应用套式PCR检测嗜肺军团杆菌的实验研究

应用套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测１￣６型嗜肺军团杆菌，两轮ＰＣＲ都分别出现了９９６ｂｐ和６５０ｂｐ的特异性扩增产物；而金黄色葡萄球菌等七种细菌均未出现特异性扩增。两轮ＰＣＲ分别可以检测１０ｐｇ和１０ｆｇ的模板ＤＮＡ。８份嗜肺军团杆菌含量分别为１￣１０＾７ｃｆｕ／ｍｌ的痰感染模拟标本均出现了特异性扩增产物。提示该方法可用于临床，特别是检测含微量嗜肺军团杆菌的临床标本。     

嗜肺军团杆菌肺炎合并肺部空洞5例临床分析

军团杆菌肺炎 (ＬＰ)是一种以肺炎为主 ,可合并肺外多系统损害的感染性疾病 ,其胸部Ｘ线主要表现为肺野内多发性、多形性、多变性实变影[1] ,少数可形成空洞。现收集本院自 1992～ 2 0 0 0年符合ＬＰ诊断标准[2 ] 的 78例病例 ,其中 5例胸部Ｘ线示肺野内有空洞形成 ,分析报告如下。1　临床资料病例 1:男 ,2 7岁 ,化验员 ,发热、咳嗽 2 0天 ,胸痛 10天入院。体温 38℃～ 39℃ ,痰量少 ,偶有血丝 ,外院多次痰培养(包括细菌培养、真菌培养及结核菌培养 )阴性 ,用头孢他啶治疗 3周无效 ,既往体健。入院检查 :血ＷＢＣ 9 7× 10 9/Ｌ ,Ｎ80 %。丙…     

聚合酶链反应技术检测临床标本中军团病杆菌

探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测临床标本中军团病杆菌（ＬＤＢ）对军团菌病的诊断价值。用ＰＣＲ技术对３１例ＬＤＢ培养和（或）血清学阳性、临床诊断为军团菌病患者急性期的临床标本，军团菌巨噬细胞感染增效基因（ｍｉｐ ｇｅｎｅ）６３０ｂｐ片段进行ＤＮＡ扩增，并与军团菌培养和血清血诊断（间接荧光抗体检查法）比较。结果：ＰＣＲ技术诊断军团菌病的阳性率为９０．３％９２８／３１），比培养的阳性率（６２．６％，１     

基因扩增法检测军团杆菌DNA的研究

采用聚合酶链式反应建立检测军团菌 DNA 的实验诊断方法。结果显示,采用军团菌属5 SrRNA 编码区特异性引物进行扩增,11种军团菌(包括八种嗜肺军团菌)均可见104bp 的阳性扩增带;采用嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强(mip)基因编码区特异性引物扩增,所有八种嗜肺军团菌均可见650 bp 的特异性扩增带,所有三种非嗜肺军团菌扩增结果为阴性。检测敏感性为60 fg 左右。     

嗜肺军团杆菌分布规律及分子标记技术研究

军团菌(legionella)是一种革兰阴性杆菌，可广泛存在于自然环境和生活环境的水体，可以通过含菌气溶胶的方式在空气中播散而被人体吸入导致人类感染，发生军团病(Legionnaire’s disease)。自1976年美国首次发现军团病，1977年分离出军团菌以来，军团菌感染的危害性逐渐被认识，全球一些国家和地区都有散发及暴发流行。1983年我国首次报道，其后报道了数次。     

用Nested聚合酶链反应检测嗜肺军团菌的实验研究

用Nested聚合酶链反应(Nested PCR)法检测嗜肺军团菌种。Nested PCR法所用的两对寡核苷酸引物按编码24 kDa嗜肺军团菌表面抗原的基团片段序列设计的。用此两对引物对实验的军团菌种和非军团菌种细菌DNA进行扩增,只有嗜肺军团菌种DNA被扩增,而其他军团菌种和非军团菌属细菌没有被扩增。第1步和第2步PCR分别检测到最小量为10pg和10 fg的靶DNA。对不同量的嗜肺军团菌配制成的痰标本进行检测,能检测到0.1cfu/ml的嗜肺军团菌,只需12h。这些结果显示Nested PCR法检测嗜肺军团菌特异性强,敏感性高。此方法为从临床标本和环境材料中早期、快速检测到嗜肺军团菌提供了有效的工具。     

肺部感染78例血清嗜肺军团菌抗体测定

本文应用微量凝集试验(MAT)对我院78例肺部感染患者进行了嗜肺军团菌血清杭体的测定,结果表明本地区确有嗜肺军团杆菌感染,以LP_6为多见。并与本地区同期无呼吸道感染的正常人嗜肺军团菌血清抗体测定结果对比发现两者阳性率无明显差别(P>0.05)     

应用聚合酶链式反应检测myc族癌基因

聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术的应用简化了基因分析和检测过程。在PCR扩增过程中,引物决定产物合成的起点和方向、其顺序决定产物的特异性。选择基因间同源DNA顺序作引物,通过PCR可以扩增同源基因和基因家族。我们称这种使用一对引物能同时扩增几个或多个基因的方法为“通用引     

聚合酶链法检测环境水体中嗜肺军团菌

目的建立检测环境水体中嗜肺军团菌聚合酶链(PCR)法。方法以嗜肺军团菌特异性保守基因Mip为靶基因,采用Godkex软件设计引物,聚合酶链反应测定。结果该方法检测军团菌的灵敏度为5.8×102cfu/ml,6株标准军团菌均扩增出996 bp的条带,4株非嗜肺军团菌和4株非军团菌无条带出现;检测71份环境水样,5份阳性,阳性率为7.0%。结论该方法快速、灵敏、特异,是检测水体中嗜肺军团菌的有效方法。     

聚合酶链反应技术早期诊断关节结核

目的：早期诊断关节结核。方法：应用聚合酶链反应技术对３３例共３８个关节的关节液行结核杆菌检测;同时将所取关节液抗酸染色涂片镜检,以病理诊断为金标准并比较基华 病理确诊的关节结核有１７个,其中ＰＣＲ法与涂片法出的阳怀数分别为１２个和３个,ＰＣＲ法的灵敏度为７０．６％,而涂片法仅为１７．６％,经统计学处理差异有显著性意义。３８个关节中,ＰＣＲ法与涂法检出的阳性数分别为１４个和５个,ＰＣＲ法和涂片法的     

应用聚合酶链反应制备HBV DNA生物素探针

通过聚合酶链反应将Bio-11-duTP掺入扩增的HBV DNA中,制备了长度为120bp的生物素探针,可检测到0.1pg的HBV DNA。PCR际记法简便迅速,特异性强,所用DNA量少且无需分离纯化,其标记探针得率高,活性强。     

应用聚合酶链反应快速诊断巨细胞病毒感染

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测学龄前儿童尿标本中的巨细胞病毒（ＨＣＭＶ），并和常规细胞培养（ＣＣＣ）、早期抗原检测（ＤＥＡ）两法进行了比较。结果表明，１０５份尿标本中有４１份ＣＣＣ出现ＨＣＭＶ特征性细胞病变（ＣＰＥ），其中３８份标本ＰＣＲ检测为阳性，敏感性为９２．７％；其余６４份ＣＣＣ阴性，有６份ＰＣＲ检测阳性，特异性为９０．６％。与ＤＥＡ相比，ＰＣＲ检测的特异性和敏感性分别为９３．６％，９５．２％；提示ＰＣＲ检测临床标本中ＨＣＭＶ，不仅敏感特异，而且与ＣＣＣ，ＤＥＡ两法相比快速简便。     

PCR对脑膜炎双球菌DNA片段的检测

用聚合酶链反应(PCR)检测脑膜炎双球菌,在该菌染色体DNA中的保守区域中选择一段核苷酸作为靶DNA,用PCR技术进行扩增,经过35个循环后可将1ngDNA扩增到能通过凝胶电泳检测出其596bp的特异性DNA产物,与其设计的该菌核苷酸序列长度一致.该方法对人有致病性的A,B,C 3型细菌均能扩增出阳性结果,且能快速、敏感、特异地检测出脑膜炎双球菌,在临床上具有重要的应用价值和广泛的应用前景.     

聚合酶链反应法快速检测幽门螺杆菌

设计一互补于幽门螺杆菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ，ＨＰ）脲酶Ｃ基因片段的引物，建立快速检测ＨＰ的ＰＣＲ方法。ＨＰ标准菌株和临床分离株基因组ＤＮＡ的ＰＣＲ扩增产物，经琼脂糖凝胶电泳显示３０１ｂｐ的特异区带，而其它几种常见的肠道菌均呈阴性。ＰＣＲ可检出少至１００个幽门螺杆菌细胞，并能用于临床胃粘膜活检标本中ＨＰ的检测，是一种快速、灵敏和特异的检测１ＩＰ的方法。     

用聚合酶链反应技术探测人载脂蛋白AI基因多态性

用聚合酶链反应(PCR)技术扩增载脂蛋白(Apo)AⅠ基因第3个内含子中包括MspⅠ多态位点在内的总长307bp DNA片段,观察中国汉族健康人、高脂血症和冠心病患者Apo AⅠ基因多态性。结果表明,中国汉族人种Apo AⅠ基因Msp Ⅰ多态性与白种人不同,M_2等位基因属常见等位基因,而白种人为罕见等位基因。高脂血症和冠心病患者M_2等位基因频率与健康人无差异。     

聚合酶链式反应对结核病的诊断评价

本文对８２例血、痰等ＴＢ－ＰＣＲ阳性患者的临床检查结果发现，其中有５０例确诊为结核病，结核的诊断率为６１．０％：３２例为肺部其它疾病（３９．０％）。说明不能仅以ＴＢ－ＰＣＲ阳性诊断结核病，应结合临床症状用其它有关检查来进一步明确诊断。     

Nested PCR检测HBV DNA技术的建立与应用

本研究建立一种Nested PCR技术检测HBV DNA,即采用内外两对引物分别进行连续两次扩增,使检测极限由一次PCR的10~(-2)Pg提高到10~(-5)Pg;经~(32)P标记寡核苷酸探针作Southern转移杂交以及BgIⅡ作酶切分析证实两次扩增均为特异性扩增。通过抗-HBe阳性、单项抗一HBc阳性和单项抗-HBs阳性三种血清的HBV DNA的检测,表明该方法确能检出标准PCR所不能检出的极低水平的HBV感染,对提高乙型肝炎的诊断水平及更准确地评价药物疗效有重要意义。     

聚合酶链反应中引物的计算机辅助筛选

利用计算机辅助筛选聚合酶链反应（ＰＣＲ）的扩增引物。计算机程序根据引物筛选规则编写。这些规则包括：①引物的３′端均以ＧＣ对结尾；②引物的长度为１８～的个寡核苷酸；③每个引物中的ＧＣ含量为４５％～６０％；④避免引物自身及引物之间的同源性。由此我们设计了ＳＲＳ小鼠白血病病毒的引物，成功地扩增了３．４ｋｂ的大片段目的基因。实验结果证明了由此法筛选出来的引物的有效性和特异性。