更年春方对破骨细胞的分化与凋亡及骨吸收活性的影响

目的 探讨更年春方对破骨细胞的分化、凋亡及骨吸收活性的影响.方法 分离培养大鼠破骨细胞,加入含不同浓度的"更年春"有物血清培养液培养,生理盐水作为阴性对照组,尼尔雌醇作为阳性对照组,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色对TRAP阳性多核破骨细胞计数;用显微摄影结合计算机图像分析测定骨吸收造成的陷窝面积;采用AnnexinV-FITC凋亡荧光染色结合TRAP染色法计数破骨细胞的凋亡率.结果 与生理盐水组相比,尼尔雌醇组和更年春高剂量组TRAP染色阳性的破骨细胞数量显著减少(P＜0.01);破骨细胞的凋亡率明显增加(P＜0.01);尼尔雌醇组,更年春高、中剂量组骨吸收陷窝的面积明显减少(P＜0.01).与尼尔雌醇组相比,更年春高剂量组差别无显著性.结论 更年春可抑制破骨细胞的形成和分化及骨吸收活性,促进破骨细胞的凋亡,从而发挥其抗骨质疏松的作用.     

补肾填精方对去卵巢大鼠炎症因子与破骨细胞活性的影响

目的:对比观察补肾填精方左归丸与左归丸去补阳药对去卵巢骨质疏松模型大鼠炎症因子和破骨细胞活性的影响,探讨左归丸阳中求阴配伍的作用机制。方法:雌性SD大鼠32只,双侧卵巢摘除术建立骨质疏松模型,分为假手术组、模型对照组、左归丸组、左归丸去补阳药组4组,每组8只。灌胃给药90 d,收集各组大鼠血清和股骨组织,采用HE染色法观察股骨组织形态学,采用TRAP染色法检测股骨组织破骨细胞数,采用ELISA法检测血清中TNF-α、IL17和RANKL水平。结果:与模型对照组比较,补肾填精方改善去卵巢大鼠股骨组织形态学,减少破骨细胞数量;显著降低去卵巢大鼠血清TNF-α、IL-17、RANKL水平(P0.05)。结论:补肾填精方能够抗去卵巢骨质疏松症大鼠骨丢失,其作用机制可能与其通过提高雌激素水平以调节炎症因子抑制破骨细胞活性有关,全方效果较为明显。     

仙灵骨葆对D-半乳糖致雄性大鼠骨质疏松骨量的影响

目的:观察仙灵骨葆对D-半乳糖致雄性大鼠骨质疏松骨量的影响.方法:30只3月龄雄性SD大鼠随机分为3组,对照组、D-半乳糖组和仙灵骨葆组,每组10只.时照组每天皮下注射生理盐水,D-半乳糖组皮下注射5%的D-半乳糖,剂量为100mg/kg,仙灵骨葆组皮下注射100mg/kg 5%的D-半乳糖 灌胃给药270mg/kg的仙灵骨葆,连续给药3个月后,取左侧胫骨进行骨量分析.结果:与对照组相比,D-半乳糖组骨小粱面积百分数减小(P<0.01)、骨小梁数目减少(P<0.01)、骨小梁分离度增大(P<0.05),单位骨小梁破骨细胞数增加(P<0.01)及矿化沉积率下降(P<0.05),均有统计学意义.与D-半乳糖组相比,仙灵骨葆组治疗90d后骨小粱面积百分数增加(P<0.01)、骨小梁厚度增加(P<0.01)、骨小粱数目增加(P<0.01)、骨小梁分离度减小(P<0.01)、单位骨小梁破骨细胞数减少(P<0.01)及矿化沉积率增加(P<0.05).结论:D-半乳糖可导致雄性大鼠骨质疏松,仙灵骨葆可有效防治D-半乳糖致雄性大鼠骨质疏松.     

桃红四物汤治疗骨质疏松症的药效学研究

目的考察桃红四物汤对去卵巢骨质疏松模型大鼠骨密度、骨形态学和骨载荷能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组、仙灵骨葆胶囊(0.4 g/kg)组以及桃红四物汤低、高剂量(0.2、0.4 g/kg)组,每组8只。除对照组外,其余各组大鼠去除双侧卵巢建立骨质疏松模型。各给药组ig相应药物,连续3个月。采用三点弯曲实验检测各组大鼠股骨荷载能力;采用苏木素-伊红(HE)和番红固绿染色观察各组大鼠胫骨病理变化;采用微计算机断层扫描技术(micro computed tomography,Micro-CT)分析各组大鼠胫骨骨密度、骨小梁宽度和分离度等形态学参数;采用抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色检测各组大鼠胫骨破骨细胞数量;采用免疫组化法检测各组大鼠胫骨骨保护素(osteoprotegerin,OPG)和核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)蛋白表达情况。结果与模型组比较,桃红四物汤组大鼠股骨最大载荷、最大应力和弹性载荷均显著升高(P0.05、0.01);胫骨骨丢失程度改善,骨小梁数量和连接增多;胫骨骨密度、骨小梁与骨组织面积比、骨小梁宽度和骨小梁数量显著升高(P0.05、0.01),骨小梁分离度显著降低(P0.01);胫骨破骨细胞数量减少,OPG表达增加,RANKL表达降低。结论桃红四物汤能够增加骨密度及荷载能力,促进成骨细胞功能,抑制破骨细胞功能亢进引起的骨吸收,从而发挥抗骨质疏松作用。     

补骨脂-淫羊藿药对对去卵巢骨质疏松型大鼠血清IL-10、TNF-α水平的影响

目的:观察补骨脂-淫羊藿药对对去卵巢骨质疏松型大鼠血清中IL-10、TNF-α水平的影响,探讨补骨脂-淫羊藿药对防治绝经后骨质疏松症的作用机制。方法:3月龄SD雌性大鼠40只,分为假手术组、模型组、壮骨止痛胶囊组、阳性对照组、补骨脂-淫羊藿药对组,采用去卵巢3个月制备绝经后骨质疏松大鼠模型,连续灌胃13周后检测比较各组大鼠血清IL-10、TNF-α水平。结果:与模型组比较,补骨脂-淫羊藿药对组能提高骨质疏松模型大鼠血清IL-10水平,但差异无统计学意义(P0.05);补骨脂-淫羊藿药对组能显著降低模型大鼠血清TNF-α水平,差异有统计学意义(P0.01)。结论:补骨脂-淫羊藿药对可以抑制骨吸收,调节成骨细胞与破骨细胞的功能活动,使成骨细胞活动加剧,破骨细胞活动减弱,从而使骨吸收/骨形成代谢保持动态平衡。     

盐制杜仲对去势大鼠骨密度及血清IGF-I的影响

目的:观察盐制杜仲的乙醇浸膏对去势大鼠骨密度及血清激素的影响.方法:采用雌性大鼠切除双侧卵巢建立骨质疏松症模型,随机分成假手术组、模型组、尼尔雌醇组、盐制杜仲提取物高、中、低剂量组(6,3,1.5 g·kg-1,ig).手术后7d开始给药,持续12周.检测各组腰椎和股骨的骨矿物质含量(BMC)和骨矿物质密度(BMD),血清雌二醇(E2)和胰岛素样生长因子1 (IGF-Ⅰ)的含量.结果:与假手术组比较,模型组大鼠的BMC和BMD明显下降,血清E2和IGF-Ⅰ水平明显下降;盐制杜仲能增加去卵巢大鼠BMC和BMD,提高血清E2和IGF-Ⅰ水平,与模型组相比有差异性(P＜0.05).结论:炮制能加强杜仲的抗骨质疏松作用,盐制杜仲通过上调血清E2水平,提高血清IGF-Ⅰ含量而对去卵巢大鼠的骨质疏松症有预防或延缓发生的作用.     

仙珠胶囊对去卵巢大鼠骨密度和血生化指标的影响

目的观察仙珠胶囊对去卵巢大鼠骨密度(BMD)、骨代谢标志物的影响.方法将去卵巢大鼠随机分为模型组,仙珠胶囊低、中、高剂量(2.715、5.430、10.860 g生药/kg)组及阳性药倍美力片(0.104 mg/kg)组.另设假手术组.连续ig给药3个月,测定血清中骨源性碱性磷酸酶(BALP)、Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(CTX)、雌二醇(E2)、甲状旁腺素(PTH)、钙(Ca)、磷(P)的量,并剖取大鼠股骨测BMD.结果模型组大鼠BMD,E2、Ca、P的量低于假手术组(P<0.01);各给药组的这些指标高于模型组(P<0.05),高剂量仙珠胶囊组大鼠BMD高于阳性对照药(P<0.05).模型组大鼠BALP、CTX、PTH高于假手术组(P<0.01),仙珠胶囊及倍美力组这3项指标均降低(P<0.01).结论仙珠胶囊可有效增加去卵巢大鼠BMD,有效抑制骨丢失,增加成骨细胞活性,降低血清PTH水平,提高性激素水平.     

补肾壮骨中药对大鼠去卵巢后早期白细胞介素6介导的骨髓源性破骨细胞形成的影响

目的 观察补肾壮骨中药对大鼠去卵巢后早期骨髓源性破骨细胞形成能力和骨髓细胞表达白细胞介素6(IL-6)、IL-6受体(IL-6R)、gp130基因的影响。方法 健康3月龄雌性SD大鼠72只,其中24只为假手术对照组;48只去卵巢,随机分为去卵巢组和中药组,每组24只。分别于去卵巢后2、4、6、12周每组各取6只大鼠骨髓细胞作细胞培养和提取RNA,培养第6天分别作瑞氏-吉姆萨染色和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,骨髓细胞TRIZOL提取总RNA。结果 去卵巢后2周,去卵巢组破骨细胞形成数即多于对照组(P<0．05),骨髓细胞IL-6和IL-6R基因表达均显著升高(P<0．05,P<0．01),第4～6周。上述改变达高峰,并持续至第12周;从4～12周,上述各指标中药组均明显低于去卵巢组(P<0．05,P<0．01)。以上各组全程未见gp130基因表达水平有明显变化。结论 本方所用补肾壮骨中药可以抑制大鼠去卵巢后骨髓源性破骨细胞的生成,这一效应至少部分与其抑制骨髓细胞在去卵巢后过度表达IL-6、IL-6R有关。     

中药何首乌饮对衰老大鼠卵巢组织胰岛素样生长因子Ⅰ及胰岛素样生长因子结合蛋白3表达的影响

目的 探讨何首乌饮抗大鼠卵巢组织衰老的机理,为抗女性性腺的衰老研究提供理论指导和实验依据.方法 将60只SD大鼠随机分为3组:正常组、模型组、预防组.采用D-半乳糖连续腹腔注射法制造雌性大鼠亚急性衰老模型,预防组在造模的同时以中药方剂何首乌饮灌胃.应用原位杂交方法检测各组大鼠卵巢组织胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)蛋白的表达,用RT-PCR方法检测各组大鼠卵巢组织胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)基因的表达情况.结果 何首乌饮明显抑制了衰老大鼠卵巢组织中IGFBP3基因表达的上调趋势(P＜0.05),且明显提高了衰老大鼠卵巢组织中IGF-Ⅰ蛋白的表达(P＜0.05).结论 何首乌饮通过影响衰老大鼠卵巢中细胞因子IGF-Ⅰ、IGFBP3的表达,起到抗大鼠性腺衰老的作用.     

红曲对去卵巢大鼠骨质疏松模型血清ALP,TRAP及骨组织TNF-α,RANK表达的影响

目的:明确红曲对去卵巢大鼠骨质疏松模型血清ALP,TRAP及骨组织TNF-α,RANK表达的影响。方法:取12周龄Wistar雌性大鼠40只,随机分为结合雌激素组、红曲组、模型组、假手术组,每组10只。前三组行完整双侧卵巢摘除术,假手术组仅打开腹腔,不切除卵巢。灌胃12周后,处死各组动物,采用多光谱成像系统检测骨密度,用ELISA法测定各组大鼠血清中ALP及TRAP,用Image Pro Plus对免疫组化染色图像结果进行定量分析。结果:红曲组TNF-α免疫组化表达水平低于模型组(P0.05),红曲组RANK免疫组化表达水平低于模型组(P0.05)。结论:红曲可以提高血清ALP表达水平,降低血清TRAP表达水平,能够通过降低TNF-α水平及RANK水平来提高去卵巢大鼠骨密度,其机理与雌激素类似,可能与成骨细胞及破骨细胞活跃程度有关。     

针刺血清对体外培养破骨细胞数量的影响

目的:探讨针刺抑制骨吸收的细胞学机制。方法:40只12月龄雌性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、针刺预防组和针刺治疗组。针刺预防组和针刺治疗组分别在造模术后的3d、3个月开始针刺。取“肾俞”“脾俞”“足三里”“大椎”。自新生SD大鼠四肢长骨分离破骨细胞,接种于24孔培养板中,加入含10%上述各组大鼠血清的培养液培养48h后,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色并计数TRAP( )多核细胞数。结果:与假手术组比较,模型组TRAP( )多核细胞数明显增加(P<0.01);与模型组比较,针刺预防组和针刺治疗组TRAP( )多核细胞数明显减少(P<0.05)。结论:针刺血清能够减少破骨细胞的数量,预防组和治疗组之间的作用无统计学差异。     

中药骨碎补对大鼠骨髓破骨细胞体外培养的影响

目的:研究中药骨碎补对大鼠骨髓破骨细胞体外培养的作用.方法:采用大鼠长骨骨髓体外培养的方法,通过检测抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)阳性细胞生成数,反映破骨细胞的生成情况.结果采用SPSS软件包分析.结果:20%骨碎补提取液组及固邦组TRACP阳性破骨细胞数的形成受到明显抑制,与空白对照组比较有显著性意义(P＜0.01),10%骨碎补组TRACP阳性破骨细胞数的形成有抑制,但与对照组比较无显著性意义(P＞0.05).结论:骨碎补可抑制骨髓体外培养中破骨样细胞的生长,主要抑制破骨母细胞向成熟破骨细胞转化,但与浓度有关.     

仙茅苔黑酚类酚苷对去卵巢大鼠骨代谢和破骨细胞形成分化的影响

目的 探讨仙茅苔黑酚类酚苷(orcinol glucoside in Curculigo orchioideson,COOG)对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢及破骨细胞形成分化的影响.方法 3月龄Sprague-Dawley大鼠被随机分为正常对照组和去卵巢组.再将去卵巢大鼠分为5组,连续12周分别灌胃给0.5％的羧甲基纤维素...     

右归饮对体外培养破骨细胞分化与功能的影响

目的：探讨右归饮对体外培养破骨细胞的分化、凋亡及骨吸收活性的影响。方法：分离培养大鼠破骨细胞,分别以空白对照血清、地塞米松＋对照血清、地塞米松＋右归饮血清的培养液来培养破骨细胞,通过抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色对TRAP阳性多核破骨细胞计数;采用吖啶橙荧光染色法计数破骨细胞的凋亡率;用RT-PCR测定ATPase a3基因相对表达变化分析破骨细胞骨吸收活性。结果：与空白对照血清组和对照血清＋地塞米松组相比,地塞米松＋右归饮血清组TRAP染色阳性的破骨细胞数量显著减少（分别为P〈0.01,P〈0.05）,破骨细胞的凋亡率明显增加（P〈0.01）,ATPase a3基因表达明显减少（P〈0.01）。结论：右归饮可抑制破骨细胞的形成和分化及骨吸收活性,促进破骨细胞的凋亡,从而发挥其抗激素性股骨头坏死的作用。     

补肾中药对去卵巢大鼠骨组织ER、OPG表达的促进作用

通过检测去卵巢大鼠给予补肾中药后腰椎内ERmRNA及OPG mRNA的表达,进一步探讨补肾中药防治骨质疏松的分子机制.将雌性3月龄SD大鼠48只,随机分为卵巢切除 补肾中药防治(HDP),卵巢切除 雌激素(倍美力)防治(ER),骨质疏松(卵巢切除)(OVX)及正常对照组(SHAM)4组,每组12只.术后12周处死大鼠,取L3椎体,异硫氰酸胍一步法提取总RNA,嵌套式反转录聚合酶链反应(NRT-PCR),扩增待检测各组ERmRNA及OPGmRNA的表达.同时取L4椎体,行骨组织形态计量学检测.结果显示HDP组ER mRNA及OPG mRNA阳性表达率分别为75.0%和66.7%;EP组ER mRNA及OPG mRNA阳性表达率均为83.3%;OVX组各例ER mRNA均无表达,2例OPG mRNA呈弱阳性表达(阳性率为16.7%);SHAM组呈ER mRNA及OPG mRNA阳性表达.χ2检验,HDP组与ER组比较ER mRNA及OPG mRNA阳性表达率均无显著性差异(P＞0.05);该两组与OVX组比较,ER mRNA及OPG mRNA阳性表达率均有高度显著性差异(P＜0.01);而与SHAM组比较,HDP组ERmRNA,ER组ER mRNA及OPG mRNA阳性表达率无显著性差异(P＞0.05),但HDP组OPG mRNA阳性表达率有显著性差异(0.01＜P＜0.05).骨组织形态计量学检测,OVX组骨体积、骨小梁厚度及骨小梁数目均比SHAM组显著减少,而骨小梁间隔显著增大.同EP组相似,HDP组骨体积、骨小梁厚度显著增加,虽也使骨小梁间隔稍有减少,但与OVX组比较无统计学差异.表明补肾中药通过直接作用于骨组织中ER,增强ER mRNA的表达,并刺激OPG的分泌,从而有望替代雌激素,对去卵巢大鼠的骨质疏松有明显的防治作用.     

柔毛淫羊藿对去卵巢小鼠骨密度、破骨细胞和IL-1β的影响

目的:探讨单味中药柔毛淫羊藿( EPM)对去卵巢小鼠骨密度、破骨细胞和白介素-1β(IL-1β)的影响.方法:切除雌性小鼠双侧卵巢制备骨质疏松动物模型,随机分为模型组、己烯雌酚( DES,2 mg·kg-1)组及EPM水煎浸膏高、中、低剂量( 200,100,50 mg·kg-1)组,另设正常对照组.术后45 d开始给予相应药物,1次/d,60d后检测小鼠骨组织骨密度、破骨细胞数和骨组织中IL-1β.结果:模型组动物呈现明显的骨质疏松表现;给药组动物骨密度增加;EPM高、中、低剂量骨组织破骨细胞数分别为(1.9±1.0),(0.9±0.6),(0.8±0.4)个,明显低于模型组(3.4±1.6)个,(P ＜0.05或P＜0.01);EPM高、中、低剂量骨组织IL-1β阳性细胞数分别为(11.6±2.1),(12.4±2.2),(16.4±2.7)个,明显低于模型组(20.6±3.2)个(P＜0.01).结论:EPM能增加去卵巢骨质疏松症小鼠的骨密度、降低破骨细胞数和IL-1β的表达.     

中药复方对骨质疏松大鼠雌激素受体mRNA及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的:探讨自拟中药复方对实验性骨质疏松大鼠雌激素受体mRNA及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响及骨细胞数目的影响.方法:切除大鼠卵巢造成骨质疏松模型,随机分组对照处理,3月后应用原位杂交法和HE色观察雌激素受体mRNA及Ⅰ型胶原mRNA的表达及成骨细胞数量.结果:中药复方组成骨细胞数目增加(P＜0.01),雌激素受体mRNA及Ⅰ型胶原mRNA表达水平提高(P＜0.01).结论:自拟中药复方具有拟雌激素样作用,可使骨质疏松大鼠骨内雌激素受体mRNA及Ⅰ型胶原mRNA表达增强,调节骨代谢,增加骨质疏松大鼠成骨细胞数目.     

蛇毒复方制剂对W256癌细胞诱导的骨癌痛大鼠破骨细胞的影响

目的观察冰茶栓(蝮蛇毒、冰片、茶叶、桂枝)对骨癌痛大鼠破骨细胞数量和活性的影响。方法将40只雌性SD大鼠分为冰茶栓组、阳性药对照组、模型对照组及假手术组,采用骨髓腔注射W256癌细胞复制骨癌痛模型;自模型复制第13天开始,冰茶栓组给予冰茶栓101 mg/kg;阳性药对照组给予伊班膦酸注射液20μg/kg,模型对照组和假手术组给予空白栓,末次给药后,取各组大鼠患肢骨组织采用TRAP染色法计数破骨细胞数量、透射电镜观察破骨细胞结构、免疫组化法观察骨保护素表达。结果冰茶栓可明显降低W256细胞诱导的骨癌痛大鼠骨组织破骨细胞数量(P<0.01);诱导破骨细胞凋亡;明显上调骨组织骨保护素表达(P<0.01)。结论冰茶栓可抑制骨癌痛大鼠骨组织破骨细胞的数量和活性。     

针刺夹脊穴对DOP模型大鼠骨钙素、破骨细胞CK表达影响的实验研究

目的:观察针刺夹脊穴对糖尿病性骨质疏松(DOP)模型大鼠血清骨钙素(OC)及破骨细胞组织蛋白酶K(CK)表达的影响。方法:SD雄性大鼠50只,10只作正常对照组,余40只大鼠采用链脲佐菌素腹腔注射结合高脂、高糖饮食进行DOP造模,测血糖及骨密度后将符合诊断标准的DOP大鼠随机分成针刺组、阳性药物组与模型组,分别给予夹脊穴针刺、碳酸钙和阿法迪三、生理盐水灌胃,针刺治疗6周后,检测动物骨密度和骨形态的变化以及OC和破骨细胞CK的表达。结果:治疗6周后与DOP模型组比较,针刺可明显增加DOP大鼠骨密度,差异有统计学意义(P0.01),增加血清中骨钙素的表达,抑制破骨细胞组织CK,且与阳性药物组差异无统计学意义(P0.05)。结论:针刺夹脊穴促进OC表达,抑制破骨细胞CK的表达,调节骨代谢平衡,从而有效改善糖尿病大鼠骨质流失。     

巴戟天与雌激素对骨质疏松大鼠破骨细胞RANK和CAII的表达影响分析

目的:探讨巴戟天与雌激素对骨质疏松大鼠破骨细胞RANK和CAII的表达影响。方法:选用4月龄SPF级健康成年雌性SD大鼠,建立去势大鼠骨质疏松模型,分离大鼠原代破骨细胞并分为3组:B组给予17β-雌二醇10-6mmol/L,C组给予1.0 mmol/L巴戟天,D组给予17β-雌二醇10-6mmol/L和1.0 mmol/L巴戟天进行培养,观察比较各组CAII、RANKmRNA表达等指标差异。结果:B、C和D组破骨细胞数量均较A组明显减少,而D组减少最明显(P0.05);B、C、D组骨吸收陷窝面积相均低于A组(P0.05),而D组骨吸收陷窝面积明显低于其他组(P0.05);B、C、D组CAII、RANKmRNA基因表达水平明显低于A组(P0.05),B组和C组RANKmRNA基因表达水平差异无统计学意义(P0.05),而CAIImRNA基因表达水平差异有统计学意义(P0.05),D组CAII、RANKmRNA基因表达水平最低(P0.05)。结论:巴戟天联合雌激素能明显降低骨质疏松大鼠破骨细胞RANK和CAII的表达,起到抑制骨质疏松的作用。