榄香烯和PD98059诱导人胃癌SCG-7901细胞株凋亡及其机制的探讨

目的：探讨榄香烯及PD98059对人胃癌SCG-7901细胞株凋亡的影响,及其与ERK1／2、P38MAPK信号通路的关系。方法：用不同浓度的榄香烯和PD98059处理人胃癌SCG-7901细胞,体外细胞增殖抑制实验（MTT）法检测细胞增殖情况;Western—blot法检测ERKl／2、磷酸化ERKl／2（p-ERK1／2）和磷酸化P38（p-P38）的表达;RT-PCR检测bcl-2mRNA及baxmRNA的表达;TUNEL法检测胃癌细胞凋亡并计算凋亡指数。结果：榄香烯和PD98059单独作用都有抑制胃癌细胞增殖的作用,前者呈浓度和时间依赖性,后者则呈时间依赖性但无浓度依赖性,两药联合作用时对胃癌细胞增殖的抑制作用显著大于单一用药时（P〈0．05）;随榄香烯的浓度增加p-ERK1／2蛋白的表达量增加（P〈0．05）,总FRK1／2无明显变化;榄香烯（0．08mg／mL）、PD98059（50μmol／L）及榄香烯＋PD98059组作用胃癌细胞24h,p-P38的表达均高于对照组（P〈0．05）,且榄香烯＋PD98059组较榄香烯组或PD98059组更高（P〈0．05）;随榄香烯浓度的增加,baxmRNA的表达增加,bcl-2mRNA的表达降低,且榄香烯＋PD98059组表现最显著;实验组细胞凋亡率均高于对照组（P〈0．05）,具有浓度依赖性（P〈0．05）,且榄香烯＋PD98059组的凋亡率明显高于单一作用组（P〈0．05）。结论：榄香烯及PD98059可以抑制胃癌细胞增殖,前者具有时间和浓度依赖性;榄香烯及PD98059还可以促进胃癌细胞凋亡。榄香烯抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的机制包括促进ERKl／2磷酸化和上调P-P38MAPK信号通路的表达;PD98059抑制ERKl／2的磷酸化,但通过上调p-P38MAPK信号通路的表达而发挥其细胞调节作用。     

人参皂苷对体外培养低氧海马神经元的保护作用

目的 观察人参皂苷（Rg2）对大鼠低氧海马神经元的保护作用及其机制。方法 取新生Wistar大鼠海马神经元体外培养14d,随机分为对照组、5μmol/L尼莫地平组（尼莫地平组）、Rg2 0．025mmol/L组（Rg2 1组）、Rg2 0．050mmol/L组（Rg2 2组）。将相应药物加入到培养液中孵育4h后,连续充以体积分数0．95N2＋体积分数0．05CO2混合气体,建立急性低氧细胞模型。台盼蓝染色计数存活细胞,吉姆萨染色观察细胞形态,荧光分光光度计法测细胞内Ca^2＋浓度。结果 尼莫地平组、Rg2两个剂量组的细胞死亡率均明显低于对照组,以Rg2 2组最低,差异均有显著性（X^2=3．37,P〈0．05）。海马神经元细胞内Ca^2＋浓度在尼莫地平组、Rg2两个剂量组均明显低于对照组,以Rg2 2组最低,差异均有显著性（F=466．58,q=6．76～48．82,P〈0．01）。结论 Rg2可显著降低体外培养大鼠低氧海马神经元的细胞死亡率,其机制可能是通过减少Ca^2＋内流而发挥作用。     

人参皂苷Rb1对胎鼠背根神经节损伤的保护作用

目的观察不同浓度人参皂苷Rb1对损伤胎鼠背根神经节（DRG）神经元形态学改变的影响,探讨人参皂苷Rb1对谷氨酸引起的兴奋性神经毒损伤的保护作用,为Rb1的进一步研究和临床应用提供理论依据。方法选择胎龄为15 d的SD大鼠,获取DRG神经元并进行体外分散培养48 h后,随机分为对照组、谷氨酸损伤组、谷氨酸损伤＋低浓度Rb1（10μg/ml）保护组和谷氨酸损伤＋高浓度Rb1（100μg/ml）保护组,继续培养12 h。终止培养后,倒置相差显微镜观察各组神经元的生长状态,MTT检测不同浓度人参皂苷Rb1孵育的背根神经节神经元的凋亡增殖情况。结果对照组DRG神经元细胞贴壁呈单层散在分布,少部分出现细胞聚集现象,突起较长且互相交织形成网状;谷氨酸损伤组DRG神经元细胞聚集现象明显,神经元突起变短、断裂甚至消失;谷氨酸损伤＋Rb1保护组DRG神经元细胞部分呈簇状聚集,部分呈单个散在分布,突起仍然相互交织。MTT结果显示谷氨酸损伤＋Rb1保护组细胞存活率均高于谷氨酸损伤组,但高浓度Rb1保护组与低浓度Rb1保护组之间差异无统计学意义。结论人参皂苷Rb1可以影响损伤胎鼠DRG神经元的形态学改变和凋亡增殖情况,对胎鼠背根神经节神经元具有一定的保护作用。     

姜黄素对氧化应激损伤后海马神经元血红素加氧酶-1 的表达影响

目的：探讨姜黄素对氧化应激损伤后的海马神经元血红素加氧酶-1（hemeoxygenase-1,HO-1）的表达影响。方法i将培养的原代海马神经元,分为6组：空白对照组、损伤对照组、姜黄素不同剂量治疗组（2．5μmol／L,5μmol／L,10μmol／L,20μmol／L）。利用1mmol／L的H2O2处理海马神经元1h,制作神经元氧化应激损伤模型。按照以上分组情况加入等浓度的姜黄素培养液,37℃、5％CO2孵箱孵育6h,采用倒置相差显微镜观察细胞的形态变化;免疫荧光、PCR半定量检测细胞内HO-1的表达。结果：①5μmol／L组、10μmol／L组细胞形态变化不明显;损伤对照组和2．5μnol／L组细胞损伤明显;②损伤对照组与空白对照组比较,P〈0．05;损伤对照组与2．5μmol／L组、20μmol／L组两两比较差异无统计学意义（P〉0．05）;5μmol／L组、10μmol／L组与损伤对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;PCR检测结果提示20μmol／L组比2．5μmol／L组HO-1的表达量减少。结论：姜黄素对氧化应激损伤海马神经元的保护机制可能是通过上调HO-1的表达实现的。     

壳寡糖促神经元生长的作用

目的研究壳寡糖（COSs）对大鼠神经元生长的影响。方法以体外培养的背根神经节（DRG）和DRG神经元为研究模型,通过神经丝蛋白-H（NF—H）免疫荧光细胞化学染色和LeicaQWin软件检测不同浓度壳寡糖（0．0、0．1、0．2mg／m1）作用5d对DRG和DRG神经元突起生长的影响;通过Westernblot检测不同浓度壳寡糖（0．05、0．1、0．2mg／m1）作用DRG神经元12h后,对DRG神经元中NF—H和生长相关蛋白-43（GAP-43）表达的影响。结果与对照组相比,中、高剂量壳寡糖（0．1、0．2mg／m1）显著促进DRG突起的生长（均P〈0．01）;0．2mg／ml剂量的壳寡糖明显促进DRG神经元突起的生长（P〈0．05）。与对照组相比,体外培养的DRG神经元加入壳寡糖作用12h后,0．2mg／ml剂量壳寡糖组的NF—H和GAP43表达量明显增加（分别P〈0．05和〈0．01）。结论壳寡糖可有促进体外培养的DRG和DRG神经元突起的生长,并可促进NF—H、GAP43的表达。     

人参皂苷 Rg1对帕金森病小鼠黑质多巴胺能神经元凋亡及EphB1、TH、P-c-Jun蛋白表达的影响

目的：观察人参皂苷Rg1对MPTP所致帕金森病（ PD）模型小鼠黑质多巴胺能神经元凋亡及酪氨酸羟化酶（TH）、EphB1和P-c-Jun蛋白表达的影响。方法：将27只C57BL／6小鼠等分为对照组、模型组和人参皂苷Rg1组。腹腔注射人参皂苷Rg1预防给药3 d,腹腔注射MPTP构建PD模型。观察不同时间点小鼠游泳情况。 MPTP给药2周后采用TUNEL染色检测小鼠黑质多巴胺能神经元凋亡情况,采用免疫组化检测黑质EphB1蛋白的表达,采用Western blot检测黑质TH、P-c-Jun蛋白的表达。结果：模型组小鼠不同时间点游泳实验分值低于对照组和人参皂苷Rg1组（P均＜0．05）。模型组黑质多巴胺能神经元凋亡数、EphB1阳性细胞数和P-c-Jun蛋白相对表达量均高于对照组和人参皂苷Rg1组,而模型组黑质TH蛋白相对表达量低于对照组和人参皂苷Rg1组（P均＜0．05）。结论：人参皂苷Rg1可能通过减少黑质多巴胺能神经元凋亡以及降低EphB1、P-c-Jun的表达而改善PD的症状。     

七氟烷诱导HO-1基因表达抑制氧糖剥夺神经元凋亡机制的研究

目的：探讨七氟烷诱导HO—1基因表达抑制氧糖剥夺神经元凋亡的机制。方法：将96孔和6孔培养板上培养7d的海马神经元随机分为5组（n=10）：正常培养组（C组）、氧糖剥夺组（D组）、氧糖剥夺组＋2％七氟烷组（s1组）、糖剥夺组十4％七氟烷组（S2组）、糖剥夺组＋4％七氟烷＋Znpp组（Z组）。C组神经元按正常培养方法培养。S1组在神经元缺糖缺氧的同时接受2％七氟烷麻醉。S2组在神经元缺糖缺氧的同时接受4％七氟烷麻醉。Z组在神经元进行缺糖同时加入Znpp使其终浓度分别为10μmol／L后同s2组处理。96孔培养板的神经元进行细胞存活率的检测。6孔培养板的神经元进行神经元纯度鉴定、神经元凋亡率、HO-1-mRNA和Fas蛋白表达的检测。结果：与D组比较S1组海马神经元HO-1—mRNA的表达增加，Fas蛋白表达减少，神经元存活率增加、凋亡率降低（P〈0．05）。与S1组比较S2组海马神经元HO-1-mRNA的表达增加，Fas蛋白表达减少，神经元存活率增加、凋亡率降低（P〈0．05）。与S2组比较Z组海马神经元HO-1-mRNA的表达减少，Fas蛋白表达增加，神经元存活率降低、凋亡率增加（P〈0．05）。结论：七氟烷通过诱导神经元HO-1-mRNA的表达而抑制了凋亡因子Fas，最终抑制了氧糖剥夺神经元的凋亡。     

人参皂苷Rg1对多巴胺能神经元的保护作用及ICI182,780的阻断作用

目的研究人参皂苷Rg1对去卵巢（ovariectomized,OVX）帕金森病（Parkinson disease,PD）模型大鼠黑质（substantianigra,SN）酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）表达的影响以及ICI182,780的阻断作用。方法雌性Wistar大鼠随机分为正常组、OVX组、6-hydroxydopamine（6-OHDA）组、Rg1＋6-OHDA组及ICI＋Rg1＋6-OHDA组。大鼠OVX后应用6-OHDA单侧损毁内侧前脑束（medial forebrain bundle,MFB）制备PD模型,腹腔注射Rg1或侧脑室同时给予雌激素受体（estro-gen receptor,ER）拮抗剂ICI182,780,免疫组织化学技术检测TH阳性神经元,RT-PCR技术检测SN内TH基因的表达。结果OVX大鼠SN内TH基因的表达较正常大鼠明显降低（P〈0.05）。6-OHDA制备的PD模型组损毁侧SN内TH阳性神经元数量及TH基因表达较健侧明显降低（P〈0.01）。与模型组相比,Rg1可显著提高损毁侧大鼠SN内TH阳性神经元数量及TH基因的表达（P〈0.01）。此效应可以被ER拮抗剂ICI182,780完全阻断（P〈0.01）。结论ER拮抗剂ICI182,780可以阻断人参皂苷Rg1对OVX PD模型大鼠黑质多巴胺能神经元的保护作用。     

人参皂苷Rg1和IGF-Ⅰ对帕金森病小鼠DA能神经元作用

目的观察人参皂苷Rg1、胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF-Ⅰ）及二者合用对小鼠黑质纹状体系统多巴胺（DA）能神经元的神经保护作用。方法 C57BL/6去卵巢（OVX）小鼠50只,采用腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）方法制备帕金森病（PD）模型小鼠,随机分为对照组、MPTP组、Rg1组（10mg/kg腹腔注射）、IGF-Ⅰ组（0.5g/L侧脑室注射）、Rg1＋IGF-Ⅰ组,每组10只。应用高效液相色谱法检测各组纹状体内DA的含量,免疫组织化学染色法检测黑质内酪氨酸羟化酶免疫阳性（TH-IR）神经元数目。结果 MPTP组纹状体内DA含量、黑质TH-IR神经元数目较对照组明显降低,差异有显著性（F=21.23、45.45,q=11.67、14.24,P〈0.01）。Rg1组、IGF-Ⅰ组及Rg1＋IGF-Ⅰ组纹状体DA含量、黑质TH-IR神经元数目较MPTP组明显升高,差异有显著性（q=5.66～17.91,P〈0.01）;Rg1＋IGF-Ⅰ组与Rg1组、IGF-Ⅰ组比较,差异有显著性（q=4.37～8.74,P〈0.05）。结论 Rg1、IGF-Ⅰ及二者合用均能够对抗MPTP对黑质纹状体系统DA能神经元的毒性作用,且Rg1与IGF-Ⅰ合用具有协同作用。     

CT-1对癫痫持续状态大鼠海马神经元缺失及苔状纤维发芽的影响

目的：观察重组腺病毒心肌营养素1（Adv—CT1）对癫痫持续状态（SE）大鼠海马神经元缺失及苔状纤维发芽的影响,探讨CT-1对SE后脑损伤的修复作用．方法：建立氯化锂-匹罗卡品大鼠SE模型,随机将SE成功模型分为CT-1组（n=6,海马区注射Adv—CT1）及模型对照组（n=6,海马区注射生理盐水）,另设正常对照组（n=6,腹腔注射生理盐水）．各组动物于SE后14d进行检测：①Nissl染色观察海马神经元形态学变化,并计数海马CA1区细胞数;②Timm染色检测苔状纤维发芽（MFS）程度;③免疫组化检测Caspase-3表达,结果用积分吸光度（IOD）值表示．结果：模型对照组可见海马区神经元变性、坏死,CT-1组病变较轻,正常对照组未见类似改变．模型对照组及CT-1组CA1区细胞数较正常对照组明显减少,但CT-1组细胞数明显多于模型对照组,差异具有统计学意义（P〈0．05）．模型对照组可见致密MFS染色颗粒;CT-1组虽也见MFS染色,但评分明显低于模型对照组（P〈0．05）．模型组Caspase-3的表达明显高于CT-1组（P〈0．05）．结论：CT-1可减轻SE后的神经细胞损伤,抑制MFS,其保护机制可能与抑制神经元凋亡,增加神经细胞存活有关．     

鸡胚脊髓背角感觉神经元诱向因子的初步分离及鉴定

为探讨脊髓背角内影响ＳＧ神经元存活和生长的因素,取５００只Ｈａｍｂｕｒｇｅｒ４０期鸡胚脊髓背角组织匀浆,离心后提取上清液,用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳初步分离脊髓背角内的蛋白质。以简易细胞钓蛋白带（ＰＢＦＣ）技术找寻有神经细胞贴附的蛋白带并求相对迁移率（Ｒｆ）。将有神经细胞贴附的各Ｒｆ范围凝胶剪下并将胶内各蛋白带电转移至硝酸纤维膜上,用ＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＮＴ－３、ＧＤＮＦ兔抗血清于硝酸纤维膜上分别进行Ｗ     

鸡胚脊髓背角感觉神经元诱向因子的初步分离及鉴定

为探讨脊髓背角内影响SG神经元存活和生长的因素,取 500只Hamburger 40期鸡胚脊髓背角组织匀浆,离心后提取上清液,用SDS-PAGE电泳初步分离脊髓背角内的蛋白质.以简易细胞钓蛋白带(PBFC)技术找寻有神经细胞贴附的蛋白带并求相对迁移率(Rf).将有神经细胞贴附的各Rf范围凝胶剪下并将胶内各蛋白带电转移至硝酸纤维膜上,用NGF、BDNF、NT-3、GDNF兔抗血清于硝酸纤维膜上分别进行Western杂交.PBF C结果显示: 在电泳胶Rf 0.10～0.19、0.30～0.35、0.50～0.55、0.60～0.67、0.90～0.94 处发现有多少不等的神经元附着.而Western杂交结果表明,在上述各Rf范围均有强弱不等的多条阳性杂交带.分别为NGF、BDNF、GDNF者;NGF、BDNF、NT-3者;NGF、BDNF、NT-3者 ;NGF、NT-3者、BDNF、NT-3者.提示:40期鸡胚脊髓背角提取液各Rf蛋白带的促神经元存活作用,至少涉及NGF、BDNF、NT-3、GDNF中的两种或三种.     

肝纤维化中丹参素对TGFβ1/Smads/ERK信号通路的影响及其相互关系

目的探讨肝纤维化过程中转化生长因子β1(transforming growth factorβ,TGFβ1)/Smads/细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路的相互作用。方法体外分离培养大鼠肝星状细胞(hepatic stellatecell,HSC),MTT法筛选丹参素最适浓度;以最适浓度丹参素及ERK阻断剂(PD98059)作用于经TGFβ1处理的HSC,CCK-8法检测各组HSC增殖;免疫细胞化学染色法检测各组HSC内α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle sctin,α-SMA)及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达;RT-PCR检测各组HSC的Smad2、Smad3、Smad7 mRNA表达量;Western blot法检测各组Smad2/3、ERK1/2蛋白磷酸化及Smad7蛋白水平。结果 0.062 5～0.25 mmol/L的丹参素可有效抑制HSC增殖,作为最适处理浓度;PD98059(100μmol/L)可抑制TGFβ1诱导的HSC增殖,丹参素剂量依赖性抑制TGFβ1诱导的HSC增殖(P<0.01);TGFβ1促进细胞内α-SMA及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达,PD98059及丹参素降低TGFβ1诱导的α-SMA及Ⅰ、Ⅲ型胶原水平;PD98059可拮抗TGFβ1诱导的Smad2、Smad3、Smad7 mRNA的表达(P<0.05,P<0.01),丹参素下调Smad2、Smad3 mRNA水平,但上调Smad7 mRNA水平(P<0.01);PD98059及丹参素抑制TGFβ1诱导的Smad2/3、ERK1/2蛋白磷酸化(P<0.01),但对TGFβ1诱导的Smad7蛋白表达上调有不同效应(P<0.01)。结论 TGFβ1上调Smad2、Smad3 mRNA表达及蛋白磷酸化,进而诱导HSC增殖、活化及胶原合成,ERK通路可能参与HSC中TGFβ1诱导Smad基因表达及蛋白磷酸化过程。丹参素对TGFβ1/Smad/ERK信号通路具有抑制效应。     

The spatiotemporal change of neurotrophin family and their mRNA expression in spinal cord of cats after partial rhizotomy]

OBJECTIVE: To investigate the spatiotemporal change rule of NGF, BDNF, NT-3 and their mRNA expression in spinal cord of cats after partial dorsal rhizotomy. METHODS: Rhizotomy of unilateral L1-L5, L7-S2 dorsal roots of cats was performed, leaving L6 as a spared dorsal root. By using ABC immunohistochemistry and in situ hybridization techniques, the dynamic changes of the above three factors and their mRNA in spinal lamina II of different segments were analysed. RESULTS: 1. In normal cat, NGF and it's mRNA were detected in part of neurons; BDNF, in nerve fiber terminals, varicosities and neurons; NT-3, in part of neurons, neuroglias and few nerve fiber terminals and varicosities. The mRNAs of the later two were negative. 2. The population of NGF and NGGmRNA positive neurons, NT-3 positive neurons and neuroglias increased significantly 3d-5d after rhizotomy. However, the quantity and density of positive varicosity of BDNF decreased. At 10-11d, the population of NGF and NGF mRNA positive neurons was still on the high level as that at 3-5d, and that of NT-3 began to decrease; the quantity of BDNF recovered to normal except for L, segment, but the density of positive varicosity of BDNF did not yet. The mRNAs of BDNF and NT-3 were still negative. 3. The change of each factor varied with the segments. The highest level time of NGF was earlier in L5, L6 than in L3; the recovery of the quantity of BDNF was the latest in L7; the change of NT-3 positive neuroglia was the same at each segment, but the number of NT-3 positive neuron in L5, L7 returned to normal at 10-11d, and that of L3 did not. CONCLUSION: The three factors all play roles in spinal plasticity after partial rhizotomy, but they function at different time phase and last different time length.     

人参皂苷Rb1对Aβ淀粉样蛋白诱导大鼠海马神经元损伤的保护作用

目的：研究人参皂苷Rb1对Aβ淀粉样蛋白诱导大鼠海马神经元损伤的影响,为其临床应用提供理论依据。方法：体外原代培养的SD大鼠海马神经元经Aβ淀粉样蛋白损伤建立细胞模型,实验分为正常对照组、Aβ淀粉样蛋白诱导损伤对照组(损伤对照组)、Rb1低剂量组（10 mg/L）、Rb1中剂量组（50 mg/L）及Rb1高剂量组（100 mg/L）,应用MTT法检测海马神经元生长增殖活力,TUNEL法检测神经元凋亡情况,化学发光法检测海马神经元内caspase-3活性。结果：MTT法检测结果显示,与正常对照组比较,损伤对照组和Rb1低、中及高剂量组神经元生存率均有不同程度的下降(P<0.05),损伤对照组下降最明显;与损伤对照组比较,Rb1中、高剂量组神经元生存率明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）。TUNEL法检测结果显示,与正常对照组比较,损伤对照组、Rb1低、中剂量组的阳性神经元数量明显增加,其中损伤对照组增加最明显;损伤对照组与Rb1高剂量组比较差异有统计学意义（P<0.05）。损伤对照组caspase-3活性与Rb1高剂量组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论：人参皂苷Rb1对Aβ淀粉样蛋白诱导性神经元损伤具有保护作用,并通过调控细胞凋亡实现。     

大鼠脊髓横断损伤后不同时间神经营养素表达的变化

目的:探讨大鼠脊髓全横断后不同时间神经营养因子表达的变化。方法:30只成年健康SD大鼠,随机分为正常组(手术对照组)和脊髓全横断1d、3d、7d、14d、21d组,共6组,每组5只。采用免疫组织化学ABC法结合图像灰度分析法,检测脊髓全横断后各组神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)和神经营养素-3(NT-3)表达的变化。结果:脊髓全横断后手术对照组NGF、BDNF、NT-3的表达较少,损伤后表达明显增加,NGF、BDNF和NT-3在损伤后1-7d表达的阳性细胞数逐渐增加,与对照组比较差异有显著性(P<0.01),7d达到最高;NGF和NT-3的高表达一直维持到21d,而BDNF在损伤后14d恢复到正常。结论:在脊髓横断损伤中,神经营养因子NGF、BDNF和NT3的表达增加,可能起着保护作用。     

NGF诱导PC12细胞向神经元的分化

目的：研究NGF诱导PC12细胞向神经元的分化情况。方法：实验分为10、20、50和80 μg•L^-1 NGF组及含10%胎牛血清的对照组。不同浓度的NGF组均诱导PC12细胞72 h,在24、48和72 h分别观察细胞的突起长度和细胞最大直径的变化情况;在诱导72 h后利用免疫细胞化学技术,观察不同剂量NGF作用后PC12细胞向MAP2阳性细胞分化的情况。 结果： 20、50和80 μg•L^-1 NGF组MAP2阳性细胞数明显高于对照组,且以50 μg•L^-1 组最为明显（P<0.05）。与对照组比较,加入NGF组分化的细胞其突起和细胞直径明显增长和增大,以50 μg•L^-1 组最为明显（P<0.01）。结论：NGF能够诱导PC12细胞向神经元分化,50 μg•L^-1 的NGF浓度是诱导PC12细胞向神经元分化的最适浓度。     

人参皂苷Rg1对Aβ25-35致小鼠海马神经元损伤保护作用

目的探讨人参皂苷Rg1对β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)所致小鼠海马神经元损伤的保护作用及ICI182,780的阻断作用。方法 C57BL/6雌性OVX小鼠侧脑室注射Aβ25-35制备Alzheimer病(AD)小鼠模型,在有或无雌激素受体(ER)拮抗剂ICI182,780的情况下,腹腔注射Rg1。Morris水迷宫测试小鼠的空间学习记忆能力,RT-PCR技术检测海马bcl-2基因的表达情况。结果与对照组相比,Aβ25-35可导致小鼠的潜伏期和总路程增长(F=11.34、10.90,q=6.184、5.905,P<0.05),穿越平台次数减少(F=10.90,q=6.023,P<0.05),明显降低海马bcl-2基因的表达(F=18.47,q=6.082,P<0.05);与Aβ25-35组相比,Rg1可降低AD小鼠的潜伏期和总路程(q=5.478、6.097,P<0.05),提高其穿越平台次数(q=6.023,P<0.05),逆转Aβ25-35所致的bcl-2基因表达的降低(q=9.661,P<0.05);Rg1的这些作用可被ICI182,780完全阻断(q=5.360~7.482,P<0.05)。结论 Rg1可减弱Aβ25-35对小鼠海马神经元的损伤,其机制可能与雌激素受体途径的激活有关。     

TrkA膜外域各结构域重组蛋白的制备和活性测定

目的:制备有活性的TrkA 膜外域各结构域重组蛋白.方法:用PCR法克隆TrkA膜外域各结构域(分别命名为CLC、Ig1和Ig2)的cDNA片段,然后插入融合表达载体pET-28a(+)中,经测序证实后,转入大肠杆菌BL21中表达,并用亲和层析法进行纯化,用神经生长因子(NGF)诱导PC12细胞株测定TrkA与配体结合的关键结构域(CLC、Ig1和Ig2)活性.结果:成功地用大肠杆菌制备了纯度达90％以上的TrkA膜外域各结构域重组蛋白;NGF+Ig2组PC12细胞突起生长率明显低于NGF组(P<0.05),NGF+CLC、NGF+Ig1组与NGF组相比没有显著差异.结论:Ig2能抑制经NGF诱导的PC12细胞的分化,CLC和Ig1不能抑制PC12细胞的分化.