VEGF抗体对骨肉瘤OS—732血管生成的抑制作用＊

目的：研究血管内皮生长因子（Ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ＶＥＧＦ）抗体的抗骨肉瘤血管生成作用。方法：应用鸡胚尿囊膜（Ｃｈｉｃｋ ｅｍｂｒｙｏ ｃｈｏｒｉｏａｌｌａｎｔｏｉｃ ｍｅｍｂｒａｎｅ，ＣＡＭ）模型观察ＶＥＧＦ抗体对骨肉瘤血管生成及肿瘤生长的影响。结果：ＶＥＧＦ抗体组血管数目在给予抗体后第２、４、６、８天均显著低于ＰＢＳ对照组（Ｐ〈０．０５或Ｐ〈０．     

抗VEGF抗体对骨肉瘤OS-732细胞血管生成及其肿瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的：探讨阻断血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF)的血管生成作用对骨肉瘤OS-732细胞及血管内皮细胞增殖、凋亡的影响。方法：应用鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）模型,通过解剖显微镜血管计数,光镜HE染色,原位末端标记及PC-NA免疫组化检测观察VEGF抗体对骨肉瘤血管生成及肿瘤增殖,凋亡状态的影响。结果：VEGF抗体组肿瘤区血管数目及瘤细胞数显著低于PBS对照组,肿瘤细胞凋亡指数显著高于PBS对照组,增殖指数两组差异不明显,同时VEGF抗体组凋亡的微血管内皮细胞增多,增殖期微血管内皮细胞少见。结论：VEGF抗体能显著抑制骨肉瘤OS-732血管生成,抑制内皮细胞增殖,促进内皮细胞凋亡,可能是VEGF抗体发挥抗血管生成作用的途径之一,并可能通过抑制血管形成而促进肿瘤细胞凋亡,最终达到抑制瘤细胞生长的作用。     

骨肉瘤VEGF表达及VEGF抗体抑制血管生成的实验研究

目的研究血管内皮生长因子（VEGF）表达与骨肉瘤血管生成和预后的关系,以及VEGF抗体抑制骨肉瘤细胞OS-732诱导血管生成的作用和可能机制,为以VEGF为靶点治疗骨肉瘤提供实验依据。方法应用免疫组化和形态计量方法,检测80例骨肉瘤VEGF表达、肿瘤微血管密度（MVD）,以及OS-732血管生成相关因子的表达。进一步应用鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）模型观察VEGF抗体对OS-732诱导血管生成及肿瘤细胞生长的抑制作用。结果（1）骨肉瘤VEGF表达与肿瘤微血管密度（MVD）及预后密切相关。（2）OS-732表达VEGF和BFGF,而且VEGF表达强度明显高于BFGF,OS-732具有很强的诱导血管生成能力。（3）VEGF抗体干预实验结果显示VEGF抗体组肿瘤区血管密度明显低于PBS对照组,细胞凋亡指数显著高于PBS对照组,而增殖指数两组差异无统计学意义。同时,VEGF抗体组凋亡的微血管内皮细胞增多,增殖期内皮细胞少见。结论VEGF是骨肉瘤重要的血管生成因子,其表达可能是评估骨肉瘤预后的一项有价值的指标。VEGF抗体能够抑制内皮细胞增殖,促进内皮细胞凋亡,显著抑制骨肉瘤OS-732血管形成,并可能通过抑制血管形成而促进肿瘤细胞凋亡,达到抑制瘤细胞生长的作用。该结果提示VEGF可以作为骨肉瘤抗血管生成治疗的潜在靶分子。     

人骨肉瘤细胞系OS-732诱导微血管生成的解剖显微结构及超微结构观察

目的观察人骨肉瘤细胞系OS-732诱导微血管生成的解剖显微结构及超微结构特点。方法应用鸡胚绒毛尿囊膜模型,通过解剖显微镜、光镜及透射电镜观察该细胞系诱导生成微血管的解剖显微结构及超微结构特点。结果OS-732细胞系具有较强的诱导血管生成能力,解剖显微镜下可见血管辐辏现象,透射电镜下可见新生血管壁由单层内皮细胞构成,内皮细胞裂隙增宽,基底膜不完整,缺乏平滑肌成分。结论肿瘤诱导的新生血管在病理、生理及形态功能方面都具有特征性,以血管为靶点治疗骨肉瘤对改善预后可能具有重要意义。     

内异方药物血清对子宫内膜异位症血管生成的影响

目的：比较子宫内膜异位症（endometriosis,EM）在位、异位内膜组织与对照在位内膜组织的血管生成能力及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的表达水平,并评价中药内异方药物血清对其的影响。方法：采用鸡胚尿囊膜（chick chorioallantoic membrane,CAM）上子宫内膜组织种植的方法建立EM模型。Sprague-Dawley大鼠分别灌胃生理盐水、达那唑和内异方制备对照血清和药物血清。将CAM模型分别用空白血清、达那唑药物血清和内异方药物血清干预后,测量种植灶面积和阳性血管面积,计算阳性血管面积百分比;免疫组织化学EnVision法检测各组种植组织中VEGF的表达。结果：EM患者的在位、异位内膜组织种植于CAM后,种植灶面积与对照在位内膜组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,但EM异位内膜种植灶周围形成的血管面积显著高于在位内膜种植后（P〈0.05）;与各自空白血清组相比,内异方血清组的EM在位、异位内膜组织种植于CAM后形成的种植灶面积明显缩小（P〈0.01,P〈0.05）,种植灶周围阳性血管面积显著减少（P〈0.01）。达那唑与内异方作用相似,但其异位内膜种植灶面积与空白血清组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。EM在位、异位内膜组种植灶中VEGF的阳性表达显著高于对照在位内膜组（P〈0.01）,内异方血清组VEGF的阳性表达显著低于各组空白血清组（P〈0.01）,达那唑血清组亦下降明显,但异位组织与空白血清组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：EM在位、异位内膜组织中VEGF的表达水平明显增高,异位内膜组织血管形成能力显著增强。内异方药物血清可显著降低EM在位和异位内膜组织中VEGF的表达,抑制种植灶新生血管网的形成,减少异位灶局部血供,从而抑制异位内膜组织的生长。与达那唑作用相比,中药内异方在抑制和治疗EM上有相似的作用,但在抑制异位内膜组织VEGF的表达方面,中药内异方作用更佳。     

人骨肉瘤细胞系OS—732诱导微血管生成的解剖显微结构及超微结构观察

目的 观察人骨肉瘤细胞系OS-732诱导微血管生成的解剖显微结构及超微结构特点。方法 应用鸡胚绒毛尿囊膜模型。通过解剖显微镜，光镜及透射电镜观察该细胞系诱导生成微血管的解剖显微结构及超微结构特点。结果 OS-732细胞系具有较强的诱导血管生成能力，解剖显微镜下可见血管辐辏现象。透射电镜下可见新生血管壁由单层内皮细胞构成，内皮细胞裂隙增宽，基底膜不完整，缺乏平滑肌成分。结论 肿瘤诱导的新生血管在病理，生理及形态功能方面都具有特征性，以血管为靶点治疗骨肉瘤对改善预后可能具有重要意义。     

髓源性生长因子促进血管生成能力的实验研究

目的 观察骨髓源性生长因子(MYDGF)对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管新生的促进作用,明确MYDGF对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖及成管能力的作用.方法 新鲜种鸡蛋孵化7d选择其中发育正常鸡胚随机分为对照组、PBS组、低剂量MYDGF组、中剂量MYDGF组、高剂量MYDGF,每组各10枚.通过气室分别向各组加入30μl样品(低、中和高剂量MYDGF组为溶于PBS中浓度分别为10、100和500 ng/ml的MYDGF溶液).2 d后拍照记录CAM血管生长情况,利用计算机软件IPP 6.0分析血管生成面积(VA)与CAM面积并计算两者之比(VA/CAM).体外培养HUVEC,用CCK-8法检测MYDGF对HUVEC细胞的增殖能力的影响.成管实验检测MYDGF对HUVEC成管功能的影响.结果 血管交叉点数(VN)分别为PBS组(20.80±2.49)个,中剂量MYDGF组(27.60±3.17)个,高剂量MYDGF组(28.60±3.27)个,中剂量MYDGF组、高剂量MYDGF组分别与PBS组比较,差异有均统计学意义(P<0.05).VA/CAM值分别为PBS组(23.53±1.96)％,中剂量MYDGF组(27.87±3.10)％,高剂量MYDGF组(29.26±2.73)％,中剂量MYDGF组、高剂量MYDGF组分别与PBS组比较差异均有统计学意义(P<0.05).与对照组比较,MYDGF(100 ng/ml)可促进HUVEC增殖(P<0.05)、成管(P<0.05)的功能,差异有统计学意义.结论 MYDGF可促进CAM血管新生,增强HUVEC细胞的增殖及成管能力.     

益气养阴方抗血管生成作用的实验研究

目的：探讨益气养阴方抗鸡胚绒毛尿囊膜（Chick chorioa—llantoic membrane,CAM）血管及肿瘤细胞诱导CAM血管生成的效应。方法：制备CAM模型及接种肿瘤细胞的CAM模型,采用血清药理学方法制备含药血清。观察含药血清对CAM血管和肿瘤细胞诱导CAM血管生成的影响,并与生理盐水血清组对照。结果：益气养阴方含药血清可抑制CAM血管及肿瘤细胞诱导的CAM血管生成,各剂量含药血清组血管数目（高剂量组：9．662±0．599,中剂量组：9．682±0．818,低剂量组：10．242±0．640）与血管面积（高剂量组：8878．500±1870．115,中刺量组：9369．750±3206．427,低剂量组：11226．875±2665．071,mm^2）均较对照血清纽（10．511±0．990,12759．375±4379．058,mm^2）明显减少,与生理盐水对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：益气养阴方对血管生成有明显抑制作用。     

骨肉瘤中血管内皮生长因子的表达及血管生成的研究

目的：探讨血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ）的表达、血管生成与骨肉瘤的关系。为判断骨肉瘤的恶性程度及预后提供新的指标。方法：应用免疫组化技术分别对４６例骨肉瘤标本（经过Ｐｒｉｃｅ分级）进行ＶＥＧＦ和微血管密度（ｍｉｃｒｏｖｅｓｓｅｌ ｄｅｎｓｉｔｙ,ＭＶＤ）染色,研究ＶＥＧＦ表达、微血管密谋之间及其与骨肉瘤的关系。结果：骨肉瘤标本中Ｐ     

VEGF165的载体构建、表达及其生物学活性

目的:构建血管内皮生长因子(VEGF)165原核表达载体,在大肠杆菌中表达,获得重组VEGF165,并通过细胞和鸡胚尿囊膜试验鉴定其生物学活性.方法: 本实验室保存的T-VEGF165质粒,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切,将其克隆至原核表达载体pET28a( )中,获得含人VEGF165全序列基因的表达载体pET28a( )-VEGF165,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,对表达产物进行纯化,获得VEGF165蛋白.通过体外促进HUVEC细胞增殖及鸡胚尿囊膜血管增生实验鉴定其生物学活性.结果:成功构建了VEGF165蛋白的原核表达载体,表达纯化了VEGF165蛋白,经过细胞增殖试验及鸡胚尿囊膜血管增生实验,证明该蛋白具有良好的促进血管内皮细胞增殖的生物学活性.结论:成功地获得了人VEGF165重组蛋白,并证实了该蛋白具有促进血管内皮细胞增殖活性.     

人骨肉瘤OS-732单克隆抗体的制备及纯化

目的制备、纯化抗人骨肉瘤OS-732单克隆抗体。方法通过杂交瘤细胞腹腔注射BALB/c小鼠制备腹水,ProteinA-Sepharose CL-4B亲和层析法纯化单抗,SDS-PAGE、免疫组化及ELISA检测该单抗的性质。结果SDS-PAGE鉴定单抗纯度达到93%,ELISA检测抗体免疫活性效价为1×10-7。结论制备、纯化了具有较高纯度及生物活性的的抗骨肉瘤OS-732单克隆抗体,为下一步骨肉瘤靶向治疗打下了基础。     

Avastin抑制骨肉瘤裸鼠模型血管生成实验研究

目的 观察Avastin抑制骨肉瘤裸鼠移植瘤血管生成并探讨其作用机制.方法 人骨肉瘤细胞9901荷瘤裸鼠12只随机分为3组:对照组、Avastin低剂量组(2mg·kg-1·w-1)和Avastin高剂量组(5mg·kg-1·w-1),每周瘤内注射1次,共治疗2次,治疗过程中观察肿瘤生长情况.治疗后处死裸鼠,计算抑瘤率,并通过病理组织学观察、免疫组织化学和激光共聚焦观察肿瘤内微血管密度、坏死、增殖、凋亡和肿瘤细胞缺氧情况.结果 Avastin低剂量治疗组和Avastin高剂量治疗组的抑瘤率分别为32.87%、39.81%;对照组、Avastin低剂量治疗组和Avastin高剂量治疗组3组坏死的比例分别为2.01%、11.49%和12.15%.Avastin低剂量治疗组和Avastin高剂量治疗组的微血管密度及增殖指数明显低于对照组(P<0.05),凋亡指数明显高于对照组(P<0.05),但Avastin低剂量治疗组和Avastin高剂量治疗组的微血管密度、增殖指数和凋亡指数差异无统计学意义(P>0.05).EF-5和CD31免疫荧光双标激光共聚焦显微镜观察显示Avastin治疗组血管密度降低、组织缺氧加重.结论 Avastin能显著抑制骨肉瘤的血管生成和肿瘤细胞的增殖,诱导细胞凋亡,进而显著抑制裸鼠原位肿瘤的生长.     

血管内皮生长因子促血管形成作用及其调控

血管内皮生长因子是一种具有促血管生成活性的功能性蛋白,它通过与特异性受体的结合,发挥生理功能:(1)促血管内皮细胞分裂从而促进新生血管形成;(2)增强血管通透性的功能.其活性的发挥受到多因素、多水平的调节,如:缺氧、癌基因、细胞因子、细胞间质成分等.本文从血管内皮生长因子的促血管形成机制及其调控因素等方面对其生物学行为和特性作一综述.     

血管内皮生长因子对缺氧诱导内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨缺氧对培养人静脉内皮细胞凋亡的影响及血管内皮生长因子的干预性影响。方法 （1）人脐静脉内皮细胞的培养及鉴定。（2）建立人脐静脉内皮细胞缺氧模型,TUNEL法观测不同缺氧时间（0、12、24、48h）对内皮细胞凋亡的影响及血管内皮生长因子的干预作用。结果 随缺氧时间延长,NUVECs凋亡率显著升高,血管内皮生长因子抑制缺氧导致的内皮细胞凋亡。结论 内皮细胞的过渡凋亡是引起内皮功能障碍的一个重要因素,血管内皮生长因子通过抑制内皮细胞凋亡,而具有内皮细胞保护作用。     

整合素和血管内皮生长因子在血管新生中的作用

整合素(integrin)是介导细胞与细胞外基质黏附作用的主要因子,它通过调节内皮细胞的黏附和迁移能力,参与新生血管管腔的形成和血管网络构建.细胞外基质是整合素的配体,胶原和层黏连蛋白的沉积形成新的血管管腔.血管内皮生长因子(VEGF)可促进内皮细胞增殖、促进血管生成以及增加血管的通透性.现就整合素和VEGF在血管新生中的作用及相互关系的研究进展进行综述.     

骨肉瘤微血管密度与血管内皮生长因子表达的关系

目的 研究骨肉瘤微血管密度（MVD）与血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达是否具有相关性。方法 对33例骨肉瘤组织标本应用CD34单克隆抗体标记血管内皮细胞。计数骨肉瘤MVD;用VEGF多克隆抗体检测肿瘤细胞浆中VEGF的表达情况。结果 （1）骨肉瘤MVD与VEGF表达程度呈正相关,VEGF高表达组的MVD平均值明显高于VEGF低表达组;（2）骨肉瘤中VEGF的表达和MVD与骨肉瘤组织病理分级无关。结论 VEGF是骨肉瘤血管形成的一种重要调节因子。     

多发性骨髓瘤患者血管内皮生长因子表达及血管生成的研究

目的　探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)和血管生成与多发性骨髓瘤(MM)发展的关系。方法　采用EnVision免疫组织化学二步法检测 20例MM患者骨髓中VEGF蛋白的表达及微血管数,比较治疗前、后骨髓VEGF蛋白表达和微血管数的差异,分析其与患者部分实验室检查指标及临床疗效的相关性。结果　化疗后部分显效患者VEGF蛋白的表达及骨髓微血管数显著低于初发未治患者 (P<0. 05),而在化疗后微小显效患者中无显著下降(P=0. 446和 0. 950)。初发未治、部分显效和微小显效患者VEGF蛋白的表达及骨髓微血管数均显著高于对照组(P<0. 01)。结论　VEGF可能是骨髓瘤细胞的一种自分泌因子,同时可作为一种旁分泌因子调控患者骨髓中的血管新生反应。VEGF可能是MM患者血管生成反应的主要调控因子之一。     

血管内皮生长因子拮抗缺氧诱导的血管内皮细胞凋亡及其机制研究

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)和缺氧对血管内皮细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2与Apo-1/FasmRNA表达的影响,探讨VEGF用于预防经皮冠状动脉介入治疗术(PCI)后再狭窄的机制。方法将体外培养的人脐静脉内皮细胞(hUVEC)分成对照组、缺氧处理组、缺氧 VEGF处理组,12h后采用原位末端标记法、流式细胞术观察各组细胞的凋亡发生情况,通过RT-PCR法观察各组细胞中凋亡相关基因Bcl-2与Apo-1/FasmRNA表达的变化。结果与对照组和缺氧 VEGF处理组比较,缺氧处理组凋亡细胞及FasmRNA表达明显增加,Bcl-2mRNA表达明显下降,而VEGF能拮抗上述作用。结论VEGF能拮抗缺氧诱导的内皮细胞凋亡,其抗凋亡的机制可能与上调Bcl-2mRNA表达与下调Apo-1/FasmRNA表达有关。从而为VEGF预防再狭窄进一步提供了理论依据。     

VEGF的表达以及血管生成在子宫腺肌病中的意义

目的　通过检测子宫腺肌病在位内膜、异位内膜及异位内膜周围肌层平滑肌组织中VEGF的表达及MVD值 ,探讨血管生成在子宫腺肌病发病机制中的作用。方法　应用免疫组织化学法 (SABC法 )检测 5 6例腺肌病子宫及 2 6例正常子宫中VEGF的表达和MVD值。结果　VEGF在腺肌病组在位内膜和对照组正常内膜中的阳性表达率分别为 5 2 5 %和 46 2 % (P >0 0 5 )。在腺肌病组异位内膜中VEGF的阳性表达率为 75 0 % ,均明显高于在位内膜和对照组正常内膜 (P <0 0 5 )。在异位内膜周围肌层中的阳性表达率为 69 6% ,明显高于对照组子宫肌层 38 5 % (P <0 0 5 )。MVD与VEGF在异位内膜及异位内膜周围肌层中的表达水平呈明显正相关 (P <0 0 1 )。结论　VEGF的表达增强以及与MVD的正相关性提示血管生成在子宫腺肌病的发生发展中发挥作用。