产前应用地塞米松和沐舒坦对胎鼠及仔鼠肺组织Toll样受体4表达影响的比较

目的 比较产前单次应用小剂量地塞米松与联合应用地塞米松加盐酸氨溴索(沐舒坦)对胎鼠及仔鼠肺Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)基因及蛋白表达的影响. 方法 54只SD孕鼠随机分为3组:地塞米松组(干预组1)、地塞米松加沐舒坦组(干预组2)和生理盐水对照组.妊娠17 d,腹腔注射给药,干预组1予地塞米松0.2 mg/kg,干预组2予地塞米松0.2 mg/kg加沐舒坦100 mg/kg,对照组予等体积生理盐水.分别在妊娠19d及生后3、7d取胎(仔)鼠肺组织,通过逆转录聚合酶链反应、免疫组织化学和蛋白质免疫印迹技术检测各组胎(仔)肺组织中TLR4基因转录水平及蛋白表达差异.统计学方法 采用方差分析和独立样本t检验. 结果 (1)孕19 d,2个干预组分别与对照组相比,TLR4 mRNA在胎鼠肺组织中的表达均明显增加(对照组:0.26±0.18,干预组1:0.39±0.21,t=5.866,P＜0.05;对照组:0.27±0.22,干预组2:0.46±0.13,t=9.572,P＜0.01).生后3d和7d干预组2与对照组相比,TLR4 mRNA在仔鼠肺组织中的表达均明显增加(生后3 d:0.59±0.23与0.47±0.24,t=2.295,P＜0.05;生后7 d:0.52±0.12与0.35±0.17,t=4.219,P＜0.05),但干预组1与对照组比较,差异无统计学意义(生后3 d:0.45±0.22与0.44±0.14,t=0.128,P＞0.05;生后7 d:0.40±0.16与0.36±0.12,t=1.365,P＞0.05).(2)免疫组织化学:孕19 d,2个干预组分别与对照组相比,TLR4蛋白表达量在胎鼠肺组织中的表达均明显增加(对照组:0.20±0.29,干预组1:0.35±0.32,t=7.179,P＜0.05;对照组:0.20±0.29,干预组2:0.39±0.25,t=10.764,P＜0.01).生后3d和7d干预组2与对照组相比,TLR4蛋白表达量在仔鼠肺组织中的表达均明显增加(生后3 d:0.55±0.32与0.37±0.18,t=7.121,P＜0.05;生后7d:0.41±0.29与0.25±0.24,t=6.355,P＜0.05),但干预组1与对照组比较,差异无统计学意义(生后3 d:0.40±0.21与0.37±0.18,t=0.683,P＞0.05;生后7 d:0.28±0.31与0.25±0.24,t=0.462,P＞0.05).免疫印迹法:孕19 d,2个干预组分别与对照组相比,TLR4蛋白表达量在胎鼠肺组织中的表达均明显增加(对照组:0.15±0.12,干预组1:0.27±0.20,t=7.835,P＜0.05;对照组:0.16±0.18,干预组2:0.34±0.16,t=10.470,P＜0.01).生后3d和7d干预组2与对照组相比,TLR4蛋白表达量在仔鼠肺组织中的表达均明显增加(生后3 d:0.37±0.20与0.25±0.22,t=6.379,P＜0.05;生后7 d:0.35±0.15与0.24±0.13,t=5.152,P＜0.05),但干预组1与对照组比较,差异无统计学意义(生后3 d:0.32±0.26与0.25±0.16,t=1.167,P＞0.05;生后7 d:0.29±0.19与0.24±0.10,t=1.248,P＞0.05). 结论 小剂量地塞米松可能参与调控大鼠胎肺中TLR4表达的上调,这可能是糖皮质激素促胎肺成熟的重要机制之一;小剂量地塞米松联合沐舒坦产前应用可能不仅参与调控大鼠胎肺组织中TLR4表达的上调,也上调生后大鼠肺中TLR4的表达.     

单独使用沐舒坦对大鼠胎肺表面活性物质及胎肺形态发育的影响

目的研究单独使用沐舒坦对大鼠胎肺表面活性物质及胎肺形态发育的影响。方法选择健康清洁级妊娠的SD大鼠18只分为3组,沐舒坦治疗组、地塞米松治疗组和对照组各6只。各组大鼠于妊娠第16、17、18天尾静脉分别注射沐舒坦75mg／kg(按成人15mg／kg计算),地塞米松0．8mg／kg(按成人0．2mg／kg计算),生理盐水2ml／只。于妊娠第19天剖宫取出胎肺,通过光镜图像分析和电镜技术观察胎肺的形态结构,并测定胎肺的磷脂含量。结果在光镜下,沐舒坦和地塞米松治疗组的肺泡扩张比对照组明显,肺泡腔结构大且较规则;呼吸膜周径比对照组大;肺泡间质比对照组薄(P<0．01),但沐舒坦组与地塞米松组之间无差异(P>0．05)。电镜下,两个治疗组的板层小体数量明显多于对照组,且板层小体深染、致密。而对照组肺内难见板层小体,胞浆内糖原沉积却非常丰富。此外,沐舒坦治疗组肺磷脂含量为(0．72±0．06)mmol／g湿肺,地塞米松治疗组为(0．73±0．19)mmol／g湿肺,对照组为(0．62±0．09)mmol／g湿肺,沐舒坦、地塞米松治疗组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0．01),沐舒坦治疗组与地塞米松治疗组两者之间无统计学差异(P>0．05)。结论单独使用沐舒坦能促进胎肺发育,效果类似于地塞米松。沐舒坦可能成为临床上用于产前促胎肺成熟的一种更好的选择。     

妊娠期肝内胆汁淤积症对胎鼠肺脏形态的影响

目的 探讨孕鼠发生肝内胆汁淤积症(ICP)时对胎鼠肺脏形态学的影响.方法 将妊娠15 d的20只SD孕鼠随机分为实验组和对照组,每组10只.实验组孕鼠皮下注射17α-乙炔雌二醇和孕酮,连续5 d,成功建立ICP大鼠模型;对照组孕鼠皮下注射精制植物油,连续5 d.分别测定两组孕鼠模型建立前、后血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆汁酸(TBA)的水平.于妊娠第21天处死孕鼠,取出孕鼠肝脏组织;处死孕鼠后立即行剖宫取胎术,对取出的胎鼠肺组织和孕鼠肝脏组织进行光镜和电镜的病理学检查.结果 (1)生化指标:模型建立前,实验组孕鼠血中ALT、AST及TBA水平分别为(55±15)U/L、(146±16)U/L及(13±4)μmol/L;对照组分别为(49±12)U/L、(145±20)U/L及(14±4)μmol/L,两组比较,差异无统计学意义(P>0.05).模型建立后(于妊娠第21天断颈处死孕鼠),实验组孕鼠血中ALT、AST及TBA水平分别为(94±12)U/L、(245±26)U/L及(44±16)μmol/L;对照组分别为(59±17)U/L、(163±27)U/L及(17±3)μmol/L,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05).(2)孕鼠肝脏病理学检查:大体所见,实验组孕鼠肝脏边缘钝厚,色泽灰暗;对照组孕鼠肝脏边缘锐利,色泽红润.光镜下所见,实验组孕鼠中有部分肝细胞肿胀变性,胞质疏松化,肝血窦受压变窄,部分胆管扩张,偶见肝细胞坏死;对照组孕鼠则肝细胞形态及肝小叶结构均正常.(3)胎鼠肺脏组织学检查:实验组胎鼠肺脏色泽灰暗,对照组胎鼠肺脏外观红润.光镜下所见,实验组胎鼠肺组织已发育成熟,但肺间质毛细血管明显扩张、充血,大部分肺泡间隔增宽,肺泡内少量炎性渗出物,灶状肺泡内出血.电镜下所见,肺泡Ⅱ型细胞微绒毛减少,线粒体空泡变性,部分细胞质崩解,板层小体排空增多;对照组为正常肺组织病理表现,肺组织结构清晰,肺泡壁薄,肺泡腔内偶见巨噬细胞,未见炎性细胞浸润.结论 联合应用雌、孕激素能够有效地建立ICP孕鼠模型,且ICP孕鼠的高胆汁酸血症对胎鼠肺组织有明显的毒性损伤作用,导致肺组织发生严重的病理改变.     

孕鼠血清高胆酸水平对胎鼠大脑组织形态的影响

目的 探讨孕鼠血清高胆酸水平对胎鼠大脑组织形态的影响.方法将30只清洁级成年SD孕鼠随机分为A、B、C 3组,每组10只.在妊娠第13～20天,A组孕鼠每天1次腹腔注射纯胆酸5.5 mg·kg-1·d-1(高胆酸);B组孕鼠每天1次腹腔注射纯胆酸1.4 mg·kg-1·d-1(低胆酸);C组同步注射等量生理盐水.妊娠第21天剖腹取胎,测定胎鼠体重及记录死亡率.测定孕鼠和胎鼠血清总胆酸水平,采用酶联免疫吸附试验测定血神经元特异烯醇化酶(NSE)水平.同时,胎鼠断头取脑,采用光镜和电镜观察胎鼠大脑组织的病理改变.结果 (1)3组孕鼠及胎鼠血清胆酸水平分别为:A组(22.3±8.1)μmol/L,(28.8±8.1)μmol/L;B组(9.8±3.6)μmol/L,(9.3±3.5)μmol/L;C组(3.6±1.8)μmol/L,(4.0±1.2)μmol/L.3组间相互比较,差异有统计学意义(P＜0.01).孕鼠血清总胆酸水平与胎鼠血清总胆酸水平呈正相关关系(r=0.875,P＜0.01).(2)胎鼠死亡率在A、B、C组中分别是30.1%,16.9%和7.1%,3组间相互比较,差异有统计学意义(P＜0.05).(3)A、B、C组胎鼠血清NSE水平分别为(31.9±13.1),(13.9±5.9)和(9.3±3.9)ng/L,A组明显高于B组及C组(P＜0.01);B组与C组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).胎鼠血清NSE水平与总胆酸水平呈正相关(r=0.758,P＜0.01).(4)胎鼠大脑皮层组织光镜下病理改变:A、B组胎鼠均表现为不同程度的大脑皮层组织层次紊乱,神经元变性坏死,密度降低,胞核固缩深染.胎鼠神经元变性面积积分在A、B、C组中分别是(1.4±0.6),(1.5±0.7)和(0.7±0.3),A组和B组明显高于C组(P＜0.01);A组与B组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).胎鼠神经元变性面积积分与胎鼠血清NSE水平的r为0.282(P＞0.05).胎鼠神经元坏死面积积分在A、B、C组中分别是(1.8±0.7),(0.9±0.4)和(0.6±0.3),A组明显高于B组和C组(P＜0.05);B组与C组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).胎鼠神经元坏死面积积分与胎鼠血清NSE水平呈正相关关系(r=0.798,P＜0.01).(5)胎鼠神经细胞透射电镜下病理改变:A、B组胎鼠均表现为不同程度的神经细胞核膜双层结构模糊,核固缩及核仁消失,染色质浓缩;内质网和线粒体数目减少,残留线粒体肿胀破坏,嵴空化消失.胎鼠神经细胞内线粒体数密度(Nv)在A、B、C组中分别是(21.9±9.0),(45.5±13.1)和(36.1±12.1)μm-3.A组明显低于B组和C组(P＜0.01);B组与C组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).胎鼠神经细胞内线粒体平均体积((V))在A、B、C组中分别是(7.0±1.8),(5.7±1.6)和(3.2±1.2)×10-4μm3.A组和B组明显高于C组(P＜0.01);A组与B组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 孕鼠血清中胆酸可使胎鼠脑组织出现明显的病理改变,低水平胆酸主要导致神经细胞变性和线粒体体积增大,而高水平胆酸主要导致神经细胞坏死和线粒体数目减少.胎鼠血清NSE水平与总胆酸水平呈正相关关系.     

产前应用地塞米松对早产仔鼠脑发育的影响

目的 探讨产前孕鼠使用地塞米松不同次数对早产仔鼠脑发育的影响. 方法 孕SD大鼠分为产前地塞米松3剂组(3只):于妊娠第16、17、18天给予地塞米松0.8 mg/(kg·d)生理盐水稀释至4 ml腹腔注射;地塞米松1剂组(3只):于妊娠第16,17天腹腔注射4 ml生理盐水,第18天腹腔注射等体积的地塞米松0.8 mg/(kg·d);对照组(3只):于妊娠第16、17、18天各腹腔注射生理盐水4 ml.孕19 d处死大鼠,取仔鼠称体重及脑重,免疫组织化学法检测脑组织特异性烯醇化酶(NSE)表达,电镜观察脑超微结构.组间差异比较采用ANOVA. 结果 (1)地塞米松3剂组体重、脑重、脑重/体重分别为(1.543±0.052)g、(88.80±7.12)mg和(5.75±0.38)0A,1剂组分别为(1.584±0.035)g、(98.21±3.71)mg和(6.20±0.26)%,均低于对照组[(1.696±0.076)g、(111.53±6.29)mg和(6.59±0.48)%](P<0.01或P<0.05);且地塞米松3剂组低于1剂组(P<0.01或P<0.05).(2)地塞米松3剂组脑皮质及海马区NSE表达强度分别为0.223±0.054和0.192±0.054,1剂组分别为0.381±0.041和0.359±0.046,均低于对照组(0.590±0.064和0.529±0.068)(P均<0.01).(3)地塞米松组早产仔鼠脑超微结构可见神经元核膜断裂、线粒体空泡变性、核仁消失、神经纤维丝断裂. 结论 产前使用地塞米松可损伤早产仔鼠脑发育,且多次使用比单次使用对脑组织的损伤更大.     

脂氧素受体激动剂5(S),6(R),7-三羟基庚酸甲酯对地塞米松所致小鼠胎儿生长受限的保护作用及可能机制

目的 探讨5(S),6(R),7-三羟基庚酸甲酯[5(S),6(R),7-trihydroxyheptanoic acid methyl ester,BML-111]对地塞米松所致小鼠胎儿生长受限的影响及可能机制. 方法 60只清洁级ICR雌性小鼠受孕后随机分为对照组、地塞米松组和BML-111组.地塞米松组孕鼠妊娠第9天开始皮下注射地塞米松(5 mg/kg),2h后皮下注射生理盐水(1 mg/kg) ;BML-111组孕鼠妊娠第9天开始皮下注射地塞米松,2h后腹腔注射BML-111(1 mg/kg);对照组孕鼠相应时间皮下注射生理盐水(1 mg/kg).均为每天1次,连续6d.妊娠第18天眼球取血后处死孕鼠,取胎盘和子宫组织,免疫组织化学方法检测胎盘组织11β-羟基类固醇脱氢酶2(11β-hydroxysteroid dehydrogenase 2,11β-HSD2)蛋白表达;逆转录聚合酶链反应技术检测胎盘组织11β-HSD2、白细胞介素- 1β(in terleukin-1β,IL-1β)及子宫组织脂氧素A4受体——甲酸基肽受体3(formyl peptide receptor 3,FPR3) mRNA的表达;酶联免疫吸附试验检测孕鼠血清脂氧素A4水平.组间差异比较采用单因素方差分析及两两检验.结果 地塞米松组胎鼠平均体重为(0.823±0.054)g,低于对照组[(1.103±0.218)g]及BML-111组[(0.992±0.207)g],差异均有统计学意义(t分别为-4.108和-2.890,P均＜0.05).免疫组织化学方法检测显示,11β-HSD2表达于绒毛部位合体滋养层细胞胞质内,地塞米松组11β-HSD2蛋白表达强度较对照组及BML-111组低(0.030±0.019与0.058±0.015和0.049±0.025),差异均有统计学意义(t分别为-3.107和-2.211,P均＜0.05).地塞米松组11β-HSD2 mRNA也较对照组及BML-111组低,分别为0.457±0.062、0.943±0.057和0.698±0.071,差异有统计学意义(t分别为-9.418和-4.617,P均＜0.05).地塞米松组IL-1β mRNA(0.543±0.103)介于对照组(0.710±0.085)及BML-111组(0.229±0.031)之间,差异有统计学意义(t分别为-3.736和7.025,P均＜0.05).地塞米松组FPR3 mRNA(0.323±0.019)较对照组(0.857±0.057)及BML-111组(0.499±0.050)低,差异有统计学意义(t分别为-14.630和-4.822,P均＜0.05).地塞米松组孕鼠血清脂氧素A4浓度[(64.463±22.144)pg/ml]低于对照组[(101.610±24.916)pg/ml],差异有统计学意义(t=3.152,P＜0.05). 结论 孕鼠过早过多接触地塞米松可导致胎儿生长受限.BML-111可能通过调节11β-HSD2的表达,从而改善糖皮质激素在孕鼠体内的代谢而对地塞米松所致胎儿生长受限起保护作用.     

妊娠合并心脏病患者孕晚期左心室结构及功能与基质金属蛋白酶1及其组织抑制物1水平变化的相关性

目的 探讨妊娠合并心脏病患者左心室结构及功能与血清基质金属蛋白酶1(MMP-1)及其组织抑制物1(TIMP-1)水平的相关性,评价MMP-1及TIMP-1在妊娠合并心脏病患者心脏重新构建过程中的临床价值.方法 收集2007年10月至2008年7月上海交通大学医学院附属仁济医院产科收治的孕晚期妊娠合并心脏病孕妇58例,根据左心室肥大和肺动脉高压情况分为:A组:有心慌、胸闷等临床症状,但无左心室肥大者17例;B组:有心慌、胸闷等临床症状及左心室肥大,但无肺动脉高压者15例;C组:有心慌、胸闷等临床症状及左心室肥大,且有肺动脉高压者26例,其中C组患者根据肺动脉压情况又分为轻度[肺动脉压30～49 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)]11例,中度(肺动脉压50-79 mm Hg)9例,重度(肺动脉压≥80 mm Hg)6例.另选同期正常妊娠妇女15例作为对照组.采用多普勒彩色超声心动仪分别测定各组孕妇妊娠晚期的左心室结构和功能指标,包括左心窒重量指数(LVMI)、舒张未期内径(LVEDd)、左心室射血分数(EF)、二尖瓣舒张早期充盈峰(E峰)、舒张晚期充盈峰(A峰)及其比值(E/A);采用酶联免疫法测定各组孕妇血清MMP-1和TIMP-1水平.结果 (1)C组孕妇LVMI为(148±7)g/m~2、LVEDd为(58.9±3.5)mm,E峰为(50±10)cm/s,明显高于对照组及A组、B组(P＜0.01);EF为(51.0±4.4)%,E/A比值为(0.6±0.3),与对照组及A组、B组比较,均显著降低(P＜0.01).(2)C组重度肺动脉高压孕妇LVMI为(150±7)g/m~2、LVEDd为(69.7±3.4)mm,均明显高于轻度及中度孕妇(P＜0.01),A峰[(86±8)cm/s]升高(P＜0.05);E峰[(44±9)cm/s]下降(P＜0.05),EF为(45.6±2.6)%,E/A比值为(0.52±0.17),均明显低于轻度及中度孕妇(P＜0.01).(3)C组孕妇血清MMP-1[(41±10)μg/L]及TIMP-1[(393±37)μg/L]水平与对照组、A组和B组比较,显著升高(P均＜0.01).(4)C组重度肺动脉高压孕妇血清MMP-1[(42±27)μg点/L]及TIMP-1[(411±31)μg又/L]水平较轻度孕妇显著升高(P＜0.01).(5)相关性分析显示,A组、B组及C组孕妇血清MMP-1水平与TIMP-1呈正相关(r=0.587,P＜0.01);MMP-1水平与LVMI、LVEDd呈正相关(r=0.782,P＜0.01;,=0.648,P＜0.01);与EF旱负相关(r=-0.587,P＜0.01).(6)C组重度肺动脉高压孕妇中有3例发生心功能衰竭,其血清MMP-1水平均＞50μg/L,血清TIMP-1水平均＞450μg/L.结论 (1)妊娠合并心脏病孕妇妊娠晚期存在心脏重新构建的特点,并且随着左心室肥大和肺动脉高压严重程度的加重而明显化.(2)血清MMP-1和TIMP-1水平变化与妊娠合并心脏病孕妇的左心室结构、功能及临床症状的严重程度密切相关,并对妊娠合并心脏病孕妇心功能衰竭发生可能有预测价值.     

倍他米松对双胎择期剖宫产新生儿结局作用探讨

目的:探讨倍他米松对双胎妊娠择期剖宫产新生儿结局的影响.方法:对2011年1月至2012年2月在四川省妇幼保健院临产前行择期剖宫产的72例双胎妊娠(研究组)临床资料进行回顾性分析,选择同期156例单胎妊娠作为对照组,两组患者剖宫产前均常规预防性使用倍他米松,比较两组新生儿结局.结果:两组在分娩孕周分布、平均孕周比较,差异无统计学意义(P＞0.05);但研究组新生儿体重低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).研究组与对照组新生儿Apgar评分、新生儿死亡、新生儿呼吸窘迫综合征(2.78％、2.56％)、持续性肺动脉高压(0.69％、1.28％)、脑室内出血(2.78％、3.21％)、坏死性小肠结肠炎(2.08％、1.28％)等相比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);但研究组与对照组新生儿住院率分别为36.11％和24.36％;住院时间分别为8.6±5.2天和7.2±4.8天,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:使用单胎妊娠相同剂量的倍他米松,能有效预防双胎妊娠择期剖宫产新生儿疾病,降低新生儿死亡率.     

正常妊娠分娩前后母胎凝血功能动态变化的研究

目的 探讨正常妊娠分娩前后母胎凝血功能改变及动态变化.方法 2005年6月至2006年8月在复旦大学附属妇产科医院等3家医院采用ELISA法检测40例正常妊娠妇女分娩前后母胎以及20例正常非妊娠妇女血浆中的组织因子(TF)、组织因子途径抑制物(TFPI)、血管性血友病因子(vWF)、纤维蛋白肽A(FPA)和D-二聚体水平.结果 正常妊娠妇女vWF、TFPI 和D-二聚体在分娩时、产后1d、5d均显著高于非妊娠妇女(P均＜0.01);妊娠妇女TF在分娩时(53.3±5.7)ng/L显著高于非妊娠妇女(38.7±3.0)ng/L(P＜0.05);妊娠妇女FPA在分娩时、产后1d、5d与非妊娠妇女比较差异均无统计学意义(P均＞0.05).妊娠妇女分娩后的vWF和TF呈下降趋势,TFPI和D-二聚体呈上升趋势,FPA无明显变化(P均＞0.05).胎儿脐血TF(69.0±5.9)ng/L显著高于母血(56.2 ±5.7)ng/L(P＜0.01),脐血TFPI和vWF(41.7±3.8)μg/L和(871.4±119.0)U/L显著低于母血(93.4±4.9)μg/L和(2436.0 ±155.1)U/L(P均＜0.01).脐血FPA和D-二聚体低于母血,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 正常妊娠晚期孕妇抗凝功能和纤溶活性增高,保持着高水平的动态平衡.与母体的高凝状态相比,胎儿处于更明显的高凝状态.     

缺氧对大鼠肺泡上皮细胞凋亡及缺氧诱导因子-1α表达的影响

目的 探讨氯化钴(cobalt chloride,CoCl2)化学缺氧对大鼠肺泡上皮细胞(alveolar epithelial cell,AEC)凋亡的影响及相关凋亡蛋白缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-talpha,HIF-1α)的表达变化及意义.方法 将AEC进行体外培养,分4组,每组6个样本.缺氧4 h组:选用化学缺氧物质CoCl2 500/μmol/L为作用浓度,诱导AEC缺氧,共培养4 h;缺氧24 h组:与CoCl2共培养24 h;缺氧48 h组:与CoCl2共培养48 h;常氧对照组:不做任何特殊处理.利用荧光显微镜及流式细胞仪检测细胞凋亡率,透射电子显微镜进行细胞凋亡的形态学观察,Western印记法检测HIF-1α蛋白的表达情况.结果 (1)荧光显微镜的结果 显示缺氧4、24、48 h组细胞凋亡率分别为(5.83±0.76)%、(15.00±3.28)%和(51.50±3.00)%,均高于常氧对照组[(1.50±0.50)%](P＜0.05);(2)流式细胞仪的结果 与荧光显微镜的结果一致;(3)透射电子显微镜可以观察到AEC凋亡的形态学改变,缺氧24 h显著;(4)缺氧4、24、48 h组HIF-1α蛋白的表达分别为0.69±0.035、1.02±0.044和0.71±0.046,均高于常氧对照组(0.21±0.026)(P＜0.01);(5)各组HIF-1α蛋白变化与荧光显微镜及流式细胞仪检测的细胞凋亡率变化均呈正相关(r=0.484,P=0.016;r=0.713,P=0.009).结论 缺氧对大鼠AEC的生存有抑制作用,这种抑制作用与缺氧引起的细胞凋亡有关;HIF-1α可能参与了缺氧诱导AEC凋亡的发生,而AEC凋亡可能又参与了缺氧肺损伤的发病.     

大气颗粒物暴露对小鼠妊娠和胚胎发育的影响

目的 探讨大气颗粒物(PM)亚急性暴露对小鼠妊娠和胚胎发育的影响.方法选择雌、雄小鼠各40只按1∶1合笼,将妊娠的雌鼠随机分为对照(A组)、小剂量PM暴露(B组)、中剂量PM暴露(C组)、大剂量PM暴露(D组)、超大剂量PM暴露(E组),每组8～11只.从妊娠0～19 d分别向A组小鼠咽后壁接种磷酸盐缓冲液,向B、C、D、E组小鼠咽后壁接种PM标准品SRM1649a混悬液(浓度分别为0.09、0.52、1.85、69.2μg/μl).于自动分娩发生时剖宫取胎,观察孕鼠体质量、妊娠天数、仔鼠宫内存活及生长情况和肝、肺组织的病理改变,计算仔鼠肺及肝脏体系数,检测仔鼠肺CYP1A1、肝CYP1A2蛋白及mRNA的表达.结果 (1)各组孕鼠均未出现自然死亡.各组孕鼠妊娠1、7 d时体质量比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);妊娠至14、18 d时,E组孕鼠体质量[分别为(41.8±5.8)及(48.9±8.9)g]明显低于A组[分别为(45.9±1.8)及(56.2±4.9)g],差异均有统计学意义(P＜0.05).E组孕鼠妊娠天数[(19.3±1.3)d]也明显低于A组[(20.5±0.7)d],差异有统计学意义(P＜0.05);A、B、C、D组孕鼠间妊娠天数分别比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).各组仔鼠肺体系数及肝体系数比较,E组孕鼠[(1.21±0.18)及(4.68±0.21)%]高于A、B、C及D组,且差异均有统计学意义(P＜0.05).(2)E组仔鼠的死亡率(23.0%)高于A(0.8%)、B(0.9%)、C(1.7%)及D组(3.7%),差异均有统计学意义(P＜0.05);A、B、C、D组仔鼠的死亡率依次升高,但差异无统计学意义(P＞0.05).(3)E组仔鼠肝、肺病理改变显著,肝脏特征性病理改变包括肝组织结构紊乱、肝细胞浊肿、胞质淡染;多数肝细胞胞质内出现脂肪变性,部分肝细胞固缩,胞质深染;肝组织内见炎细胞浸润和点灶状坏死.肺特征性病理改变包括肺细支气管管腔变窄、黏膜下层小血管充血;间质、肺泡水肿,肺泡间隔增厚,泡内、细支气管周中性粒细胞及淋巴细胞浸润.C、D组上述病变程度次之,A、B组正常或变化轻微.(4)E组仔鼠肺CYP1A1和肝CYP1A2蛋白表达水平(分别为1.20±0.40及2.55±0.89)高于A组(0.77±0.36及2.08±0.31),两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).肺CYP1A1 mRNA表达,C(0.36±0.12)、D(0.41±0.08)、E组(0.43±0.11)高于A组(0.21±0.10),D、E组高于B组(0.28±0.10),分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).肝CYP1A2 mRNA表达,C(0.37±0.13)、D(0.36±0.14)、E组(0.43±0.16)高于A组(0.21±0.03),E组高于B组(0.24±0.11),分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 PM具有胚胎毒性作用.超大剂量PM亚急性暴露可导致小鼠的不良妊娠结局;中、高剂量PM暴露可导致癌相关基因CYP1 A1和CYP1 A2表达的上调,可能对个体的后期发育有潜在的不良效应.

Abstract：

Objective To investigate subacute exposure of airborne particulate matter (PM) on pregnancy and fetal development in female mice. Methods Forty female and forty male ICR adult mice group (A), small (B) , middle (C) , large (D) or overdose (E) PM challenge groups (n = 8 - 11), and were administered with 30 μl of phosphate buffered solution (A) or resuspended standard PM SRM 1649a at 0.09 (B), 0.52 (C), 1.85 (D) or 69.2 (E) μg/μl, once per trid from d 0 till d 19 of pregnancy via instillation onto the base of the tongue. Fetal mice were harvested by cesarean section at the time when spontaneous delivery occurred. Body weight of the pregnant mice, gestational days, intrauterine survival and growth, hepatic and pneumonic histopathological changes of the fetal mice were investigated. Lung/body and liver/body weight ratios were calculated. Expressions of mRNA and protein of CYP1A1 in the fetal lung and CYP1 A2 in the fetal liver were assayed. Results (1) All of the pregnant mice survived pregnancy throughout the entire experiment. Body weight of the pregnant mice was not significantly different among all the groups at gestational d 1 and 7 (P ＞ 0.05), but significantly lower in group E [(41.8 ± 5.8) and (48.9 ± 8.9) g] than in group A [(45.9 ± 1.8) and (56.2 ± 4.9) g] at gestational d 14 and 18 (P ＜0.05). The gestational days were significantly decreased in group E [(19.3 ± 1.3) d] when compared with group A [(20.5 ± 0.7) d; P ＜ 0.05] and were not significantly different among groups A, B, C and D (P ＞ 0.05). Lung/body and liver/body weight ratios of the fetal mice were significantly increased in group E [(1.21 ±0.18) and (4.68 ±0.21)%] as compared with groups A, B, C and D (P＜0.05). (2)Mortality rates of the fetuses were significantly higher in group E (23.0%) than in groups A (0.8%), B (0.9%), C (1.7%) and D (3.7%) (P ＜ 0.05), but were not significantly different among groups A,B, C and D (P ＞ 0.05) despite of an increasing tendency. (3) Pathological changes in the liver and lung of the fetuses were conspicuous in group E. The fetal liver injury was histopathologically evidenced by deranged tissue structure, degenerated parenchyma of hepatic cells, and mildly stained cytoplasm. Adipose degeneration was represented by clear-boundary intracytoplasmic vacuoles in most of the liver cells, and cell pyknosis with heavily stained cytoplasm was observed in some of the liver cells. Inflammatory cell infiltration and focal necrosis were occasionally found in the hepatic tissue. The fetal lung exhibited bronchiole with narrow lumina, vascular engorgement in the submucosal layer, interstitial and alveolar edema, thickened alveolar septum, granulocyte and lymphocyte infiltrations within the pulmonary alveoli and around the bronchioles. The above pathological changes were lesser in groups C and D, and were not or least found in groups A and B. (4) Protein expressions of CYP1A1 in the fetal lung and CYP1A2 in the fetal liver were significantly increased in group E (1.20 ± 0.40 and 2.55 ± 0.89) when compared with group A (0.77 ±0.36 and 2.08 ±0.31) (P ＜ 0.05). mRNA expressions of CYP1A1 in the fetal lung were significantly increased in groups C (0.36 ±0.12), D (0.41 ±0.08) and E (0.43 ±0.11) compared with group A (0.21 ±0.10), and significantly increased in groups D and E compared with group B (0.28 ±0.10,P＜0.05). mRNA expressions of CYP1 A2 in the fetal liver were significantly increased in groups C (0.37 ±0.13), D (0.36 ±0.14) and E (0.43 ±0.16) compared with group A (0.21 ±0.03), and significantly increased in group E compared with group B (0.24± 0.11, P ＜ 0.05). Conclusions PM elicited embryotoxigenicity and resulted in adverse pregnancy outcomes in mice by intrauterine exposure of overdose PM. The expressions of cancer-related genes CYP1A1 and CYP1A2 were up-regulated in organs after the middle- and large-dose subacute exposure of PM, which may have a potential role on the future development.     

宫内高血糖环境及生后早期过度喂养对子代大鼠代谢的远期影响

目的 通过建立大鼠孕期高糖模型,观察出生后早期过度喂养对子代远期代谢的影响.方法 成年Wistar大鼠妊娠第5天,给予链脲霉素50 mg/kg腹腔内注射,建立高糖环境模型.将子代大鼠分为3组:宫内血糖环境正常组(CP组):仔鼠8只;宫内高血糖环境模型鼠出生仔鼠,且每只糖尿病母鼠哺乳喂养8只仔鼠(DP-1组);宫内高血糖环境,每只糖尿病母鼠哺乳期喂养4只仔鼠(DP-2组).观察出生后3～10周3组仔鼠体重变化,仔鼠10周龄时行口服葡萄糖耐量实验(OGTT),11周龄行高胰岛素一正葡萄糖钳夹实验,并采用酶联免疫吸附法测量胰岛素水平评价其胰岛功能.结果 DP-1和DP-2组仔鼠出生后3～10周的体重增长率分别为(6.68±1.70)%和(6.03±1.85)%,均显著高于CP组[(4.74±0.93)%,P<0.05].3组仔鼠10周龄OGTT结果差异均无统计学意义(P>0.05);DP-1组基础胰岛素水平[(0.76±0.37)μg/L]低于CP组及DP-2组[(1.13±0.25)μg/L和(1.06±0.14)μg/L,P<0.05];DP-1组平均葡萄糖输注速率高于DP-2组[(4.93±1.11)U/(kg·h)与(3.72±1.07)U/(kg·h),P<0.05].结论 宫内高血糖环境暴露下的子代大鼠出生后3～10周体重增长过快,出生后早期过度喂养会加速胰岛素敏感性的下降.     

复方当归注射液可减轻大剂量柴油机尾气颗粒物对雌性小鼠卵和卵裂球的损伤

目的 观察雌性小鼠亚急性接触柴油机尾气颗粒物(diesel exhaust particles,DEP)致卵和卵裂球损伤以及复方当归注射液对损伤的干预效果.方法 210只21 d ICR雌鼠随机分为对照组(A组)、DEP组(B组)、DEP+小剂量组(C组)、DEP+中剂量组(D组)和DEP+大剂量组(E组)(各42只),分别向小鼠咽后壁接种12.0 μg/μl DEP混悬液(B～E组)或载液(PBS,A组)各30μl,每3 d重复接种1次,共4次.末次DEP接触后3 d处死动物.C、D、E组首次接种日至处死前1 d,每日分别经腹腔给予复方当归注射液相当于生药75、150和300 mg各1次,连续给药12次.观察指标包括小鼠一般情况、体重;卵巢重量、卵巢重量/体重比值、卵巢组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)和丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量;卵母细胞的存活率、胚泡破裂比率、第一极体释放率、受精率、线粒体DNA含量和超微结构变化.结果 (1)各组小鼠体重差异无统计学意义(P＞0.05).卵巢重量、卵巢重量/体重比值、卵巢SOD活性和GSH含量B组分别为(1.5±0.6)mg、(7.2±2.5)×10-5、(192.10±23.67)nU/mg prot和(262.40±31.60)nmol/mg prot,C组分别为(1.7±0.2)mg、(8.9±0.6)×10-5、(198.92±24.27)nU/rng prot和(271.66±14.58)nmol/mg prot,D组分别为(2.1±0.2)mg、(9.8±1.1)×10-5、(214.37±27.19)nU/mg prot和(285.93±9.55)nmol/mg prot,低于A组,分别为(3.3±1.5)mg、(15.4±7.3)×10-5、(292.30±40.03)nU/mg prot和(367.98±24.59)nmol/mg prot(P＜0.05或＜0.01);E组分别为(3.7±1.1)mg、(18.7±5.4)×10-5、(279.10±12.63)nU/mg prot和(353.59±10.61)nmol/mg prot,显著高于B组(P＜0.01);MDA含量B、C、D组分别为(3.88±0.35)nmol/mg prot、(3.62±0.19)nmol/mg prot和(2.63±0.34)nmol/mg prot,显著高于A组的(2.18±0.44)nmol/mg prot(P＜0.05或＜0.01),D、E组[(2.35±0.37 nmol/mg prot]显著低于B组(P＜0.01).(2)观察时间B、C组卵母细胞存活率以及B、C、D组第一极体释放率和24 h体外受精率显著低于A组(P＜0.05或P＜0.01),E组显著高于B组(P＜0.05);各组胚泡破裂比率均为100%.(3)卵母细胞线粒体DNA的拷贝数对数值,与A组比较,C、D、E组显著降低(P＜0.01);与B组比较,C、D组显著降低而E组显著升高(P＜0.01).(4)A组卵母细胞结构无明显改变;B、C组卵母细胞许多细胞器退变明显,部分细胞坏死;D组细胞内较多线粒体肿胀、空泡化,E组这些变化范围及程度均减小.结论复方当归注射液对雌性小鼠亚急性接触DEP所致的卵和卵裂球损害有治疗及保护作用.     

大鼠髂内动脉灌注甲氨蝶呤时肺及其他主要脏器药物浓度的变化

目的 研究甲氨蝶呤(MTX)髂内动脉灌注时大鼠肺及其他主要脏器药物浓度的变化.方法 选择50只雌性大鼠,随机分为2组,动脉组行股动脉插管、髂内动脉灌注药物,静脉组行股静脉插管、髂内静脉灌注药物.每组分别在5个时间点取血样及组织,利用建立的高效液相色谱方法 分析药物浓度.结果 动脉组大鼠肺、卵巢和子宫的药物浓度-时间曲线下面积(AUC)分别为(3.77±0.28)、(4.40±0.40)、(9.97±0.89)μg·h-1·g-1,静脉组分别为(2.31±0.25)、(3.91±0.19)、(7.65±1.54)μg·h-1·g-1,两组分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).动脉组大鼠血浆、心脏、肾、肝和脾的AUC分别为(6.13±0.53)、(1.90±0.11)、(5.32±0.89)、(14.16±1.96)、(0.76±0.20)μg·h-1·g-1,静脉组分别为(5.79±0.71)、(1.64±0.29)、(5.15±1.69)、(14.29±3.47)、(0.76±0.13)μg·h-1·g-1,两组分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 相比较静脉给药,髂内动脉灌注给药后子宫、卵巢和肺有较高的药物浓度,髂内动脉灌注化疗町以有效地治疗妇科恶性肿瘤的肺转移.     

心肌损伤标记物在动脉导管未闭早产儿的变化和临床意义

目的 探讨早产儿动脉导管未闭(patent ductus arteriosus,PDA)对早产儿心肌的影响.方法 选择2010年5月1日至2011年1月31日入院治疗的110例胎龄28～36周的早产儿,在生后72 h和7d取血,测定血清肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)和肌酸激酶MB同工酶(creatine kinase MB isoenzyme,CK-MB)水平,并行心脏超声心动图检查.根据超声心动图结果分为PDA组(44例)和对照组(66例).PDA组患儿接受布洛芬治疗后,再次行超声心动图检查,同时2组复查相关的血清学指标.统计学方法采用t或近似t检验、x2检验、多元线性回归和Spearman秩相关检验.结果 治疗前,PDA组的血清cTnT和CK-MB均高于对照组[(0.259±0.134)μg/L与(0.083±0.054)μg/L,t=9.557,P＜0.01;(7.31±2.69)μg/L与(5.71±1.88)μg/L,t=2.588,P＜0.05].治疗成功的34例PDA患儿cTnT和CK-MB较治疗前显著降低,分别降至(0.062±0.039)μg/L和(5.34±1.50)μg/L(t分别为9.268和5.974,P＜0.05);但与对照组cTnT、CK-MB相比差异均无统计学意义(P＞0.05).治疗失败的10例PDA患儿cTnT、CK-MB水平较治疗前稍有降低[分别为(0.193±0.049)μg/L和(6.93±1.63)μg/L,t分别为1.525和0.766,P均＞0.05],但仍明显高于对照组(t分别为9.068和4.055,P＜0.05).cTnT水平与机械通气时间、PDA、肺透明膜病呈正相关,不受性别、胎龄、体重的影响;而CK-MB与性别、胎龄、体重、机械通气时间及PDA均显著相关.在PDA组,cTnT水平与动脉导管直径呈正相关;而CK-MB与各项超声心动图指标均不相关.结论 有临床表现的PDA可造成早产儿心肌损伤,cTnT和CK-MB的动态变化与PDA病情程度相平行,动态监测cTnT和CK-MB有助于PDA并发心肌损伤的早期诊断和及时干预.     

孕期口服葡萄糖耐量试验结果中血糖水平较低者的围产儿结局

目的 探讨孕期口服葡萄糖耐量试验(oral glucose tolerance test,OGTT)结果中血糖水平偏低孕妇的围产儿结局特点.方法 统计OGTT结果了解空腹、服糖后1 h、2 h、3 h的血糖百分位数分布.血糖水平小于第5百分位者为血糖水平较低组,小于第1百分位者为血糖水平极低组,比较血糖水平较低组、血糖水平极低组和血糖水平不低组孕妇的围产儿结局. 结果 空腹血糖水平与新生儿体重和身长分别呈正相关(r=0.16,P＜0.01;r=0.081,P＜0.05).空腹血糖极低组孕妇分娩的新生儿平均出生体重明显低于其余孕妇[(2817±764)g和(3439±487)g,t=3.344,P＜0.01];其小于胎龄儿分娩率亦高于血糖水平不低组(3/7和3.4%,y2=22.78,P＜0.01);其出生体重＜3000 g的新生儿分娩率明显高于其余孕妇(5/7和14.73%,P＜0.01).服糖后2h血糖水平较低组孕妇分娩的新生儿平均出生身长(49.03±1.68)cm,显著低于血糖值不低组(49.48±1.65cm,P＜0.05). 结论 OGTT结果 中血糖水平偏低的孕妇分娩的新生儿体重低、身长短、小于胎龄儿分娩率高.     

促性腺激素释放激素激动剂联合反向添加疗法治疗子宫内膜异位症的效果及安全性

目的 探讨促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)联合反向添加疗法(经皮雌激素及口服醋酸甲羟孕酮)治疗子宫内膜异位症(内异症)的疗效及安伞性.方法 选择2007年1月1日-7月31日于复旦大学附属妇产科医院住院接受治疗、经腹腔镜或开腹手术确诊的内异症患者28例,随机分为A、B两组,每组各14例.A组患者于月经周期第2天起给予戈舍瑞林3.6 mg皮下注射,每4周注射1次,共12周;B组患者在A组治疗方案基础上同时加用半水合雌二醇贴剂,每周1/2片贴于腹部皮肤,并每晚口服醋酸甲羟孕酮6 mg,共12周.比较两组患者治疗前、治疗后(疗程第12周内)及月经恢复后的血清激素及骨钙素水平、阴道脱落细胞百分比、疼痛症状视觉模拟评分(VAS)、腰椎骨密度及骨量丢失率、绝经症状严重程度(以Kupperman评分表示)等.结果 (1)两组患者治疗后的m清卵泡刺激素(FSH)及雌二醇水平,A组分别为(5.0±2.6)U/L和(29±17)pmol/L,B组分别为(3.0±1.5)U/L和(87±53)pmol/L,均分别低于治疗前水平[A组分别为(17.0±12.2)U/L和(184±194)pmol/L.,B组分别为(15.3±13.6)U/L和(281±242)pmol/L],差异均有统计学意义(P＜0.01);治疗后B组的雌二醇水平高于A组,FSH水平低于A组,差异也均有统计学意义(P＜0.01).(2)治疗后的阴道脱落细胞中,A组的底层细胞百分比[(66.2±29.0)%]高于B组[(11.8±28.0)%],中层细胞[(29.1±23.1)%]、表层细胞[(4.0±5.5)%]和伊红染色细胞百分比[(2.3±2.6)%]则分别低于B组[分别为(73.0±25.2)%、(15.2±10.9)%、(10.8±7.9)%],差异均有统计学意义(P＜0.01).(3)两组患者治疗前的疼痛症状总分及盆腔痛、痛经、性交痛评分,A组分别为(7.43±3.20)、(2.35±1.82)、(4.93±1.98)和(0.14±0.53)分,B组分别为(7.71±2.02)、(2.57±1.60)、(4.86±1.56)和(0.29±1.07)分;治疗后,两组患者的VAS总分及各项评分[A组分别为(0.14±0.36)、(0.07±0.27)、(0.07±0.27)和0分,B组分别为(0.36±0.50)、(0.29±0.47)、(0.07±0.27)和0分]均低于治疗前,差异均有统计学意义(P＜0.01);月经恢复后,两组的总分及各项评分[A组分别为(0.21±0.43)、(0.07±0.27)、(0.14±0.36)和0分,B组分别为(0.50±0.65)、(0.29±0.47)、(0.2l±0.43)和0分]也均低于治疗前,差异也均有统计学意义(P＜0.01);两组之间各项评分比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).(4)治疗前A、B两组的骨密度分别为(0.99±0.06)g/cm2和(0.99±0.10)g/cm2,治疗后A组的骨密度为(0.96±0.06)g/cm2,低于治疗前水平,差异有统计学意义(P＜0.01),B组的骨密度为(0.98±0.09)g/cm2,也低于治疗前水平,但差异无统计学意义(P=0.201);治疗前、后两组间骨密度分别比较,筹异均无统计学意义(P＞0.05).A、B两组的骨量丢失率分别为(-2.77±1.97)%和(-0.93±2.86)%,两组之间比较,差异无统计学意义(P=0.058).治疗前A、B两组外周血骨钙素水平分别为(13±3)μg/L和(13±6)μg/L,治疗后A组外周血骨钙素水平为(17±6)μg/L,高于治疗前水平,差异有统计学意义(P＜0.01),B组为(16±6)o,g/L,也高于治疗前水平,但差异无统计学意义(P=0.053);治疗前、后两组问骨钙素水平分别比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).(5)A、B两组患者治疗后的改良Kupperman评分总分分别为(15±7)分和(11±6)分,两组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).A、B两组患者中潮热出汗的发生率分别为93%(13/14)和57%(8/14),两组间比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 经皮雌激素加订服醋酸甲羟孕酮治疗内异症是一种安全有效的反向添加疗法.