临床细胞加工与细胞治疗

随着干细胞研究从实验室走向临床,临床细胞加工技术逐步成为热点.起源于造血干细胞移植的细胞加工技术,在发展中对条件与技术的要求越来越严格和规范.该文深入探讨了临床细胞治疗中的常见种类和方法,如应用免疫磁珠筛选外周血CD34 的造血干细胞;通过体外筛选、共培养和纯化技术改良淋巴细胞,防范移植物抗宿主或进行过继免疫治疗血液系统肿瘤或实体瘤;脐血造血干细胞移植的方法和优缺点;骨髓间充质干细胞的富集和体外扩增等加工技术及其诸多临床应用;树突状细胞体外激活后移植治疗肿瘤、胰岛细胞移植治疗Ⅰ型糖尿病、角膜缘干细胞移植修复角膜、神经干细胞移植治疗脑外伤和帕金森等疾病的技术方法和现状.还明确了目前临床细胞治疗的潜力和价值,强调了规范治疗的必要性.     

树突状细胞与肾细胞癌治疗的进展

树突状细胞(DC)是一类具有典型树突状形态、膜表面高表达MHC-Ⅱ类分子、能移行至淋巴器官和刺激初始型T细胞增殖活化的细胞。本文就DE的分类、生物学作用及其机理、肾细胞癌患者DE的变化、肾细胞癌的DC治疗进展作一综述。     

睾丸支持细胞和间质细胞在生精细胞凋亡中的作用

睾丸精子发生过程中存在生精细胞凋亡，支持细胞和间质细胞作为非生殖细胞对生精细胞凋亡具有重要作用。本文对这方面的研究作一综述。     

树突状细胞与肾细胞癌治疗的进展

树突状细胞(DC)是一类具有典型树突状形态、膜表面高表达MHC-Ⅱ类分子、能移行至淋巴器官和刺激初始型T细胞增殖活化的细胞.本文就DC的分类、生物学作用及其机理、肾细胞癌患者DC的变化、肾细胞癌的DC治疗进展作一综述.     

活化的肝星状细胞促进调节性T细胞的表达

目的 越来越多的研究证实,活化的肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)具有免疫抑制功能.本研究观察了HSCs对T细胞介导的适应性免疫应答的影响及其与调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的关系.方法 分离培养小鼠HSCs,运用混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR),体外观察活化的HSCs对T细胞增殖和Treg细胞的影响.结果 活化的HSCs能导致树突状细胞(dendritic cells,DCs)介导的适应性免疫应答中T细胞的低反应性:抑制T细胞的增殖,同时诱导Treg细胞的表达.结论 活化的HSCs能通过促进Treg细胞表达而诱导适应性免疫应答中T细胞的活化无能,促进免疫耐受.     

足细胞标志蛋白及足细胞疾病

肾小球内有三种固有细胞：系膜细胞、内皮细胞、足细胞。不同的病因可导致不同固有细胞的损伤，在临床上表现为不同类型的肾小球疾病。其中足细胞受损后，临床主要表现为蛋白尿，典型的表现为大量蛋白尿。蛋白漏出是肾小球疾病的常见表现，反过来也是加速肾小球硬化的一个重要因素。随着近年来对足细胞生物学研究的深入，尤其是在发现足细胞表达的一些特异性蛋白分子之后，足细胞现已被认为是参与各种原发或继发性肾小球疾病进展的关键细胞。     

膀胱移行细胞癌与细胞角蛋白20/19

为了探寻膀胱移行细胞癌 (TCC)患者和正常人群CK2 0的真实表达模式 ,我们采用RT PCR和DNA序列分析方法对2 0 0 2年 3月至 9月收治的 43例初诊TCC患者尿脱落细胞进行检测分析。现报告如下。材料与方法　本组 43例。年龄 2 5～ 72岁 ,平均 60岁。TCC组 2 6例 ,其中G116例 ,G2 7例 ,G3 3例。非TCC组 17例 ;正常健康对照组 17例。年龄 2 4～ 70岁 ,平均 58岁。留取日间尿液 50～ 10 0ml。尿液标本低温高速离心 ,尿脱落细胞提取总RNA ,RNA溶液用随机六聚引物逆转录。参照文献 [1] ,设计针对CKl9和CK2 0cDNA的特异引物 ,表 1为CKl…     

树突状细胞疫苗在晚期肾细胞癌治疗中的研究进展

树突状细胞（DC）是目前发现强大的抗原提呈细胞（APC），能有效激发T细胞应答并诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）生成。肾癌是泌尿系常见的恶性肿瘤，发病率位于泌尿系肿瘤的第2位，其主要治疗方法是外科手术，化疗、放疗、激素治疗均不敏感。但是，由于肾癌是一种免疫原性很强的肿瘤，利用DC疫苗接种宿主、诱导或增强宿主防御功能、提高机体免疫系统对肿瘤的特异杀伤能力，已成为晚期肾癌免疫治疗中的研究热点。     

人卵巢癌细胞光动力学细胞裂解物负载树突状细胞对体外免疫应答的影响

目的:研究人卵巢癌细胞光动力学细胞裂解物对体外免疫应答反应的影响.方法:体外诱导培养人脐血树突状细胞(DC).人卵巢癌细胞SKOV3分别用光动力学方法(激光照射)及冻融的方法制备细胞裂解物,与DC共培养48 h,RPMI1640与DC培养作为阴性对照,采用流式细胞仪检测DC免疫表型CD1a、CD80、CD86、HLA-...     

细胞角蛋白20与尿路移行细胞癌

细胞角蛋白20是新近发现的细胞角蛋白成员之一，具有独特的分布特点与表达模式。本文就其在尿路移行细胞癌中的研究近况和应用作一综述，以便寻求尿路移行细胞癌诊断，监测，随访，估计预后的新手段。     

睾丸支持细胞与生精细胞凋亡的关系

生精细胞处于支持细胞构造的环境中 ,激素、生长因子和温度以及它们与支持细胞的联系调控着生精细胞的分化与成熟 ;细胞之间的旁分泌信号转导亦调节着生精细胞凋亡的过程。在睾丸生精细胞发生的自发性凋亡和诱发性凋亡中 ,支持细胞表达和分泌的产物扮演重要角色。     

透明细胞乳头状肾细胞癌临床病理特征与预后分析

目的 探讨透明细胞乳头状肾细胞癌(CCPRCC)的临床病理特征和预后情况。方法 回顾性分析2011年6月—2021年10月于南京大学医学院附属金陵医院泌尿外科治疗的40例CCPRCC患者的临床、病理及随访资料。比较其与我院同时期40例透明细胞肾细胞癌(CCRCC)和19例乳头状肾细胞癌(PRCC)患者的预后情况。生存分析采用log-rank检验并绘制Kaplan-Meier生存曲线。结果 40例患者中，男性28例，女性12例；年龄31～84岁；38例为单侧，2例为双侧肿瘤；3例呈多灶性病变。所有患者均行手术治疗。肿块最大径3.0～95.0 mm,平均(27.6±18.1)mm。病理分级均为Fuhrman 1～2级。免疫组织化学检测CK7、CA-IX阳性。患者术后随访5～129个月，中位随访时间56个月：1例骨转移后死亡，2例同侧复发，1例罹患原发食管癌。CCPRCC患者生存预后明显好于CCRCC(P<0.001)和PRCC(P=0.005)患者，而CCRCC与PRCC患者预后差异无统计学意义(P=0.93)。结论 CCPRCC恶性程度低，确诊依靠特征性的病理学与免疫组化特点，手术...     

进展期胃癌病人NK细胞和T细胞亚群的变化

本文主要报道我科近年来对一组进展期胃癌病人检测其自然杀伤细胞(NK)活性和T细胞亚群变化,结果提示这类病人的NK活性和T细胞亚群中CD_3~ 、CD_4~ 细胞均明显低于正常值,而CD_8~ 细胞有增高,CD_4~ /CD_8~ 细胞比值减小。这一变化已引起临床医师的关注,并已用于开展对中、晚期胃癌病人手术、化疗前后全过程的免疫学检测。     

T细胞疫苗诱导免疫耐受与外周血T细胞凋亡的关系探讨

目的　探讨T细胞疫苗诱导特异性免疫耐受与外周血T细胞凋亡的关系。方法　制备针对Wistar大鼠的SD大鼠T细胞疫苗 ,然后用该疫苗免疫健康SD大鼠 ,每周 1次 ,连续 3周 ,作为实验组 (n =6)。对照组 (n =6)用RPMI 164 0培养液替代T细胞疫苗。以被免疫的SD大鼠的脾细胞作为反应细胞 ,以Wistar大鼠的脾细胞作为刺激细胞 (经丝裂霉素处理 ) ,于接种前和每次接种后第 5天进行单向混合淋巴细胞反应 (3 H TDR掺入法 ) ,测定其cpm值 ;用流式细胞仪对外周血T细胞凋亡情况进行检测。结果　混合淋巴细胞反应结果显示 ,实验组SD大鼠脾细胞免疫应答能力于接种后受到显著抑制 ,其cpm值较接种前显著降低 (P<0 .0 1) ;对照组接种前后各时点比较 ,其差异无显著性(P>0 .0 5 ) ;接种后相同时点的cpm值组间比较 ,实验组显著低于对照组 (P <0 .0 1) ;与接种前比较 ,接种后实验组外周血T细胞凋亡率显著增高 (P<0 .0 1) ,且随着疫苗接种次数的增加而升高 ,而对照组接种后各时点T细胞凋亡率与接种前比较差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结论　T细胞疫苗可以诱导同种特异性免疫耐受 ,其机理可能是通过诱导外周血T细胞凋亡 ,清除抗原特异性反应性T细胞克隆来实现的。     

树突状细胞诱导特异性细胞毒性淋巴细胞对胰腺癌细胞荷瘤鼠种植模型的治疗研究

目的探讨树突状细胞诱导特异性细胞毒性淋巴细胞 (CTL)对胰腺癌的治疗作用。方法以体外诱导的树突状细胞诱导特异性CTL细胞 ,然后与胰腺癌细胞Bxpc 3共培养 ,检测其对Bxpc 3的杀伤作用。同时将Bxpc 3种植于荷瘤鼠皮下 ,31天后每周在肿瘤边缘注射CTL细胞 ,观察肿瘤生长情况 ,并检测肿瘤组织端粒酶活性。结果树突状细胞诱导特异性CTL对胰腺癌细胞Bxpc 3的杀伤率是 71 6 %。荷瘤鼠接种胰腺癌细胞后第 31天 ,CTL治疗组与对照组相比种植瘤大小及端粒酶活性之间差异无显著意义 ,第 5 5天CTL治疗组肿瘤大小为 (38± 6 )mm2 ,端粒酶活性为1 33± 0 0 3,对照组肿瘤大小为 (74± 33)mm2 ,端粒酶活性为 4 16± 0 32 ,治疗组与对照组相比肿瘤大小及端粒酶活性之间差异均有显著意义。结论树突状细胞诱导特异性CTL在体内可以大量杀伤胰腺癌细胞 ,在体外可以抑制胰腺癌细胞种植瘤的生长并降低瘤细胞端粒酶活性。     

大肠癌细胞p53基因突变与细胞凋亡及细胞倍性的关系

目的　了解ｐ５３ 基因突变、细胞倍性、细胞凋亡三者的关系,探讨突变型ｐ５３ 基因在肿瘤发生中的作用机制。方法　采用 Ｐ Ｃ Ｒ Ｓ Ｓ Ｃ Ｐ（ 单链构象多态性） 检测ｐ５３ 基因突变,用流式细胞仪 Ｆａｃｓｃａｎ 检测大肠癌细胞染色体倍性、凋亡率及其在细胞周期各相中的分布情况。结果　大肠癌标本ｐ５３基因突变率为５０ ％ ;其中突变组肿瘤细胞凋亡率（２２ ．１１ ％ ） 明显低于未突变组细胞凋亡率（４０ ．５７ ％ ） ,（ Ｐ＜ ０ ．０５） ;突变组异倍体细胞百分率（ 占７６ ．９ ％ ） 明显高于未突变组（ 占４６ ．２ ％ ） ,（ Ｐ＜ ０ ．０５） ;异倍体肿瘤细胞凋亡率为３４ ．０ ％ ,二倍体肿瘤细胞凋亡率为４０ ．７ ％ ,二者差异无显著性（ Ｐ＞ ０ ．０５） 。结论　ｐ５３ 基因突变使肿瘤细胞凋亡率下降,进而促进肿瘤发生、发展。ｐ５３ 基因突变多见于异倍体细胞,细胞凋亡率与细胞倍性无关。     

细胞凋亡的线粒体机制

细胞凋亡分为凋亡的信号启动、调控与执行、特征性结构改变3个阶段，线粒体在第二阶段发挥重要作用，cytC、bcl-2s、Ca^2 、ROS有轴浆转运系统等线粒体因素参与了调控细胞凋亡的过程。     

硼替佐米增强前列腺癌细胞对NK细胞介导细胞杀伤作用的敏感性

目的:探讨硼替佐米是否能够增强前列腺癌细胞对NK细胞介导杀伤作用的敏感性,以及是否在不同类型的人前列腺癌细胞系中有相似的作用。方法:以激素依赖性的前列腺癌细胞株LNCaP和激素非依赖性的前列腺癌细胞株DU145为模型,不同浓度(0、5、10、15、20、25nmol/L)硼替佐米处理细胞后,CCK-8法检测肿瘤细胞的增殖,Annexin V/PI法检测细胞凋亡率。结果:15、20、25nmol/L硼替佐米处理DU145细胞48、72h后,各处理组细胞的增殖率分别为(82.79±2.04)%、(73.59±2.95)%、(74.16±6.16)%和(71.24±5.30)%、(51.20±2.91)%、(38.02±2.67)%,同样处理LNCaP细胞后,各处理组细胞的增殖率分别为(77.04±7.74)%、(42.61±6.62)%、(23.85±6.04)%和(36.45±7.02)%、(14.94±5.76)%、(11.65±5.87)%。与对照组相比,硼替佐米强烈抑制两种细胞系的增殖(P0.05)。15、20、25nmol/L硼替佐米处理DU145细胞24h后,DU145细胞的凋亡率分别为(14.41±1.32)%、(16.13±1.55)%、(14.48±1.42)%,而在LNCaP细胞,20、25nmol/L硼替佐米处理24h后,凋亡率为(12.77±1.28)%和(14.84±1.65)%,与对照组相比有统计学差异(P0.05),DU145细胞对硼替佐米诱导的凋亡作用较LNCaP细胞更加敏感。但是,在短期分析中硼替佐米不能致敏两种细胞系对NK细胞介导的杀伤作用。在长效分析中,用硼替佐米处理肿瘤细胞后,20nmol/L硼替佐米+NK组诱导的DU145细胞和LNCaP细胞凋亡率分别为(41.83±5.06)%和(30.31±3.62)%,较单独应用硼替佐米或者NK细胞更高(P0.05)。结论:硼替佐米能够应用于致敏前列腺癌细胞对NK细胞介导的杀伤作用的敏感性,提高当前前列腺癌的治疗水平。而且此治疗策略对雄激素非依赖性的前列腺癌患者更有效。     

外科性黄疸对T细胞和NK细胞活性的影响

目的　探讨黄疸对外周血T细胞和自然杀伤 (NK)细胞的活性的影响。方法　通过应用CD系列单克隆抗体对 2 0例术前黄疸患者外周血T细胞和NK细胞的活性进行检测 ,观察免疫功能改变。结果　良性黄疸组CD3 (65 .0 9± 6.5 2 )、CD4(4 0 .5 8± 5 .82 )及NK(16.62± 6.91)细胞活性与对照组相比下降明显 (P <0 .0 5 ) ;CD8(3 5 .40± 6.0 7)细胞活性上升 (P <0 .0 5 )。恶性黄疸组CD3 (62 .44± 7.2 8)、CD4(3 0 .0 1± 6.89)及NK(16.2 3± 7.0 2 )细胞活性同样下降明显 (P <0 .0 5 ) ;且良恶性黄疸组CD4(3 0 .0 1± 6.89)细胞活性比较有显著性意义 (P <0 .0 5 )。而黄疸持续时间仅对CD4(分别为 2 3 .43± 3 .70 ,3 0 .0 1± 6.89)有影响。结论　良恶性黄疸能降低T淋巴细胞和NK细胞的活性 ,对机体免疫功能产生一定的影响。