嘌呤核苷磷酸化酶与系统性红斑狼疮发病的相关性研究

嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)介导嘌呤降解,异常时会影响DNA合成。本研究探讨PNP与SLE发病的相关性。检测了诊断明确的42例系统性红斑狼疮患者和48例正常对照者PBMC、12例狼疮肾炎患者肾穿样本和10例肾癌患者癌旁正常肾脏样本中PNP的表达格局,继而分析了PNP与SLE患者的临床表现。由于I型干扰素通路的异常活化在SLE发病中起重要作用,因此本研究还分析了PNP表达与干扰素积分的相关性。结果表明:与正常人相比,狼疮病人PBMC和肾脏组织中PNP表达水平均显著性降低。进一步通过干扰素积分相关性分析发现,狼疮肾炎患者肾脏组织PNP的表达水平与干扰素积分呈负相关,提示PNP可能参与I型干扰素通路的调节。本研究表明狼疮患者PNP表达异常,可能参与SLE的发病。     

BRCA1在乳腺癌细胞系中负调控miR-146a并抑制其促癌功能

目的在乳腺癌细胞系中,研究BRCA1基因对miR-146a的调控,以及miR-146a的细胞学功能。方法采用Western blot和实时定量PCR检测BRCA1基因对miR-146a的调控;利用生物信息学分析软件对BRCA1以及miR-146a的相互调控进行分析;运用MTS、克隆形成、Transwell等实验技术检测miR-146a高表达及敲降对MCF-7细胞生长增殖、侵袭迁移等能力的影响。结果该研究发现BRCA1缺失的情况下,miR-146a表达显著表达升高。通过对miR-146a启动子区分析发现BRCA1可以与miR-146a启动子区结合并调控其表达,同时miR-146a可以与BRCA1 3'UTR不完全互补结合,这提示BRCA1对miR-146a的调控是一种负反馈作用机制。该研究还发现miR-146a高表达可以促进细胞生长增殖和侵袭迁移的能力,而miR-146a敲降后却可以抑制细胞这些表型。结论在乳腺癌细胞中,BRCA1通过负调控miR-146a的表达来抑制其促癌功能。     

MicroRNA-146a通过靶向TAK1诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的:观察微小RNA-146a(miR-146a)对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及其可能的分子机制。方法:将miR-146a mimic(上调miR-146a表达)和miR-146a inhibitor(下调miR-146a表达)分别转染至人胃癌SGC-7901细胞中,同时设置miRNA无义序列转染为阴性对照组(NC组)。RT-q PCR检测转染后胃癌细胞miR-146a的表达水平;CCK-8法和流式细胞术检测miR-146a对SGC-7901胃癌细胞生长活力和凋亡的影响;RT-q PCR和Western blot法检测miR-146a上调或下调对转化生长因子β激活激酶1(TAK1)/核因子κB(NF-κB)通路的影响。结果:在SGC-7901细胞中,上调miR-146a表达显著促进细胞凋亡,而下调miR-146a表达则显著抑制细胞凋亡。与NC组相比,miR-146a mimics转染SGC-7901细胞后,TAK1的mRNA和蛋白表达均明显下降,差异均有统计学显著性(P0.05),而miR-146a inhibitors转染组TAK1的mRNA和蛋白质表达则显著增加(P0.05),提示miR-146a负调控TAK1表达。敲低TAK1促进SGC-7901细胞凋亡(P0.01),而TAK1过表达TAKI则抑制SGC-7901细胞凋亡(P0.01)。此外,过表达miR-146a和敲低TAK1均能显著上调NF-κB抑制蛋白α(IκBα)和下调B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)表达。结论:本研究结果表明miR-146a通过靶向TAK1抑制NF-κB途径,从而诱导胃癌细胞凋亡。     

Toll样受体7及I型干扰素通路在系统性红斑狼疮中的作用研究

探讨Toll样受体7(TLR7)及I型干扰素(IFN-α)通路在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用。采用实时荧光定量PCR方法检测42例SLE患者和34例正常人外周血TLR7mRNA以及4个干扰素调节基因mRNA的表达水平,同时观察TLR7mRNA的表达量与SLE疾病活动相关指标和干扰素积分(IFN score)的关系。结果,SLE患者外周血TLR7mRNA的表达水平显著增高;TLR7mRNA的表达水平与SLEDAI积分、肾脏损伤指数、抗双链DNA(dsDNA)抗体、抗RNA相关抗体水平及干扰素积分呈正相关;与补体C3、C4、白细胞数呈负相关。TLR7—IFN-α通路可能参与了SLE的病理过程。     

系统性红斑狼疮患者中miR-410 表达及其靶基因生物信息学分析

目的:检测miR-410 在系统性红斑狼疮患者(SLE)中的表达水平,运用生物信息学方法研究miR-410 及其靶基因在SLE 发生发展过程中的作用。方法:定量检测miR-410 在SLE 患者外周血单个核细胞中的表达水平,并通过miR-410序列分析,靶基因预测和Genecards 数据库分析,进一步对其靶基因进行GO 富集和KEGG Pathway 分析。结果:miR-410 在SLE 患者中表达显著降低,其核苷酸序列在多物种间呈高度保守性。受miR-410 调控且与SLE 疾病相关的潜在靶基因包括FASLG、CSF2、IFNAR2、MAPK1、PLCG2、IL4 等。GO 分析发现miR-410 的靶基因参与细胞生长增殖、程序性死亡、细胞分化、免疫系统发育等多个生物过程。KEGG Pathway 分析发现miR-410 的靶基因显著富集在肿瘤途径信号通路、细胞因子-细胞因子受体相互作用信号通路、胶质瘤信号通路、黑色素瘤信号通路、TGF-β和JAK-STAT 信号通路等。结论:miR-410 可能通过直接靶向作用其调控靶分子,影响SLE 患者体内多条信号通路的网络调控,从而参与SLE 疾病的发生和发展。     

甲状腺乳头状癌患者外周血miR-146a、miR-146b表达水平与预后的关系研究

目的 探讨甲状腺乳头状癌(papillary thyroid cancer,PTC)患者血清miR-146a、miR-146b的表达水平及其与临床病理特征、预后的关系.方法 采用前瞻性研究方法,选取2018年6月至2020年2月本院收治的PTC患者80例为研究对象,50例同期健康人群作为对照组.荧光定量PCR检测外周血中miR-146a、miR-146b的表达水平,分析PTC患者血清miR-146a、miR-146b水平与临床病理、预后的关系.结果 PTC患者血清miR-146a、miR-146b表达水平(5.18±0.04、2.59±0.13)高于正常人群(1.01±0.01、1.12±0.03)(t=23.091、8.431,P<0.001、<0.001).miR-146a、miR-146b表达与TNM分期、分化程度、淋巴结转移和组织学亚型有显著相关性(P<0.05).miR-146a低表达组患者累积生存率高于miR-146a高表达组(P=0.001);miR-146b低表达组患者累积生存率高于miR-146b高表达组(P<0.001).结论 miR-146a、miR-146b在PTC患者血清中高水平表达,与肿瘤的进展、预后不良有关.     

Toll 样受体7及Ⅰ型干扰素通路在系统性红斑狼疮中的作用研究

探讨Toll样受体7(TLR7)及Ⅰ型干扰素(IFN-α)通路在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用.采用实时荧光定量PCR方法检测42例SLE患者和34例正常人外周血TLR7mRNA以及4个干扰素调节基因mRNA的表达水平,同时观察TLR7mRNA的表达量与SLE疾病活动相关指标和干扰素积分(IFN score)的关系.结果,SLE患者外周血TLR7mRNA的表达水平显著增高;TLR7mRNA的表达水平与SLEDAI积分,肾脏损伤指数、抗双链DNA(dsDNA)抗体、抗RNA相关抗体水平及干扰素积分呈正相关;与补体C3、C4、白细胞数呈负相关.TLR7-IFN-α通路可能参与了SLE的病理过程.     

选择性自噬受体对SLE患者Ⅰ型IFN过表达调节的研究进展

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)也被称为Ⅰ型IFN特征性疾病,是一种病因不明的慢性全身性自身免疫性疾病。体内过度免疫应答和Ⅰ型IFN的过量表达为该病的主要特征。在固有免疫应答过程中,核酸感受器对于病原体及体内核酸的过度反应是导致患者体内Ⅰ型IFN异常的主要原因之一。调节体内过度免疫反应及Ⅰ型IFN的过量表达对于缓解病情有重要作用。自噬作为调控机体稳态的重要过程可以抑制Ⅰ型IFN应答。该文就选择性自噬受体三方基序蛋白21(tripartite motif 21, TRIM21)、干扰素基因刺激物(stimulator of interferon gene, STING)、 p62通过介导多种信号通路中的关键调节因子的自噬来影响Ⅰ型IFN应答展开探讨。     

MiR-146a在免疫反应中的调节作用

microRNA是一类非编码的小分子RNA,通过在转录后水平抑制蛋白的表达,在许多生理和病理进程中发挥重要作用。MiR-146a在固有免疫调节、炎症反应以及抗病毒中发挥重要作用。本文就最近对miR-146a在固有免疫、炎症应答、病毒感染和人类疾病等方面的研究进行了综述。研究显示,可能可以通过对miR-146a表达的调控来治疗一些人类疾病。     

系统性红斑狼疮患者外周血CD4~+T细胞细胞因子的检测

本文通过检测系统性红斑狼疮 (SLE )患者外周血中Th1和Th2分泌IFN γ、IL 2、IL 4细胞因子的表达情况 ,探讨Th1/Th2细胞因子水平与SLE的发病关系。采用流式细胞分析法对 4 1例SLE患者和 15例健康志愿者外周血中细胞因子(IFN γ、IL 2、IL 4 )在辅助性T细胞 (CD4 )内的表达进行检测。结果活动期SLE患者Th1细胞因子的表达率较正常人明显下降 (P <0 0 1)。SLE患者Th1细胞因子 (IFN γ、IL 2 )的表达与SLEDAI之间具有明显的负相关性 (P <0 0 5 )。活动期SLE患者Th1细胞因子的表达明显下降 ,SLE患者Th1细胞因子水平与SLEDAI之间呈负相关性     

Genetic association of miRNA-146a with systemic lupus erythematosus in Europeans through decreased expression of the gene

A recent genome-wide association study revealed a variant (rs2431697) in an intergenic region, between the pituitary tumor-transforming 1 (PTTG1) and microRNA (miR-146a) genes, associated with systemic lupus erythematosus (SLE) susceptibility. Here, we analyzed with a case-control design this variant and other candidate polymorphisms in this region together with expression analysis in order to clarify to which gene this association is related. The single-nucleotide polymorphisms (SNPs) rs2431697, rs2910164 and rs2277920 were genotyped by TaqMan assays in 1324 SLE patients and 1453 healthy controls of European ancestry. Genetic association was statistically analyzed using Unphased. Gene expression of PTTG1, the miRNAs miR-3142 and primary and mature forms of miR-146a in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were assessed by quantitative real-time PCR. Of the three variants analyzed, only rs2431697 was genetically associated with SLE in Europeans. Gene expression analysis revealed that this SNP was not associated with PTTG1 expression levels, but with the microRNA-146a, where the risk allele correlates with lower expression of the miRNA. We replicated the genetic association of rs2341697 with SLE in a case-control study in Europeans and demonstrated that the risk allele of this SNP correlates with a downregulation of the miRNA 146a, potentially important in SLE etiology.     

慢性血小板减少性紫癜患者microRNA-146a的表达及其意义

目的 研究microRNA-146a(miR-146a)在慢性免疫性血小板减少性紫癜(immune thrombocytopenic purpura,ITP)患者外周血单个核细胞(PBMC)的表达及其临床意义.方法 28例慢性ITP患者和28例健康对照者,荧光定量PCR(fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)检测PBMC中miR-146a的表达,ELISA检测血清中TNF-α、IL-2、IL-lβ和IFN-γ的表达水平;采用电转染技术将miR-146a前体(mimics)/抑制体(inhibitor)转染至ITP患者PBMC中,CCK-8法检测其对血小板诱导的细胞增殖反应的影响.结果 ITP患者PBMC的miR-146a表达较健康对照组显著降低,且与血小板计数呈正相关,与患者血浆TNF-α、IL-2和IFN-γ浓度呈负相关.转染miR-146a前体至ITP患者PBMC可抑制血小板诱导的IL-2合成以及PBMC增殖,转染miR-146a抑制体则可以促进IL-2的合成以及PBMC的增殖.结论 miR-146a参与了慢性ITP的发病机制,调控IL-2的表达,并介导了ITP患者PBMC的增殖,是慢性ITP潜在的治疗靶点.

Abstract：

Objective To investigate the increased expression of microRNA-146a(miR-146a) in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of patients with chronic immune thrombocytopenic purpura (ITP) and its clinical significance. Methods Twenty-eight patients with chronic ITP and 28 healthy controls matched with age and gender were enrolled in this study. Fluorescent quantitative PCR reaction was used to detect the relative expression of miR-146a in their PBMC. The serum concentration of TNF-α, IL-2,IL-1 β and IFN-γ were measured by ELISA. CCK-8 method was used to detect the proliferation ability of PBMC , which transfected with miR-146a mimics or inhibitor and then stimulated with platelet . Results The relative expression of miR-146a in ITP patients was higher than that of healthy controls. The increased expression of miR-146a was negatively correlated with the serum TNF-α, IL-2 and IFN-γ. The PBMC transfected with miR-146a mimics had reduced expression of IL-2 and proliferation when stimulated with platelet.In contrast, the opposite effect was observed with the miR-146a inhibitors transfection. Conclusion MiR146a was involved in the pathogenesis of chronic ITP by controlling IL-2 production and PBMC proliferation.Thus, it may be a potential therapy target for chronic ITP.     

SLE患者外周血IFN-γ及IL-4细胞因子mRNA的表达研究

为利用实时监测定量PCR技术检测细胞因子mRNA的表达 ,从mRNA水平探讨IFN γ、IL 4mRNA的变化。对初诊SLE患者外周血IFN γ、IL 4的mRNA表达进行检测 ,并同时使用LPS及PHA作刺激剂研究其对SLE患者细胞因子mRNA表达的影响。结果是PHA刺激后 ,正常组IFN γmRNA的表达明显高于SLE组 (P =0 0 2 4 ) ;LPS对正常对照的IFN γ和IL 4的mRNA表达均能明显上调 ,但SLE患者仅表现为IFN γ升高 ,IL 4升高不明显 ;未刺激组SLE患者与正常对照的比较结果显示IFN γ的表达及IFN γ/IL 4有明显降低 (P =0 0 14 ,P =0 0 33)。故SLE患者与正常对照相比 ,IFN γmRNA的表达下降 ,同时SLE患者的IFN γ、IL 4mRNA表达对LPS及PHA的反应下降。由于不同的患者受累系统不同 ,临床表现不一 ,可能T细胞的异常并不相同 ,其免疫系统紊乱的机制也不一致     

微小RNA-146a 上调cyclin D1 表达诱导大鼠血管平滑肌细胞的增殖

目的:采用基因芯片技术研究小分子RNA-146a(miR-146a)促进血管平滑肌细胞增殖的作用靶点并进行验证。方法:原代培养大鼠血管平滑肌细胞,分成mimics 组、inhibitor 组、control 组、sham 组,分别体外转染miR-146a mimics(50nmol/ L)、miR-146a inhibitor(50 nmol/ L)、miR-146a 错义链(50 nmol/ L)、PBS,Real time PCR 测定转染后miR-146a 水平,CCK8法检测转染后血管平滑肌细胞增殖情况。采用基因芯片检测inhibitor 组和control 组基因表达谱,通过生物信息学技术筛选出差异基因和调控的信号通路。对筛选出来的信号通路用Real time PCR 和Western blot 进行验证。结果:转染48 h后,inhibitor 组血管平滑肌细胞的miR-146a 水平明显低于control 组和sham 组(P<0.01),inhibitor 组血管平滑肌细胞的OD 值明显低于control 组、sham 组(P<0.05)。通过对基因表达谱分析发现,p53 信号通路被miR-146a 上调。用Real time PCR 和Western blot进行检测发现,p53 信号通路中关键分子p53、caspase3、PTEN 的mRNA 和蛋白水平无明显变化(P>0.05),而mimics 组VSMC中cyclin D1 的mRNA 和蛋白水平增加(与sham 相比,P<0.05),inhibitor 组VSMC 中cyclin D1 的mRNA 和蛋白水平下降(与sham相比,P<0.05)。结论: miR-146a 可能通过上调细胞周期蛋白cyclin D1 的表达促进大鼠血管平滑肌细胞的增殖。