SHV-5编码基因的克隆及序列分析

目的：研究鉴定得自浙江省嘉兴地区临床分离的肺炎克雷伯菌E2株编码超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的基因。方法：PCR扩增ESBLs编码基因片段,克隆入pGEM-Teasy载体,双脱氧链终止法测定核苷酸序列并确定亚型。结果：PCR扩增结果显示E2株产生的ESBL为SHV型,其基因片段含812个核苷酸,GeneBank查询其氨基酸序列与SHV-5型ESBLs完全相同。结论：浙江省嘉兴地区肺炎克雷伯菌E2株所产ESBL亚型为SHV-5。     

一种新基因型TEM-128β-内酰胺酶的发现及其临床意义

目的 分析产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)鲍曼不动杆菌TEM型β-内酰胺酶(BLA)的编码基因并确定其亚型。方法 采用聚合酶链反应(PCR)扩增BLA编码基因TEM、SHV、OXA、CTX—M-1、CTX—M-2、CTX—M-9、PER和VEB片段，双脱氧链终止法测定核苷酸序列、确定亚型。结果临床分离的鲍曼不动杆菌HZ38株产生TEM型BLA，其扩增片段含1049个核苷酸，核苷酸及相应的氨基酸序列经Gen—Bank查询无相同序列，为新发现的一种BLA TEM-128型(GenBank注册号：AY359287)。结论 临床分离的鲍曼不动杆菌HZ38株所产BLA为TEM-128亚型，为一种新发现的新型BLA。     

多重耐药肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶编码基因分子生物学研究

目的确定浙江省嘉兴地区临床分离的多重耐药肺炎克雷伯菌E3株所产β-内酰胺酶编码基因序列及亚型.方法肺炎克雷伯菌E3株经酶抑制剂增强的肉汤稀释法鉴定为产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)细菌,聚合酶链反应(PCR)扩增其β-内酰胺酶编码基因片段,克隆入pGEM-Teasy载体,双脱氧链终止法测定核苷酸序列并确定亚型,重组细菌表型鉴定.结果E3株同时产SHV和TEM型2种β-内酰胺酶,其中SHV基因片段含812个核苷酸,编码产物有266个氨基酸,应为SHV-11型β-内酰胺酶;TEM基因片段含973个核苷酸,编码产物有288个氨基酸,应为TEM-1型β-内酰胺酶.含TEM-1和SHV-11编码基因的重组细菌经酶抑制剂增强的肉汤稀释法鉴定为阴性.结论E3株肺炎克雷伯菌同时产生SHV-11和TEM-1 2种ESBLs,其可影响ESBLs的表型检测结果.     

SHV型β内酰胺酶新亚型SHV-71的发现

目的了解鲍曼不动杆菌中SHV型β内酰胺酶的基因型及其耐药性。方法采用纸片扩散法(K-B法)测定5株鲍曼不动杆菌对13种抗菌药物的敏感性;设计SHV型β内酰胺酶引物,采用PCR法获得SHV型酶编码基因的片段,并将PCR扩增产物克隆入pMD18-T载体,以双脱氧链终止法测定核苷酸序列,确定亚型。结果药敏试验结果显示:5株鲍曼不动杆菌对氨苄西林、哌拉西林、头孢西丁、头孢他啶和氨曲南均耐药。3株菌SHV基因型扩增结果呈阳性,其中2株与SHV-12的序列100%相同,另1株(No-03)经GenBank网上同源性比较,未发现完全相同的核苷酸和氨基酸序列,为一种新发现的SHV亚型β内酰胺酶耐药基因,其序列以SHV-71的名称在美国核酸数据库GenBank成功登录(GenBank注册号:DQ296194)。结论临床分离的鲍曼不动杆菌No-03株所产SHV型BLA为一种新SHV亚型β内酰胺酶。     

一种新CTX-M型超广谱β-内酰胺酶及其临床意义

目的 查明肺炎克雷伯菌的耐药情况及其超广谱β－内酰胺酶(ESBLs)的分型。方法 采用琼脂稀释法对1999年7－12月分离的80株肺炎克雷伯菌进行药敏试验，用美国临床实验室标准化委员会2000年制定的方法测ESBLs，并对所有ESBLs阳性菌株进行质粒接合试验、等电点（pI）测定，并对其中CK23株的ESBLs耐药基因做了序列分析。结果 28／80株（35％）的肺炎克雷伯菌产ESBLs。该28株中20株临床菌的耐药质粒接合成功。 等电聚焦电泳显示：结合子的粗提酶中13／20（65％）有pI为8．8的酶，10／20（50％）有pI为7．6的酶，9／20（45％）有pI为5．6的酶。13株有pI值为8．8的ESBLs阳性的肺炎克雷伯菌对头孢噻肟的耐药明显高于头孢他啶，从中抽取CK23结合子进行耐药基因的PCR扩增和测序，证实为CTX－M型酶，与CTX－M－3比较，仅有3个氨基酸序列不同。结论 28／80株（35％）的肺炎克雷伯菌产ESBLs。13／20（65％）株肺炎克雷伯菌接合子产pI8．8的β－内酰胺酶。系CTX－M型的ESBLs，它极类似CTX－M－3。     

4株产TEM型超广谱β内酰胺酶肠杆菌科细菌的研究

目的：鉴定临床分离的3株大肠埃希菌和1株肺炎克雷伯菌所产的TEM型β内酰胺酶编码基因的序列，并进行原核表达，了解其相关特性。方法：聚合酶链反应(PCR)扩增TEM型β内酰胺酶编码基因片段，克隆入pGEM—T easy载体，表达于感受态细胞大肠埃希菌DH5a中，双脱氧链终止法测定核苷酸序列，确定基因型；其基因与原核表达载体(pET-28c)连接，并在感受态细胞大肠埃希菌DH5a中进行原核表达，提取质粒，用PCR进行表达鉴定，用超广谱β内酰胺酶(ESBLs)表型确认试验鉴定表达菌株的表型，另外对这些临床菌株进行接合试验。结果：PCR扩增结果显示这4株细菌产生的TEM型β内酰胺酶编码基因片段含981个核苷酸，其表达酶的性质均为ESBLs，临床菌株的质粒接合试验均为阳性。这4株临床菌株所产生的TEM型β内酰胺酶的编码基因已被GenBank命名为TEM-10(GenBank注册号：U95363)。结论：安徽地区这4株细菌所产TEM型β内酰胺酶均为TEM-10，在国内我们首次从临床分离株中发现TEM-10。     

多重耐药肺炎克雷伯菌基因型和整合子的分析

目的 了解多重耐药肺炎克雷伯菌的基因型和整合子存在情况.方法 设计TEM、SHV和CTX-M型及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合酶基凶特异性引物,并将聚合酶链反应(PCR)扩增获得β-内酰胺酶编码基因,分别克隆入pMD18-T载体后测定其核苷酸序列,分析其基因亚型.结果 该多重耐药株与TEM-1、SHV-12及CTX-M-3型编码基因序列的同源性为100%,Ⅰ类整合酶基因检测阳性,Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因检测阴性.结论 Ⅰ类整合子存在产ESBLs肺炎克雷伯菌中.     

多重耐药肺炎克雷伯菌基因型和整合子的分析

目的 了解多重耐药肺炎克雷伯菌的基因型和整合子存在情况.方法 设计TEM、SHV和CTX-M型及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合酶基凶特异性引物,并将聚合酶链反应(PCR)扩增获得β-内酰胺酶编码基因,分别克隆入pMD18-T载体后测定其核苷酸序列,分析其基因亚型.结果 该多重耐药株与TEM-1、SHV-12及CTX-M-3型编码基因序列的同源性为100%,Ⅰ类整合酶基因检测阳性,Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因检测阴性.结论 Ⅰ类整合子存在产ESBLs肺炎克雷伯菌中.     

多重耐药肺炎克雷伯菌基因型和整合子的分析

目的 了解多重耐药肺炎克雷伯菌的基因型和整合子存在情况.方法 设计TEM、SHV和CTX-M型及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合酶基凶特异性引物,并将聚合酶链反应(PCR)扩增获得β-内酰胺酶编码基因,分别克隆入pMD18-T载体后测定其核苷酸序列,分析其基因亚型.结果 该多重耐药株与TEM-1、SHV-12及CTX-M-3型编码基因序列的同源性为100%,Ⅰ类整合酶基因检测阳性,Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因检测阴性.结论 Ⅰ类整合子存在产ESBLs肺炎克雷伯菌中.     

多重耐药肺炎克雷伯菌基因型和整合子的分析

目的 了解多重耐药肺炎克雷伯菌的基因型和整合子存在情况.方法 设计TEM、SHV和CTX-M型及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合酶基凶特异性引物,并将聚合酶链反应(PCR)扩增获得β-内酰胺酶编码基因,分别克隆入pMD18-T载体后测定其核苷酸序列,分析其基因亚型.结果 该多重耐药株与TEM-1、SHV-12及CTX-M-3型编码基因序列的同源性为100%,Ⅰ类整合酶基因检测阳性,Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因检测阴性.结论 Ⅰ类整合子存在产ESBLs肺炎克雷伯菌中.     

多重耐药肺炎克雷伯菌基因型和整合子的分析

目的 了解多重耐药肺炎克雷伯菌的基因型和整合子存在情况.方法 设计TEM、SHV和CTX-M型及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合酶基凶特异性引物,并将聚合酶链反应(PCR)扩增获得β-内酰胺酶编码基因,分别克隆入pMD18-T载体后测定其核苷酸序列,分析其基因亚型.结果 该多重耐药株与TEM-1、SHV-12及CTX-M-3型编码基因序列的同源性为100%,Ⅰ类整合酶基因检测阳性,Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因检测阴性.结论 Ⅰ类整合子存在产ESBLs肺炎克雷伯菌中.     

多重耐药肺炎克雷伯菌基因型和整合子的分析

目的 了解多重耐药肺炎克雷伯菌的基因型和整合子存在情况.方法 设计TEM、SHV和CTX-M型及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合酶基凶特异性引物,并将聚合酶链反应(PCR)扩增获得β-内酰胺酶编码基因,分别克隆入pMD18-T载体后测定其核苷酸序列,分析其基因亚型.结果 该多重耐药株与TEM-1、SHV-12及CTX-M-3型编码基因序列的同源性为100%,Ⅰ类整合酶基因检测阳性,Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因检测阴性.结论 Ⅰ类整合子存在产ESBLs肺炎克雷伯菌中.     

多重耐药肺炎克雷伯菌基因型和整合子的分析

目的 了解多重耐药肺炎克雷伯菌的基因型和整合子存在情况.方法 设计TEM、SHV和CTX-M型及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合酶基凶特异性引物,并将聚合酶链反应(PCR)扩增获得β-内酰胺酶编码基因,分别克隆入pMD18-T载体后测定其核苷酸序列,分析其基因亚型.结果 该多重耐药株与TEM-1、SHV-12及CTX-M-3型编码基因序列的同源性为100%,Ⅰ类整合酶基因检测阳性,Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因检测阴性.结论 Ⅰ类整合子存在产ESBLs肺炎克雷伯菌中.     

多重耐药肺炎克雷伯菌基因型和整合子的分析

目的 了解多重耐药肺炎克雷伯菌的基因型和整合子存在情况.方法 设计TEM、SHV和CTX-M型及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合酶基凶特异性引物,并将聚合酶链反应(PCR)扩增获得β-内酰胺酶编码基因,分别克隆入pMD18-T载体后测定其核苷酸序列,分析其基因亚型.结果 该多重耐药株与TEM-1、SHV-12及CTX-M-3型编码基因序列的同源性为100%,Ⅰ类整合酶基因检测阳性,Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因检测阴性.结论 Ⅰ类整合子存在产ESBLs肺炎克雷伯菌中.     

多重耐药肺炎克雷伯菌基因型和整合子的分析

目的 了解多重耐药肺炎克雷伯菌的基因型和整合子存在情况.方法 设计TEM、SHV和CTX-M型及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合酶基凶特异性引物,并将聚合酶链反应(PCR)扩增获得β-内酰胺酶编码基因,分别克隆入pMD18-T载体后测定其核苷酸序列,分析其基因亚型.结果 该多重耐药株与TEM-1、SHV-12及CTX-M-3型编码基因序列的同源性为100%,Ⅰ类整合酶基因检测阳性,Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因检测阴性.结论 Ⅰ类整合子存在产ESBLs肺炎克雷伯菌中.     

多重耐药肺炎克雷伯菌基因型和整合子的分析

目的 了解多重耐药肺炎克雷伯菌的基因型和整合子存在情况.方法 设计TEM、SHV和CTX-M型及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合酶基凶特异性引物,并将聚合酶链反应(PCR)扩增获得β-内酰胺酶编码基因,分别克隆入pMD18-T载体后测定其核苷酸序列,分析其基因亚型.结果 该多重耐药株与TEM-1、SHV-12及CTX-M-3型编码基因序列的同源性为100%,Ⅰ类整合酶基因检测阳性,Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因检测阴性.结论 Ⅰ类整合子存在产ESBLs肺炎克雷伯菌中.     

一种新SHV基因型β-内酰胺酶的发现及其临床意义

[目的]查明中国浙江省湖州地区临床分离的鲍曼不动杆菌的耐药情况及其β-内酰胺酶(BLA)耐药基因类型。[方法]采用微量稀释法测定临床分离的鲍曼不动杆菌HZ01株对21种抗菌药物的敏感性、三维试验法检测超广谱β-内酰胺酶(ES—BLs)，采用聚合酶链反应(PCR)技术检测TEM、SHV、OXA、CTX—M-1、CTX—M-2、CTX—M-9、PER及VEB型BLA耐药基因、并进行序列分析。[结果]临床分离的鲍曼不动杆菌HZ01株产生SHV型BLA，其扩增片段含826个核苷酸，核苷酸及相应的氨基酸序列经GenBank查询无相同序列，为新发现的一种BLASHV-48型(GenBank注册号：AY259164)。[结论]临床分离的鲍曼不动杆菌HZ01株所产BLA为SHV-48亚型，为一种新发现的新型BLA。     

产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌中SHV型β内酰胺酶的分子生物学研究

目的：了解复旦大学附属华山医院临床分离产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌中SHV型β内酰胺酶的分布、流行情况以及分子生物学特点。方法：用SHV型β内酰胺酶基因的通用引物进行聚合酶链反应(PCR)检测；编码框以外设计引物、PCR扩增SHV型β内酰胺酶全编码基因并进行克隆表达、序列分析；对产SHV型β内酰胺酶的菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)检测。结果：58株产ESBLs大肠埃希菌中，只有3株细菌产生SHV型β内酰胺酶(5．2％)，其中1株产生SHV—11(非ESBLs)，另2株产生SHV—12(ESBLs)；3株产SHV型β内酰胺酶菌株的PFGE谱型不同。结论：临床分离产ESBLs大肠埃希菌中，SHV型β内酰胺酶的基因型为SHV—11和SHV—12，SHV型ESBLs不是主要的ESBLs型别。未发现产SHV型β内酰胺酶菌株间克隆传播。     

多重耐药肺炎克雷伯菌基因型和整合子的分析

目的了解多重耐药肺炎克雷伯菌的基因型和整合子存在情况。方法设计TEM、SHV和CTX-M型及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因特异性引物,并将聚合酶链反应（PCR）扩增获得哥内酰胺酶编码基因,分别克隆入pMD18-T载体后测定其核苷酸序列,分析其基因亚型。结果该多重耐药株与TEM-1、SHV-12及CTX—M-3型编码基因序列的同源性为100％,Ⅰ类整合酶基因检测阳性,Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因检测阴性。结论Ⅰ类整合子存在产ESBLs肺炎克雷伯菌中。     

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶检测和基因分型

摘要：目的：探讨碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶情况和β-内酰胺酶基因分型研究。 方法：用Vitek-Ⅱ全自动微生物分析仪对本院临床标本中分离的对碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌进行菌种鉴定和药物敏感试验;用冻融法提取β-内酰胺酶,三维试验检测β-内酰胺酶［AmpC酶、超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）、金属酶;改良Hodge试验检测KPC酶;用PCR扩增TEM、SHV、CTX-M、PER、VEB、DHA、MIR/ACT、KPC、IMP、VIM、SPM、GIM和NDM-1基因,并对阳性基因进行测序分析确定其基因型;REP-PCR检测分析其同源性。 结果: 4株对碳青霉烯类抗生素耐药肺炎克雷伯菌均表现为多重耐药,其中2株菌对所有测试的抗菌药物均耐药;1株菌产金属酶,由IMP-4型金属酶基因编码;4株菌均产生DHA型AmpC酶,2株菌产CTX-M-14型ESBLs;1株菌产TEM-71型ESBLs,均经测序证实;未检测出SHV、PER、VEB、MIR/ACT、KPC、VIM、SPM、GIM和NDM-1基因型。REP-PCR显示4株菌属于3个不同的克隆型。 结论：本院出现碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌,属于不同克隆型,产多种β-内酰胺酶（AmpC酶、ESBLs、金属酶）,基因型为DHA、IMP-4、CTX-M-14、TEM-71。