脂溢性角化病皮损中Smad4 mRNA表达水平的变化

目的探讨转化生长因子β(TGF-β)/Smad信号转导途径中共有Smad——Samd4 mRNA在脂溢性角化病皮损中的表达水平及其意义。方法应用反转录-实时定量聚合酶链反应(RT and quantitative Real-Time PCR)方法分别检测脂溢性角化病皮损与正常对照皮肤中Smad4的mRNA表达情况。结果脂溢性角化病皮损中Smad4的mRNA表达水平显著低于正常对照皮肤。结论脂溢性角化病皮损中Smad4表达下调可能干扰TGF-β信号下传,使TGF-β抑制上皮过度增生的作用不能有效发挥,从而促进了脂溢性角化病皮损中表皮的过度增生。     

寻常型银屑病皮损区表皮Smurf2表达及其意义

目的探讨寻常型银屑病皮损区Smad泛素化调节因子2(Smadubiquitinationregulatoryfactor2,Smurf2)的表达及其意义。方法采用逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)和SP免疫组化法分别检测寻常型银屑病皮损和对照正常皮肤中Smurf2的表达情况。结果RTPCR显示,寻常型银屑病皮损中Smurf2表达水平上调。与对照正常皮肤相比,寻常型银屑病皮损区表皮角质形成细胞Smurf2的免疫组化染色显著增强。结论寻常型银屑病皮损区表皮Smurf2表达增强。     

脂溢性角化病皮损区受体活化Smad的变化

目的 探讨转化生长因子β（transforming growth factor—β,TGF—β）信号转导通路中受体活化Smads（Smad2,Smad3）在脂溢性角化病皮损区的表达及其意义。方法 采用反转录一实时定量聚合酶链式反应（RT and quantitative Real—Time PCR）和免疫组化技术分别检测脂溢性角化病皮损和正常对照皮肤中Smad2及Smad3的mRNA和Smad1／2／3及磷酸化Smad2／3（p-Smad2／3）蛋白的表达情况。结果 与正常对照皮肤组相比,脂溢性角化病皮损中Smad2、Smad3的mR-NA以及Smad1／2／3、p-Smad2／3的表达水平下降。结论 脂溢性角化病中受体活化Smads（Smad2、Smad3）和p-Smad2／3表达下调可阻断TGF—B信号转导,可能使TGF—p抑制上皮增生的作用不能有效发挥,从而促进了脂溢性角化病表皮的过度增生。     

体外培养人皮肤鳞癌A431细胞Smad4的表达下调

目的研究体外培养的人皮肤鳞癌细胞中Smad4的表达情况。方法采用反转录-实时荧光定量聚合酶链式反应及Western blotting,分别检测体外培养的人皮肤鳞癌A431细胞与人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)中Smad4 mRNA及其蛋白的表达水平。结果在mRNA表达水平上,A431细胞与对照HaCaT细胞相比,其2-△△CT值大于2,在蛋白表达水平上,两者差异有统计学意义(t=2.536,P<0.05),提示人皮肤鳞癌A431细胞Smad4的mRNA及其蛋白的表达水平均显著低于对照的HaCaT细胞。结论Smad4表达下调可能是鳞癌A431细胞所固有的转化生长因子β信号转导通路的异常变化之一。     

TGF-βs在寻常型银屑病患者皮损中的表达

转化生长因子βs（TGF—βs）是由许多具有共同生物学特性的信号分子所组成,是一种多功能的信号分子,在哺乳类中主要有三种异构体,即TGF—β1、TGF—β2及TGF—β3,能够调节多类细胞的增殖、分化、迁移,促进细胞间质的形成和调控免疫反应及血管的再生,而皮肤是转化生长因子β作用的重要靶器官,它能够抑制角质细胞的异常增殖。     

脂溢性角化病皮损的表皮中TGF-βⅠ型和Ⅱ型受体表达下调

目的探讨转化生长因子-β受体（tmnsforming growth factor β receptor,TGF—βR）在脂溢性角化病皮损中表达水平的变化及其意义。方法采用实时定量聚合酶链式反应（quantitative real—time PCR）和S-P免疫组织化学技术分别检测脂溢性角化病及正常对照皮肤中Ⅰ型和Ⅱ型TGF-β受体（TGF—βRⅠ,TGF—βRⅡ）的表达。结果TGF-βRⅠ和TGF-βRⅡ在脂溢性角化病皮损表皮中的表达较正常表皮显著降低。结论脂溢性角化病皮损中表皮TGF-β受体表达下调有助于表皮细胞的异常增生,促进了该表皮肿瘤的形成。     

Smad7对TGF-β/Smad信号转导通路的调节及其在肾纤维化中的作用

TGF-β是肾纤维化发生、发展中的必需因子,Smad蛋白是TGF-β受体的胞内激酶底物,介导了TGF-β的胞内信号转导.Smad7是负反馈调节TGF-β功能的细胞分泌因子,其过度表达可能改变了R-Smads和I-Smads对TGF-β诱导纤维化的应答或阻断的病理生理平衡.深入研究Smads介导的TGF-β胞内信号转导,将有助于对肾脏纤维化发病机制的理解,为探索新的治疗途径、开发临床新药提供理论依据.     

银屑病皮损血管内皮细胞CD105的表达

目的 探讨转化生长因子β的结合蛋白CD105在银屑病皮损血管内皮细胞的表达及其作用。方法 采用免疫组化方法检测TGF-β1、TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ和CD105在银屑病皮损及正常对照皮肤的血管内皮细胞的表达。结果 与正常皮肤相同,TGF-β1、TGF-βRⅠ在银屑病皮损血管内皮细胞均无明显表达;TGF-βRⅡ在银屑病皮损和正常皮肤的血管内皮细胞均有明显表达,但两者差异无显著性;CD105在银屑病皮损血管内皮细胞的表达明显强于正常皮肤,差异有显著性（P〈0．01）。结论 CD105在银屑病皮损血管内皮细胞的表达明显上调可能与银屑病真皮浅层血管增生、炎症细胞浸润的病理机制有关。     

表皮生长因子受体在银屑病患者皮损中的分布

用一种新的免疫组织化学技术－标记的抗生蛋白链菌素－生物素连接系统，对２４例银屑病患者皮损中的表皮生长因子受体进行研究。结果；在银屑病进展期，ＥＧＦＲ阳性细胞分布于表皮全层包括角质层，在汗腺及毛囊外根鞘上皮细胞也有ＥＧＦＲ的表达；而静止期患者ＥＧＦＲ明显减少，主要分布于颗粒层和棘层，角层阴性。     

表皮生长因子受体在银屑病患者皮损中的分布

用一种新的免疫组织化学技术──标记的抗生蛋白链菌素－生物素连接系统（ＬＳＡＢ），对２４例银屑病患者皮损中的表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）进行了研究。结果：在银屑病进展期，ＥＧＦＲ阳性细胞分布于表皮全层包括角质层，在汗腺及毛囊外根鞘上皮细胞也有ＥＧＦＲ的表达；而静止期患者ＥＧＦＲ明显减少，主要分布于颗粒层和棘层，角层阴性。ＥＧＦＲ阳性表达率及阳性细胞密度，进展期患者明显大于静止期，差异有显著性意义（Ｐ＜０．０５）。ＥＧＦＲ在银屑病发病中具有重要作用。     

Smad4在胃癌组织中表达的研究

目的检测Smad4在胃癌组织及其相应正常胃粘膜组织中的表达分布,并分析其与胃癌患者临床病理学特征之间的关系。方法选取39例经外科手术切除及组织病理学证实的胃癌患者癌组织标本及相应正常胃粘膜组织,应用冰冻切片免疫组化染色方法,在蛋白水平进行检测。结果正常胃粘膜细胞浆中都有Smad4阳性表达,39例胃癌患者癌组织中22例有Smad4阳性表达(56.4%),两者之间差异有显著性(P<0.05)。Smad4蛋白的表达与癌细胞的分化程度及浸润程度相关,分化程度越低、浸润程度越重,其阳性表达率越低(P<0.05);而Smad4蛋白的表达与年龄、性别、TNM分期、淋巴结转移、远处转移无相关性。结论Smad4的表达下降与胃癌的发生有关,而且与癌细胞的分化程度及浸润程度密切相关,Smad4可能作为胃癌诊断和预后的分子标志。     

Smad4及Smad7在胃癌组织中的表达研究

目的:研究Smad4及Smad7在不同胃组织中的表达及作用.方法:病理学证实的胃癌根治术切除的胃癌组织标本78例,胃癌旁组织78例,采用SP免疫组织化学染色技术,检测Smad4及Smad7在不同胃组织中的表达.结果:qDSmad4蛋白在胃癌旁组织中的阳性表达率为69.23%,在胃癌组织中的阳性表达率为44.87%(P<0.01);随着胃癌分化程度的降低其阳性表达率降低;有淋巴结转移者阳性表达率为23.25%,无淋巴结转移者的阳性表达率为71.43%,差别亦有统计学意义(P<0.01).②Smad7蛋白在胃癌旁组织中的阳性表达率为17.95%,在胃癌组织中的阳性表达率为89.74%(P<0.01);随着胃癌分化程度的降低其阳性表达率升高;有淋巴结转移者阳性表达率为97.67%,无淋巴结转移者的阳性表达率为80.00%,有淋巴结转移者阳性表达率高于无淋巴结转移者(p<0.05 .结论:①smad4蛋白在胃癌组织中低表达,与癌旁组织比较差异有统计学意义(P<0.01),其表达的阳性率与胃癌的分化程度及转移有关.②Smed7蛋白在胃癌组织中高表达,与癌旁组织比较差异有统计学意义(P〈0.01),其表达的阳性率与胃癌的分化程度及转移有关.     

Smad4/DPC4基因小发夹RNA质粒表达载体的构建和鉴定

目的：构建Smad4基因小发夹RNA（shRNA）表达载体。方法：设计、合成3对编码Smad4基因shRNA的寡核苷酸序列，并分别将其克隆人pGCsi—H1／Neo／GFP质粒，酶切、测序鉴定，脂质体法转染293细胞。实时荧光定量PCR检测RNA干扰（RNAi）的抑制效果。结果：在经Hindm和BamHⅠ双酶切分别鉴定三种重组载体后，DNA测序证实小干扰RNA（siRNA）序列正确，并被准确克隆人载体。实时荧光定量PCR检测结果表明三种重组载体psiSmad4—1、psiSmad4—2和psiSmad4—3载体，分别对293细胞中Smad4基因mRNA表达的特异性抑制率为39．00％、8．80％和73．80％。结论：成功构建Smad4pGCsi—H1／Neo／GFP／shRNA质粒，为后期研究Smad4基因在肿瘤细胞中的作用机制和基因治疗打下基础。     

TGF-β1与Smad4在大肠癌组织中的表达及意义

目的：探讨TG-β1与Smad4在大肠癌组织中的表达及其与大肠癌发生发展的关系。方法：应用免疫组织化学SABC法检测67例大肠癌组织中TGF-β1与Smad4蛋白表达。并选择24例正常人大肠黏膜组织作为正常对照组。结果：大肠癌组织中TGF-β1蛋白的阳性表达率为67．2％，较正常对照组（4．2％）明显增高（P〈0．05）；大肠癌组织中Smad4蛋白的阳性表达率为44．8％，较正常对照组（95．8％）明显（P〈0．05）降低；TGF-β1和Smad4在大肠癌组织中的表达呈负相关（r=-O．521；P〈O．01）。结论：高表达的TGF-β1和低保留表达的Smad4在大肠癌发生发展中起重要作用，且二者作用具有相关性。     

深低温停循环对大鼠额叶皮质Smad2和Smad4表达的影响

目的探讨深低温停循环对缺血缺氧大鼠额叶皮质信号转导分子2（Smad2）和信号转导分子4（Smad4）表达的影响.方法 40只SD大鼠经随机分组（其中4只为预灌注血液供体）后采用体外插管法建立大鼠闭胸式体外循环模型,三组动物分别经深低温停循环（DHCA,n=12,脑温〈20℃,停循环10 min）、常温停循环（NTCA,n=12,脑温36.5℃～37.5℃,停循环10 min）和常温不停循环（NC,n=12,脑温36.5℃～37.5℃）处理后,快速断头取额叶皮质,液氮保存.免疫组化染色后图像分析系统处理判断Smad2和Smad4在缺血早期大鼠额叶皮质的表达情况.结果 Smad2和Smad4在DHCA组中较NTCA组和NC组表达均有明显升高,差异有统计学意义（P〈0.05）;Smad2和Smad4在NTCA组中较NC组表达有升高,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论缺血缺氧可诱导大鼠额叶皮质Smad2和Smad4的表达,而深低温可以进一步促进额叶皮质内Smad2和Smad4的表达,反应性地增强脑损伤保护因子TGF-β1的作用,从而发挥脑保护作用.     

他莫昔芬对人肝癌细胞增殖及ER、Smad4表达的影响

目的：研究他莫昔芬对人肝癌HepG2细胞增殖、雌激素受体（ER）、Smad4表达的影响。方法：根据他莫昔芬的不同浓度分为3组,即7.5、15、30μmol/L组,对照组不加他莫昔芬,每组设6个平行对照孔,每孔加入细胞浓度为1×105个/ml的细胞悬液0.1ml,培养24、48、72h。采用MTT法测定OD值,然后计算抑制率;免疫组化染色观察他莫昔芬对人肝癌HepG2细胞ER、Smad4表达的影响。结果：他莫昔芬抑制人肝癌细胞增殖,随浓度的增加及处理时间的延长,抑制率增加;他莫昔芬抑制肝癌细胞ER表达,促进Smad4的表达,具有时间－浓度依赖。结论：他莫昔芬可通过影响肝癌细胞ER、Smad4的表达来抑制肝癌细胞增殖。     

胃腺癌组织中Smad4的表达及其临床意义

目的研究胃腺癌及癌旁组织中Smad4的表达、临床意义及对预后的判断价值。方法收集130例胃腺癌患者的手术切除标本共378份,其中取自癌组织130份,癌旁组织248份。采用免疫组织化学法检测胃组织芯片中Smad4的表达。结果癌旁正常胃黏膜均可见Smad4的正常表达,Smad4在肠上皮化生和不典型增生中正常表达率分别为83.3%和75.0%,在癌细胞中则为64.6%。Smad4在胃癌组织中的表达率显著低于癌旁黏膜组织,差异有统计学意义（P〈0.05）。低分化癌细胞中Smad4蛋白表达率下降为42.2%,而高分化癌中仅为23.4%,Smad4表达与胃腺癌分化程度显著相关（P〈0.05）,而与其他临床病理参数无关。Kaplan-Meier分析显示,Smad4表达下降组3年生存率为35.0%,显著低于表达正常组的46.3%,差异有统计学意义（P〈0.05）。Cox回归多因素分析显示,Smad4表达是一个独立的预后因素。结论Smad4异常表达在胃腺癌发生发展方面起重要作用,Smad4可作为评价胃癌预后的独立指标。     

Smad2和Smad4蛋白在乳腺癌组织中的表达及其意义

目的：研究细胞信号传导分子Smad2和Smad4蛋白在乳腺癌组织中的表达,阐明其与乳腺癌发生发展的关系及意义。方法：选取53例乳腺导管癌和50例癌周正常组织标本,应用免疫组织化学SP法检测乳腺癌组织和癌周正常组织中Smad2和Smad4蛋白的表达水平,并评估二者的表达与乳腺癌临床病理参数间的关系。结果：乳腺癌组织中Smad2蛋白表达水平明显高于癌周正常组织（Z=-2.08,P < 0.05）;乳腺癌组织中Smad4蛋白表达水平明显低于癌周正常组织（Z=-5.01,P < 0.01）。乳腺癌组织中Smad2和Smad4蛋白的阳性表达率与患者年龄无关（r=0.035,P > 0.05;r=-0.077,P > 0.05）,与肿瘤大小无关（r= 0.128,P > 0.05;r=0.133,P > 0.05）,与淋巴结转移无关（r=0.163,P > 0.05;r=0.006,P > 0.05）,与是否有远处转移无关（r=0.113,P > 0.05;r=0.126,P > 0.05）,与ER的表达无关（r=0.056,P > 0.05;r=0.047,P > 0.05）,与PR的表达无关（r=0.129,P > 0.05;r=0.107,P > 0.05）;但与HER2的阳性表达率呈负相关关系（r=-0.388,P < 0.01;r=-0.360,P < 0.01）,与乳腺癌病理分级呈负相关关系（r=-0.331,P < 0.05;r=-0.388,P < 0.01）;乳腺癌组织中Smad2与Smad4的表达呈正相关关系（r= 0.830,P < 0.01）。结论：Smad2和Smad4蛋白在乳腺癌的发生发展过程中起重要作用,可能成为评估乳腺癌恶性程度及预后的重要生物学指标。     

术前新辅助化疗对大肠癌组织Smad4表达的影响及其与细胞增殖凋亡的关系

目的探讨术前新辅助化疗对大肠癌Sm ad4表达的影响及其与细胞增殖凋亡的关系。方法应用免疫组化S-P技术及原位末端标记法（TUNEL法）对15例经术前新辅助化疗的患者进展期大肠癌标本进行Sm ad4、增殖细胞核抗原（PCNA）、细胞凋亡的检测,并以18例经5-FU静脉化疗及21例未经化疗进展期大肠癌作为对照。结果在3组中Sm ad4的表达呈递增趋势（P〈0.05）;在3组中PCNA的表达呈递减趋势（P〈0.05）;凋亡指数（AI）在3组中也呈递增（P〈0.05）。从未经化疗的空白对照组→5-FU化疗组→新辅助化疗组,Sm ad4与AI呈正相关（r=1,P〈0.01）,与PCNA呈负相关（r=-1,P〈0.01）。结论术前新辅助化疗可使进展期大肠癌组织中Sm ad4表达更为明显增高,并可更有效的抑制大肠癌细胞增殖促进凋亡,术前新辅助化疗可作为比5-FU静脉化疗更为有效的一种治疗进展期大肠癌的辅助化疗手段。