动脉粥样硬化大鼠弓状核L-脑啡肽免疫反应阳性细胞的变化

使用免疫细胞化学过氧化物酶抗过氧化物酶复合体（ＰＡＰ）法和计算机图象分析技术,对动脉粥样硬化大鼠下丘脑弓状核Ｌ－脑啡肽免疫反应（Ｌ－ＥＮＫ－ｉｒ）阳性细胞的变化进行了半定量研究。结果发现：动脉粥样硬化大鼠下丘脑弓状核Ｌ－ＥＮＫ－ｉｒ阳性细胞数目增加,在单     

弓状核三种肽能神经元免疫细胞化学分析

使用免疫细胞化学ＰＡＰ法和计算机图象分析等技术，对下丘脑弓状核亮氨酸－脑啡肽（Ｌ－ＥＮＫ），β－内啡肽（β－ＥＮＤ），促肾上腺皮质激素（ＡＣＴＨ）三种免疫反应阳性细胞进行了半定量研究。结果如下：Ｌ－ＥＮＫ，β－ＥＮＤ和ＡＣＴＨ免疫反应阳性细胞的积分光密度（ＩＯＤ）分别为０．１１０６±０．０３７，０．０８３３±０．０４１６和０．１２５±０．０５１；每个弓状核剖面中它们的阳性细胞数分别为３１．０±９．２，１５．５±４．２和１５．０±５．２。该研究从形态学角度定量分析了弓状核三种肽能神经元，为进一步研究弓状核肽能神经的功能提供了直接依据。     

正常老龄大鼠下丘脑弓状核ACTH和β－END的相关变化

采用正常Ｗｉｓｔａｒ大鼠，雌雄不拘。老龄鼠（２０个月）８只，壮龄鼠（８个月）１３只。采用石蜡切片，ＡＢＣ法染色，ＤＡＢ显色。光镜下观察下丘脑ＡＣＴＨ－ｉｒ和β－ＥＮＤ－ｉｒ阳性细胞形态、分布和计数。图像分析仪测其灰度值。结果：弓状核β－ＥＮＤ－ｉｒ阳性细胞可分为两种类型，Ⅰ型为胞核不明显，着色较深，数量较多的强阳性细胞；Ⅱ型为胞核明显，着色较淡，数量较少的弱阳性细胞。ＡＣＴＨ－ｉｒ阳性细胞，胞核明显，胞体较大，类似β－ＥＮＤ－ｉｒ弱阳性细胞。老龄大鼠两种阳性细胞出现率均明显低于壮龄大鼠（Ｐ＜０．０５）。老龄大鼠弓状核ＡＣＴＨ－ｉｒ阳性细胞灰度值显著低于壮龄大鼠（Ｐ＜０．０１），其β－ＥＮＤ－ｉｒ阳性细胞灰度值则显著高于壮龄大鼠（Ｐ＜０．０１）。并对结果进行了讨论。     

免疫后再感染大鼠下丘脑弓状核ACTH样和β-内啡肽样免疫阳性细胞的相关变化

取经福氏痢疾杆菌免疫后的Ｗｉｓｔａｒ大鼠，老龄鼠（２０个月）１０只，壮龄鼠（８个月）１１只，雌雄兼用。通过腹膜腔注入致病量福氏痢疾杆菌Ｆ１ｂ，２４ｈ后，处死取材；常规脱水，低度石蜡包埋、切片；ＡＢＣ法染色，ＤＡＢ显色。光镜下观察下丘脑弓状核促肾上腺皮质激素样免疫反应（ＡＣＴＨ－ｉｒ）和β－内啡肽样免疫反应（β－ＥＮＤ－ｉｒ）阳性细胞的形态、分布和计数。图像分析仪测其灰度值。结果：光镜下计数下丘脑弓状核ＡＣＴＨ－ｉｒ和β－ＥＮＤ－ｉｒ阳性细胞，老龄鼠明显低于壮龄鼠。多数鼠第三脑室室周层出现许多β－ＥＮＤ－ｉｒ强阳性细胞。再感染老龄鼠弓状核ＡＣＴＨ－ｉｒ阳性细胞灰度值显著高于再感染壮龄鼠；其β－ＥＮＤ－ｉｒ阳性细胞灰度值显著低于再感染壮龄鼠。提示：再感染老龄鼠虽经人工主动免疫，当受细菌攻击时，有呈高ＡＣＴＨ低β－ＥＮＤ趋势；或许与其免疫功能衰退密切相关。     

二仙汤对18月龄雌性大鼠下丘脑EOP含量及其mRNA水平作用…

应用分子生物学和放免法观察了二仙汤对老年前雌性大鼠下丘脑内阿片肽（ＥＯＰ）含量及其ｍＲＮＡ水平的调节作用。结果表明：１８月龄雌性大鼠下丘脑和血浆β－ＥＰ，Ｌ－ＥＮＫ，ＤｙｍＡ含量下降，下丘脑ＰＯＭＣ和Ｐｒｏｅｎｋｅｐｈａｌｉｎ基因ｍＲＮＡ水平显著降低。二仙汤组下丘脑和血浆β－ＥＰ，Ｌ－ＥＮＫ含量上升，垂体β－ＥＰ含量下降，Ｌ－ＥＮＫ含量升高；下丘脑ＤｙｎＡ含量降低，垂体和血浆ＤｙｎＡ含量升高；ＰＯ     

二仙汤对18月龄雌性大鼠下丘脑EOP含量及其mRNA水平作用的实验研究

应用分子生物学和放免法观察了二仙汤对老年前期雌性大鼠下丘脑内阿片肽（ＥＯＰ）含量及其ｍＲＮＡ水平的调节作用。结果表明：１８月龄雌性大鼠下丘脑和血浆β－ＥＰ、Ｌ－ＥＮＫ、ＤｙｎＡ含量下降；下丘脑ＰＯＭＣ和Ｐｒｏｅｎｋｅｐｈａｌｉｎ基因ｍＲＮＡ水平显著降低。二仙汤组下丘脑和血浆β－ＥＰ、Ｌ－ＥＮＫ含量上升，垂体β－ＥＰ含量下降，Ｌ－ＥＮＫ含量升高；下丘脑ＤｙｎＡ含量降低，垂体和血浆ＤｙｎＡ含量升高；ＰＯＭＣｍＲＮＡ和ＰｒｏｅｎｋｅｐｈａｌｉｎｍＲＮＡ水平升高。     

大鼠小肠缺血／再灌注休克中一氧化氮,内皮素检测及意义

目的：观察一氧化氮（ＮＯ）对大鼠小肠缺血／再灌注（Ｉ／Ｒ）的作用及内皮素的改变。方法：复制内脏血管阻塞（ＳＡＯ）性休克模型,用左旋精氨酸（Ｌ－Ａｒｇ）及硝基精氨酸甲脂（Ｌ－ＮＡＭＥ）处理动物模型后分别测定血浆中ＥＴｓ、ＭＤＡ、组织蛋白酶Ｄ（ＣＤ）、ＮＯ－２／ＮＯ－３含量。结果：Ｌ－Ａｒｇ减缓了大鼠Ｉ／Ｒ血压下降（Ｐ＜０．０１）,降低了血浆ＭＰＯ、ＬＤＨ、ＣＤ、ＭＤＡ的含量（Ｐ＜０．０１）及肠组织中伊文思蓝（ＥＢ）的含量（Ｐ＜０．０５）;Ｌ－ＮＡＭＥ与Ｌ－Ａｒｇ相反。ＭＰＯ与ＥＢ正相关（Ｐ＜０．０１）,ＮＯ－２／ＮＯ－３与ＥＴｓ负相关（Ｐ＜０．０５）。结论：ＮＯ对小肠Ｉ／Ｒ损伤有保护作用,ＥＴｓ参与ＳＡＯ休克过程。     

东莨菪碱对吗啡成瘾大鼠下丘脑,垂体及血β内啡肽和催产素含量的影响

用放射免疫法测定了东莨菪碱对吗啡成瘾大鼠下丘脑，垂体和血浆β内啡肽样免疫活性物质（ｉｒ－β－ＥＰ）和催产素样免疫活性物质（ｉｒ－ＯＴ）含量的变化。结果表明：（１）吗啡成瘾后，大鼠下丘脑，血浆中ｉｒ－β－ＥＰ和ｉｒ－ＯＴ含量增加（Ｐ＜０．０１），而垂体中ｉｒ－β－ＥＰ和ｉｒ－ＯＴ含量降低（Ｐ＜０．０１），提示大鼠脑内β－ＥＰ和ＯＴ含量的改变可能与吗啡的依赖和耐受产生有关。（２）东莨菪碱治疗３天和天后     

反义寡核苷酸对正常和常压缺氧大鼠肺血流动力学的作用

筛选出针对内皮素－１（ＥＴ－１）前体基因反义硫代寡核苷酸片断（ＥＴＡＳＯＤＮ）,已证明ＥＴＡＳＯＤＮ能显著抑制培养细胞ＥＴ－１的生成（Ｐ〈０．０５）,通过实验观察侧脑室注射该片断对常氧和常压缺氧大鼠的作用,发现缺氧性肺动脉高压大鼠下丘脑ＥＴ－１含量显著高于常氧大鼠（Ｐ〈０．０５）;侧脑室内注ＥＴＡＳＯＤＮ能显著降低常氧和缺氧大鼠下丘脑ＥＴ－１水平（Ｐ〈０．０５）、降低常氧大鼠肺动脉平均压（Ｐｐａ）     

反义寡脱氧核苷酸对人肝癌裸鼠模型生长及转移的影响

目的 观察反义Ｈ－ｒａｓ寡脱氧核苷酸（ＯＤＮ）对高表达蛋白ｐ２１Ｈ- ｒａｓ的人肝癌高转移裸鼠模型ＬＣＩ－Ｄ２０细胞生长、凋亡及转移潜能的影响。方法原代培养ＬＣＩ－Ｄ２０细胞，经１０μｍｏｌ／Ｌ浓度反义ＯＤＮ处理后，以１．５×１０细胞数分别接种于１４只裸鼠皮下缝制皮囊内：６只接种反义Ｈ－ｒａｓＯＤＮ处理细胞，４只接种Ｈ－ｒａｓ非特异性反义ＯＤＮ处理细胞，余４只接种未作处理的对照细胞。结果反义Ｈ－ｒａｓ对ＬＣＩ－Ｄ２０细胞增殖具有显著抑制作用（ｔ＝３１．５２９，Ｐ＜０．０１），反义ＯＤＮ处理细胞，Ｓ期比率（３６．０±１．４）显著低于对照组（５８．５±０．９，ｔ＝１３．５１９，Ｐ＜０．０１），而Ｇ１／Ｇ０期比率（５６．７％±１．１％）高于对照组（３７．４±０．７，ｔ＝１４．８０２，Ｐ＜０．０１）；反义Ｈ－ｒａｓＯＤＮ处理细胞的凋亡发生率（３４．０％±４．５％）显著高于对照组（２．５％±１．２％，ｔ＝１３．４３４，Ｐ＜０．０１）；反义Ｈ－ｒａｓ处理对ＬＣＩ－Ｄ２０细胞在接种动物体内的生长具有显著延迟抑制作用（ｔ＝３．５０９，ｔ＝３．４５２，Ｐ＜０．０１）；接种动物的肺转移率，反义Ｈ－ｒａｓＯＤＮ处理组显著低于对照组。     

动脉粥样硬化兔弓状核NPY免疫反应阳性神经元的形态学变化

目的观察动脉粥样硬化兔下丘脑弓状核NPY免疫反应阳性神经元的形态变化,为研究神经体液因素在动脉粥样硬化形成中的作用提供形态学依据.方法采用免疫组织化学ABC法和计算机图像分析技术.结果实验组下丘脑弓状核NPY免疫反应阳性神经元体积、数目及积分光密度出现明显改变(P＜0.05).结论下丘脑弓状核NPY免疫反应阳性神经元的形态变化与动脉粥样硬化的形成有关.     

Morphological Changes of Aorta and Total Cholesterol, High Density Lipoprotein, Oxidized Low Density Lipoprotein, Nitric Monoxide and Lipide Peroxidation in Serum after Arcuate Nucleus Lesioned

After arcuate nucleus of hypothalamus lesioned with monosodium glutamate and cutting infundibulum, morphological changes of aorta and total cholesterol, high density lipoprotein, oxidized low density lipoprotein, nitric monoxide and lipid peroxidation in serum were investigated to explore the effect of hypothalamic arcuate nucleus on the development of atherosclerosis. In experimental group of arcuate nucleus lesioned, degeneration of endothelial cells and edematous nuclei of endothelial can be observed, vesicles of various sizes in subendothelial tissue and smooth muscle cells migrated from tunica media to tunica intima through ruptured elastic interna, and the levels of total cholesterol, oxidized low density lipoprotein and lipid peroxidation in serum was significant higher and nitric monoxide was lower than that of control subjects. After cutting infundibulum, degeneration of endothelial cells with edematous nucleus and proliferous collagenous fibers around ruptured myo-endothelial junction were also observed. The structure of control group remained intact. Results suggest that hypothalamic arcuate nucleus might be of significance regulative effect in the development of atherosclerosis.     

外周炎症性疼痛诱导下丘脑弓状核c-fos表达及其机制

目的观察下丘脑弓状核（ARC）神经元在炎症性痛觉过敏中的激活状态,分析NMDA受体在ARC神经元活动与痛觉过敏中的作用。方法用完全弗氏佐剂建立大鼠炎症性痛觉过敏模型,用辐射热-缩腿法测定痛阈,用c-fos检测神经元激活状态,用体视学无偏差测量系统计数免疫阳性细胞,用MK801观测NMDA受体的作用。结果佐剂组的痛阈均有明显下降（P〈0.05）,ARC中Fos蛋白阳性细胞计数明显上调（P〈0.05）;在侧脑室微量注射MK801后痛阈可恢复至正常水平,ARC中Fos蛋白阳性细胞计数回落接近正常水平。生理盐水组在这两方面都无明显变化。结论 ARC神经元的激活对炎症性痛觉过敏的产生和维持有重要作用,该作用主要通过NMDA受体介导。中枢敏感化也可发生在脊髓以上的高位痛觉调节中枢。     

癫痫大鼠弓状核神经元损伤性改变─—光、电镜定量研究

目的：在癫痫动物模型上,探讨癫痫脑损伤性改变。方法：20只SD大鼠随机分为对照组和癫痫组,采用光、电镜技术和形态定量方法观察马桑内酯所致急性局灶型癫痫大鼠弓状核神经元损伤性改变。结果：两组间神经元胞体的面积分数和面数密度,神经元胞体和胞核的等效直径无显著差异（P＞0.05）,癫痫组暗细胞内线粒体体积分数减少（P＜0．05）、粗面内质网则增加（P＜0．05）,两者的面数密度无显著性改变（P＞0．05）,溶酶体的体积分数及面数密度均增加P＜0．05）。亮细胞各细胞器及分泌颗粒未见明显改变（P＞0．05）。结论：以上结果提示癫痫大鼠弓状核神经元超微结构的改变,亮、暗细胞反应不同;癫痫引起神经内分泌功能的紊乱,可能与弓状核神经元损伤有关。     

下丘脑Hypocretin神经肽在大鼠缰核对睡眠-觉醒调节中的作用

目的：研究下丘脑Hypocretin神经肽在缰核(Hb)对睡眠-觉醒调节中的作用,为探讨Hb在睡眠-觉醒调节中的作用提供理论依据。方法：成年雄性Wistar大鼠20只,随机分为实验组(n=10)和对照组（n=10）,实验组灌胃给予催眠药唑吡坦5 mg•kg^-1,对照组给予等量生理盐水,待唑吡坦药效达峰值时,将大鼠断头处死,取出Hb组织,提取总RNA,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Hb中HcrtR2 mRNA的表达水平。另取大鼠(n=5)单侧Hb微量注射霍乱毒素b亚单位(CTb）,采用CTb逆行追踪法观察下丘脑内是否有免疫阳性神经元存在。结果：经RT-PCR检测,实验组和对照组Hb中HcrtR2 mRNA的表达水平（相对平均灰度值分别为0.13±0.03和0.26±0.04）比较差异有显著性（P<0.05）。免疫组织化学染色显示,在大鼠下丘脑外侧区(LHA)、外侧视前区（LPO）和弓状核（ARC）都可见CTb标记免疫阳性神经元。结论：下丘脑Hypocretin神经肽及其受体参与Hb对睡眠-觉醒调节的作用,且Hb接受下丘脑内睡眠相关结构LHA、LPO、ARC的纤维投射。     

青年及老年大鼠下丘脑弓状核阿黑皮素原mRNA的表达

目的：观察青年和老年期大鼠下丘脑弓状核阿黑皮素原mRNA（POMC mRNA）的表达水平。方法应用原位杂交技术显示POMCmRNA和用计算机图像分析观察杂交信号的强弱及阳性细胞的面积,结果：与青年组相比,老年组下丘脑弓状核及其附近区域POMCmRNA阳性神经元的灰度下降,POMCmRNA阳性神经元的数目无明显变化,结论：老年期POMCmRNA阳性神经元相应的mRNA表达水平下降可能是下丘脑的POMC基因衍生肽表达水平下降的原因之一。     

甜味觉对大鼠弓状核NPY及FOS表达的影响

目的:观察给SD大鼠摄入蔗糖甜味觉溶液后对弓状核内NPY及FOS表达的影响。方法:给实验组SD大鼠摄入15ml蔗糖溶液,给对照组SD大鼠摄入15ml蒸馏水,2h后应用免疫组织化学方法观察弓状核内NPY及FOS表达。应用统计软件分析实验组与对照组NPY及FOS表达情况的差异性。结果:与对照组相比,给大鼠蔗糖甜味觉溶液后引起弓状核NPY及FOS表达的显著增多。结论:甜味觉食物的促食欲作用可能与其激活了弓状核内的NPY能神经元,使NPY表达上调有关。     

一氧化氮合酶神经元在大鼠下丘脑中的分布观察

目的：观察大鼠下丘脑各核团内一氧化氮合酶（NOS）阳性神经元的形态及分布特征。方法：用黄递酶组织化学染色方法观测NOS神经元在大鼠下丘脑各核团中的分布。结果：视上核、室旁核内密集的NOS阳性神经元为大细胞型神经分泌神经元;其他核团内的阳性神经元主要为小细胞型神经分泌神经元,其中弓状核最密集,视前内侧核、Broca斜带核水平支次之,视前室周核、视前腹前核和视前外侧区内的密度最低。第三脑室室管膜上皮下见一些NOS阳性“触液神经元”,其胞体或突起伸向室管膜上皮,甚至嵌入其中。在弓状核、视前内侧束内有密集的NOS阳性神经纤维。结论：下丘脑各核团内NOS神经元的分布有差异。NO在下丘脑神经内分泌调节系统中起重要作用。