牙周优势菌内毒素对人牙周膜细胞分泌IL-6、TNF-α的影响

目的：研究牙周优势菌——中间普氏菌和具核梭杆菌内毒素对人牙周膜细胞(PDL细胞)分泌IL—6、TNF—α的影响。方法：采用细胞培养技术和ELISA方法，检测培养上清中IL—6、TNF—α水平。结果：在孵育6h后，即可在培养上清中检测到IL—6和TNF—α；IL—6在6—12h内呈上升趋势(Fn除外)，24—48h呈下降趋势。TNF—α在6—24h随时间延长呈上升趋势，48h时开始下降。结论：牙周膜细胞在内毒素作用下局部分泌IL—6、TNF—α参与了牙周炎的发生、发展过程。     

IL-1α对体外培养人牙囊细胞TNF-α表达的影响

目的：研究白细胞介素-α（interleukin—1α,IL—1α）对体外培养的人牙囊细胞（dental follicle cells,DFC）分泌肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF—α）的影响,探讨TNF-α在牙齿萌出过程中的作用。方法：原代培养人牙囊细胞;取3-6代细胞,培养基中加入IL-1α,在不同浓度和时间点,MTT检测细胞增殖,免疫组化法检测细胞中TNF—α的表达,Sandwich ELISA测定培养上清中TNF-α的含量。结果：IL-1α在25ng／ml,促进人牙囊细胞的增殖,IL-1α与牙囊细胞共孵育,可使TNF-α表达和分泌增强。结论：IL-1α有增强人牙囊细胞TNF-α表达的作用。     

淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及内毒素作用下IL-6表达的影响

目的初步研究淫羊藿苷对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,h PDLC)增殖以及在内毒素(Lipopolysaccharide,LPS)作用下淫羊藿苷对h PDLC白细胞介素6(IL-6)表达的影响。方法组织块法原代培养并鉴定h PDLC,采用MTT方法检测淫羊藿苷(0、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9、10-10mol/L)作用下h PDLC增殖的变化;利用PCR、ELISA方法检测淫羊藿苷对在LPS刺激下的人牙周膜细胞IL-6分泌的情况。结果一定浓度范围下(10-6~10-7mol/L)淫羊藿苷对h PDLC的增殖具有积极作用;在10μg/m L LPS作用下h PDLC的IL-6表达增多、活性增强,加入10-6mol/L淫羊藿苷处理后,对此加强效果有一定的抑制作用。结论在一定浓度范围作用下淫羊藿苷可促进h PDLC的增殖;同时,淫羊藿苷对LPS导致h PDLC的IL-6表达增强有一定的抑制作用。     

牙种植体龈沟液中IL-1β、IL-6、TNF-α的检测分析

目的：研究口腔种植体周围龈沟液（PICF）中IL－1β、IL-6、TNF-α的表达特点。方法：34位接受种植义齿治疗的患者作为受试者，检测种植体数目为43枚，其中种植体龈组织有炎症表现的31枚作为实验组，龈组织健康的12枚作为对照组。用whatman 1#滤纸条吸取种植体龈沟液（PICF）。采用ELISA法检测PICF中的细胞因子（IL－1β、IL-6、TNF-α）的种类及含量。结果：种植体龈组织健康的PICF中未检测到IL－1β和IL－6，但有少量的TNF－α。种植体龈组织有炎症表现的PICF样本中可检测到IL－1β、IL-6的存在，TNF-α的含量有显著增加。结论：IL－1β、IL-6、TNF-α参与了种植体组织炎症的免疫调节，并且有可能作为评价种植体组织健康程度的指标。     

五倍子水提取物对Pg LPS诱导单核细胞分泌IL-6的抑制作用

目的：研究百倍子水提取物对牙龈卟啉菌(Pg)内毒素(LPS)介导的人单核细胞分泌IL-6水平的影响。方法：采用健康人外周血分离培养的单核细胞以25μg/ml牙龈卟啉菌内毒素作为刺激因子，用放射免疫分析法(RIA)测定细胞培养上清中IL-6的水平，观察5种浓度瓦倍子水提取物对单核细胞分泌炎性细胞因子的影响，结果：五倍子水提取物可显著抑制牙龈卟啉菌内毒素诱导人单核细胞分泌IL-6的水平，其作用在一定范围内呈浓度依赖性。结论：五倍子水提取物能够显著抑制牙龈卟啉菌内毒素诱导人单核细胞分泌IL-6的水平，提示五倍子具有一定的抗炎作用，有助于对牙周病的防治。     

TNF-α刺激髁突软骨细胞产生白细胞介素-34的研究

目的通过观察TNF-α对髁突软骨细胞分泌白细胞介素-34(IL-34)及表达IL-34 mRNA基因的影响,探讨IL-34在颞下颌关节紊乱病中的致病机制。方法取第三代髁突软骨细胞,培养过程于培养液中加入不同浓度(0、1、10、20、50 ng/m L)的TNF-α培养24 h以及同一浓度(10 ng/m L)TNF-α分别培养1、3、6、10、24 h后,收集培养上清液及细胞,分别用ELISA和RT-PCR方法测定IL-34浓度以及IL-34 mRNA的表达情况。结果 1实验组和对照组髁突软骨细胞上清液中均能检测到IL-34。2TNF-α刺激髁突软骨细胞IL-34mRNA基因表达,并呈正相关关系。结论 TNF-α能刺激髁突软骨细胞产生IL-34。     

银杏叶提取物对脂多糖作用下人牙周膜细胞增殖及分泌细胞因子的影响

目的 观察银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract,GBE)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作用下人牙周膜细胞(periodental ligament cell,PDLC)增殖及分泌白细胞介素(interleukin,IL)6、IL-1β及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的影响,为GBE在牙周病防治中的应用提供依据.方法 选取2010年5至7月在遵义医学院附属口腔医院口腔颌面外科门诊因正畸拔除的10例11 ～15岁患者的20颗前磨牙,采用改良组织块培养法体外原代培养人PDLC,实验共分5组:①阴性对照组,含10 ml/L胎牛血清的达尔伯克改良伊格尔培养基(Dulbecco's modified Eagle's medium,DMEM)培养液;②LPS组,含10 ml/L胎牛血清的DMEM培养液+100 mg/L LPS;③LPS+0.1 g/L GBE组,含10 ml/L胎牛血清的DMEM培养液+100 mg/L LPS+0.1g/L GBE;④LPS+0.01 g/L GBE组,含10 ml/L胎牛血清的DMEM培养液+100 mg/L LPS +0.01 g/L GBE;⑤LPS+地塞米松组,含10 ml/L胎牛血清的DMEM培养液+100 mg/L LPS+2 mg/L地塞米松.甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定GBE对LPS作用下人PDLC活性的影响,酶联免疫吸附测定法测定各组IL-6、IL-1β及TNF-α的含量,对所得结果分别进行单因素方差分析,采用LSD-t检验进行组间两两比较,检验水准为双侧α=0.05.结果 实验12、24、48及72 h,LPS+0.1 g/L GBE组的吸光度值(分别为0.30±0.03、0.33±0.02、0.34 ±0.02及0.35 ±0.02)均显著高于LPS组(分别为0.20±0.03、0.20±0.02、0.22±0.04及0.24±0.02)(P＜0.05),PDLC IL-6、IL-1 β及TNF-α的分泌量均显著低于LPS组(P＜0.05);实验12、24、48及72 h,LPS+0.01 g/L GBE组吸光度值(分别为0.27±0.05、0.31 ±0.03、0.33±0.03及0.32 ±0.01)均显著高于LPS组(P＜0.05),PDLC IL-6、IL-1β及TNF-α的分泌量均显著低于LPS组(P＜0.05).结论 GBE对LPS作用下的人PDLC有保护作用.     

免疫抑制对鼠根尖周炎中IL—1α、TNF—αmRNA表达的影响

目的：比较免疫抑制鼠和正常鼠根尖周炎中IL-1α、TNF-αmRNA表达，了解免疫抑制对根尖周炎的影响。方法：20只SD大鼠分成实验组（腹腔注射环磷酰胺）和对照组（腹腔注射生理盐水），3周后将实验组和对照组上、下颌磨牙开髓，分别于术后3、7、14、28d取根尖周组织，用RT-PCR方法检测IL-1α和TNF-αmRNA表达，并进行半定量分析。结果：实验组术后7d根尖周组织中即有IL-1α和TNF-αmRNA表达，14d达高峰，28d有所下降；对照组呈与此相似的动态过程，两者间的表达量无明显差别。结论：外周血白细胞减少对根尖周炎中IL-1α表达无明显影响。     

五倍子水提取物抑制内毒素诱导人牙龈成纤维细胞分泌IL-6

目的：研究不同浓度五倍子水提取物对内毒素(LPS)介导的人牙龈成纤维细胞(HGF)分泌IL-6水平的影响。方法：采用MTT比色法和放射免疫分析法(RIA)，测定五倍子水提取物对HGF增殖的影响；及对以25μg／mL内毒素作为刺激因子，HGF培养上清中IL-6水平的影响。结果：五倍子水提取物可显著抑制内毒素诱导HGF分泌IL-6水平，其作用在一定范围内呈浓度依赖性，同时当其浓度＞50μg／mL时，可抑制HGF增殖。结论：五倍子水提取物能够抑制内毒素诱导人牙龈成纤维细胞分泌IL-6的水平，浓度过高时对HGF增殖有影响，提示一定浓度(＜50μg／mL)的五倍子水提取物具有抗炎作用，有助于对牙周病的防治。     

TNF-α及LPS刺激下牙周膜干细胞IκB磷酸化及其下游基因的表达

目的:研究TNF-α及LPS刺激下牙周膜干细胞IκB磷酸化及其下游基因的表达.方法:体外分离、培养人牙周膜干细胞,分别在10 ng/mL TNF-α和500 ng/mL Ecoli.LPS刺激下进行培养,并于刺激培养即时(0 h)、5、30 min和1、2h,采用Western Blot法检测IκBα总蛋白和磷酸化IκBα蛋白的表达变化;Real-time PCR检测IL-6、IL-8 mRNA的表达水平.结果:牙周膜干细胞在10 ng/mL TNFα或500 ng/mL Ecoli.LPS刺激下培养0～2h不同时间后,IκBα总蛋白随刺激时间逐渐降低,1h时最低;磷酸化IκBα随刺激时间逐渐升高,2h时最高;NFκB的下游基因IL-6及IL-8mRNA表达水平均随刺激时间逐渐升高,2h时升高最明显(P＜0.05).结论:炎症细胞因子TNF-α或LPS均可促进牙周膜干细胞中IκBα蛋白的磷酸化,并上调IL-6、IL-8 mRNA的表达;提示NFκB信号通路的活化可能是导致炎症状态下牙周膜干细胞功能损害的重要因素.     

口腔厌氧菌内毒素对白介素—1（IL—1）的体外诱导活性

用单层细胞培养法体外培养C_(57)BL/6小鼠腹腔巨噬细胞,并在培养上清中加入不同浓度内毒素,采用小鼠胸腺细胞增殖法测定,发现0.1ng内毒素(LPS)即可刺激巨噬细胞产生IL-1。并随内毒素刺激量增加而上升。用100ng内毒素刺激时,IL-1活性分别为1939～2609cpm。但当内毒素刺激量大于1mg时。IL-1水平反呈下降趋势。     

IL-lβ和TNF-α对人牙周膜细胞内LIF表达的影响

目的：探讨白细胞介素-lβ（IL-lβ）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对牙周膜细胞内白血病抑制因子（LIF）表达的影响。方法：体外分离培养鉴定人牙周韧带细胞（HPDLC）,取第3代细胞用于实验,利用牙周改建中高表达因子TNF-α和IL-1β刺激HPDLC后,实时定量反转录-聚合酶链反应检测LIF mRNA的表达。结果：IL-1β在浓度为0．1 ng/mL和5 ng/mL时,均显著促进LIF的分泌（P ＜0．01）。TNF-α在浓度为10 ng/mL时,明显促进LIF的分泌（P ＜0．05）。结论：牙周改建中高表达细胞因子IL-1β和TNF-α可促进牙周膜细胞中LIF的表达。     

可溶性CD14对LPS诱导人牙龈成纤维细胞活化的影响

目的:观察重组表达的sCD14对LPS的炎症介导作用的影响。方法:将异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate,FITC)标记的LPS分别和sCD14以及阳性对照内毒素中和蛋白(endotoxin neutralizing protein,ENP)孵育后,加入人牙龈成纤维细胞培养系统中,通过流式细胞仪测定LPS与细胞结合后的荧光强度;采用ELISA检测细胞培养上清中的TNF-α和IL-6的含量。结果:sCD14和ENP可导致细胞膜平均通道荧光强度减低,LPS诱导的细胞因子TNF-α和IL-6分泌量显著下降。结论:sCD14和ENP使人牙龈成纤维细胞的LPS结合量显著下降,表明sCD14和LPS中和蛋白可竞争性结合LPS,引起细胞培养系统中游离LPS浓度下降,对细胞的炎症介导作用减小。     

茶多酚对脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞凋亡及炎症因子的影响

目的:探讨茶多酚对脂多糖(LPS)诱导人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)凋亡及肿瘤坏死因子-α-(TNF-α)、白介素6(IL-6)分泌的影响。方法:体外培养HPDLFs,MTT法筛选茶多酚浓度梯度,再分别用LPS(1μg/ml)和LPS(1μg/m1)+茶多酚(10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)刺激HPDLFs,流式细胞仪检测细胞凋亡,Elisa法检测TNF一α、IL-6分泌。结果:LPS可显著诱导HPDLFs凋亡,上调TNF一α、IL-6表达。茶多酚可显著降低LPS诱导的细胞凋亡和TNF-α、IL-6表达,且呈量效依赖性。结论:茶多酚可通过有效降低LPS诱导的细胞凋亡和TNF一α、IL-6表达。     

LPS刺激牙龈成纤维细胞IL-6、IL-8的产生和膜表面受体CD14的表达

目的：观察牙龈卟啉菌和中间普氏菌LPS刺激人牙龈成纤维细胞合成IL-6、IL-8的能力，并了解LPS是否通过细胞表面膜受体mCD14介导信号传导。方法：4种浓度的LPS在不同时间段。分别作用于体外培养的人牙龈成纤维细胞。采用ELISA检测IL-6、IL-8含量的变化，同时利用逆转录聚合酶链反应，进一步观察IL-6、IL-8，CD14在mRNA水平的表达特征。结果：ELISA和RT-PCR的反应结果证实，受LPS的刺激，细胞合成和分泌细胞因子IL-6、IL-8的能力明显增强，但未检测到细胞表面膜受体mCD14mRNA的表达。结论：LPS用于牙龈成纤维细胞合成和分泌细胞因子没有通过膜受体mCD14的介导。     

氧化苦参碱对内毒素作用下人牙周膜细胞白细胞介素-6和白细胞介素-1β mRNA表达的影响

目的 研究氧化苦参碱对内毒素(LPS)作用下人牙周膜细胞(PDLC)白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA表达的影响,探讨氧化苦参碱抑制LPS所造成的牙周炎症反应的机制.方法 体外分离及培养PDLC,实验组分别为LPS和不同质量浓度的氧化苦参碱溶液的不同组合,对照组为仅含1%FBS的DMEM培养液.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-6和IL-1β mRNA的水平.结果 质量浓度为25 μg·mL-1 LPS能够有效地增强IL-6和IL-1β mRNA水平的表达,实验组高于对照组,差异有统计学意义,加入氧化苦参碱进行干预后实验组与对照组IL-6和IL-1β mRNA的表达无显著差异.结论 氧化苦参碱可抑制LPS所造成的PDLC IL-6和IL-1β mRNA表达.     

大鼠牙乳头细胞旁分泌效应对巨噬细胞分泌炎症因子的调控作用

目的:研究大鼠牙乳头细胞(rat dental papilla cells,RDPCs)对LPS活化的巨噬细胞分泌免疫因子的影响.方法:分离SD大鼠牙胚,酶消化法原代培养牙乳头细胞并进行矿化诱导和成脂诱导,茜素红染色观察矿化结节形成.油红O染色观察脂滴形成.CCK8法检测大鼠牙乳头细胞条件培养基(rat dental papilla cells' conditioned medium,RDPC-CM)对巨噬细胞增殖能力的影响,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定RDPC-CM对巨噬细胞分泌炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-6的影响,Griess reagent法检测RDPC-CM对巨噬细胞分泌炎症因子NO的影响.采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析.结果:原代培养24 h后,大鼠牙乳头细胞从组织块中爬出,传代后可得到纯化大鼠牙乳头细胞;茜素红染色见矿化诱导组中出现散在的红色矿化结节;油红O染色后可见经成脂诱导的牙乳头细胞中脂滴形成;CCK8结果表明,RDPC-CM对巨噬细胞增殖能力无影响;ELISA结果显示,大鼠牙乳头细胞条件培养基可对LPS活化巨噬细胞分泌细胞因子产生作用,表现为条件培养基作用于巨噬细胞24h可减少细胞分泌TNF-α,而对IL-1β和IL-6分泌无影响;Griess reagent法结果显示,RDPC-CM对LPS活化的巨噬细胞分泌NO无影响.结论:大鼠牙乳头细胞条件培养基作用于LPS活化的巨噬细胞,可使巨噬细胞分泌TNF-α下降,提示牙乳头细胞具有一定的免疫调控作用.     

肿瘤坏死因子α和白细胞介素2在大鼠皮肤移植中的作用

目的：探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素2(IL-2)在同种异体大鼠皮肤移植后免疫排斥反应中的作用，研究组织工程皮肤的组织相容性。方法：取SD大鼠皮肤和实验室培养的组织工程SD大鼠皮肤移植于成年Wistar大鼠，移植成功后取不同时间点标本用免疫组织化学方法和Western blot方法检测TNF-α和IL-2在组织中的表达。结果同种异体皮肤移植组，TNF-α和IL-2有显著表达；组织工程皮肤移植后，局部组织中TNF-α和IL-2水平显著低于同种异体皮肤移植组。结论：TNF-α和IL-2水平的改变与同种异体皮肤移植后免疫排斥反应的发生密切相关，组织工程皮肤只具有很弱的免疫原性，不引起显著的排斥反应。     

重组人β防御素3对牙龈卟啉单胞菌脂多糖致炎作用的影响

目的:以牙龈卟啉单胞菌脂多糖(P.g-LPS)诱发载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠和RAW264.7小鼠单核巨噬细胞的急性炎症反应,并应用重组人β防御素3(rhBD3),观察其对炎症的干预效果。方法:20周龄雄性ApoE-/-小鼠随机均分为PBS对照组、P.g-LPS组和P.g-LPS+rhBD3组,分别经腹腔注射给药2h后,检测血清中不同炎症指标(MCP-1、TNF-α、IL-6、IL-1β和NO)的水平。同时,以rhBD3干预P.g-LPS对RAW264.7细胞的致炎作用,分别检测培养上清和细胞中炎症指标的水平及其mRNA的相对表达量。结果:经P.g-LPS刺激后,ApoE-/-小鼠血清MCP-1、TNF-α、IL-6和NO的水平较对照组显著上调;而同时应用rhBD3能明显降低MCP-1、TNF-α和NO表达量。P.g-LPS能显著上调RAW264.7细胞培养上清中TNF-α和NO的水平以及细胞中TNF-α和IL-6的mRNA相对表达量,rhBD3对此具有抑制作用。结论:rhBD3对P.g-LPS在体内、外诱导的急性炎症具有一定的抑制效应,可能在牙周炎与高脂血症的相互作用中发挥免疫调节作用。     

咬合力影响大鼠牙周组织改建过程澡IL—1β表达变化的研究

目的：探讨IL-1β在咬合力影响牙周组织改建中的分子机制。方法：采用Wistar大鼠建立正常咬合力、咬合力丧失和增强的动物模型。用HE染色和免疫组化的方法，观察不同咬合力状态下牙周组织的形态学改变以及IL-1β在牙周膜成纤维细胞（PDLC）和牙西山有细胞中表达的动态变化。结果：咬合力丧失导致牙周膜结构紊乱、牙槽骨吸收，IL-1β在PDLC和成骨细胞中的表达，较正常咬合力时明显增强，咬合力增强引起牙周膜结构致密、宽度增加，牙槽骨的明显的新骨形成，IL-1β在PDLC和成骨细胞中的表达也较正常时明显增强。结论：咬合力丧失和增强均诱导IL——1β在牙周组织PDLC和成骨细胞中的表达，较正常咬合力时明显增强，提示IL-1β在咬合力影响着牙周组织改建的过程中起着重要的调节作用。