体外模拟动态力学刺激对SD幼鼠前脂肪细胞生长活力影响的研究

目的:探讨体外模拟动态力学刺激对SD幼鼠前脂肪细胞生长活力影响的研究,为推拿按摩治疗青少年单纯性肥胖的现代医学细胞生物学机制提供理论与实验依据。方法:体外培养SD幼鼠前脂肪细胞,从细胞生物力学角度,模拟推拿治疗的按摩作用方式,对细胞实施按摩动态力学刺激,观察按摩动态力学刺激对前脂肪细胞生长活力的影响。结果:体外模拟动态力学刺激抑制了前脂肪细胞的生长活力(P<0.05,P<0.01)。结论:推拿按摩治疗青少年单纯性肥胖可能通过抑制前脂肪细胞的生长活力,使前脂肪细胞向脂肪细胞转化率降低而实现。     

荷叶水提物对3T3-L1前体脂肪细胞增殖、凋亡及前体脂肪细胞、成熟脂肪细胞IL-6 mRNA、TNF-α mRNA的影响

目的:研究荷叶水提物对3T3-L1前体脂肪细胞增殖、凋亡的影响,以及对3T3-L1前体脂肪细胞、成熟脂肪细胞白介素-6(IL-6)信使核糖核酸(mRNA)、肿瘤坏死因子(TNF-α)mRNA的影响。方法:体外培养3T3-L1细胞,采用MTT法检测荷叶水提物对3T3-L1前体脂肪细胞增殖的影响;采用荧光定量PCR检测其对3T3-L1前体脂肪细胞和成熟脂肪细胞IL-6 mRNA、TNF-αmRNA的表达,采用DAPI染色法检测其对3T3-L1前体脂肪细胞凋亡的影响。结果:不同质量分数的荷叶水提物均能抑制3T3-L1细胞增殖,且呈现量-效关系;1 g/L荷叶水提物可增高3T3-L1成熟脂肪细胞TNF-αmRNA和IL-6 mRNA的表达,降低3T3-L1前体脂肪细胞TNF-αmRNA的表达;还可以促进3T3-L1前体脂肪细胞的凋亡。结论:荷叶水提物可能是通过抑制细胞增殖、降低细胞炎症因子mRNA的表达、促进细胞凋亡进而影响脂肪细胞的活性。     

体外压力刺激对大鼠“足三里”穴筋膜组织细胞合成释放肿瘤坏死因子-α和干扰素-β影响的研究

目的通过体外实验探讨压力刺激对大鼠"足三里"穴筋膜组织细胞合成释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-β(INF-β)的影响,为腧穴"扶助正气"的治疗作用提供细胞生物力学方面的实验依据。方法体外培养大鼠"足三里"穴筋膜组织细胞,对细胞实施免疫组织化学鉴定后,实施100 kPa和200 kPa压力刺激,检测细胞外培养液INF-β和TNF-α含量的变化。结果 "足三里"穴筋膜组织细胞Keratin染色阴性,Vimnetin染色阳性,200 kPa压力刺激后,培养液中TNF-α含量增加,INF-β含量降低,差异均有统计学意义。结论 "足三里"穴筋膜组织细胞主要是成纤维细胞,压力刺激对筋膜组织成纤维细胞TNF-α和INF-β合成释放的调节,可能是腧穴接受针灸推拿治疗后特异性发挥"扶助正气"作用的细胞生物力学原理之一。     

小檗碱联合人参皂苷Rb1对脂肪细胞炎症信号通路作用

目的:观察小檗碱联合人参皂苷Rb1对脂肪细胞炎症信号通路的影响。方法:将诱导分化成熟的 3T3-L1 脂肪细胞分在肿瘤坏死因子(TNF-α)作用下给予小檗碱、人参皂苷 Rb1、小檗碱和人参皂苷 Rb1合用处理后,观察药物对脂肪细胞炎症信号通路的作用。 结果:基础状态下,与空白对照组相比,Ber组脂肪细胞的TNF-α和IL-6的mRNA表达量降低更明显(P<0.01)。胰岛素抵抗(TNF-α刺激)状态下,与空白对照组比较,Ber组能显著地抑制TNF-α刺激下上调的TNF-α、IL-6的表达(P<0.01),而Rb1仅抑制TNF-α的表达(P<0.01),Ber+Rb1两药合用,与Rb1单用作用类似,仅抑制了TNF-α的表达(P<0.01)。经TNF-α诱导后,加入Ber处理的脂肪细胞,NF-κB和IKK-β 表达水平下调,而加入Rb1处理的脂肪细胞(无论是否+Ber),NF-κB和IKK-β 表达水平上调。 结论:小檗碱和人参皂苷Rb1两者合用对脂肪炎性细胞未能显示出增效作用。     

积雪草苷对LPS刺激RAW264.7细胞炎症因子的影响

目的：观察积雪草苷对脂多糖刺激小鼠RAW264．7细胞释放细胞因子的影响。方法：体外培养小鼠RAW264.7细胞，用LPS刺激小鼠RAW264．7细胞分泌TNF-α、IL-6，用不同浓度积雪草苷进行干预，ELISA法检测培养上清中促炎细胞因子的含量。结果：积雪草苷可抑制LPS刺激小鼠RAW264．7细胞释放TNF-α和IL-6，并呈一定的量效关系。结论：积雪草苷呈浓度依赖性地抑制LPS刺激小鼠RAW264，7细胞释放TNF-α和IL-6。     

肿瘤坏死因子-α诱导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型的建立

目的:应用肿瘤坏死因子d(TNF-α)诱导3T3-L1脂肪细胞,探讨建立可靠胰岛素抵抗(IR)细胞模型的方法.方法:3T3-L1前脂肪细胞经3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、地塞米松、胰岛素诱导分化成3T3-L1脂肪细胞,将其与20,10,5μg·L-1TNF-α共孵育,100 nmol·L-1胰岛素作用30 min刺激脂肪细胞糖转运.以葡萄糖氧化酶法测定培养基上清液葡萄糖含量,观察TNF-α对脂肪细胞糖摄取的影响,鉴定IR模型.结果:TNF-α抑制胰岛素诱导前、后的脂肪细胞糖转运,抑制作用呈剂量依赖性,其中20 μg·L-1TNF-α的抑制率分别为79.2％和81.4％(P＜0.05).结论:肿瘤坏死因子α可诱导3T3-L1脂肪细胞产生IR,这种细胞模型简便、可靠.     

体外压力刺激对大鼠筋膜组织成纤维细胞形态和MMP-1、MMP-3合成释放影响的研究

目的:通过体外实验探讨压力刺激对大鼠筋膜组织成纤维细胞形态和MMP-1、MMP-3合成释放变化的影响,为推拿基本力学刺激"舒筋散结"的治疗作用提供细胞生物学方面的实验依据。方法:体外培养大鼠筋膜组织成纤维细胞,对细胞实施100KPa和200KPa压力刺激后,观察细胞形态的变化和检测细胞MMP-1、MMP-3合成释放的变化。结果:筋膜组织成纤维细胞接受压力作用后,100KPa压力组细胞发生回缩,细胞间隙加大,200KPa压力组出现回缩成圆形并漂浮的细胞,细胞形态缩小;100KPa和200KPa压力组MMP-1合成释放呈增加趋势,但均无显著性差异(P>0.05;P>0.05);MMP-3合成释放减少,差异均有统计学意义(P<0.01;P<0.05)。结论:压力刺激对筋膜组织成纤维细胞MMP-1、MMP-3合成释放的影响和对细胞形态的影响,可能是推拿良性发挥"舒筋散结"作用的细胞生物力学原理之一。     

妍婷颗粒对脂多糖诱导小鼠脾细胞产生TNF-α的影响

[目的]研究中药复方妍婷颗粒对脂多糖(LPS)诱导小鼠脾细胞产生肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,初步探讨妍婷颗粒对慢性盆腔炎抗炎、免疫调节的内在机制.[方法]体外培养小鼠脾细胞用LPS刺激,用不同浓度妍婷颗粒含药血清干预,酶联免疫银光法(ELISA)法检测上清液中TNF-α含量,反向逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法测细胞中TNF-α mRNA表达.[结果]1)经LPS诱导后小鼠脾细胞TNF-α分泌量明显升高,TNF-α mRNA表达增强.2)小鼠脾细胞TNF-α的分泌量与表达与妍婷颗粒含药血清浓度呈剂量依赖性.[结论]妍婷颗粒具有抑制LPS诱导的小鼠脾细胞产生TNF-α的作用,据此推测妍婷颗粒的抗炎、免疫调节作用机制可能与其抑制脂多糖介导的TNF-α释放有关.     

推拿对脑瘫幼鼠海马炎症的拮抗作用及DNA甲基化调控机制

目的观察推拿对脑瘫(Cerebral palsy,CP)幼鼠海马炎症细胞因子TNF-α和IL-10蛋白表达的影响及其DNA甲基化水平,探讨推拿对脑瘫幼鼠海马炎症的拮抗作用及机制。方法 39只SD雄性幼鼠随机分为3组:实验组(n=13)、模型对照组(n=13)和空白对照组(n=13),实验组和模型对照组在出生后第3天(Postnatal 3 days,P3)制备脑瘫模型。在P5天,实验组开始进行推拿干预,1次/日,15 min/次,持续4周,空白对照组和模型对照组不予任何干预。P33天处死所有幼鼠进行取材,取幼鼠脑内海马组织并保存于-80℃,采用蛋白质印迹法检测海马中的TNF-α和IL-10蛋白变化并分别以Sequenam质谱检测法和焦磷酸测序法检测各组海马组织内TNF-α和IL-10 DNA甲基化水平并以先检测蛋白后检测甲基化。结果实验组IL-10蛋白表达水平低于空白对照组,两组间差异无统计学意义(P0.05)。实验组和空白对照组IL-10蛋白表达水平高于模型对照组,差异有统计学意义(P0.05)。实验组TNF-α蛋白表达水平高于空白对照组,差异无统计学意义(P0.05)。与模型对照组相比,实验组和空白对照组TNF-α蛋白表达水平较低,差异有统计学意义(P0.05)。2.三组间IL-10基因启动子区域甲基化水平差异无统计学意义(P0.05),TNF-α基因启动子区域三组间差异有统计学意义(P0.05)。结论推拿后脑瘫幼鼠海马炎症细胞因子TNF-α,表达下降IL-10表达升高,其机制可能是推拿调控了炎症细胞因子TNF-α和IL-10的基因启动子区域甲基化水平,同时IL-10蛋白表达的改变可能也与其他因素的调节有关。     

黄连解毒汤含药血清对脂多糖诱导的巨噬细胞炎症因子影响研究

目的:观察黄连解毒汤含药血清对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞炎症因子表达的影响。方法:以大、中、小剂量黄连解毒汤水煎剂灌胃SD大鼠制备含药血清,采用MTT法观察含药血清对细胞增殖的影响,选择各剂量浓度为20%的含药血清体外干预LPS刺激的巨噬细胞;采用Griess法检测NO释放量,采用ELISA法检测细胞上清液中TNF-α及IL-6含量。结果:采用LPS刺激细胞后,引起NO、TNF-α及IL-6因子的高表达,与正常对照组比较差异具有统计学意义(P0.05);采用黄连解毒汤含药血清干预后,可明显抑制NO、TNF-α及IL-6因子的高表达,与模型组比较差异具有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论:黄连解毒汤含药血清可抑制LPS诱导的巨噬细胞炎症反应,可能是该方防治动脉粥样硬化的重要机制。     

柿叶黄酮对肿瘤坏死因子α诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡信号调节激酶1表达的影响

目的:观察柿叶黄酮对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的大鼠血管平滑肌细胞凋亡信号调节激酶1的影响。方法:体外培养SD大鼠血管平滑肌细胞,应用柿叶黄酮与TNF-α共同进行作用并设立对照进行比较,采用非放射性的MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。利用Western blotting蛋白免疫印迹法测定血管平滑肌细胞凋亡信号调节激酶1蛋白的表达情况。结果:各组的细胞增殖率分别为对照组0.817±0.074;TNF-α20 ng/ml组1.865±0.093;柿叶黄酮50μg/ml组0.905±0.044;TNF-α20 ng/ml联用柿叶黄酮50μg/ml组1.247±0.061。统计分析显示TNF-α20 ng/ml能明显刺激血管平滑肌细胞的增殖。柿叶黄酮单独作用对血管平滑肌细胞细胞增殖率无影响;柿叶黄酮对TNF-α诱导血管平滑肌细胞增于有明显的抑制作用,TNF-α对血管平滑肌细胞的凋亡信号调节激酶1蛋白的表达有显著的增强作用,这种作用部分可以被柿叶黄酮所抑制。结论:柿叶黄酮能明显抑制由TNF-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞凋亡信号调节激酶1蛋白的表达。     

针刀治疗对神经根型颈椎病患者TNF-α的影响

目的观察针刀治疗对神经根型颈椎病患者肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响。方法将患者随机分为治疗组（针刀配合推拿手法治疗）与对照组（单纯推拿手法治疗）,比较两组临床疗效,并于治疗前后分别测定患者血清TNF-α水平。结果治疗组临床疗效优于对照组,其血清TNF-α水平明显低于对照组。结论针刀治疗能够抑制神经根型颈椎病患者炎性细胞因子TNF-α的释放。     

健脑益智合剂对脑瘫幼鼠模型脑组织病理学及TNF-α表达的影响

目的:探讨健脑益智合剂对脑瘫幼鼠脑组织病理学及TNF-α表达的影响。方法:将32只SPF级SD孕鼠随机分为对照组(8只)和模型组(24只),于孕第16～17天,模型组腹腔注射脂多糖(LPS)后置于混合气体9.5%O2+90.5%N2缺氧箱中3 h,1次/d,分娩后将幼鼠置于缺氧箱中3 h,1次/d,持续1周。幼鼠出生后2周判定模型制备成功后,随机选取模型组幼鼠60只后随机分为脑瘫模型组(A组)、康复训练组(B组)和健脑益智合剂干预组(C组),每组20只,并随机选取对照组幼鼠20只,为正常对照组(D组)。B组幼鼠予康复训练,C组幼鼠予健脑益智合剂(18 mL/kg)灌胃,A组、D组予同体积生理盐水灌胃,1次/d,持续3周。干预结束后各组幼鼠脑组织进行HE染色,观察病理学变化,并检测脑组织匀浆TNF-α含量。结果:A组脑室旁组织细胞排列紊乱不齐,软化灶形成,炎性细胞浸润,脑匀浆TNF-α表达明显高于D组(P0.05);B组侧脑室组织细胞排列紊乱,可见炎性细胞,局部软化灶形成,TNF-α表达低于A组(P0.05);C组脑室周围细胞排列较为规整,软化灶和炎性细胞浸润较少,TNF-α表达明显低于A组(P0.01)。结论:健脑益智合剂可改善脑瘫模型幼鼠脑组织病理学,降低脑组织TNF-α水平,这可能是健脑益智合剂治疗脑瘫的作用机制之一。     

柴胡皂苷a对PTZ诱导大鼠海马星形胶质细胞TNF-α释放及其受体表达的影响

目的:探讨柴胡皂苷a(SSa)对戊四氮(PTZ)诱导体外培养的大鼠海马星形胶质细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)释放及其受体表达的影响。方法:将体外原代培养的大鼠海马星形胶质细胞随机分为对照组(A组)、PTZ10mmol/L诱导组(B组)、PTZ 10mmol/L加SSa不同剂量干预组(C组、D组,SSa分别为1.25mg/L、0.625mg/L),PTZ诱导2h后运用ELISA法检测细胞外液TNF-α水平、Western-blot法检测星形胶质细胞TNF受体1(TNFR1)表达水平。结果:含PTZ 10mmol/L的B组TNF-α水平、TNFR1表达均显著高于A组、C组和D组(P<0.01)。结论:PTZ可以诱导体外培养大鼠海马星形胶质细胞TNF-α释放及TNFR1的高表达;SSa可以抑制PTZ诱导星形胶质细胞TNF-α释放及TNFR1的高表达,这可能是其抗癫痫的作用机制之一。     

祛湿活血方对脂肪细胞多聚化脂联素表达的影响

目的:通过研究祛湿活血方在脂肪细胞内外对脂联素多聚化表达的影响,探讨祛湿活血方治疗NAFLD的分子机制。方法:体外对3T3-L1脂肪细胞及大鼠原代脂肪细胞进行诱导分化;在3T3-L1脂肪细胞中加入浓度为4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.625 g/L的祛湿活血方中药,通过Western Blot检测高分子量脂联素,筛选合适的中药浓度;体外培养3T3-L1脂肪细胞及大鼠原代脂肪细胞,ELISA检测TNF-α作用下的高分子量脂联素的变化;并以Akt活化阻断剂AKTi VIII作阳性对照,用Westernblot分析祛湿活血方对3T3-L1脂肪细胞及大鼠原代脂肪细胞HMW脂联素、Dsb A-L、Akt、P-Akt、FOXO1、P-FOXO1的影响。结果:取祛湿活血方浓度0.5 mg/mL进行实验,ELISA结果显示:无论是3T3-L1脂肪细胞还是大鼠原代脂肪细胞,TNF-α明显抑制了HMW脂联素的分泌(P0.05),而加入祛湿活血中药后,HMW脂联素的分泌明显增加。Western Blot实验结果显示:与空白组对比,祛湿活血方组和Akt抑制剂组的HMW脂联素及Dsb A-L表达水平升高;与空白组比较,祛湿活血方组和AKTi VIII组表达P-FOXO1、P-Akt水平降低,而FOXO1、Akt的表达水平无明显变化。结论:祛湿活血方可促进脂肪细胞的多聚化脂联素的表达,其在细胞外机制主要与改善TNF-α对脂肪细胞分泌HMW的抑制以及在脂肪细胞内,直接抑制Akt/FOXO1的活化,上调Dsb A-L的表达有关。     

瓜子金有效部位群抗炎作用机制研究

目的:采用体外炎症模型研究瓜子金有效部位群抗炎作用机制。方法:建立脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞系RAW264.7细胞体外炎症模型,研究不同浓度瓜子金有效部位群对一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的释放及对TNF-α和IL-6 mRNA表达的影响。结果:瓜子金有效部位群能显著降低LPS诱导的RAW264.7细胞NO,IL-6及TNF-α的释放,显著降低TNF-α及IL-6 mRNA的表达。结论:瓜子金有效部位群抗炎作用与其减少巨噬细胞炎症介质的生成与释放及降低TNF-α和IL-6 mRNA的表达密切相关。     

田蓟苷对TNF-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的:通过观察田蓟苷对TNF-α诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的影响,探讨其治疗动脉粥样硬化的可能药效机制。方法:体外培养大鼠主动脉VSMC,采用SABC-Cy3荧光免疫组化技术鉴定其纯度;以TNF-α刺激VSMC建立细胞增殖和迁移模型;采用MTT法检测细胞的增殖,Transwell小室法检测细胞的迁移,免疫酶组化法检测细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平。结果:2.5～10μg/ml田蓟苷可不同程度抑制TNF-α诱导的VSMC增殖、迁移以及细胞内PCNA的表达,且呈现一定剂量依赖关系的趋势。结论:田蓟苷通过抑制TNF-α对VSMC的增殖和迁移作用,可能是其治疗动脉粥样硬化的药效机制之一。     

板蓝根提取物对RAW 264.7细胞生成NO及表达iNOS的影响

目的:研究板蓝根的抗炎作用及分子机制。方法:以LPS刺激RAW 264.7细胞,用板蓝根提取物进行干预,测定NO和TNF-α含量,Western blot法检测iNOS和COX-2蛋白表达水平。结果:板蓝根在12.5～100μg.mL-1浓度范围内可明显抑制RAW 264.7细胞释放TNF-α及NO,并可显著抑制iNOS蛋白表达。结论:板蓝根通过下调iNOS蛋白表达,抑制炎症介质TNF-α及NO而发挥抗炎作用。     

连翘提取物对RAW264.7细胞生成NO及表达iNOS的影响

目的:研究连翘的抗炎作用及分子机制。方法:以LPS刺激RAW 264.7细胞,用连翘提取物进行干预,测定NO和TNF-α含量,Western blot法检测iNOS和COX-2蛋白表达水平。结果:连翘在12.5～100μg·mL-1浓度范围内可明显抑制RAW 264.7细胞释放TNF-α及NO,并可显著抑制iNOS蛋白表达。结论:连翘通过下调iNOS蛋白表达,抑制炎症介质TNF-α及NO而发挥抗炎作用。     

葫芦巴4－羟基异亮氨酸对高糖诱导小鼠3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的影响

目的 研究葫芦巴活性成分4－羟基异亮氨酸（4-hydroxyisoleucine, 4-HIL）对高糖诱导的小鼠前脂肪细胞（3T3-L1）胰岛素抵抗的作用及其机制。方法 以25 mmol/L葡萄糖加0.6 nmol/L胰岛素诱导小鼠3T3-L1脂肪细胞建立胰岛素抵抗细胞模型,予以不同浓度4-HIL（5、10、20 μmol/L）进行干预。采用［3H］－脱氧-D-葡萄糖摄入法检测葡萄糖摄取率,PCR法检测肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-alpha,TNF-α）mRNA表达量,ELISA法检测细胞上清TNF-α蛋白水平。以棕榈酸（palmitic acid,PA）为对照。结果 25 mmol/L葡萄糖加0.6 nmol/L胰岛素作用18 h后,3T3-L1脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖转运抑制了63％;PCR显示脂肪细胞内TNF-α mRNA的表达较正常脂肪细胞明显增高（P<0.05）;ELISA显示细胞上清中的TNF-α分泌量增加70 pg/mL（P<0.05）。PA组表现出类似结果。分别加入5、10、20 μmol/L 4-HIL作用24 h后,3T3-L1脂肪细胞胰岛素刺激所产生的葡萄糖转运分别增加35％、50％、60％;PCR检测显示,脂肪细胞内TNF-α mRNA的表达随着药物浓度的增加呈递减趋势,与模型组及PA组比较,差异有统计学意义（P<0.05）;与模型组比较,药物干预后脂肪细胞培养基上清TNF-α分泌水平分别下降10、18、39 pg/mL（P<0.05）。结论 4-HIL可以显著改善高糖诱导的小鼠3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗,同时4-HIL能够抑制TNF-α的分泌。