人B淋巴细胞肿瘤凋亡信号转导通路缺陷相关的研究进展

凋亡在B淋巴细胞的发育及肿瘤发生中的作用非常重要。B淋巴细胞肿瘤的发生和化疗耐药机制通常包括Bcl-2蛋白家族失调和p53/p14ARF通路改变。然而Burkitt淋巴瘤细胞株Raji细胞凋亡通路中Apaf-1或DFF-40异常,而非Bcl-2、p53异常诱发凋亡耐受的研究结果令人关注。进一步探索B细胞淋巴瘤凋亡失调的机制,开发新的靶向治疗药物,或将为B细胞淋巴瘤的治疗带来新的希望。     

内毒素诱导淋巴细胞凋亡

内毒素 (ＬＰＳ)是革兰氏阴性细菌细胞壁的成分 ,它可以引起宿主的广泛病理生理效应 ,如休克、组织损伤 ,甚至宿主死亡。ＬＰＳ也激活免疫系统 ,但主要作用于中性粒细胞、单核/巨噬细胞和Ｂ淋巴细胞。ＬＰＳ是否能影响Ｔ淋巴细胞 ,一直是研究者们感兴趣的课题。本研究对ＬＰＳ体外诱导淋巴细胞凋亡进行初步观察。1　材料与方法1 1　材料　 (1)试剂 :ＬＰＳ(Ｓｉｇｍａ ,10 0 μｇ·ｍｌ-1) ,淋巴细胞分离液 (上海试剂二厂 ) ,ＲＰＭＩ16 40完全培养基 (Ｇｉｂｃｏ ,美国 ) ,丫啶橙 (Ｓｉｇｍａ ,2 0 0 μｇ·ｍｌ-1)和嗅乙啶 (上海生产 ,2 0 0 μｇ·ｍｌ-1)。     

CXCL13和CCL19联合诱导的B淋巴细胞白血病细胞抗凋亡作用

目的探讨CXCL13和CCL19在急、慢性B淋巴细胞白血病发病机制中的作用。方法采用趋化试验分别检测CXCL13和CCL19对B—ALL和B—CLL中CD19^ CD34^ B细胞的趋化效应，流式细胞术检测CXCL13和CCL19联合作用时TNF—α诱导B—ALL和B—CLL患者CD19^ CD34^ 和CD19^ CD3^-B细胞的凋亡情况。结果在B—AlL和B—CLL中，CXCL13和CCL19联合作用能明显抗TNF—α诱导的CD19^ CD34^ B细胞凋亡，而PKC途径抑制剂百日咳毒素(PT)可明显抑制该效应。结论CXCL13和CCL19联合作用，经PKC途径抑制剂TNF-α诱导的B—ALL、B—CLL中的CD19^ CD34^ B细胞凋亡，为探讨B淋巴细胞白血病的发病机制提供一条新思路。     

催乳素保护人B淋巴细胞免其凋亡的实验研究

目的:研究人催乳素(PRL)在B淋巴母细胞系IM-9细胞凋亡中的保护作用。方法:在地塞米松诱导IM-9细胞凋亡的实验体系中加入PRL(10ng/ml),DNA琼脂糖凝胶电泳观察PRL对地塞米松诱导IM-9细胞凋亡的保护。结果:地塞米松组诱导的IM-9细胞在48h后出现细胞凋亡,DNA琼脂糖凝胶电泳显示有大量小分子DNA片段形成,呈典型的细胞凋亡DNA梯形带,地塞米松-PRL组的IM-9细胞的DNA经电泳后未出现凋亡的DNA条带。结论:地塞米松能诱导IM-9细胞的凋亡,PRL能保护IM-9细胞,免其凋亡。     

蛋白激酶C和蛋白酪氨酸激酶活性对缺血再灌注心肌细胞凋亡影响的实验研究

为探讨缺血预适应（Ｉｓｃｈｅｍｉｃ Ｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ,ＩＰ）早期以及蛋白激酶Ｃ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｋｉｎａｓｅ Ｃ,ＰＫＣ）及蛋白酷氨酸激酶（Ｐｅｏｔｅｉｎ Ｔｙｒｏｓｉｎｅ Ｋｉｎａｓｅ,ＰＴＫ）激动剂和抑制剂对缺血再灌注（Ｉ／Ｒ）心肌细胞凋亡的影响以及ＩＰ效能发挥通路中央ＰＫＣ和ＰＴＫ的关系。用ＴＵＮＥＬ法检测Ｉ／Ｒ心肌细胞凋亡。结果显示：１、ＩＰ早期能显著降低Ｉ／Ｒ心肌细胞凋亡（     

Sertoli细胞诱导异基因T淋巴细胞凋亡的研究

目的 探讨大鼠睾丸支持细胞(Sertoli细胞)在体外与同种异体来源T淋巴细胞共同培养能否诱导T淋巴细胞凋亡.方法 用SABC法检测T淋巴细胞Fas和Sertoli细胞FasL的表达率.Sertoli细胞和异基因T淋巴细胞共同培养实验分为,A组(对照组)只有T淋巴细胞培养,B组为T淋巴细胞与经过FasL单克隆抗体处理过的等量Sertoli细胞共同培养;C组T淋巴细胞与培养Sertoli细胞24 h的培养液上清共同培养;D组为T淋巴细胞与等量Sertoli细胞共同培养;用TUNEL法检测各组淋巴细胞的凋亡指数.结果 T淋巴细胞Fas的表达率为(91.67±2.08)%;Sertoli细胞FasL的表达率为(90.43±3.52.)%.C组和D组淋巴细胞的凋亡指数显著大于A组和B组(P＜0.01);D组T淋巴细胞的凋亡指数显著大于C组(P＜0.01).结论 T淋巴细胞高表达Fas,Sertoli细胞高表达FasL;在体外共同培养的条件下,Sertoli细胞能够诱导异基因T淋巴细胞的凋亡,T淋巴细胞凋亡原因可能与Sertoli细胞产生FasL有关.     

SLE患者外周血淋巴细胞凋亡及Caspase表达研究

目的 研究SLE患者外周血淋巴细胞凋亡及细胞凋亡caspase途径在SLE病人中作用机制。方法 选取SLE患者25例,其中活动期11例,缓解期14例,另设对照组18例;采用体外细胞培养法检测外周血淋巴细胞（PBLC）细胞凋亡率、Westernblot法检测PBLCCaspase蛋白表达。结果 SLE患者外周血淋巴细胞凋亡异常,培养前低于对照组,培养24、48h后则明显高于对照组,其差异均有统计学意义;其Caspase-2、3蛋白表达水平由低到高依次是：活动组〈缓解组〈正常组。结论 SLE患者的外周血淋巴细胞Caspase2、3蛋白水平低于正常对照组是自身外周血淋巴细胞凋亡障碍导致的结果。     

褪黑素对氧化诱导人淋巴细胞凋亡相关基因表达的影响

目的 研究抗氧化剂褪黑素(MT)对H2O2诱导人淋巴细胞凋亡的作用。方法 用免疫细胞化学的方法检测凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达。结果 H2O2处理细胞后bcl-2基因表达轻度增高，加入MT后明显增高，而bax基因表达明显增加，MT干预后明显下降。结论 H2O2可诱导人淋巴细胞凋亡，MT可使H2O2诱导的细胞bcl-2基因的蛋白表达明显增高，并明显降低bax基因的蛋白表达，从而抑制淋巴细胞凋亡。     

B细胞淋巴瘤石蜡包埋组织克隆性重链基因重排检测

目的 探讨克隆性重链基因重排检测在B细胞淋巴瘤(B—NHL)诊断中的价值。方法 用半巢式聚合酶链反应(semi—nested PCR)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及银染技术，检测经形态学及免疫组织化学确诊的23例B—NHL石蜡包埋组织标本的克隆性免疫球蛋白第三互补决定区(IgHCDR3)重排基因，对照组为7例T细胞淋巴瘤(T—NHL)及6例反应性增生或肉芽肿性淋巴结炎。结果 B—NHL IgHCDR3检出的阳性率87．0％(20／23)，假阳性率7．7％(1／13)，假阴性率13．0％(3／23)。结论 检测克隆性IgHCDR3重排为B—NHL的诊断及鉴别诊断提供有效的辅助手段。     

HSS促进人肝癌细胞凋亡的研究

目的：研究肝刺激物（hepatic stimulator substance,HSS)对人肝癌细胞凋亡的影响。方法：用无血清培养人肝癌细胞诱导典型的细胞凋亡，以此为模型应用流式细胞术及流式细胞免疫荧光技术，检测HSS作用不同时间后，对无血清培养人肝癌细胞诱导凋亡比率的影响，并观察HSS对常规培养人肝癌细胞的P53蛋白表达变化的影响。结果：HSS作用于无血清培养的人肝癌细胞，细胞凋亡比率随时间延长而增加；HSS作用于常规培养的人肝癌细胞，P53蛋白的表达随时间延长而减弱。结论：HSS对无血清培养人肝癌细胞凋亡有促进作用。     

弥漫大B细胞淋巴瘤中枢神经系统浸润的研究

目的：研究弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中枢神经系统(CNS﹚浸润的危险因素。方法回顾性分析2013年1月＿2015年8月期间福建医科大学附属协和医院血液病研究所新诊断的年龄满18周岁的DLBCL患者。结合文献,对DLBCL患者发生CNS浸润的时间、高危因素进行回顾性分析。结果共分析173例患者,13例发生中枢神经系统浸润(7.5%﹚,5例在发病5个月内发生,8例在6个月后发生且均在1年内,4例表现为软脑膜受累,6例为脑实质受累,3例两者同时受累。高IPI评分、高LDH水平、结外病变≥2处、临床分期≥III期系CNS浸润的高危因素(P﹤0.05﹚。发生CNS浸润后患者平均生存时间为5.7个月。结论高危患者发生CNS浸润风险高,发生CNS浸润后患者预后差。     

吴茱萸碱对胶质瘤SHG-44细胞凋亡的促进作用及其机制

目的研究吴茱萸碱对人胶质瘤SHG-44细胞凋亡的促进用及其机制。方法将体外培养的胶质瘤SHG-44细胞分为对照组、吴茱萸碱组(根据吴茱萸碱浓度不同分为3个亚组),CCK-8法观察细胞活性,流式细胞仪测定细胞凋亡率,Hoechst 33258核染色法观察细胞核凋亡,透射电镜观察细胞形态学的变化,Western blot法检测胶质瘤SHG-44细胞内Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9的蛋白表达。结果吴茱萸碱对胶质瘤SHG-44细胞增殖有抑制作用。流式细胞仪及Hoechst 33258核染色法的检测结果表明,随着吴茱萸碱作用浓度的递增,胶质瘤SHG-44细胞凋亡率呈剂量依赖性递增;吴茱萸碱作用后可使Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9蛋白的表达升高。结论吴茱萸碱通过改变Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9蛋白的表达,抑制胶质瘤SHG-44细胞增殖并促进其凋亡。     

c-myc反义核苷酸对淋巴瘤细胞系CA46凋亡的作用

目的 研究c—myc反义核苷酸对体外培养的淋巴瘤细胞系CA46基因表达及诱导凋亡的作用。方法 c—myc反义核苷酸(ASPO)为人工合成的针对c—myc基因的一段外源性基因片段，以无义的寡核苷酸作为对照，导入CA46细胞后观察其基因表达及诱导凋亡的作用。流式细胞仪检测c—myc基因产物表达，荧光染色观察CA46细胞的凋亡形态，流式细胞仪定量检测凋亡百分率，TUNEL检测加用VP16后的CA46原位凋亡。结果 c—myc反义核苷酸(ASPO)作用CA46细胞后，RT—PCR示c—myc mRNA表达降低。荧光染色ASPO组细胞胞体缩小，胞膜完整，核质浓缩，出现黄绿色不规则或局部致密荧光，凋亡细胞约占23．3％，而SPO组及空白组未见明显凋亡细胞，细胞呈均匀绿色荧光。流式细胞仪检测仅用VP16 10mg／L 3d，ASPO作用2d后加VP16 10mg／L 1d及ASPO作用3d均出现凋亡峰，凋亡率分别为16％，72％及52％，而SPO组及空白但均未见凋亡峰。流式细胞仪检测CA46细胞c—myc蛋白为95．3％，经ASPO作用后降为23．7％，同时SPO组c—myc表达率为90．6％，TUNEL检测ASPO组凋亡细胞为25．5％，加用VP16后的CA46凋亡率为36．7％。结论 体外实验中CA46特异地被c—myc反义核酸抑制生长，细胞出现凋亡表现，c—myc mRNA癌基因表达降低。     

黄连素抑制GRP78表达促进三阴乳腺癌细胞凋亡的研究

[目的]通过检测黄连素对三阴乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞株MDA-MB-231细胞凋亡及葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)表达的影响,探讨黄连素抗TNBC的机制。[方法]以MTT法检测不同浓度黄连素对MDA-MB-231细胞增殖的影响,筛选黄连素的处理浓度。将MDA-MB-231细胞分为对照组、40μmol·L~(-1)黄连素组、60μmol·L~(-1)黄连素组、免疫球蛋白重链结合蛋白诱导剂X(immunoglobulin heavy chain binding protein inducer X,BiX)组,以及BiX联合40μmol·L~(-1)黄连素组、BiX联合60μmol·L~(-1)黄连素组。相应药物处理24h后,应用流式细胞术检测细胞凋亡情况,并以Western blot检测细胞GRP78和凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达。[结果]40μmol·L~(-1)以上浓度的黄连素可剂量依赖性抑制MDA-MB-231细胞增殖。与对照组比较,BiX组细胞凋亡率降低(P0.05)、GRP78和Bcl-2表达增高(P0.01,P0.001)、Bax表达减低(P0.05)。与BiX组比较,BiX联合40、60μmol·L~(-1)黄连素组细胞凋亡率增加(P0.01),GRP78和Bcl-2表达减低(P0.01,P0.01),Bax表达增加(P0.01)。[结论]黄连素可以促进MDA-MB-231细胞凋亡,其机制可能是通过下调GRP78的表达,从而降低Bcl-2表达,并促进Bax的表达。     

BRS-3激活对人支气管上皮细胞凋亡的影响

目的:观察BRS-3激活对人支气管上皮细胞凋亡的影响,以探讨BRS-3在气道功能稳态中的生物学作用,进一步拓展对神经源性气道高反应性机制的认识。方法:人支气管上皮细胞常规培养,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:臭氧应激促进支气管上皮细胞凋亡,BRS-3激活可抑制臭氧应激诱导的细胞凋亡。结论:BRS-3激活抑制细胞凋亡,提示BRS-3激活维持应激状态下支气管上皮细胞功能稳态,可能在哮喘等气道高反应性疾病中起保护作用。     

玉竹提取物B对Hela细胞凋亡的影响

目的 观察中药玉竹提取物B(EB—PAOA)是否能引起人宫颈癌Hela细胞的凋亡。方法 将体外培养的人宫颈癌Hela细胞与不同浓度的EB—PAOA共育，通过倒置显微镜和透射电镜进行形态学观察，确认凋亡细胞；通过流式细胞仪检测凋亡率和细胞周期的分布。结果 经过EB—PAOA处理后，在倒置显微镜和透射电镜下可观察到EB—PAOA引起的典型的凋亡形态学变化；流式细胞仪测定显示经EB—PAOA处理后的Hela细胞凋亡率呈时间-剂量依赖性，G0／G1期细胞减少，S期细胞减少，G2／M期细胞增多。结论 EB—PAOA能够诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡，EB—PAOA抑制Hela细胞生长的机制之一是诱导该细胞凋亡。     

乙型肝炎病毒相关性膜性肾病肾组织细胞凋亡的意义

目的 观察儿童乙型肝炎病毒相关性膜性肾病(HBV-MN)肾组织的细胞凋亡情况,以探讨其在HBV-MN发病中的意义.方法 采用活性Caspase-3免疫组织化学染色和核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)观察HBV-MN患儿肾组织及正常肾组织中的凋亡现象.并分析其与肾组织病理改变、尿蛋白及临床免疫学指标等因素的关系.结果 正常肾组织中,Caspase-3仅表达于少数肾小管上皮细胞胞质;在HBV-MN患儿的肾小球和肾小管一间质区,Caspase-3不仅表达于细胞质尚可见于胞核区(即活性Caspase-3),且肾小球和肾小管-间质区活性Caspase-3的表达(凋亡指数)与TUNEL指数均显著相关.HBV-MN患儿肾组织的凋亡指数与肾脏病变病理分期显著相关.肾小球凋亡指数与蛋白尿程度相关,而与HBsAg的沉积强度、血清补体C3水平无相关性;肾小管-间质区凋亡指数与蛋白尿程度、尿视黄醇结合蛋白水平显著相关.结论 HBV-MN患儿肾小球及肾小管-间质区均存在依赖Caspase-3的肾脏固有细胞凋亡,活性Caspase-3的表达与肾脏病变严重程度、临床蛋白尿水平及尿视黄醇结合蛋白(RBP)水平相关.肾脏固有细胞凋亡可能在HBv-MN的病理过程中发挥重要作用.     

血管内皮细胞凋亡研究进展

凋亡诱导剂通过Fas/FasL/caspase途径、Cyt C途径、TNF-α途径及PARP途径等诱导血管内皮细胞凋亡。抗凋亡诱导剂通过干扰细胞凋亡的信号通路来抑制凋亡。中药作为广泛使用的抗凋亡药物在临床上已取得显著成效,但其部分具体的分子机制还不清楚。文章对血管内皮细胞凋亡的4条信号通路及凋亡诱导剂和抗凋亡诱导剂的研究进展作一综述。