生物人工肝人肝细胞系进展

大多数生物人工肝 (bioartificialliver,BAL)装置以原代猪肝细胞作为生物成分 ,然而 ,由于异种移植相关危险性 ,猪肝细胞终究不是最佳选择。人肝细胞系无论哪方面都具有比动物肝细胞要好的特性 ,所以是应用于BAL的候选细胞。肿瘤来源细胞系C3A和HepG2具有多种肝细胞功能 ,但缺乏一些特异的肝功能 ,如氨解毒和尿素生成等。永生化肝细胞可能提供更好的BAL应用前景。另一有希望的方法是应用胚胎或成人干细胞。啮齿动物干细胞已经可在体外定向分化为肝细胞 ,这些体外诱导方法可能也适用于人干细胞。但是 ,在人肝细胞系和分化的干细胞成功…     

人肝细胞L-02/聚丙烯杂化界面的初步研究:肝细胞球形聚集体培养

生物人工肝（bioartificial liver，BAL）在肝功能衰竭中的治疗价值已得到肯定，大量高活性的人肝细胞是细胞型体外BAL支持系统的核心原材料。球形聚集体是一种立体、高密度、高活性培养肝细胞的方法，但操作较复杂。我们采用生物材料表面接枝功能化学基团的方法，对人肝细胞L-02／聚丙烯杂化界面进行了研究，并通过简单的静止培养实现了肝细胞的球形聚集体培养方式，极大的简化了既往的肝细胞球形聚集体培养方法。     

生物人工肝辅助支持系统的研制现状及展望

肝脏是人体内最大的代谢器官 ,具有生物合成、生物转化及生物降解等复杂的功能 ,急性肝功能衰竭及肝脏先天性代谢性疾病等终末性肝病的预后甚差[1] 。生物人工肝辅助支持系统 (BAL )辅助治疗使患者渡过危险期或使患肝完全再生是终末性肝脏疾患最理想治疗手段[2 ] 。生物反应器 (BRC )是BAL核心成分 ,患者血浆在体外通过附着大量有代谢活性肝细胞的网状结构的BRC进行循环 ,以给肝功能衰竭患者提供代谢支持。目前急性肝衰的确切病因及其主要并发症 肝性脑病发生机制尚不十分清楚 ,BRC所必须具有的功能不十分明了 ,维持BRC内肝细胞正…     

为生物人工肝选择合适的细胞

生物人工肝(bioartificial liver,BAL)是以培养肝细胞为生物材料,具有体外代偿肝脏功能的人工器官装置.本文就BAL细胞来源的研究进展进行综述.     

猪肝细胞用于生物人工肝的研究进展

异种动物肝细胞一直是国外生物人工肝研究的主要细胞 ,其中猪肝细胞已成为生物人工肝应用最多的肝细胞。由于猪肝细胞的代谢功能 (细胞色素P4 5 0含量及其代谢能力 )与人工肝细胞最为接近 ,其混合氧化酶的高水平表达正是代偿肝衰竭解毒功能的重要基础〔1〕,故猪肝细胞被公认是目前生物人工肝较好的细胞材料。近年来 ,在大量实验研究的基础上 ,猪肝细胞型生物人工肝已进入Ⅱ /Ⅲ期临床研究阶段〔2〕。一、猪肝细胞用于生物人工肝的优缺点在人肝细胞来源极为困难的情况下 ,猪肝细胞在生物人工肝的实验研究和临床实验中起着重要作用〔3〕,占据…     

猪肝细胞用于生物人工肝的安全性问题

人工肝为肝衰患者过渡到肝移植的桥梁,而生物人工肝更符合生理需要.目前进入临床实验的生物人工肝多以猪肝细胞为材料,本文对猪肝细胞源性生物人工肝脏辅助系统的概念,猪肝细胞应用的潜在危险,猪内源性逆转录病毒的相关问题,以及防止猪病原体传播的方式等进行了综述.     

永生化肝细胞研究的现状及其进展

细胞永生化（immortalization）是指体外培养的细胞经过自发的或外界因素的影响从增殖危机中逃逸，从而具有无限增殖能力的过程。近年来，生物人工肝（biological artificial liver，BAL）已成为治疗暴发性和急性肝功能衰竭及支持肝移植过渡期的重要手段。肝细胞作为主要成分需要量占成人肝脏的10％～15％。理想的细胞材料应具有正常的表型，成熟肝细胞的代谢解毒合成功能，且易于快速高密度培养。     

猪肝细胞用于生物人工肝的安全性问题

人工肝为肝衰患者过渡到肝移植的桥梁,而生物人工肝更符合生理需要.目前进入临床实验的生物人工肝多以猪肝细胞为材料,本文对猪肝细胞源性生物人工肝脏辅助系统的概念,猪肝细胞应用的潜在危险,猪内源性逆转录病毒的相关问题,以及防止猪病原体传播的方式等进行了综述.     

生物人工肝的细胞培养及反应器进展

生物人工肝支持系统(BALSS)由肝细胞、专用反应器和体外循环系统三大要素共同构建。其中生物活性部分的体外培养技术与反应器设计的优劣是影响BALSS性能的重要因素。为使培养肝细胞的数量、活性和功能更理想,近年各种培养技术及其相应反应器均从各个方面改进以期实现"拟肝化培养"。现就目前常用于BAL的肝细胞培养方法及其相应反应器的现状及进展进行综述。     

一种新型生物人工肝系统的构建及体外功能评价

目的　构建一种新型生物人工肝 (BAL )系统 ,并评价其体外功能。方法　采用原位胶原酶循环灌注法分离中国实验用小型猪肝细胞。 1× 10 1 0 肝细胞在无血清培养基中经限制贴壁、旋转培养形成肝细胞球体后 ,注入BIOLIVA3A中空纤维管生物反应器的细胞环路 ,构建新型BAL系统。观察循环 6h内细胞环路中肝细胞总数和活率变化 ,并检测循环的细胞悬液和RPMI164 0培养基中ALT ,TBI和ALB的变化及进行利多卡因代谢试验。结果　循环 6h内肝细胞总数和活率无明显变化 ;新型BAL系统具有较强的清 (白 )蛋白合成和利多卡因代谢能力。结论　该新型BAL系统具有一定的肝支持作用 ,可望用于肝衰竭的治疗和为过渡到肝移植创造条件     

猪内源性逆转录病毒透过生物人工肝的影响因素

目的 病毒安全性是猪源性生物人工肝(BAL)不可忽略的安全问题.本研究旨在探讨影响BAL中猪内源性逆转录病毒(PERV)透过的因素.方法 构建双循环的新型猪源性BAL.两循环间采用膜孔径为10 nm、20 nm、30 nm和35 nm的血浆成分分离柱以及500 nm膜孔径的血浆过滤柱分隔两循环.反应器内填充共培养的猪肝细胞-骨髓间充质肝细胞或原代猪肝细胞并连续循环72 h.每12 h抽取内、外循环内培养液检测PERV RNA、逆转录酶(RT)活性以及其体外感染性.结果 血浆过滤柱组中,内外循环内PERV检测结果完全相同,提示500 nm血浆滤过柱对PERV并无阻隔作用.在血浆成分交换柱各组中,各时间点内循环中均能检出RNA和RT活性,但是外循环中并未检出RT活性,而且随着膜孔径减小,RNA的检出时间逐渐延迟,且内循环RNA水平逐渐增加.各培养液均未发现能够体外感染HEK293细胞.结论 膜孔径、循环时间以及内循环病毒浓度是影响BAL中PERV透过的主要原因.     

球体培养人、猪肝细胞：一种理想的体外生物人工肝模式

体外培养的肝细胞有多种临床用途〔１〕。其中将肝细胞置入特殊的生物反应器,构建生物人工肝（ｂｉｏａｒｔｉｆｉｃｉａｌｌｉｖｅｒ,ＢＡＬ）支持系统有重要的临床价值。有研究报道,细胞聚集成多细胞的球体（ｓｐｈｅｒｉｏｄ）更类似于体内条件;并且可在有限的容积内高密度地培养肝细胞〔２〕。因此,我们实验构建人、猪肝细胞球体,并比较肝细胞普通培养与球体培养蛋白分泌功能的变化。１．材料和方法：试剂：Ｄｕｂｅｃｃｏ′ｓ磷酸盐缓冲液;Ｈａｎｋ′ｓ平衡盐;ＩＴＳ（胰岛素,运铁蛋白和硒,ｉｎｓｕｌｉｎ,ｔｒａｎｓｆｅｒ…     

一种新型生物人工肝系统对急性肝衰竭犬的治疗效果

我们在构建了 1种新型生物人工肝(BAL)系统并建立了 1种犬急性肝衰竭(ALF)新模型的基础上 ,应用新型BAL系统对ALF犬进行治疗 ,以评价新型BAL对ALF犬提供肝支持作用的有效性和安全性。一、材料和方法1.ALF犬模型的制作 :杂种犬 2 5条 ,体重 10～ 15kg ,雌雄不限。行门腔分流及胆总管结扎切断术 ,术前、术后 14d采血 ,全自动生化仪测定ALT、AKP、TBi,干式生化分析仪测定氨 (NH3 ) ,HPLC测定支链氨基酸 /芳香氨基酸比(BCAA/AAA) [1] 。2 .猪肝细胞分离和培养 :中国实验用小型猪 5头 ,体重 7～ 9kg ,雌雄不限。采用原位胶原酶…     

低温条件下肝细胞研究

目的 探索一种新的肝细胞储存方法。方法 三明治构型低温储存肝细胞，并观察其形态、细胞活率、特异性胆小管膜抗原分布及蛋白合成功能，并与传统单层胶原储存肝细胞相比较。结果 三明治构型肝细胞能较好地耐受低温损伤，保持较高的细胞活串和蛋白合成功能，更好地维持了肝细胞形态。结论 三明治构型肝细胞能较好地耐受低温损伤，为建立肝细胞库，生物人工肝及肝细胞移植的推广提供了潜在的临床应用前景。     

人工肝生物成分的研究进展

体外生物人工肝支持系统是用以为肝衰竭患者提供体外肝功能支持的装置。肝细胞是其主要生物成分 ,该系统的支持作用主要来源于肝细胞的生物代谢功能。近几年来 ,国外在肝细胞作为人工肝生物成分的有关研究方面取得较大进展 ,现就这一领域的主要进展作一综述。一、肝细胞来源1.同种肝细胞 :理论上讲 ,人肝细胞最为理想[1] ,但成人肝仅用于肝移植 ,因而成人肝细胞来源困难。有人提出将不适于肝移植的成人肝及肝移植时剩余的肝叶碎片收集起来 ,建立成人肝细胞“库”以资利用[2 ] ,但其来源仍然有限。胎肝细胞特别是较大月龄胎肝分离出的肝细胞 …     

生物人工肝的临床应用进展

肝衰竭病人即使进行综合内科治疗，病死率仍高达70％-80％。肝脏移植是治疗肝衰竭的有效方法，但由于供肝相应短缺，病人等待肝脏移植的时间逐渐延长。美国2004年仅有20％等待肝脏移植的病人接受了肝脏移植。如何应用暂时的支持手段，维持病人的生命，以待肝细胞再生或等到合适的供肝，成为研究的热点之一。人工肝支持系统（artificial liver support system，ALSS）是基于肝细胞的强大再生能力，通过一系列体外的机械或生物装置，担负起暂时辅助或代替严重病变的肝脏功能，清除各种有害物质，补充生物活性物质，从而使肝细胞得以再生直至自体肝脏恢复或等待机会进行肝移植的治疗方法。非生物人工肝包括血浆置换、血液和（或）血浆灌流、血液透析、血液滤过、分子吸附再循环系统等。非生物人工肝经过几十年的发展，特别是根据病情选择各种方法单用或联合应用、个体化治疗后有效地提高了肝衰竭的疗效。肝脏功能十分复杂，为更有效地代替肝脏的功能，将生物成分引入人工肝的治疗，即为生物人工肝（BAL）。     

从手术切除肝组织和屠宰房肝组织分离肝细胞

自６０年代末期建立胶原酶灌注法分离大鼠肝细胞的方法以来,利用体外培养单肝细胞为工具的研究得以广泛开展。利用健康单肝细胞提供肝功能支持也已经能够从一临床设想进人临床实验;肝细胞移植和生物人工肝支持在大量的动物实验和一些有限的临床实验中获得良好的效果,成为有前途的肝病治疗途径~〔１〕。但肝细胞的来源,及大量分离肝细胞的技术仍存在许多问题要解决。由于供体的普遍缺乏,从整肝上分离人肝细胞显然不现实。若有一从手术切除肝组织分离肝细胞的方法,则有非常实用的价值。利用体外培养肝细胞的生物人工肝常选用猪肝细胞。…     

膜截流分子量对新型生物人工肝支持系统内细胞材料影响的实验研究

目的 探索膜截流分子量对新型生物人工肝(bioartificial liver,BAL)支持系统内细胞材料功能的影响.方法 选用200×103和1200×103两种不同膜截流分子量的半透膜作为BAL隔离膜.正常比格犬接受新型BAL治疗6h,定时收集BAL系统中培养液.观察各组细胞活力及功能变化.结果 200×103组细胞活力保持在90％左右,明显高于1200×103组的22％.细胞功能检测显示,200×103组细胞白蛋白分泌水平及尿素合成分别为53.3 μg/106细胞和3.6 μg/106细胞,显著高于1200×103组的5.6 μg/106细胞和0.3 μg/106细胞.1200×103组反应器内免疫球蛋白分子浓度显著高于200×103组,免疫荧光试验进一步证实了上述结果.结论 降低BAL膜截流分子量可以有效减少免疫球蛋白分子的透过,从而维持BAL中细胞材料的功能.     

红细胞携氧促进多层平板型生物反应器中肝细胞氧供

目的 生物人工肝作为肝功能衰竭的一种有效支持手段,近年来得到不断的改进,如何解决反应器中的氧供问题成为目前人们研究的焦点.本研究拟通过在循环培养液中加入红细胞为这一问题提供可能的解决方案.方法 将新鲜分离的原代猪肝细胞接种于笔者自主构建的新型生物反应器内.实验分为两组,对照组在反应器内仅加入RPMI1640培养液直接循环;实验组在培养液中同时加入猪红细胞(2.5×1011/L)进行循环,两组循环液均经过膜肺进行氧合.采用血气分析仪检测反应器中氧耗情况,同时检测反应器中葡萄糖消耗及肝细胞的功能表达.结果 实验组反应器中肝细胞氧耗率为对照组的1.5倍,葡萄糖消耗为对照组的2倍.同时,实验组肝细胞的白蛋白分泌及尿素合成各项功能均明显高于对照组.结论 在培养液中加入红细胞能显著改善反应器中肝细胞的氧供,从而提高反应器中细胞的葡萄糖代谢及各种肝特异功能的表达.该方法简便易行,效果明显,有望成为解决反应器中氧供的有效手段.     

生物人工肝中肝细胞的应用研究进展

肝细胞是生物人工肝中的核心部分，决定着其治疗效果。