为(17.20±2.95)％,明显高于对照组的凋亡率(11.40±2.86)％(P＜0.05);RT-PCR和Western blot结果显示,吗啡组胃癌细胞中Survivin mRNA和蛋白表达降低,而Caspase-9 mRNA和蛋白表达增高(P＜0.05).结论 0.1μmol/L吗啡通过抑制Survivin的表达、增强Caspase-9的活性而促进胃癌细胞的凋亡.     

IGF-1调控乳腺癌VEGF-C表达的实验研究

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)对乳腺癌MDA-MB-231细胞株的血管内皮生长因子-C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)表达的调控及其相关信号传导通路。方法:应用实时定量PCR和Western印迹技术检测IGF-1刺激前后目的基因VEGF-C mRNA及其蛋白在乳腺癌细胞中表达的变化,检测细胞内相关信号传导分子Akt、ERK1/2蛋白及其磷酸化表达改变。结果:IGF-1显著促进乳腺癌细胞株的VEGF-C表达(P0.05);VEGF-C表达与IGF-1间呈浓度依赖关系;在IGF-1作用下,p-Akt及p-ERK1/2表达显著增加(P0.05)。结论:IGF-1能显著促进乳腺癌MDA-MB-231细胞株的VEGF-C表达,信号传导分子p-Akt与p-ERK1/2可能在其中起着重要的介导作用。