TGF-β1对口腔鳞癌相关成纤维细胞FAP表达的影响

目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对癌相关成纤维细胞(CAFs)中成纤维细胞活化蛋白(FAP)表达的影响.方法 应用10 ng/ml的TGF-β1作用于CAFs细胞,设置正常成纤维细胞(NFs)和未经处理的CAFs细胞作为对照组,采用RT-PCR和Western blot法检测细胞中FAP的蛋白和mRNA表达情况.结果 FAP在NFs中几乎不表达,而在CAFs中FAP的mRNA和蛋白表达均增加.与NFs组和CAFs组相比,10 ng/ml的TGF-β1能够明显促进CAFs细胞分泌FAP,作用12、24 h后FAP mRNA和蛋白的相对表达量差异有统计学意义(P＜0.05).且随着作用时间的延长,FAP的表达持续升高,24 h较12 h表达增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TGF-β1能够促进CAFs中FAP的表达,在肿瘤上皮-间质交互作用中扮演着重要角色.     

肿瘤相关成纤维细胞与上皮性卵巢癌顺铂耐药性的研究

目的 探讨卵巢癌相关成纤维细胞(CAFs)对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响及其可能作用机制.方法 收取上皮性卵巢癌及正常卵巢上皮组织各10例,分离纯化培养CAFs和正常卵巢成纤维细胞(NFs),免疫荧光法鉴定CAFs;收集CAFs或NFs培养上清液与卵巢癌SKOV3细胞建立间接共培养体系;C C K8法检测细胞增殖及顺铂毒...     

c-Ski癌基因对肿瘤相关成纤维细胞活化的影响

目的：研究癌基因c-Ski对乳腺癌相关成纤维细胞（cancer-associated fibroblasts,CAFs）活化的影响。方法：应用基因重组技术,将c-Ski基因克隆到载体pBABE-puro,转染至永生化的正常乳腺成纤维细胞（normal fibroblasts,NFs）,嘌呤霉素药物筛选稳定转染细胞株;Western blot检测转染后c-Ski、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）和成纤维细胞活化蛋白（fibroblast activation protein,FAP）的表达;通过MTT法、流式细胞术、细胞划痕实验及Transwell细胞侵袭实验研究转染前、后成纤维细胞增殖、迁移、侵袭能力的差异;收集细胞上清制备条件培养基,用Transwell细胞侵袭实验分析转染后成纤维细胞对MD-MB-231细胞侵袭能力的影响。结果：成功构建重组质粒pBABE-puro-Ski;Western blot检测结果显示,pBABE-puro-Ski转染组细胞中c-Ski、α-SMA和FAP表达明显高于空白对照组细胞（P=0.000,P=0.001,P=0.002）;MTT法结果显示转染组细胞增殖能力高于空白对照组细胞（P=0.011）;转染组细胞的S期含量（38.58±1.28）明显高于空载体组（25.05±0.52）和空白对照组（26.01±0.86）,差异具有统计学意义（P=0.000）;细胞划痕实验及Transwell细胞侵袭实验结果表明转染组细胞的迁移、侵袭能力均高于空载体组和空白对照组细胞;转染组细胞条件培养基能明显促进MD-MB-231细胞的侵袭能力。结论：c-Ski癌基因表达上调能促进NFs活化为CAFs,并进一步促进乳腺癌细胞MD-MB-231的侵袭能力。     

食管间质成纤维细胞与食管癌细胞相互作用的体外研究

目的 体外研究不同类型食管间质成纤维细胞与癌细胞株间接接触后其基因及生物学特性的改变.方法 检测人食管正常间质成纤维细胞(NFs)、不典型增生间质成纤维细胞(AFs)及癌相关纤维母细胞(CAFs)与癌细胞株间接相互接触前后的波形蛋白(Vimentin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β(TGF-β1)、人肝细胞生长因子(HGF)、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9 mRNA及食管癌细胞株的增殖细胞核抗原(PCNA) mRNA,并与食管癌细胞株进行侵袭实验.结果 从NFs到AFs再到CAFs,Vimentin mRNA的表达无差别,α-SMA、TGF-β1、HGF、MMP2及MMP9 mRNA的表达逐渐增强.在与食管癌细胞株间接接触后,NFs及AFs的α-SMA、TGF-β1、HGF、MMP2及MMP9 mRNA表达均上调,且差异有统计学意义(P＜0.05),而CAFs的相应mRNA表达无明显变化.食管癌细胞株的PCNA mRNA在与NFs接触后,无变化;而与AFs和CAFs接触后,PCNA mRNA表达明显上调.结论 食管癌细胞与食管间质成纤维细胞可影响对方的增殖活性及侵袭特性.     

口腔癌相关成纤维细胞侵袭特性研究

目的采用体外重建基底膜细胞侵袭实验,研究口腔癌相关成纤维细胞（Carcinoma-associated fibroblasts,CAFs）侵袭力,用免疫组织化学法,观察CAFs对相关蛋白的表达。探讨CAFs在口腔鳞癌中的病理意义。方法采用组织块贴壁法培养颊部正常成纤维细胞（Normal Fibroblasts,NFs）和癌相关成纤维细胞CAFs,利用包被matrigel的transwell小室模拟天然基底膜的结构,利用培养基浓度梯度差诱导细胞穿膜并计数穿膜细胞数量,比较CAFs和NFs的侵袭力差异。采用免疫组化法,比较CAFs和NFs对基质金属蛋白酶-2（matrix metalloprotease-2,MMP-2）和成纤维细胞激活蛋白（fibroblast activation protein,FAP）表达差异。结果 CAFs穿膜的细胞数量显著高于NFS（P〈0.05）,差异具有统计学意义。CAFs对MMP-2和FAP的蛋白表达阳性,NFs表达为阴性。结论口腔CAFs的体外侵袭能力明显高于NFs,且能特异性地分泌MMP-2和FAP蛋白。这提示肿瘤间质的侵袭特性可随着上皮癌变而同步激活,CAFs参与肿瘤细胞外基质的重建,与肿瘤侵袭转移有关。     

癌相关成纤维细胞来源的外泌体miR-625-3p对卵巢癌细胞SKOV3迁移和侵袭能力的影响及其机制

目的 探讨癌相关成纤维细胞(CAFs)分泌的外泌体(exos) miR-625-3p对卵巢癌细胞SKOV3迁移和侵袭能力的影响及其机制。方法 选取2021年5月至12月于衡水市人民医院接受手术的卵巢癌患者的癌组织和邻近的非癌组织(5对)。从卵巢癌组织和相邻的正常组织中分离出CAFs和正常成纤维细胞(NFs)。采用Western blot评估NFs和CAFs中α-SMA和vimentin的蛋白表达,利用外泌体提取试剂盒从NFs和CAFs培养基中获得NFs-/CAFs-exos。通过透射电子显微镜(TEM)、纳米颗粒跟踪分析(NTA)和Western blot评估NFs-/CAFs-exos的形状、粒径以及表面marker表达。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测CFAs、CAFs-exos和SKOV3中miR-625-3p和癌细胞侵袭抑制因子(SCAI)的表达。Transwell试验检测细胞迁移和侵袭能力。双荧光素酶报告基因实验确定miR-625-3p和SCAI的相互作用。最后,通过功能挽救实验确定SCAI对SKOV3细胞迁移和侵袭能力的影响。结果 West...     

成纤维细胞与成纤维细胞激活蛋白在结肠癌中的研究进展

肿瘤发生、发展是一个错综复杂的生物学过程,不仅是实质细胞本身的恶性转变,还有赖于肿瘤微环境的作用。肿瘤微环境一般由间质细胞、细胞外基质(extracellular matrix, ECM)和血管构成,其中成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)是主要的间质细胞,在微环境中与癌细胞接触,相互作用,转化为癌相关成纤维细胞(carcinoma associated fibroblasts,CAFs)。近年来,肿瘤中CAFs的研究备受关注,这些细胞在上皮肿瘤的恶性转变中发挥着不可忽视的作用。成纤维细胞激活蛋白(Fibroblast activation proteih,FAP)是活化的成纤维细胞表面上的特异性表达分子,与肿瘤的生长及侵袭密切相关。现就NFs、FAP在结肠癌中的特点、具体作用及机制综述如下。     

透明质酸合酶-2在癌相关成纤维细胞促进舌癌细胞侵袭中的作用

目的:检测透明质酸合酶2 (hyaluronan synthase 2,HAS2) 在正常成纤维细胞(normal zone fibroblasts,NFs)及癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)中的表达,并探讨其在CAFs介导的舌鳞癌细胞系Cal27侵袭行为中的作用?方法:分别从同一舌癌患者手术切除标本的癌组织及癌旁组织获取CAFs和NFs?免疫细胞化学?Western blot法鉴定细胞表型?实时定量RT-PCR及Western blot检测透明质酸合酶在两种细胞中的表达?利用Transwell小室共培养模型,观察CAFs及NFs对舌癌细胞系Cal27侵袭能力的影响?利用siRNA抑制CAFs 中的HAS2,并分析其对Cal27侵袭能力的影响?结果:α-SMA表达于CAFs,NFs中几乎无表达?Cal27在CAFs组中的侵袭力显著高于NFs组及空白对照组(P < 0.01)?实时定量RT-PCR结果显示HAS2在CAFs中的表达是NFs的7倍(P < 0.01),蛋白水平则为NFs的3倍(P < 0.01);Cal27在HAS2干扰组的侵袭力显著低于CAFs组及无关序列组(P < 0.01)?结论:CAFs具有促进舌癌细胞侵袭能力的作用,高表达HAS2可能是其作用机制之一,抑制肿瘤微环境中CAFs的HAS2功能可能是一条新的抗肿瘤侵袭转移的途径?     

VEGF-D在口腔鳞癌相关成纤维细胞的表达研究

目的:研究VEGF-D在口腔癌相关成纤维细胞(carcinoma-associated fibroblasts,CAFs)的表达情况以及其表达水平是否与口腔鳞癌淋巴结转移相关。方法:通过免疫组化和RT-PCR检测VEGF-D在NFs、无淋巴结转移CAFs、淋巴结转移CAFs的蛋白和mRNA表达情况。结果:成功培养和纯化CAFs,与NFs相比,CAFs阳性表达α-SMA,生长增殖速度明显增加,细胞排列混乱;VEGF-D在淋巴结转移CAFs的染色强度明显增加,用2-ΔΔCT法计算VEGF-D的mRNA表达水平分别为0.806 7±0.117、1.192 5±0.125、2.085 3±0.131。结论:与NFs相比,CAFs表达VEGF-D明显增加,且与患者淋巴结转移相关。     

结直肠癌细胞通过激活成纤维细胞的ERK通路诱导癌症相关成纤维细胞的形成

目的 探究结直肠癌（CRC）细胞（HCT116、Caco-2）条件培养基促进癌症相关成纤维细胞（CAFs）形成的机制,为CRC治疗提供新的思路。方法 将对数生长期的人正常结直肠成纤维细胞（CCD-18Co）分为对照组、HCT116细胞条件培养基处理组（HCT116-CM组）、Caco-2细胞条件培养基处理组（Caco-2-CM组）、300 nmol/L ERK抑制剂SCH772984组（iERK组）、HCT116-CM联合ERK抑制剂组（HCT116-CM+iERK组）、Caco-2-CM联合ERK抑制剂组（Caco-2-CM+iERK组）。采用RT-PCR和细胞免疫荧光检测CAFs相关分子标志物表达水平;利用RTCA、克隆形成和创伤愈合实验测定细胞增殖、克隆形成和迁移能力;Western blot检测HCT116-CM和Caco-2-CM激活的成纤维细胞信号通路,同时检测相应信号通路阻断后CAFs形成情况。结果 HCT116-CM和Caco-2-CM可上调CCD-18Co中CAFs标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、成纤维细胞活化蛋白（FAP）、纤连蛋白（FN）和转化生长因子-β...     

Breast cancer associated fibroblasts promote MCF-7 invasion in vitro by secretion of HGF

This study was aimed to explore the influence of breast cancer associated fibroblasts (CAFs) in migration and invasion of breast cancer cell line MCF-7,and investigate whether hepatocyte growth factor (HGF) is involved in this process.Primary breast CAFs and their corresponding normal breast fi-broblasts (NFs) were obtained by collagenase digestion.On the basis of the co-culture,the migration and invasion capacity of MCF-7 cells was compared between CAFs and NFs by Transwell.The differ-ence in the HGF expression between them was detected by ELISA.The secretion of HGF was knocked down by using RNA interference technology in CAFs.Then the changes of migration and invasion ca-pacity of MCF-7 cells were investigated by Transwell.Eventually,we isolated high-purity CAFs and NFs,and the CAFs had a stronger ability in promoting MCF-7 migration and invasion than the NFs.ELISA results demonstrated that CAFs secreted higher HGF,and the capacity of MCF-7 migration and invasion was declined after knocking down the secretion of HGF in CAFs by RNA interference.It is suggested that CAFs can promote MCF-7 migration and invasion through HGF in vitro.     

肿瘤相关成纤维细胞在垂体腺瘤侵袭性行为中的作用研究

目的 初步研究肿瘤相关成纤维细胞在垂体腺瘤侵袭性行为中的作用。方法 依据术前磁共振（MRI）检查和术中观察,收集典型侵袭性（IPA组,n=7）和非侵袭性（nIPA组,n=8）垂体腺瘤新鲜组织,进行原代培养肿瘤相关成纤维细胞,并用肌动蛋白α（α-SMA）染色鉴定;利用Transwell迁移和侵袭性试验比较两组细胞的迁移和侵袭能力,并用免疫细胞化学、Western blot比较两组肿瘤相关成纤维细胞α-SMA、基质金属蛋白酶（MMP）-9的表达差异。结果 新鲜垂体腺瘤组织中培养出α-SMA阳性的肿瘤相关成纤维细胞,两组细胞的迁移能力无明显差异,侵袭能力IPA组强于nIPA组（ P=0.010）;IPA组细胞MMP-9表达高于nIPA组（ P=0.025）,α-SMA的表达在两组之间差异无统计学意义。结论 肿瘤相关成纤维细胞可能通过分泌更多的MMP-9增强自身侵袭能力,为肿瘤细胞侵袭周围组织提供条件。     

SOX7基因在胰腺癌细胞株的表达及其启动子区甲基化状态的研究

目的:检测SOX7基因在胰腺癌细胞株中的表达及其启动子区的甲基化状态,初步探讨两者之间的关系?方法:采用RT-PCR检测SOX7基因在胰腺癌细胞株BXPC-3?CFPAC-1?PANC-1和SW1990中的表达水平?重亚硫酸盐测序PCR(bisulfite sequencing PCR,BSP)和结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法 (combined bisulfite restriction analysis,COBRA)检测启动子区域甲基化状态?采用去甲基化药物5-氮杂胞苷(5-aza-2-adeoxycytidine,5-aza-dC)处理各细胞株后,检测SOX7基因的mRNA表达和甲基化状态变化?结果:在胰腺癌细胞株BXPC-3?CFPAC-1中SOX7基因的mRNA呈阳性表达,而在PANC-1和SW1990中SOX7基因表达沉默;与BXPC-3?CFPAC-1相比,PANC-1和SW1990中SOX7基因启动子区甲基化率较高?经过去甲基化处理后,PANC-1与SW1990中SOX7启动子区的甲基化率下降,基因重新表达?结论:胰腺癌细胞株PANC-1和SW1990中的SOX7基因表达与启动子区甲基化状态有关,启动子区的高甲基化导致PANC-1? SW1990中SOX7基因的表达沉默?     

乳腺癌前病变组织原代成纤维细胞生物学特征初步研究

目的比较乳腺导管不典型增生成纤维细胞(atypical intraductal hyperplasia fibroblasts,AFs)与正常乳腺成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)、乳腺癌肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)在生物学特征上的差异。方法采用Ⅰ型胶原酶法分离并培养AFs、NFs和CAFs,免疫细胞荧光化学检测其粘连蛋白(fibronectin,FN)表达以鉴定细胞纯度。比较3种细胞的细胞生长曲线、细胞周期和周期蛋白cyclin D1、p21waf1及p53的变化。结果获得并鉴定了NFs、AFs、CAFs;其生长速度依次增加(P<0.05),细胞周期S期百分比(8.24±2.47)、(16.94±4.77)、(33.31±7.90)依次增大(P<0.05);与NFs相比,AFs周期蛋白cyclin D1表达增加(P<0.05),p21waf1和p53蛋白表达降低(P<0.05);与CAFs相比,AFs的周期蛋白cyclin D1没有升高(P<0.05),p21waf1蛋白和p53蛋白表达更强(P<0.05)。结论 AFs相对于NFs和CAFs,细胞生长增殖具有特异性,这种变化提示乳腺肿瘤的癌前病变阶段AFs可能是NFs逐步向CAFs转变的过渡阶段。     

3-methyladenine抑制自噬诱导胰腺癌细胞SW1990失巢凋亡

【目的】 探讨3-methyladenine(3-MA)对人胰腺癌SW1990细胞增殖?迁移及失巢凋亡的影响作用及其机制?【方法】 以胰腺癌细胞SW1990及永生化胰腺导管上皮细胞H6C7为研究对象,设3-MA处理组及PBS对照组,采用软琼脂克隆培养法及Poly-HEMA悬浮培养法筛选抵抗失巢凋亡的细胞?Annexin V-FITC/PI双染和TUNEL试剂盒法检测细胞凋亡;免疫荧光法及透射电镜检测细胞自噬;CCK-8法检测细胞增殖; Transwell小室检测细胞迁移能力?【结果】永生化胰腺导管上皮细胞H6C7处理组及对照组均无集落形成,胰腺癌细胞SW1990处理组形成(2.3 ± 2.63)个集落,对照组形成(9 ± 3)个,与H6C7 相比,SW1990具有较强的抵抗失巢凋亡的能力 (P < 0.05)?3-MA可抑制胰腺癌SW1990细胞自噬(P < 0.05)并抑制其增殖及迁移能力(P < 0.01)且诱导失巢凋亡(P < 0.01)?【结论】 3-MA可诱导胰腺癌细胞SW1990失巢凋亡,其机制可能与细胞自噬受抑有关?     

癌相关成纤维细胞对乳腺癌细胞株MCF-7化疗耐药的影响

目的 探讨癌相关成纤维细胞（CAFs）对乳腺癌细胞株MCF-7化疗耐药的影响.方法 采用胶原酶消化法从10例新鲜乳腺癌标本中分离培养CAFs,分别收集第3代CAFs培养上清与MCF-7共培养,采用MTT法分别对单独培养的乳腺癌细胞株MCF-7及与间接共培养的MCF-7进行常规药敏检测.结果 乳腺癌CAFs鉴定结果显示,CAFs表达α-SMA,胞浆出现棕黄色颗粒.MTT药敏结果显示,间接共培养组MCF-7对常规化疗药（氟尿嘧啶、丝裂霉素及表阿霉素）的不敏感率较单独培养者明显增高（P=0.020、0.024及0.018）.结论 肿瘤微环境可能参与了乳腺癌的化疗耐药的发生.