WWOX基因对卵巢癌PEO1细胞黏附能力的影响

目的 观察WWOX基因转染细胞对卵巢癌PEO1细胞黏附能力的影响,并探讨其作用机制.方法 利用已构建的WWOX转染细胞、质粒转染细胞及PEO1母细胞进行黏附实验,观察不同细胞对纤粘连蛋白(Fn)介导的细胞黏附性.利用整合素α和β介导的细胞黏附实验,筛选出与卵巢癌细胞黏附有关的整合素.利用筛选出的整合素,进行封闭卵巢癌细胞表面整合素的功能实验,流式细胞检测整合素的表达情况.结果 在Fn包被的培养孔中培养2 h后,WWOX转染细胞对Fn的细胞黏附性明显低于PEO1母细胞和质粒转染细胞(均P<0.01).在质粒转染细胞中,整合素α2和α3的表达明显高于WWOX转染细胞(均P<0.05),而整合素β1、β2的表达无明显变化(P>0.05);封闭整合素α3后,所有转染细胞对Fn的黏附性明显降低,与非特异性抗体IgG相比,差异有统计学意义(P<0.05),而封闭整合素α2后,与非特异性抗体IgC相比,差异无统计学意义(P>0.05).流式细胞检测结果显示,在WWOX转染细胞中,整合素α3的表达明显低于质粒转染细胞(P<0.05).结论 WWOX基因通过调节卵巢癌细胞与细胞外基质的相互作用,降低整合素α3活性,进而降低卵巢癌细胞对Fn介导的黏附性.     

TGF-β1小干扰RNA影响人腹膜间皮细胞黏附胃癌细胞株SGC-7901的研究

目的:观察人腹膜间皮细胞转染TGFβ1小干扰RNA后对胃癌细胞株SGC7901黏附的变化,探讨其治疗腹膜转移的作用。方法:使用线性化的pcPURβicassette质粒构建针对TGFβ1基因的siRNA表达载体;采用胰蛋白酶EDTA消化法,从人的腹膜组织中分离腹膜间皮细胞。将TGFβ1siRNA载体转染人腹膜间皮细胞,以半定量RTPCR和Western蛋白印迹方法检测转染后间皮细胞中TGFβ1表达水平的变化,以3HTdR掺入实验测定腹膜间皮细胞和人胃癌细胞株SGC7901之间的黏附变化。结果:电泳、DNA测序证实合成的siRNA基因序列正确并已准确克隆入pcPURβicassette载体。免疫组化染色结果显示腹膜间皮细胞角蛋白、波形蛋白表达阳性,而白细胞共同抗原(CD45)、第Ⅷ因子相关抗原阴性。与对照组比较,TGFβ1siRNA载体能显著下调TGFβ1mRNA(0.779±0.091vs0.503±0.064,P=0.013)和蛋白(77.67±5.69vs29.33±6.03,P=0.001)在腹膜间皮细胞中的表达,间皮细胞黏附胃癌细胞的能力减弱。结论:载体介导的RNAi技术可成功地干扰TGFβ1在腹膜间皮细胞中的表达。同时,降低了间皮细胞黏附肿瘤细胞的能力,有望减少胃癌腹膜转移的发生。     

粘附分子与卵巢癌SKOV3ipl多细胞团簇形成和耐药的关系

目的 :以卵巢癌SKOV3ipl细胞形成的多细胞团簇为模型 ,检测CD4 4、CD5 4、CD2 9、E 钙粘蛋白 (E cadherin ,E cad)mRNA水平及蛋白表达 ,探讨粘附分子与多细胞团簇形成及耐药的关系。方法 :用液体重叠系统获得SKOV3ipl多细胞团簇 ,以单层细胞为对照 ,用逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)检测上述四种粘附分子mRNA水平 ,用流式细胞检测法 (FCM)测定其在团簇细胞中的表达。结果 :RT PCR结果表明 ,团簇细胞的CD4 4mRNA和CD2 9mRNA条带光密度值分别是单层细胞的 0 6 2 6和 0 792倍 ,CD5 4mRNA和E cadmRNA条带光密度值分别是单层细胞的 1 815和 1 344倍 ,提示单层SK OV 3ipl细胞形成团簇后CD4 4和CD2 9基因表达活性下调 ,而CD5 4和E cad基因表达活性增强。FCM结果表明 ,SKOV3ipl单层细胞及团簇细胞CD4 4表达率分别为 (75 995± 3 0 4 6 % )、(5 0 70 0± 9 35 1% ) ,团簇细胞CD4 4表达比单层细胞明显降低 (P =0 0 0 1)。和对照细胞相比 ,单层SKOV3ipl细胞不表达CD5 4 (P =0 5 6 3) ,形成团簇后表达明显升高 (P <0 0 1)。单层细胞和团簇细胞CD2 9都有高表达 ,阳性率分别为 (96 2 90± 1 2 0 1% )、(92 4 94± 2 0 5 5 % ) ,团簇细胞CD2 9表达明显低于单层细胞 (P =0 0 14 )。和对照细胞相比 ,单层SKOV3ip     

结肠癌HT29细胞的相关分子表达及与多药耐药的相关性

目的:探讨结肠癌HT29细胞的相关分子表达及与多药耐药的相关性。方法:选择人结肠癌HT29细胞株进行三维培养,采用RT-PCR与免疫组化检测整合素ανβ的表达情况,同时在三维培养和整合素ανβ3阻断型抗体加入条件下对细胞的多药化疗耐药性进行检测。结果:结肠癌HT29细胞在三维培养24h后,部分聚集成由数个细胞组成的细胞团,电镜观察多细胞球球体呈较规则的致密的球形结构,多细胞球球体模型构建成功。结肠癌HT29细胞多细胞球球体中整合素ανβ3基因的表达比一般平面培养细胞高,整合素β3蛋白、整合素αν主要定位于胞浆,在多细胞球球体中表达明显高于普通平面培养细胞。HT29细胞多细胞球球体+整合素ανβ3抗体组在5-氟尿嘧啶和奥沙利铂作用后48h的细胞凋亡率为0.31±0.04,细胞坏死率为0.52±0.02;而HT29细胞多细胞球球体组的细胞凋亡率与坏死率分别为0.14±0.03和0.21±0.03,对比差异明显(P<0.05)。结论:结肠癌HT29多细胞球球体中的整合素ανβ3在基因与蛋白水平都呈现表达升高的趋势,可能是细胞多药耐药产生的重要原因。     

CCL18通过促进整合素的聚集增强乳腺癌细胞黏附于细胞外基质

背景与目的:在乳腺癌微环境中,肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophages,TAMs)分泌CCL18,CCL18与病人的预后呈负相关。本文旨在探讨来源于TAMs的CCL18是否能促进乳腺癌细胞黏附于细胞外基质(extracellular matrix,ECM),进一步阐明CCL18促进乳腺癌细胞黏附于ECM的分子机制。方法:在无血清培养体系中,用纤粘连蛋白包被培养板,用黏附实验的方法检测CCL18对乳腺癌SK-3rd细胞黏附于ECM的作用;用免疫荧光的方法检测CCL18对SK-3rd细胞表面整合素的影响。结果:CCL18通过引起乳腺癌SK-3rd细胞表面整合素的聚集,导致乳腺癌SK-3rd细胞黏附于ECM的数量明显增多。结论:CCL18通过促进整合素聚集而促进乳腺癌细胞黏附于ECM。     

结直肠癌细胞外基质与癌细胞上皮-间质转化和分期的相关性

目的：细胞外基质（extracellular matrix,ECM）作为肿瘤微环境的重要组成部分,参与肿瘤的发生发展。而上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）是肿瘤细胞获得运动和侵袭能力的重要方式。本研究通过研究不同分期结直肠癌 ECM 的变化,探讨其对结肠癌细胞系 HT29 EMT 的影响及作用机制。方法收集2011-01-01－2012-05-31北京朝阳医院普外科手术切除的80例结直肠癌组织和20例正常的结肠组织。应用胰酶脱细胞法制备不同分期结直肠癌 ECM,并与结肠癌细胞系 HT29复合培养,免疫组化和蛋白质印迹法检测不同分期结直肠癌 ECM 组中E-钙黏蛋白（E-cadherin,E-cad）和整合素αvβ6的表达情况。结果 E-cad 主要表达于细胞膜与细胞质中,在正常结肠ECM 组中强阳性表达,在结直肠癌 ECM 组中表达强度降低。Ⅰ期结直肠癌 ECM 组 E-cad 灰度值为1．01±0．11,Ⅱ期为1．08±0．07,Ⅲ期为1．31±0．32,Ⅳ期为1．45±0．57,均与正常结肠 ECM 组相比差异有统计学意义,P Ⅰ期＝0．049, P Ⅱ期＝0．028,P Ⅲ期＝0．003,P Ⅳ期＝0．001。整合素αvβ6主要表达于细胞膜,在正常结肠 ECM 组中低表达,在结直肠癌ECM 组中表达强度增高。Ⅰ期结直肠癌 ECM 组整合素αvβ6表达灰度值为3．75±0．57,Ⅱ期为3．67±0．61,Ⅲ期为3．45±0．69,Ⅳ期为2．95±0．96,均与正常结肠 ECM 组相比差异有统计学意义,P Ⅰ期＝0．048,P Ⅱ期＝0．034,P Ⅲ期＝0．014,P Ⅳ期＝0．002。结论重构后的结直肠癌 ECM 具有促癌细胞发生 EMT 的能力;并且结直肠癌分期越高,其 ECM促癌细胞发生 EMT 的能力越强。     

整合素β1表达下调对非小细胞肺癌细胞迁移和黏附能力的影响

目的:构建整合素β1基因特异的RNA干扰质粒,探讨抑制整合素β1蛋白表达对非小细胞肺癌(non-small cell lung carcinoma,NSCLC)细胞生物学行为的影响.方法:根据GenBank数据库提供的整合素β1基因核苷酸序列,选择设计1条能转录短发夹RNA (small hairpin RNA,shRNA)的DNA序列,命名为17-2;同时设计1条非特异性序列作为阴性对照,命名为N.将设计序列与pUC19质粒载体连接,转化感受态大肠埃希菌,挑选阳性克隆,抽取重组质粒.2种重组质粒分别转染NSCLC耐药细胞株PC-9/AB2细胞,用G418筛选后挑选单克隆并扩增获得稳定转染株.荧光显微镜、实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,RFQ-PCR)和Western印迹法检测整合素β1 mRNA及蛋白表达水平.细胞划痕实验和黏附实验比较整合素β1对细胞迁移和黏附能力的影响.结果:G418筛选出稳定转染2种质粒的PC-9/AB2细胞,荧光显微镜下可见满视野带绿色荧光的细胞,转染17-2组细胞中整合素β1的mRNA及蛋白表达水平明显低于转染N组细胞及母细胞PC-9/AB2.划痕实验和黏附实验表明,整合素β1抑制可以使细胞迁移和黏附能力明显降低.结论:成功构建针对整合素β1基因的特异性shRNA真核表达载体,转染NSCLC细胞后可抑制整合素β1蛋白表达.整合素β1表达抑制后细胞迁移和黏附能力明显降低.     

人胃癌细胞的黏附过程和整合素β1表达的研究

目的:观察胃癌细胞黏附过程中的形态学变化,以及在此过程中整合素β1表达的部位和强度,探讨胃癌细胞黏附过程与整合素β1表达之间的关系,为抑制胃癌细胞转移的研究提供依据。方法:借助位相差显微镜观察和激光共聚焦显微镜对活体胃癌MKN1细胞黏附过程中的形态变化和整合素β1的表达部位和程度进行观察。结果:胃癌细胞首先发生形态学变化,细胞伸出伪足与培养盘和其他细胞接触形成稳定状态,在此过程中整合素β1在细胞膜的伪足部分的表达增强,并形成集落团块。结论:人胃癌MKN1细胞在黏附过程中发生形态学变化,并与整合素β1的表达增强有直接关系。     

人胃癌细胞的黏附过程和整合素β1表达的研究

目的：观察胃癌细胞黏附过程中的形态学变化,以及在此过程中整合素β1表达的部位和强度,探讨胃癌细胞黏附过程与整合素β1表达之间的关系,为抑制胃癌细胞转移的研究提供依据。方法：借助位相差显微镜观察和激光共聚焦显微镜对活体胃癌MKN1细胞黏附过程中的形态变化和整合素β1的表达部位和程度进行观察。结果：胃癌细胞首先发生形态学变化,细胞伸出伪足与培养盘和其他细胞接触形成稳定状态,在此过程中整合素β1在细胞膜的伪足部分的表达增强,并形成集落团块。结论：人胃癌MKN1细胞在黏附过程中发生形态学变化,并与整合素β1的表达增强有直接关系。     

整合素α5β1与CD44s在非小细胞肺癌中表达的意义

目的:研究整合素α5β1与CD44s在NSCLC中表达的意义。方法:应用免疫组织化学SP法检测53例非小细胞肺癌标本中整合素α5β1和CD44s的表达情况,用卡方检验对各指标表达情况与临床病理参数的关系进行分析,用Spearman分析探讨NSCLC组织中整合素α5β1和CD44s表达强度的相关性。结果:有淋巴结转移组和无淋巴结转移组的NSCLC中整合素α5β1的表达阳性率分别为67.50%和30.77%,差异有显著性(P<0.05);CD44s在鳞癌组织中的表达强度明显高于腺癌,表达率分别为46.87%和14.29%,P<0.05;有淋巴结转移组与无淋巴结转移组的NSCLC组织中CD44s的表达率分别为54.55%和23.00%,两者有显著性差异(P<0.05)。NSCLC组织中整合素α5β1与CD44s表达程度呈正相关(rs=0.502,P<0.001)。结论:整合素α5β1和CD44s在NSCLC的表达呈正相关,是预测NSCLC病人预后的有意义的指标。     

硫酸右旋糖苷抑制人胃癌细胞黏附以及整合素β1蛋白表达的机制研究

[目的]探讨硫酸右旋糖苷(DS)对人胃癌MKN1细胞的黏附抑制作用机制。[方法]分别在培养液中加入DS或PBS对MKN1细胞进行培养,用荧光免疫细胞染色法进行染色,用共聚焦显微镜对固定细胞和活细胞在培养盘上的贴壁过程及形态变化进行观察,用Western blotting对整合素β1蛋白的表达水平进行测定。[结果]MKN1细胞形成伪足并与其他细胞接触形成单细胞层。整合素β1在细胞膜上有强表达并形成集落。DS使MKN1细胞的伪足缩短,表现出维持圆形形状的倾向;抑制整合素β1的表达并使已经形成的整合素集落区域减少。MKN1细胞表达了整合素β1的两种形式(130kDa和110kDa),实验组贴壁细胞整合素β1蛋白的表达分别减少到对照组细胞的64%(130kDa)和57%(110kDa),实验组游离细胞整合素β1蛋白的表达分别减少到对照组细胞的51%(130kDa)和15%(110kDa)。[结论]DS对人胃癌细胞MKN1黏附过程的抑制与整合素β1蛋白表达的减少有关。     

非小细胞肺癌中整合素和ECM蛋白表达与转移及预后的相关性研究

背景与目的 肿瘤的浸润和转移严重威胁着人类生命,正确认识和评估肿瘤的牛物学行为有重要的临床意义.整合素和细胞外基质(ECM)的异常表达在肿瘤浸润转移过程中发挥着重要作用.本研究的目的是探讨整合素α5、β1(integrin α5、β1)与细胞外基质(ECM)在人非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与淋巴结转移及患者预后之间的关系,评估它们在肿瘤转移过程中的作用.方法 采用免疫组化方法 测定119例NSCLC组织中整合素α5、β1及Ⅳ犁胶原、纤连蛋白(fibronectin,FN)、细胞黏合索的表达,探讨其与临床病理特征特别是与淋巴结转移的关系,并分析其与患者预后的相关性.结果 Ⅳ型胶原表达与淋巴结转移呈负相关(P＜0.01),与患者预后呈正相关(P＜0.01),而整合素α5和β1表达与淋巴结转移呈正相关(P＜0.01),且整合素α5表达与患者预后呈负相关(P＜0.01).整合素α5表达与整合素β1表达呈正相关而与Ⅳ型胶原表达呈负相关.Ⅳ型玵胶原在分期较早和分化较好时表达率较高,整合素α5和β1则相反.结论 整合素α5和β1的高表达与ECM蛋白的低表达与NSCLC的淋巴结转移及患者不良预后相关,整合素α5与Ⅳ型胶原可能可以作为评估患者预后的重要指标.     

干细胞标志物在卵巢癌SKOV3细胞侧群细胞中的表达

目的：检测干细胞相关标志物在卵巢癌SKOV3细胞系侧群（side population,SP）细胞和非侧群（Non-SP）细胞中的表达差异,确定卵巢癌干细胞特异性标志物。 方法： Hoechst 33342染色检测SKOV3细胞中SP细胞的比例,流式细胞术检测SKOV3细胞的SP和Non-SP细胞中干细胞标志物CD133、CD117、CD44、ABCG2、ALDH1 的表达情况,荧光定量PCR检测SP和Non-SP细胞中 ABCG2、ALDH2、NANOG、OCT4、SOX2、CD133、CD117 mRNA的表达水平。 结果： SKOV3细胞中SP细胞比例为(1.56±0.35)%。 ALDH1、ABCG2在SP细胞中表达率分别为（87.3±5.76）%、（29.48±4.43）%,在Non-SP的表达率分别为（5.32±0.47）%、（3.01±1.69）%,差异有统计学意义（ P <0.01）;CD44在这两种细胞亚群中的表达率均高于99%（ P >005）;CD133、CD117在这两种细胞亚群中均不表达。 ALDH1、ABCG2、 NANOG、OCT4和SOX2 mRNA在SP细胞中的表达分别是Non-SP细胞的21.03倍（ P =0.001）、3.14倍（ P =0.001）、23.94倍（ P =0.001）、10.73倍（ P =0.009）和21.46倍( P =0001), CD133、CD117 mRNA在两种细胞亚群中均不表达。 结论： 人卵巢癌细胞株SKOV3中存在SP细胞亚群, ALDH1、ABCG2和NANOG、OCT4、SOX2 mRNA可能是卵巢癌干细胞标志物,为诊断及治疗卵巢癌提供了潜在的靶点。     

DC-CIK对急性髓细胞白血病干细胞的杀伤作用

目的:研究树突状细胞(dendritic cell,DC)联合同源细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK)对急性髓细胞白血病细胞株KG-1a中白血病干细胞(leukemic stem cell,LSC)的体外杀伤和诱导凋亡作用。方法:分离健康人外周血单个核细胞,贴壁细胞用GM-CSF和IL-4诱导培养DC,悬浮细胞用IL-2、IL-1、IFN-γ和CD3 mAb诱导培养CIK。将KG-1a细胞冻融物作为抗原负载DC(即Ag-DC),与CIK共培养作为实验组(Ag-DC-CIK),无抗原负载的DC与CIK共培养作为对照组(DC-CIK),单独CIK作为空白对照组,与KG-1a共育后流式细胞术检测各组细胞中CD34+CD38-CD123+白血病干细胞的比例。DC-CIK与KG-1a细胞共培养,流式细胞术检测各组细胞中KG-1a细胞与CD34+CD38-CD123+细胞的凋亡率。结果:外周血单个核细胞成功诱导DC。CIK组、DC-CIK组及Ag-DC-CIK组中CD3+CD56+细胞比例为(17.36±4.44)%、(28.22±3.66)%和(36.16±5.88)%,依次升高(P<0.05)。与对照组相比,Ag-DC-CIK组与DC-CIK组细胞中CD34+CD38-CD123+细胞比例显著降低[(8.78±0.62)%vs(3.95±0.53)%、(3.03±0.62)%,P<0.01〗。DC-CIK可诱导KG-1a细胞凋亡,凋亡率由(2.34±0.74)%上升至(12.27±1.01)%,但对其中CD34+CD38-CD123+细胞无明显的诱导凋亡作用。结论:DC联合CIK能杀伤急性髓细胞白血病干细胞,但无明显的诱导凋亡作用。     

脐血及外周血中细胞毒性T细胞的体外诱导及杀瘤活性研究

目的　在体外研究卵巢癌细胞诱导脐血来源的CTL的扩增及其杀瘤活性。探索其用于卵巢癌过继免疫治疗的可行性。方法　从脐血中分离出单个核细胞 ,用不同剂量的SKOV 3细胞及IL -2刺激扩增 ;用FCM检测表型变化 ,MTT比色法检测其对SKOV 3及K 5 62的杀伤活性 ,并与用同样方法所得外周血来源CTL细胞相对照。结果　用 2× 10 6个 /ml的卵巢癌细胞可诱导脐血CTL细胞较高的杀伤活性为 5 3 .46%± 8.45 % ;诱导 10天后杀伤SKOV 3活性为 44 .0 9%± 6.95 % ,杀伤K 5 62的活性为41.0 3 %± 5 .79% ,CD3、CD4、CD 8及CD4/CD8值分别为 5 2 .0 0± 9.5 0、3 6.0 0± 4.80、3 8.0 0± 10 .2 0、1.10± 0 .40。结论　应用适当剂量的抗原可诱导较高活性的脐血源CTL ,对卵巢癌细胞株有较高的杀伤活性     

缺氧条件下缺氧诱导因子-1α抑制剂YC-1对人卵巢癌Skov3干细胞耐药的逆转作用

目的:探讨缺氧诱导因子-1α抑制剂YC-1在缺氧条件下逆转人卵巢癌干细胞Skov3耐药的机制。方法:选用人卵巢癌Skov3细胞通过无血清悬浮培养法富集肿瘤干细胞。分别于常氧及缺氧条件下检测不同浓度顺铂干预Skov3贴壁细胞及干细胞后测定顺铂对于两种细胞的抑制作用,及缺氧后干性指标、耐药指标ABCG2及HIF-1α的表达。当给予HIF-1α抑制剂YC-1后,测定顺铂对Skov3干细胞的抑制作用。并且检测干细胞干性指标、ABCG2及HIF-1α的mRNA表达。结果:悬浮培养的Skov3干细胞的干性指标CD44、NANOG、OCT-4及耐药指标ABCG2较贴壁细胞升高,且缺氧培养后,随着HIF-1α表达的升高,CD44、NANOG、OCT-4及ABCG2的表达也明显升高,P<0.05。干细胞的耐药性高于贴壁细胞,且缺氧培养耐药性增加。当给予YC-1后,干细胞耐药性下调,HIF-1α出现抑制,同时其干性指标CD44、NANOG、OCT-4、耐药ABCG2明显下调,P<0.05。结论:YC-1在缺氧条件下通过抑制HIF-1α下调ABCG2的表达逆转Skov3干细胞耐药。     

酪氨酸激酶受体B与人卵巢癌OVCAR-3细胞侵袭能力的关系

背景与目的: 失巢凋亡抑制因子酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor B,TrkB)能诱导正常上皮细胞的恶性转化并且使该细胞具有高转移能力.TrkB在神经母细胞瘤和其他多种人类高侵袭性恶性d肿瘤组织中过度表达,TrkB在卵巢癌细胞中的表达及其与卵巢癌细胞的高侵袭能力的关系的研究鲜有报道.本研究探讨失巢凋亡抑制因子酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor B,TrkB)与人卵巢癌OVCAR-3细胞侵袭能力的关系.方法:RT-PCR和Western印迹法检测卵巢癌细胞系OVCAR-3细胞贴壁培养、细胞立体培养以及细胞立体培养得到的多细胞团簇经胰酶消化成单细胞后再次贴壁培养细胞TrkB的表达差异;体内、体外细胞侵袭实验检测通过RNAi技术沉默TrkB后OVCAR-3细胞侵袭及转移能力的改变.结果: RT-PCR结果表明,OVCAR-3多细胞团簇中TrkB mRNA的表达高于贴壁细胞(P<0.001);Western印迹结果显示,与OVCAR-3贴壁细胞比较,立体培养细胞中全长TrkB表达升高[(17.47±0.58)%vs(8.93±0.19)%,(P<0.001)].体内、体外细胞侵袭实验表明,OVCAR-3细胞团簇的侵袭转移能力较普通贴壁细胞明显增强(P<0.01);TrkB沉默后OVCAR-3的侵袭及转移能力受到抑制(P<0.01).结论: TrkB通过失巢凋亡抑制机制介导了卵巢上皮性癌细胞的侵袭和转移.     

卵巢癌细胞PI3K/AKT通路与肾上腺髓质素促迁移作用的相关性研究

  目的  检测PI3K/AKT信号通路在肾上腺髓质素(AM)促卵巢癌细胞HO8910迁移中的作用。  方法  利用划痕实验检测外源性AM对卵巢癌细胞HO8910迁移功能的影响, 并且检测PI3K抑制剂Wortmannin对AM促进卵巢癌细胞迁移功能的干扰。为进一步研究AM对AKT磷酸化的影响, 应用蛋白印迹法检测细胞AKT蛋白磷酸化的表达, 应用整合素α5β1抑制性抗体(mAb)拮抗AM对卵巢癌细胞AKT磷酸化作用。  结果  外源性AM处理的卵巢癌细胞12 h迁移率(62.83±4.46)%明显高于正常卵巢癌细胞的迁移率(30.26±1.55)%(P < 0.001), PI3K抑制剂Wortmannin干扰1 h后再用Am处理12 h, 细胞迁移率为(40.44±0.88)%, 明显低于单纯应用AM刺激的细胞(P=0.001)。AM可以促进卵巢癌细胞迁移(P < 0.001), PI3K抑制剂Wortmannin可以拮抗AM的促迁移作用(P=0.001)。AM可以促进细胞AKT蛋白磷酸化, Wortmannin、整合素α5β1抑制性抗体均可以干扰AM对AKT蛋白磷酸化作用。  结论  在卵巢癌HO8910细胞中, PI3K/AKT的活化是AM促进卵巢癌细胞迁移重要机制, 而整合素α5β1可能作为感受器参与AM促进细胞PI3K/AKT通路的活化。      

人肝癌微血管内皮细胞黏附分子表达特点及其对外周血单个核细胞黏附和跨内皮迁移的影响

目的:研究人肝癌微血管内皮细胞(human liver cancer microvascular endothelial cell,HLCMVEC)上黏附分子表达的特点及其对免疫细胞黏附和迁移的影响.方法:分离培养HLCMVEC,以人肝窦内皮细胞系(liver sinusoid endothelial cell, LSEC)作为正常对照.通过细胞ELISA方法比较多种黏附分子在两种内皮细胞上的表达.外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)用荧光染料BCECF标记,将其与HLCMVEC或LSEC共培养,随后采用倒置荧光显微镜和连续光谱荧光仪检测PBMC在两种内皮细胞上的黏附和跨内皮迁移能力;此外,共培养前分别预加各种黏附分子的功能抗体,然后分析各种黏附分子在PBMC与肿瘤微血管内皮细胞黏附和迁移中的作用.结果:HLCMVEC表达CD31、CD34和细胞间黏附分子-3(intercellular adhesion molecule-3,ICAM-3)的水平低于LSEC(P＜0.05),表达ICAM-1和血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-l,VCAM-1)的水平明显低于正常LSEC(P＜0.01),但表达整合素αvβ3和αvp5明显高于LSEC(P＜0.01).PBMC在HLCMVEC上的黏附和趋化剂诱导下的跨内皮迁移均显著低于LSEC[黏附:(205.5±46.0) vs (330.5±48.4)个,迁移:(49.0±10.6) vs(110.0±19.2)个,均P＜0.01];该黏附和迁移可被ICAM-1、ICAM-3、VCAM-1抗体明显阻断(P＜0.01),抗CD31抗体对黏附阻断不明显但能阻断跨内皮迁移(P＜0.05).结论:HLCMVEC特有的黏附分子表达特点抑制了PBMC的黏附和跨内皮迁移.     

抗精子蛋白17单克隆抗体对人卵巢癌细胞SKOV-3的抑制作用

目的观察抗精子蛋白17单克隆抗体(anti-Sperm protein 17 monoclonal antibody,anti-Sp17 mAb)对卵巢癌细胞系SKOV-3的体外抗肿瘤活性和机制。方法采用MTT法观察抗anti-Sp17 mAb对肿瘤细胞SKOV-3的细胞毒作用;以外周血单个核细胞PBMCs为效应细胞,SKOV-3为靶细胞,在效靶比分别为80∶1、40∶1和20∶1的条件下,观察anti-Sp17 mAb的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用;以SKOV-3为靶细胞,加入浓度为2.5%、5%、10%和20%的健康人新鲜血清作为补体,观察单抗的补体依赖性细胞毒性。结果anti-Sp17 mAb对SKOV-3无明显细胞毒作用;与对照组相比,单抗对SKOV-3的ADCC作用呈剂量依赖关系,在效靶比为80∶1,孵育24 h后,细胞生长抑制率约为22%;补体的加入也可显著提高单抗对SKOV-3细胞生长的抑制率,在血清浓度为5%,单抗浓度为10 μg/ml时抑制率达到了40%。结论anti-Sp17 mAb对表达Sp17蛋白的卵巢癌细胞株SKOV-3具有明显的ADCC和CDC效应。