人乳头瘤病毒与P 53协同致膀胱移行细胞癌关系的研究

目的 研究人类乳头瘤病毒（ＨＰＶ）６、１１、１６和１８型及Ｐ５３与膀胱移行细胞癌的关系。方法 采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测了７５例膀胱移行细胞癌组织中ＨＰＶ的感染,免疫组化ＳＰ法检测Ｐ５３蛋白表达情况。结果 膀胱移行细胞癌组织中ＨＰＶ６、１１、１６和１８的阳性率分别为６．７％（５／７５）,５．３％（４／７５）,３３．３％（２５／７５）和６．７％（５／７５）。低危型ＨＰＶ（６或１１）阳性率为９．３％（７／７５）,高危型ＨＰＶ（１６或１８）阳性率为３４．７％（２６／７５）。同一膀胱癌组织中两种以上（包括两种）ＨＰＶ亚型感染８例,占１０．６％。ＨＰＶ６、１６和１８型之间感染阳性率在肿瘤有无转移组中差异显著（Ｐ〈０．０５）,ＨＰＶ１６、１８的阳性率在肿瘤病理分级中差异有极显著性（Ｐ〈０．０１）。ＨＰＶ ＤＮＡ型别     

不同引物介导的聚合酶链反应检测人乳头瘤病毒DNA

应用３对人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）引物对１０７例各种宫颈标本进行了聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增。结果显示，共同引物（ＧＰ）扩增，有５８．８％（３０／５１）宫颈鳞癌，１００％（１４／１４）尖锐湿疣、１３．６％（３／２２）宫颈炎和１０％（２／２０）正常宫颈出现ＨＰＶ阳性。型特异性引物ＳＰ１６／ＳＰ１８扩增，有３７．２％（１９／５１）宫颈鳞癌２５．７％（５／１４）尖锐湿疣和５％（１／２０）正常宫颈出现ＨＰＶ１６型阳性，５．８％（３／５１）宫颈鳞癌为ＨＰＶ１８型阳性。进一步用ＳＰ１６ｂ引物扩增，没有１例ＨＰＶ１６ｂ亚型被发现。说明宜颈磷癌和尖锐湿疣与ＨＰＶ感染有关，结合应用共同引物和型特异性引物可作为ＨＰＶ检测与分型方法。     

慢性宫颈炎患者宫颈中人乳头瘤病毒基因的检测

应用聚合酶链反应技术检测正常妇女与慢性宫颈炎患者宫颈人乳头瘤病毒感染情况的结果显示，南京市慢性宫颈炎患者ＨＰＶ－ＤＮＡ总阳性率达５８．６％；ＨＰＶ６，１１，１６，１８型阳性率分别为２９．３％，３０．７％，２８．６％和３４．３％，而正常妇女中ＨＰＶ总阳性率为１９．４％，４个型别ＨＰＶ阳性率为９．７％，１６．１％，３．２％和３．２％，明显低于宫颈炎患者。如皋市慢性宫颈炎患者ＨＰＶ－ＤＮＡ总阳性率高达８     

HPV16,18E6蛋白与p21ras,p53在食管癌组织中表达

采用ＳＰ免疫组化法对５２例食管鳞状细胞癌和３０例食管粘膜慢性炎（对照组）进行高危ＨＰＶ１６、１８Ｅ_６和ｐ２１ｒａｓ、ｐ５３癌基因产物的检测。结果表示：鳞癌组中Ｅ_６的阳性率为６７．３１％，与对照组相比差异有极显著性（Ｐ＜０．００１），其中Ｅ_６与ｐ５３呈双阳性者为５５．７７％（２９／５２）、８９．６６％（２６／２９），显示两者阳性着色出现在部分相同区域同一癌细胞核内（似表明Ｅ_６可与ｐ５３结合形成复合物从而导致野生型ｐ５３的降解）。本组ｐ２１ｒａｓ与ｐ５３、ｐ５３与Ｅ_６的阳性表达均具相关性（Ｐ＜０．０５）。提出ＨＰＶ１６、１８感染与本地区食管癌病因学密切相关，Ｅ_６抗体是诊断ＨＰＶ１６、１８感染的良好标记。     

斑点分子杂交检测HPV感染与宫颈癌的关系

采用ＤＮＡ－ＤＮＡ分子杂交技术，对经病理组织学确诊的慢性宫颈炎，宫颈癌和正常宫颈的宫颈活检组织中ＨＰＶ６，ＨＰＶ１１，ＨＰＶ１６，ＨＰＶ１８型ＤＮＡ进行同源序列检测，结果表明ＨＰＶ６，ＨＰＶ１１，ＨＰＶ１６，ＨＰＶ１８型ＤＮＡ的检出率在正常宫颈均为０；在慢性宫颈炎分别为１６．０９％，１２．６４％，１１．４９％，３．４５％；在宫颈癌组分别为３．９６％，１．９８％，４６．５３％，７．９２％。在宫颈癌组     

HPV16、18 E6蛋白在乳腺癌组织中的表达

目的：观察ＨＰＶ１６ 、１８ Ｅ６ 蛋白在人乳腺癌中的表达并探讨ＨＰＶ１６、１８ 感染与乳腺癌病因学的关系。方法：应用ＳＰ免疫组化法,检测５３ 例乳腺癌、２０ 例正常乳腺组织中ＨＰＶ１６、１８ Ｅ６ 蛋白的表达。结果：乳腺癌组织中ＨＰＶ１６、１８ Ｅ６ 蛋白的阳性表达率为５６－６％ （３０／５３）,多种组织学类型的乳腺癌组织中有ＨＰＶ１６、１８ 型感染的存在。结论：ＨＰＶ１６、１８ 型感染可能与乳腺癌的病因学密切相关。     

食管鳞癌HPV感染与病毒致癌基因E6的关系

目的：探讨人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）与食管鳞状细胞癌的关系。方法：采用多重引物多聚酶链反应（ＰＣＲ）的免疫组化技术、对１０４例食管鳞癌进行ＨＰＶ ＤＮＡ和病毒癌基因Ｅ６蛋白检测。结果：ＨＰＶ ＤＮＡ阳性者占５０．９６％（５３／１０４），其中ＨＰＶ１６型ＤＮＡ４９．０６％（２６／５３），ＨＰＶ１８型 ＤＮＡ５．６％（３／５３），ＨＰＶ６／１１ ＤＮＡ７．５％（４／５３）；两上或三个类型的混合感染占３７．     

宫颈癌患者外周血中的人乳头瘤病毒16例E6及E7蛋白…

本研究证明进展期宫颈癌患者１０／３７例和１０／４６例外周血中分别存在有ＨＰＶ１６Ｅ６和Ｅ７蛋白致敏的淋巴细胞，而４０例献血员中分别为１２．５％（５／４０）和１７．５％（７／４０）。４６例中有１７例和２５例分别进行了宫颈癌组织中的ＨＰＶ１６Ｅ６和Ｅ７基因序列检测，Ｅ６蛋白致敏淋巴细胞阳性的６例中检出与未检出Ｅ６序列的各占３例，Ｅ７蛋白致敏淋巴细胞阳性的５例中有３例未检出，有２例检出Ｅ７序列。     

HPV16,HPV18E6单抗SP法染色体会

ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８Ｅ６单抗ＳＰ法染色体会任占平作者单位：广西柳州市第一人民医院病理科５４５００１近年来，人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）１６、１８感染已被证实与人宫颈癌、肺癌、食管癌、大肠癌等恶性肿瘤病因学密切相关〔１，２〕。但目前国内对ＨＰＶ１６、ＨＰＶ...     

用通用引物聚合酶链反应对宫颈刮片中人乳头瘤病毒感染的快速筛检

用通用引物聚合酶链反应（ＧＰ－ＰＣＲ）可同时对人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）６、１１、１６、１８、３１、３３等型进行检测。该方法成功地用于临床宫颈刮片样品广谱ＨＰＶ感染的筛检。结果，宫颈癌组ＨＰＶ检出率（８５．５％）明显高于非癌组（１３．９％）（Ｐ＜０．０１）；对宫颈癌放疗前后ＨＰＶ阳性率比较，二者亦有明显差异（８５．５％，４３．７％，Ｐ＜０．０１）。证明ＧＰ－ＰＣＲ是一种在大规模人群中快速筛检多型ＨＰＶ感染的有效方法。     

宫颈癌中α-enolase表达及其与HPV感染的关系

目的探讨烯醇化酶-α(α-enolase)蛋白在宫颈鳞癌中的表达及其与HPV感染的关系。方法应用免疫组化PV-9000两步法检测30例慢性宫颈炎、61例宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)和70例宫颈鳞癌组织中α-enolase蛋白的表达,同时应用基因芯片技术检测70例宫颈鳞癌中HPV感染情况。结果 (1)α-enolase蛋白表达于细胞质和(或)胞核中。在慢性宫颈炎、CIN和宫颈癌中,α-enolase蛋白在胞质表达的阳性率分别为4.17%(1/24)、18.5%(10/54)和54.3%(38/70),表达依次增强(P=0.000)。(2)宫颈癌中HPV总感染率为97.1%(68/70),共检出8种HPV基因型,分别为HPV16、18、58、31、52、59、66、68,构成比为80.0%、14.3%、4.3%、4.3%、2.9%、2.9%、1.43%、1.43%。双重感染10例,占14.3%。HPV16、18为主要致病基因型。(3)宫颈癌中α-enolase蛋白表达的定位与HPV16/18感染呈正相关(r=0.340,P=0.012)。结论宫颈鳞癌中α-enolase蛋白表达与HPV16/18感染密切相关,二者在宫颈鳞癌的发生过程中可能起着协同作用。     

p53蛋白在宫颈鳞状上皮内病变与宫颈癌中的过度表达及其与H…

目的 探讨宫颈鳞状上皮内病变（ＳＩＬ）和宫颈癌中抑癌基因ｐ５３基因表达水平以及与ＨＰＶ的关系。方法 用免疫组化和ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法，对２６８例宫颈石蜡包埋组织（２９例慢性宫颈炎、６８例ＳＩＬ、１７１例宫颈癌）进行了ｐ５３蛋白水平及多型ＨＰＶ检测。结果 宫颈癌ｐ５３蛋白的过度表达率及强阳性过度表达率高于ＬＳＩＬ，ＨＰＶ１８阳性的ＳＩＬ及宫颈癌ｐ５３蛋白的过度表达率高于ＨＰＶ１６阳性和ＨＰＶ阴性者。     

Correlation between human papilloma virus infection in cervical lesions and expression of p53, p21 proteins and Ki-67

BACKGROUND: Human papilloma virus (HPV) is the most important factor in the oncogenic mechanism of cervical tumor. Furthermore, in a separate multi-stage process, abnormality in cell cycle kinetics has been demonstrated. In order to elucidate the oncogenic mechanism, we examined the relationship between cervical carcinoma and HPV infection, and also investigated the expression of p53 and p21 proteins as well as the cell proliferation capability by detecting Ki-67, and analyzed the correlations of these factors. MATERIALS AND METHODS: We studied the biopsy specimens from 107 patients of chronic cervicitis, cervical intraepithelial neoplasia and squamous cell carcinoma (SCC). HPV DNA was detected by the hybrid capture method. Immunostaining by LSAB procedures were performed using antibodies to p53 protein, p21 and MIB-1. The PCR-denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) method was used to search for mutation in exons 5, 6, 7 and 8 of p53. RESULTS: Of 107 cases studied, high-oncogenic HPV was detected in 80 cases (74.8%) with a particularly high prevalence in SCC. No correlation was observed between HPV infection and expression of p53, p21 or Ki-67. The degree of positivity of Ki-67 expression tended to be higher with disease progression. Cases strongly positive (2+) for p53 and p21 proteins were weakly positive for Ki-67, and cases positive (1+) or negative for p53 and p21 were strongly positive for Ki-67. CONCLUSION: In oncogenesis of cervical carcinoma, p53 protein, p21 protein and HPV may act separately as independent factors in some cases, and there is a strong possibility that other factors are involved.     

GnRH在宫颈鳞状细胞癌中的表达及意义

目的:从蛋白质及核酸水平研究GnRH(促性腺激素释放激素)在宫颈鳞状细胞癌中的表达,以探讨其存在的临床意义。方法:采用免疫组化和原位杂交两种实验方法,分别从蛋白质和核酸水平检测45例宫颈鳞状细胞癌及20例慢性宫颈炎中GnRH的表达。结果:在20例慢性宫颈炎宫颈上皮组织中GnRH及GnRH mRNA表达均为阴性,而在45例宫颈鳞状细胞癌组织中,GnRH阳性表达率为80%,GnRH mRNA阳性表达率为64.44%,即无论是在蛋白质水平还是在核酸水平比较两者均显示差异有显著性;定性及定量比较GnRH及GnRH mRNA在不同临床期别的宫颈癌组织中的表达情况,结果为GnRH定性表达率Ⅰ期50%(6/12),Ⅱa期85.7%(18/21),Ⅱb-期100%(12/12);GnRH mRNA定性表达率,Ⅰb期33.3%(4/12),Ⅱa期71.4%(15/21),Ⅱb-期83.3%(10/12);GnRH及GnRH mRNA在定性上表达有显著差别(P<0.05)。结论:宫颈鳞状细胞癌组织存在较高的GnRH,其有可能参与宫颈鳞状细胞癌发生、发展,为进一步研究通过抑制GnRH的产生,减少宫颈癌的发生及治疗宫颈癌提供了一定的理论基础。     

子宫颈病变组织中低分子量蛋白酶体表达与HPV16感染的关系

目的观察低分子量蛋白酶体(low molecular-weight protein,LMP)在子宫颈病变组织中的mRNA和蛋白表达,探讨其与HPV16感染的关系。方法以152例新疆维吾尔族妇女正常子宫颈上皮、子宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)和子宫颈鳞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)患者为研究对象,采用RT-PCR和免疫组化法鉴定LMP2和LMP7mRNA及蛋白表达水平;采用PCR技术检测相应标本HPV16感染情况。结果 (1)LMP2、LMP7随着子宫颈病变的加重其蛋白表达逐渐降低,且mRNA表达水平与蛋白表达趋势相一致。在CIN中LMP2、LMP7蛋白表达下调和缺失率分别为25.0%/15.6%、29.7%/23.4%;在子宫颈癌中LMP2、LMP7蛋白的表达下调和缺失率分别为17.5%/34.9%、23.8%/41.3%。临床病理参数进行分析发现LMP2、LMP7与子宫颈癌分化程度及淋巴结转移密切相关(P<0.05)。(2)PCR结果显示,HPV16的检出率随着子宫颈病变的进展而增加,在慢性子宫颈炎、CIN和子宫颈癌组织中阳性率分别为8%(2/25)、67.2%(43/64)和77.8%(49/63),且随着肿瘤恶性程度的增加其阳性表达率增加,各组间阳性表达差异有统计学意义(P<0.05)。在CIN中LMP7表达下调与HPV16感染有关(P<0.05),子宫颈癌中LMP2和LMP7表达下调与HPV16感染有关(P<0.05)。结论 LMP基因的转录表达下调或蛋白质表达缺失与维吾尔族妇女子宫颈癌病变进程密切相关,其中HPV16感染可能是重要原因之一。     

新疆维吾尔族妇女宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中FHIT、P16~(INK4a)、RARβ蛋白的表达及意义

目的探讨脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)、P16INK4a与视黄酸受体β(retinoic acid receptor-beta,RARβ)蛋白在新疆维吾尔族妇女宫颈上皮内瘤变(cervical intra-epithelial neoplasia,CIN)及宫颈癌中的表达及其意义。方法采用免疫组化链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶链接(SP)法检测20例慢性宫颈INK4a炎、30例CIN(CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ各10例)以及40例浸润性宫颈鳞癌组织标本中FHIT、P16INK4a及RARβ蛋白的表达。结果(1)FHIT蛋白阳性表达率依次为慢性宫颈炎(90.00%)CIN(66.67%)浸润性宫颈鳞癌INK4a(27.50%)(P=0.000);P16和RARβ蛋白阳性表达率依次为浸润性宫颈鳞癌(82.50%;90.00%)CIN(46.67%;53.33%)慢性宫颈炎(0.00%;10.00%)(P=0.000;P=0.000)。(2)在宫颈各组织中,FHIT蛋白INK4a与P16INK4a蛋白表达呈负相关(r=-0.384,P=0.000);FHIT蛋白与RARβ蛋白表达呈负相关(r=-0.291,P=0.006);P16INK4a蛋白与RARβ蛋白表达呈正相关(r=0.445,P=0.000)。结论抑癌基因FHIT表达缺失与P16INK4a和RARβ过度表达与宫颈癌的发生发展密切相关,并且FHIT、P16INK4a、RARβ具有协同作用。FHIT蛋白与P16INK4a蛋白和RARβ蛋白的联合检测可作为宫颈癌早期诊断和宫颈癌进展的分子指标。     

宫颈鳞状细胞癌和癌前病变中Skp2表达及其与HPV16/18感染的关系

目的 探讨skp2在宫颈鳞状细胞癌和癌前病变中的表达规律及其与人乳头状瘤病毒(HPV)感染之间的关系.方法 采用免疫组织化学(ABC法)和原位杂交检测Skp2蛋白和HPV16/18 DNA在30例正常宫颈鳞状上皮、29例宫颈低级别上皮内瘤变、31例高级别上皮内瘤变和31例宫颈鳞状细胞癌中的表达.结果 Skp2在正常宫颈鳞状上皮中呈阴性,与宫颈低级别上皮内瘤变(阳性表达率为13.8%,4/29)之间差异无统计学意义(P>0.05).随着上皮病变级别升高,表达也逐渐增强,在宫颈鳞状细胞癌中表达更强;HPV16/18 DNA在四组中的阳性表达率,除高级别上皮内瘤变和宫颈鳞状细胞癌两组间差异无统计学意义外(均为96.8%),其余各组之间差异均有统计学意义(P<0.01);在宫颈低级别上皮内瘤变中skp2蛋白表达和HPV感染相关无统计学意义,但在高级别上皮内瘤变和宫颈鳞状细胞癌两组中均呈正相关(γ高级别=0.373,γ癌 =0.416,P<0.05).结论 Skp2过表达主要在宫颈鳞状细胞癌形成的中晚期起作用,可作为一个早期诊断恶性的指标,且可能与HPV16/18感染有协同作用.E7-skp2-Rb可能是HPV感染诱导宫颈鳞状细胞癌形成的一条新致癌途径.     

子宫颈组织中人乳头瘤病毒16型E6基因片段的定量PCR检测

目的探讨子宫颈组织中人乳头瘤病毒(HPV)16型E6基因的含量与疾病严重程度的关系.方法用定量聚合酶链反应(PCR)检测20例慢性宫颈炎,6例宫颈非典型增生,18例宫颈癌组织中HPV16E6基因的拷贝数.结果HPV16E6基因在慢性宫颈炎,宫颈非典型增生及宫颈癌组织中的平均拷贝数(拷贝/μgDNA)分别为6.16×104,5.33×106和6.45×106.统计学处理表明,宫颈非典型增生及宫颈癌组织中E6基因的拷贝数显著高于慢性宫颈炎(P<0.01),宫颈癌组织中E6基因的拷贝数高于宫颈非典型增生组织,但差异无显著性(P>0.05).结论HPV16E6基因的拷贝数与宫颈疾病程度呈正相关,定量检测HPV16E6基因可作为监测宫颈癌高危人群的一种方法.     

HPV感染和p53异常表达与宫颈鳞癌的关系

目的研究宫颈鳞癌与p53蛋白表达和HPV感染的关系,探讨宫颈鳞癌的形成机制。方法采用RT-PCR法分别检测p53基因在39例宫颈鳞癌组织和39例正常宫颈黏膜组织中的表达情况以及PCR方法检测HPV在这些组织中的感染情况。结果 HPV在宫颈鳞癌组中阳性率为48.72%(19/39),正常组织中为14.81%(4/27),p53基因表达在宫颈鳞癌组中阳性率为53.85%(21/39),正常组织中为18.52%(5/27),宫颈癌组的HPV感染和p53表达均高于正常组(P0.05)。结论 HPV感染与p53基因的异常表达与宫颈鳞癌发生密切相关,联合检测能提高准确性。